不同卵龄小鼠卵母细胞激活和受精的比较研究(英文)

本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探讨卵母细胞激活和受精的机制。向ＮＩＨ雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（ＰＭＳＧ）７．５单位,４８小时后注射人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）７．５单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体（ＯＣＣ）。从注射ＨＣＧ后到取ＯＣＣ的时间视为卵母细胞的卵龄。将ＯＣＣ置于含８％酒精的Ｍ２中７分钟,再在Ｍ１６中培养５小时后,用０．３ｍｇ／ｍＬ的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志。将ＯＣＣ加入已获能的精子悬液中,５小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到Ｍ１６中,次日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为２０ｈ,其激活率为８１．６％,速即卵裂率为４８．０％;而卵龄进一步增加到２４ｈ,激活率和卵裂率转为下降（Ｔａｂｌｅ１）。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为１５ｈ,卵母细胞的体外受精率为４５．４％;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降（Ｔａｂｌｅ２）。Ｆｉｇ．１显示：新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结     

小鼠卵激活过程中胞质游离Ca^2＋的变化及孤雌发育研究

乙醇和电刺激均可使小鼠ＭⅡ期卵母细胞激活并在体外孤雌发育至囊胚。小鼠卵对乙醇十分敏感。用７％－８％乙醇处理５ｍｉｎ后９５％以上的卵母细胞（卵龄为ＨＣＧ注射后１８－１９ｈ）内形成原核。３－４次电刺激后卵的激活率为６３．６３％。乙醇刺激可诱导卵内游离Ｃａ＾２＋浓度出现多次升高;单一电刺激仅能诱导卵内游离Ｃａ＾２＋浓度出现１次升高;多次电刺激可诱导卵内游离Ｃａ＾２＋浓度多次升高,而且电刺激次数与Ｃａ＾２     

不同卵龄小鼠卵母细胞激活和受精的比较研究

本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探索卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素（PMSG）7．5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素（HCG）7．5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体（OCC）。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8％酒精的M2中7分钟,再在16中培养5小时后,用0．3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志,将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,将日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81．6％,速即卵裂率为48．0％;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降（Table1）。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h ,卵母细胞的体外受精率为45．4％;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降（Table2)。Fig.1显示：新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结构、功能及对外界刺激的敏感状态都在发生一些规律性的变化,而激活和受精的机制不完全,还不能精对卵龄的要求要严格。     

电刺激家兔卵母细胞孤雌活化的研究

采用电刺激使家兔卵母细胞孤雌活化,并对电刺激参数和电刺激介质进行选择,发现在电刺激电压为1.5kV/cm,脉冲持续时间为80us,电刺激3次,电刺激介质为M16的条件下,兔卵母细胞孤雌活化效果最好,可使95％的兔卵母细胞激活,体外培养有89.5％的激活卵发育到正常的8—16细胞期,12％的激活卵发育到囊胚,在体内培养的条件下,26％的激活卵发育到囊胚。采用不同的电刺激介质,卵母细胞最佳激活条件和发育情况不同,表明电刺激介质中Ca~(++)和Mg~(++)浓度似乎与卵母细胞的孤雌活化和维持早期发育有关。家兔在注射LH后17—19小时取卵,电刺激效果最好,激活卵在含细胞松弛素B的培养基中培养3小时,电镜观察已有原核形成,细胞膜附近的细胞器向中央移动。光镜检查表明:约有85％的激活卵具有二个原核,约15％的激活卵有四个原核。     

小鼠卵母细胞体外成熟受精过程中细胞核的时空变化规律

用电镜方法研究小鼠卵母细胞的发育及受精虽然已有很多报道,但大多数是有关细胞质、尤其是皮质颗粒、高尔基复合体及线粒体的形态及分布变化的。从卵母细胞体外成熟培养、第一次减数分裂恢复到受精后第二次减数分裂完成,细胞核经历了复杂的变化,有关的系统研究却很少。本实验详细地研究了小鼠卵母细胞体外成熟受精过程中两性生殖细胞内细胞核的时空变化规律。从卵巢中采集生发泡（GV）期卵母细胞,进行体外成熟培养,经超排获得的成熟卵母细胞去卵丘和透明带后,用于体外受精。于体外成熟培养及受精后的不同时间,用光镜及电镜方法观察细胞核变化及极体排放。结果说明,尽管大多数 母细胞在体外培养2至4小时发生泡破裂（GVBD）,但有13．6％在培养8小时后仍处于GV期（图1）。电镜观察揭示,不发生GVBD的卵母细胞核的核仁由颗粒性纤维成分、空泡及纤维中心组成有时核仁表面有空泡。只有核仁完全致密化、核仁周围有核仁相随染色质分布时,卵母细胞才获得恢复减数分裂的能力。GVBD发生时,随着核仁相随染色质向核膜侧扩散迁移,核仁越来越小;与此同时,核膜打折,染色质团块中央出现电子致密的芯。核仁的消失早于核膜的破裂,提示核仁成分可能参与核膜打折及破裂,体外培养5小时,卵母细胞减数分裂进入前中期,染爸体分布于不含任何细胞器的原GV区域,其周围有特别丰富的线粒体（PB1）（图2）。原核期的卵中,含有一个原核和一个以上原核的卵各自的百分率在培养的8小时内是随着时间的延长而不断增加的。体外受精后1小时,进入卵质的精子头开始去致密。2小时后已形成含有致密核仁的早期雄原核。雌原核的形成及增大稍早于雄原核。受精后8－9小时,已形成含有致密核仁的早期雄原核。雌原核的形成及增大稍早于雄原核。受精后8－9小时,33．3％的卵子两性原核相互靠近。原核核仁的形成过程与GVBD时核仁的变化恰好相反。受精后2至5小时,第二极体（PB2）排出,PB1和PB2的区别在于：1）PB1表面有微绒毛,PB2没有;2）PB1中含皮质颗粒;3）PB2中形成细胞核及核仁,PB1则无;4）二者的形状及大小不同。文中还讨论了极体排放的机理（图A－T）。     

Effects of Protein Synthesis on the Maturation of Mouse Oocytes in vitro

卵母细胞成熟过程中伴随有多种蛋白质的合成与磷酸化,蛋白质的合成对卵细胞的成熟具有重要作用。本实验较系统地阐述小鼠卵母细胞体外成熟培养的不同阶段蛋白质合成对卵母细胞成熟的影响。放线菌酮是肽链延伸的抑制因子。将生发泡（ＧＶ）期的卵母细胞分别于Ｔ６成熟培养液中培养０、４、６、９小时后,转至含有１０ｍｇ／ｍｌ放线菌酮的Ｔ６成熟培养液继续培养１２１５小时。固定、染色、观察卵母细胞。结果如Ｔａｂｌｅ１。０小时实验组：抑制处理４小时,其生发泡破裂（ＧＶＢＤ）发生率与对照组无明显差异。表明：卵母细胞ＧＶＢＤ所需蛋白质（如：成熟促进因子ＭＰＦ等）是在卵巢的卵泡卵母细胞生长过程中完成的。４、６小时实验组：笫一极体的释放被完全抑制,卵母细胞不能达到ＭＩ期,染色质处于凝集状态（Ｆｉｇ．３＆４）。表明：ＧＶＢＤＭＩ期间所需蛋白质的合成对卵母细胞ＭＩ期中期纺缍体的形成与维持具有重要作用。９小时实验组：可能由于卵母细胞发育速度存在个体间的差异。没有进入ＭＩＩ期的便停滞于ＭＩ期以前。进入ＭＩ期的则能排出笫一极体。因此,笫一极体的释放总体上呈不完全抑制状态,其释放率低于对照组。但是,后者虽然弪过恢复培养至１５小时,可能由于微管蛋白的合成     

小鼠卵激活过程中胞质游离Ca~(2 )的变化及孤雌发育研究

乙醇和电刺激均可使小鼠MⅡ期卵母细胞激活并在体外孤雌发育至囊胚。小鼠卵对乙醇十分敏感。用7%—8%乙醇处理5min后95%以上的卵母细胞(卵龄为HCG注射后18—19h)内形成原核。3—4次电刺激后卵的激活率为71.58%;仅刺激1次卵的激活率为63.63%。乙醇刺激可诱导卵内游离Ca~(2 )浓度出现多次升高;单一电刺激仅能诱导卵内游离Ca~(2 )浓度出现1次升高;多次电刺激可诱导卵内游离Ca~(2 )浓度多次升高,而且电刺激次数与Ca~(2 )浓度升高成一一对应关系。对于电刺激,介质中足够量的Ca~(2 )对卵激活至关重要。在无Ca~(2 )的介质中,电刺激很难使卵激活。正常受精刺激诱导卵内游离Ca~(2 )浓度出现多次有规律的升高。实验结果表明,卵母细胞激活过程中胞质游离Ca~(2 )浓度重复多次升高可促使卵母细胞恢复成熟分裂。     

卵龄和培养液中青霉素浓度对小鼠卵母细胞酒精孤雌活化效果的影响

本实验结果说明N:NIH小鼠排卵后6小时的卵母细胞酒精孤雌活化率最高,达90％。卵母细胞的孤雌活化率与培养液中的青霉素浓度成反比。卵母细胞经酒精活化后的主要发育途径,除其他人报道的一极体一原核(1 PB,1PN),一极体二原核(1 PB,2 PN),一极体二细胞(1 PB,2-Cell),二极体无原核(2 PB,0 PN)和二极体一原核(2 PB,1 PN)型之外,还发现有三细胞,四细胞,四细胞或多细胞直接分裂的现象,以及卵裂球以类似螺旋式卵裂的方式排列的特殊现象。     

卵龄和脉冲持续时间对小鼠卵母细胞电活化效果的影响

实验研究了相同电场强度，一次脉冲条件下，不同脉冲持续时间和不同卵龄对小鼠卵母细胞电活化效果的影响，结果说明：（１）在场强０．４５ＫＶ／ｃｍ，一次脉冲持续时间为１０、２０和４０μｓ时，卵母细胞活化率很低，仅为９．８％，５．５％和１２％，当脉冲持续８０、１６０、３２０、６４０和２８０μｓ时，活化率明显升高，分别为３６．５％、５３．３％，５９．７％，５１．２％和３９．４％，脉冲持续时间对卵线细胞碎裂率影     

化学联合激活可明显提高小鼠孤雌胚胎发育率

为探讨一种高效的小鼠卵母细胞孤雌激活的方案,进一步提高孤雌囊胚发育率。用不同浓度的氯化锶及不同作用时间的乙醇,并分别联合6-DMAP对不同卵龄小鼠卵母细胞进行活化,统计小鼠卵母细胞卵裂率和体外发育状况。结果显示,15～16h、18～19h和20～21h卵龄组卵母细胞经6mmol/LSrCl2联合6-DMAP处理后,三组的激活率随卵龄增长而升高,其中20～21h卵龄组显著高于15～16h、18～19h组(P<0.05),激活胚胎的发育率以18～19h时最高;6mmol/L和10mmol/L的SrCl2联合6-DMAP均能有效地激活小鼠卵母细胞,激活率分别为76.4%和83.6%,桑葚胚率分别为50.0%和56.3%;70ml/L乙醇联合6-DMAP以处理7min组获得了较好的激活率和囊胚发育率,分别为77.1%和42.4%,囊胚率均显著高于4min和10min处理组(P<0.05)。6-DMAP与SrCl2或乙醇联合应用可以有效抑制第二极体的排出,提高激活胚的二倍体比率;孤雌囊胚的平均细胞数显著低于正常受精囊胚(P<0.05)。不同激活方案对孤雌活化胚的核型和发育能力的作用差异较大,小鼠卵母细胞孤雌激活率与卵龄...     

小鼠年龄及卵丘—卵母细胞间联接的解离对卵母细胞体外成熟的影响

实验研究了小鼠卵母细胞体外过程中卵丘－卵母细胞间的相互作用。实验小鼠为雌性Ｂ６Ｄ２杂交一代。激素处理４８小时后分离出卵后天和卵母细胞复合体,并培养在含有次黄嘌呤的培养液中。２４小时后检查卵母细胞核成熟情况。     

绵羊体外成熟卵母细胞的电激活及其在体外孤雌发育的研究

首先对绵羊卵母细胞收集及其体外成熟（ＩＶＭ）条件进行了摸索,然后对影响电刺激激活ＩＶＭ卵母细胞的因素进行了研究,观察激活后卵母细胞在体外的发育能力。结果表明,剥离法比注射器吸卵法所获得的卵母细胞成熟率高,激活更加正常。剥离法收集的卵母细胞体外成熟培养２７小时后,以含０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＣａＣｌ２、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＳＯ４和１０ｍｍｏｌ／Ｌ组氨酸的０．２８ｍｏｌ／Ｌ肌醇（ｉｎｏｓｉｔｏｌ）作基     

FSH诱导卵丘细胞分泌一种促减数分裂物质(英文)

本实验利用卵母细胞的体外培养模型,将小鼠卵丘－卵母细胞复合体（ＣＥＯ）和去卵丘卵母细胞（ＤＯ）在体外培养,系统研究了促性腺激素（ＦＳＨ、ｈＣＧ）诱导小鼠卵母细胞减数分裂的机制。结果显示,ＦＳＨ能剂量依赖性地诱导ＣＥＯ恢复减数分裂（Ｆｉｇ．１）,但对ＤＯ无影响;ｈＣＧ对 ＣＥＯ、 ＤＯ皆无效果（Ｆｉｇ．２）;用 ＦＳＨ预处理ＣＥＯ时间达到１小时后,就能显著诱导卵母细胞成熟,２小时后作用达到最大;不再增强（Ｆｉｇ．３）;用 ＦＳＨ处理ＣＥＯ ２小时及２４小时的培养液,能诱导ＤＯ恢复减数分裂,但预处理卵丘细胞２４小时的培养液,并不能诱导ＤＯ恢复减数分裂（Ｆｉｇ．４Ａ）;这种培养液在７０℃下３０分钟后,仍能刺激ＤＯ成熟（Ｆｉｇ．４Ｂ）;甾醇类物质合成抑制剂酮康唑,可剂量依赖性地抑制ＦＳＨ的促减数分裂恢复作用（Ｆｉｇ．５）。这些结果说明, ＦＳＨ可能诱导卵丘－卵母细胞复合体中的卵丘细胞分泌一种促减数分裂恢复物质;该物质作用于卵母细胞,诱导其恢复减数分裂而成熟;这种物质可能是一种甾醇类物质。     

小鼠卵母细胞体外成熟及受精过程中细胞核的时空变化规律

用电镜方法研究小鼠卵母细胞的发育及受精虽然已有很多报道,但大多数是有关细胞质、尤其是皮质颗粒、高尔基复合体及线粒体的形态及分布变化的。从卵母细胞体外成熟培养、第一次减数分裂恢复到受精后第二次减数分裂完成,细胞核经历了复杂的变化,有关的系统研究却很少。本实验详细地研究了小鼠卵母细胞体外成熟及受精过程中两性生殖细胞内细胞核的时空变化规律。从卵巢中采集生发泡（ＧＶ）期卵母细胞,进行体外成熟培养,经超排获得的成熟卵母细胞去卵丘和透明带后,用于体外受精。于体外成熟培养及受精后的不同时间,用光镜及电镜方法观察细胞核变化及极体排放。结果表明,尽管大多数卵母细胞在体外培养２至４小时生发泡破裂（ＧＶＢＤ）,但有１３．６％在培养８小时后仍处于ＧＶ期（图１）。电镜观察揭示,不发生ＧＶＢＤ的卵母细胞核的核仁由颗粒性纤维成分、空泡及纤维中心组成。有时核仁表面有空泡。只有核仁完全致密化、核仁周围有核仁相随染色质分布时,卵母细胞才获得恢复减数分裂的能力。ＧＶＢＤ发生时,随着核仁相随染色质向核膜侧扩散迁移,核仁越来越小;与此同时,核膜打折,染色质团块中央出现电子致密的芯。核仁的消失早于核膜的破裂,提示核仁成分可能参与核膜打折及破裂,体外培     

体外受精和孤雌活化过程中小鼠胚胎细胞骨架的动态变化

为研究微管在体外受精与孤雌活化过程中的动态变化,本实验比较了体外受精胚胎、SrCl2激活的孤雌胚胎和体内受精的原核期胚胎在体外发育的情况,采用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术检测卵母细胞孤雌活化过程中及体外受精后微管及核的动态变化,以分析微管在减数分裂过程中的作用及其对早期发育的影响.结果显示,体内受精胚胎的发育率显著高于体外受精和孤雌激活胚胎体外发育率(P<0.05),而体外受精与孤雌激活胚胎在各阶段发育率差异均不显著.在体外受精中,精子入卵,激活卵母细胞,减数分裂恢复,纺锤丝牵拉赤道板卜致密排列的母源染色体向纺锤体两侧迁移;后期将染色体拉向两极;末期时,微管分布于两组已去凝集的母源染色体之间,卵母细胞排出第二极体(the second polarbody,Pb2),解聚的母源染色体形成雌原核.同时,在受精后5～8 h精子染色质发生去浓缩与再浓缩,形成雄原核.在原核形成的同时,胞质星体在雌、雄原核的周围重组形成长的微管,负责雌、雄原核的迁移靠近.孤雌活化过程中,卵母细胞恢复减数分裂,姐妹染色单体分离,被拉向两极,经细胞松弛素B处理后,活化4～6 h,卵周隙中未见Pb2,而在胞质中出现两个混合的单倍体原核,之间由微管相连接,负责两个单倍体原核的迁移靠近.与体外受精相比较,孤雌活化时卵母细胞更容易被激活,减数分裂期间微管的发育早且更完善.     

小鼠卵受精和人工激活过程中胞质游离Ca^2＋变化及其在卵激活中的作用

休止于第二次成熟分裂中期（ＭＩ）的小鼠卵母细胞分别乙醇,钙离子载体Ａ２３１８７、电刺激或精子激活并用Ｃａ＾２＋特异荧光探针－Ｆｕｒａ２／ＡＭ测定细胞内游离Ｃａ＾２＋的变化。结果表明,受精诱导ＭⅡ卵内游离Ｃａ＾２＋浓度多次跃升（ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ）乙醇,钙离子载体及１次电刺激仅诱导胞内Ｃａ＾２＋１次升高,人工诱导激活的卵可象正常受精卵一样卵裂并发育至囊胚,用ＥＧＴＡ阻止受精和人工激活过程中卵内游     

家养双峰驼卵巢卵母细胞的体外受精与早期发生的初步研究

本研究将采自屠宰母驼的卵卵母细胞在含有促性腺激素和胎牛血清的Ｍ１９９培养液中培养成熟后,将公驼附睾精子于含有咖啡因和牛血清蛋白的ＢＯ培养液中进行获能培养２小时,然后将成熟卵母细胞移入经过培养的精子悬液中,６－７小时以后将卵子移入含有胎牛血清及及丙酮酸钠的Ｍ１９９中继续培养。结果表明,经过成熟培养后有４６．７％（１４／３０）的卵母细胞发育为成熟卵子,并获得了４３．２％（１６／３７）的体外受精率,实验     

可口革囊星虫受精过程及早期卵裂的细胞学变化

为探究可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)受精过程中精子入卵、极体排放、雌雄原核的形成与结合以及早期卵裂的特点,为胚胎发育机制研究奠定基础及指导人工育苗,显微观察了可口革囊星虫卵母细胞的形态;用荧光染色剂HOECHST33258对已固定的成熟卵及受精卵进行染色的方法,在荧光显微镜下观察了可口革囊星虫受精过程及第一与第二次卵裂的细胞学变化。成熟卵呈椭圆形,卵膜较厚,核区偏位,染色体排列整齐。在水温30℃-31℃、盐度23条件下,授精后5min-10min,精子完成入卵;授精后10min-20min,完成第一次减数分裂、释放第一极体;授精后20min-30min,完成第二次减数分裂、放出第二极体,部分受精卵的第一极体分裂为二;授精后30min-40min,雌、雄原核形成,并相互靠近向卵中央迁移;授精后40min-50min,雌、雄原核在卵中央结合成合子核;授精后50min-70min及70min-90min分别完成第一及第二次卵裂。可口革囊星虫的受精过程及早期卵裂的细胞学特点为:1)成熟卵是处在第一次减数分裂中期的初级卵母细胞,具有受精能力;2)精子入卵位点是随机的,存在多精入卵现象;3)雌、雄原核以融合方式结合成合子核;4)第一及第二次卵裂均为经裂、不等裂。     

FSH诱导卵丘细胞分泌一种促减数分裂物质

本实验利用卵母细胞的体外培养模型,将小鼠卵丘－卵母细胞复合体（CEO）和去卵丘卵母细胞（DO）在体外培养,系统研究了促性腺激素（FSH、hCG）诱导小鼠卵母细胞减数分裂的机制。结果显示,FSH能剂量依赖性地诱导CEO恢复减数分裂（Fig.1),但对DO无影响;hCG对CEO、DO皆无效果（Fig.2);用FSH预处理CEO时间达到1小时后,就能显著诱导卵母细胞成熟,2小时后作用达到最大,不再增强（Fig.3);用FSH处理CEO2小时及24小时的培养液,能诱导DO恢复减数分裂,但预处理卵丘细胞24小时的培养液,并不能诱导DO恢复减数分裂（Fig.4A);这种培养液在70℃下30分钟后,仍能刺激DO成熟（Fig.4B);甾醇类物质合成抑制剂酮康唑,可剂量依赖性地抑制FSH的促减数分裂恢复作用（Fig.5)。这些结果说明,FSH可能诱导卵丘－卵母细胞复合体中的卵丘细胞分泌一种促减数分裂恢复物质;该物质用于卵母细胞,诱导其恢复减数分裂而成熟;这种物质可能是一种甾醇类物质。     

中国对虾受精过程中精卵核的细胞学变化

中国对虾精子以其棘部顶端随机附着在卵上,精子在凝胶膜形成后,第一极体排出前入卵,精子入卵后,絮状的精核经过重建形成雄原核,中国对虾卵子排放时处于第一次成熟分裂的中期,卵子入海水时,纺锤体的长轴与质膜平行,卵子激活后,纺锤体的长轴开始旋转,旋转至纺鲑体长轴与质膜垂直时,由纺锤丝牵引着染色体向两极移动,外侧的染色体由质膜包裹形成第一极体,受膜举起后,由次级卵母细胞排放出第二极体,此后,单倍雌核重建形成雌原核,雄原核形成早于雌原核,雌雄原核于卵子中央联会形成联合核,受精后的50分钟纺锤丝牵关染色体称向两极,质膜内缢断裂形成两个细胞的胚胎。