RT-PCR法对小鼠肝炎病毒垂直传播的应用研究

用4株小鼠肝炎病毒MHV1、MHV3、A59和JHM的混合液人工感染SCID妊娠小鼠和BALB／c和妊娠小鼠。接种病毒后1、2、3、4、5、8、10d分别取母鼠的血、肝、胎盘以及胎鼠的肝脏,用组织RNA抽提试剂盒提取各组织的总RNA,然后用RT-PCR方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：SCID孕鼠接种病毒后24h即可在母鼠胎盘、胎鼠肝脏中检出小鼠肝炎病毒,而BALB／c孕鼠于接种后5d才在胎盘和胎鼠肝中检出病毒。结果表明小鼠肝炎病毒可以通胎盘屏障垂直传播。     

汉坦病毒感染BALB／c小鼠组织中特异性抗原及病毒RNA的检测

目的检测汉坦病毒感染BALB／c小鼠组织中特异性抗原及病毒RNA,建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将1000LD50的汉坦病毒悬液经肌肉注射感染BALB／c小鼠,在感染后的第3天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法和qRT—PCR法分别检测各组织中的汉坦病毒特异性抗原及病毒RNA。结果BALB／c小鼠感染汉坦病毒后短期内在脑和肝组织中可以检测到大量汉坦病毒特异性抗原以及病毒RNA,而心、脾、肺、肾组织中未检测到特异性抗原及病毒RNA。结论实验结果为建立汉坦病毒感染动物模型的评价体系提供了参考依据。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法

目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法 根据已发表的小鼠肝炎病毒（MHV）S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果 建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1pg/μl,可检测病毒最小滴度为10-3.ml-1。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与GenBank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论 建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

RT—PCR方法在小鼠肝炎病毒检测中的应用

用４株小鼠肝炎病毒（ＭＨＶ１、ＭＨＶ３、Ａ５９和ＪＨＭ）的混合液定量人工感染ＳＣＩＤ小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,接种病毒后１、２、５、８ｄ分别取小鼠的全血、肝,用组织总ＲＮＡ抽提试剂盒提取总ＲＮＡ,用一步法ＲＴ－ＰＣＲ方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：接种后１ｄ,ＳＣＩＤ小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即保检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即可检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ小鼠至接     

汉滩病毒感染SCID小鼠动物模型的建立

目的通过检测汉滩病毒(HTNV)76-118株感染SCID小鼠组织中的特异性病毒抗原、核酸的分布以及病理学变化,以建立汉滩病毒感染动物的评价体系。方法取汉滩病毒76-118株病毒液通过肌肉注射接种SCID小鼠,接种3 d后,取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织,并分别利用ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原;利用q RT-PCR法检测各组织中的病毒RNA;利用HE染色法检测各组织中的病理学变化。结果SCID小鼠感染汉滩病毒后,用夹心ELISA法可在其心、肝、脾、肺、肾组织中检测到HTNV特异性抗原,平均P/N值分别为2.33、7.41、8.13、7.40、2.89,其中脾病毒抗原含量最高;以q RT-PCR法检测小鼠各脏器组织中的HTNV核酸,在实验组小鼠的心、肝、脾、肺、肾中均可检测到病毒核酸,与对照组相比,其相对量分别达到2~(2.11)、2~(6.23)、2~(8.21)、2~(5.26)、2~(3.79)倍,其中脾病毒核酸含量最多;HE染色法可见肝、脾、肺中伴有显著的病理学变化。结论成功检测了汉滩病毒感染SCID小鼠后组织中特异性抗原、核酸的分布以及病理学变化,从而为建立汉滩病毒感染动物的评价体系提供一种参考。     

昆明小鼠对伯氏疟原虫的易感性和组织病理研究

目的探讨昆明小鼠对伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)的易感性及其感染后的组织病理变化。方法 6周龄昆明小鼠腹腔接种1×106个感染伯氏疟原虫的红细胞,观察小鼠的生存时间及临床症状。感染后第2天开始每天采尾静脉血制作薄血膜片,Giemsa染色,计数血虫率。感染后第4天开始经肛门测小鼠体温。小鼠临死时取脑、肺、肝和脾组织,经10%中性福尔马林固定24h以上,脱水、包埋后制成4μm厚石蜡切片,苏木素-伊红染色,显微镜下观察各组织的病理变化。结果昆明小鼠腹腔接种感染伯氏疟原虫后的生存时间为8～21d;小鼠感染后第2天外周血可检出疟原虫,小鼠临死前血虫率达高峰;肉眼观察肝、脾体积增大,颜色变深,显微镜下见大量疟色素沉着,肝实质组织可见少量灶性炎性细胞聚集;脑和肺组织见感染疟原虫红细胞沉积在微血管壁,引起脑血管堵塞、大脑皮层出血灶和肺水肿、肺泡腔内炎性细胞渗出。结论昆明小鼠对伯氏疟原虫易感性较高,脑、肺、肝和脾组织均呈现出典型的疟疾病理特征,可作为研究疟原虫致病机制的动物模型。     

小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法的建立及初步应用

目的 建立小鼠脑脊髓炎病毒RT-PCR方法并对方法进行初步应用。方法 根据NCBI发表的TMEV GD VII株(GI:62039)基因组序列设计特异引物,建立RT-PCR方法,验证方法的敏感性和特异性;脑腔接种方式感染9只BALB/c小鼠,感染后第6天采集动物的脑、心、肝、脾、肺、肾、盲肠内容物和血清等样本,用建立的方法进行检测;同时检测100份小鼠盲肠内容物样本,对方法进行初步应用。结果 以GD VII RNA为模板,建立的RT-PCR方法能够扩增出约371bp的单一目的条带,敏感性验证显示能够检测到的最低GD VII cDNA量为0.69pg/μL;以脑心肌炎病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、日本乙型脑炎病毒、小鼠诺如病毒及正常小鼠脑组织为对照进行方法特异性验证,均未出现目的条带。脑腔接种感染小鼠,所有小鼠在接种第3天均产生不同程度的精神萎靡后肢麻痹等症状,其中2只小鼠于第5天死亡;采集心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠内容物及血清等样本进行检测,所有小鼠的脑组织均检测到GD VII RNA,而其他组织均未检测到;对100份小鼠盲肠内容物进行检测,结果均为阴性。结论 建立的TMEV GDVII株RT-PCR方法能够高效的检测小鼠组织中的病毒感染,可作为实验动物国家标准的有力补充。     

小鼠多瘤病毒荧光PCR检测方法的建立及其在裸鼹鼠感染情况调查中的应用

目的建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查。方法比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank:NC_001515)的核酸序列,选择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏感性和特异性进行验证。人工感染9只1日龄KM乳鼠,21 d后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行检测,验证方法在应用中的有效性,最后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本。结果建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100 copies/μL;人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高,脑、胸腺和血液中未检出;62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性。结论建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒,对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考。     

小鼠肝炎病毒检测方法研究进展

小鼠肝炎病毒（Murine Hepatitis Virus, MHV）是一种冠状RNA病毒,常呈潜伏性感染,影响实验动物的质量和动物实验的结果。及时的检测出MHV可控制其流行范围和预防其对动物实验结果的影响。本文就近年来对MHV的检测与诊断方法做出综述,分析了MHV感染对实验动物及动物实验的影响,分析了现有MHV检测方法的优劣,为进一步研究MHV提供理论依据。     

钒在妊娠和非妊娠大鼠体内分布的研究

This paper reports tissue distribution of vanadium in nonpregnant and pregnant Wistar rats. The experimental results showed that vanadium concentrations in nonpregnant rats were respectively from high to low: I. no treatment: ovary greater than uterus greater than kidney greater than lung greater than heart muscle greater than spleen greater than brain greater than liver greater than blood; II. 4h after single i.p. injection of V2O5 (5 mg/kg): kidney greater than ovary greater than liver greater than bone greater than uterus greater than lung greater than heart muscle greater than spleen greater than brain greater than blood. The results suggest that female genital organs are important organs in distribution of vanadium. The kidney is a main excretory organ. After 24h of treatment, a larger amount of vanadium in body has been excreted. Vanadium can pass through blood-brain barrier. Distribution of vanadium on gestation days 12 after 4h single i.p. injection of V2O5 (5 mg/kg) is: kidney greater than ovary greater than uterus greater than placenta greater than liver greater than fetus greater than bone greater than heart muscle greater than lung greater than brain greater than spleen greater than blood; on gestation days 16-18 after 4h single i.p. injection of V2O5 (5 mg/kg) is: kidney ovary greater than placenta greater than lung greater than bone greater than uterus greater than heart muscle greater than spleen greater than fetus greater than liver greater than brain greater than blood; after 24h (on gestation days 16-18) is: kidney greater than ovary greater than placenta greater than spleen greater than bone greater than lung greater than liver greater than fetus heart muscle greater than brain blood.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

UPLC-MS/MS法研究滇乌碱在大鼠体内组织的分布

目的 建立灌胃给药滇乌碱的大鼠中毒模型, 用高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 法测定大鼠血液及各组织中滇乌碱的含量, 研究滇乌碱在大鼠体内的分布情况.方法 将SD大鼠随机分为3组, 分别按2.2 mg/kg, 1.1 mg/kg和0.7 mg/kg剂量灌胃高、中、低剂量组大鼠, 给药2 h后处死, 迅速采取大鼠的心血、胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸和全脑, 液-液萃取法处理后, 用UPLC-MS/MS法测定各生物检材中滇乌碱的含量.结果 滇乌碱大鼠中毒模型给药剂量为1.1 mg/kg, 滇乌碱在大鼠体内分布由高到低的顺序为胃、小肠、肝脏、胰腺、肾脏、肺脏、脾脏、心脏、膀胱、睾丸、心血和大脑.结论 滇乌碱在大鼠体内分布广泛, 尤以胃、小肠和肝脏中含量最高, 该结论为黄草乌中毒的检验材料选取提供依据.     

呋喃丹及其代谢产物呋喃酚在大鼠体内的死后分布研究

建立生物样品中呋喃丹及其代谢物呋喃酚的高效液相色谱-质谱联用内标分析法,研究两者大鼠体内的死后分布规律。灌胃给予大鼠4倍LD₅₀(44 mg/kg)浓度为1.8 mg/mL自制呋喃丹混悬液,死亡后分别于0,12,24,48,72和96 h取材,HPLC-MS/MS法测定心血、心、肝、脾、肺、肾、脑、左下肢肌、胃壁等检材中呋喃丹及呋喃酚含量。结果显示,死后0 h呋喃丹在大鼠体内分布如下:胃壁>肺、肝>肾、脾>心脏、心血、脑,并逐渐从胃壁、肺及心血向肝、肾、心及骨骼肌中转移。而呋喃酚在大鼠体内分布如下:胃壁>心血>肝、肾>脾、肌肉、肺、脑>心,心血、心、肝、脾、肾中的呋喃酚浓度死后显著上升(P<0.05)。呋喃丹的降解及呋喃丹在不同组织间的扩散迁移共同导致了呋喃丹及其代谢产物呋喃酚组织浓度的死后变化。本研究建立的呋喃丹及呋喃酚组织含量HPLC-MS/MS检测方法及获得的死后分布规律可作为呋喃丹中毒死亡案件的法医学鉴定提供参考,并且为全面正确采取检材进行毒物分析提供方向。     

抗RSV脱氧核酶经鼻内给药后在小鼠体内脏器生物分布研究

目的探讨抗RSV脱氧核酶(DZ)经鼻内给药后在小鼠体内脏器的生物学分布。方法合成互补于RSV N基因的基因组转录起始序列的DZ1133:5’TGG GGC AAA GGC TAG CTA CAA CGA ACA AAG ATG 3,’5’端和3’端的2-3个碱基进行硫代修饰,3’端连接一个胆固醇,再进行125I标记。小鼠麻醉后鼻内给药,分别于不同时间点处死小鼠并取各脏器及血液,γ计数仪测放射性计数。结果滴鼻给药后,DZ很快进入肺部和胃肠道并有少量药物吸收入血并进入其他脏器,肺部放射性浓度仅次于胃肠道,于6小时达最高峰,为总药物放射量的15.59%,24小时仍有4.9%的药物存留肺部,其浓度远远高于其他脏器。在其他脏器中,6小时脏器放射性大小依次为肝脏〉肾脏〉心脏〉脾脏〉脑部。结论肺作为DZ治疗RSV感染的靶器官,经麻醉后鼻内给药后能够达到有效浓度,且持续较长时间,建议用药间隔为24小时。     

Multiplication of Pasteurella multocida in the spleen, liver and blood of turkeys inoculated intravenously

After intravenous inoculation of Pasteurella multocida into turkeys the number of organisms increased over 100 times in the liver and 75 times in the spleen three hours after inoculation, but there was no increase in the blood.Between three and 15 hours after inoculation there was no change in the number of organisms in the liver and spleen. The number of organisms rose steadily between 15 and 22 hours after inoculation.After 22 hours there was a very significant increase in numbers of organisms in the liver, spleen and blood. It was found that the increase in number of organisms in the blood occurred rapidly between 22 and 28 hours after inoculation when the number of bacteria in the liver and spleen reached its peak. It appears that the bacteria from the liver and spleen invaded the blood before the death of the turkeys.     

盐酸他可林在大鼠体内的分布和排泄

目的 研究盐酸他可林（ＴＨＡ）在大鼠体内的分布和排泄。方法 大鼠以剂量８ｍｇ／ｋｇ灌胃给予盐酸他可林后，在规定时间摘取各脏器，收集尿粪，提取后用高效液相法测定浓度，分别计算药物在各组织的分布和排泄。结果 ６９％的药物由尿排泄，２４％的药物由粪排泄。在尿粪中原形药ＴＨＡ仅占３．１％。而１－ＯＨ－ＴＨＡ和２－ＯＨ－ＴＨＡ分别为４２．０％放３５．５％，结论 盐酸他可林在大鼠体内的清除途径以羟代谢为主，药     

溴氰菊酯在家兔中死后弥散研究

目的 通过对溴氰菊酯死后弥散现象的研究,观察不受死后再分布现象影响的组织脏器,为溴氰菊酯的法医学检材采取提供实验依据. 方法 家兔处死半小时后分别经口给予4LD50溴氰菊酯,室温下分别放置24 h和48 h解剖,检测心血、股动脉血、尿液、胆汁、心、肝、脾、肺、肾、脑、左下肢肌肉中溴氰菊酯的浓度,比较其变化规律. 结果 家兔处死半小时后经口给予4LD50溴氰菊酯,灌胃24 h后溴氰菊酯就可以从胃弥散至其他组织器宫,心血、周围血、尿液和胆汁中的浓度均高于其他脏器.与24 h组相比,48 h家兔尿液、胆汁、心、脾、肾和左下肢肌肉中溴氰菊酯浓度的变化没有统计学意义. 结论 溴氰菊酯在尿液、胆汁、心、脾、肾和肌肉中的浓度比较稳定,不受死后弥散的影响,在对溴氰菊酯中毒的法医学鉴定可以采取上述检材进行毒物检验和浓度确定.     

逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因的表达

目的：克隆、分析ICR小鼠MN/CA9基因序列,并检测MN/CA9基因在ICR小鼠各组织中的表达。方法：分别取ICR小鼠小肠、肝、肾、脾、胃、胸腺、心脏、卵巢、肺、胰腺、肌肉、皮肤、子宫和膀胱新鲜组织,采用胍尼啶异硫氢酸呱酚氯仿提取法（GIT）提取总RNA。合成cDNA的第1链和第2链,连接EcoRⅠ载体,EcoRⅠ末端磷酸化,XhoⅠ消化,将cDNA构建到ZAP express vector进行包装、种植培养,筛选、切取噬菌体,使用引物扩增后进行DNA 序列分析。用逆转录聚合酶链反应检测小鼠MN/CA9基因在上述组织中的表达。结果：使用人类MN/CA9基因片段做探针,用放射性同位素 ³² P 标记探针,筛选1.47×10³大肠埃希菌落,杂交后发现一阳性cDNA信号,序列测定确定其含1 671 bp核苷酸序列（已在GenBank 登录,登录号AB086322）,这个序列与人类的MN/CA9 (基因序列号Z54349)有69.1％的同源性。在引物P521-P1193区间,MN/CA9基因在小鼠小肠、子宫、肌肉、胰腺、心脏、肺、胸腺、脾、肾、卵巢、胃和膀胱组织表达均较强,在皮肤和肝脏不表达。结论：MN/CA9基因在ICR小鼠组织中的表达与人类基本相同,可以用ICR小鼠进行MN/CA9基因的研究。