雷公藤甲素对人肝细胞L-02肝药酶活性的影响

目的:研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞的损伤作用及其对肝CYP3A及CYP2E1蛋白表达量的影响。方法:体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的损伤,试剂盒测定培养基上清液中AST、ALT及AKP活性,Western-blot测定细胞中CYP3A及CYP2E1蛋白的含量。结果:雷公藤甲素对L-02细胞有损伤作用,且随雷公藤甲素浓度的增加或孵育时间的延长,其损伤作用增强,同时,培养基中AST、ALT及AKP的活性增强;雷公藤甲素诱导细胞中CYP3A蛋白表达减弱,CYP2E1蛋白表达增强。结论:雷公藤甲素体外对人正常肝细胞L-02细胞有损伤作用,且能影响肝CYP450酶系的表达。     

盐酸小檗碱与环孢素A合用对大鼠肝P450同工酶和mdr1的影响

目的　阐明盐酸小檗碱 (berberinechloride ,Ber)及其与环孢素A (cyclosporin ,CsA)合用对大鼠肝脏P4 5 0同工酶和多药耐药基因的影响。方法　采用分光光度法测定大鼠肝微粒体红霉素N 脱甲基酶 (ERD)、氨基比林N 脱甲基酶(ADM )的活性 ,采用RT PCR法测定大鼠肝脏CYP3A1、CYP1A1、CYP2E1、mdr1a和mdr1b基因的水平。结果　灌胃给药 6d后 ,除外 10 0mg·kg-1Ber组 ,其余各组对ERD活性有明显的抑制作用 ;给药 12d时 ,所有用药组对ERD活性均有抑制作用。给药 6d后 ,CsA单用组、Ber与CsA合用组对ADM均有抑制作用 ;给药 12d后 ,除了 15 0mg·kg-1酮康唑组和 10 0mg·kg-1Ber组外 ,其余各用药组对ADM均有抑制作用。给药 12d时 ,除了 10 0mg·kg-1Ber组外 ,其余各用药组对大鼠肝脏CYP3A1、CYP2E1、mdr1a、mdr1b基因均有抑制作用。各组的CYP1A1基因均未能检出。结论　抑制CYP3A基因的表达及酶的活性 ,抑制mdr1a、mdr1b基因的表达 ,从而减少CsA在肝脏的代谢及消除 ,可能是Ber增加CsA血浓度的重要机制     

脉络宁注射液对小鼠肝药酶活性的影响

目的：通过测定细胞色素P450（CYP450）含量和甲醛生成率,考察脉络宁注射液对小鼠总CYP450以及红霉素-N-脱甲基酶（CYP3A）和氨基比林-N-脱甲基酶（CYP2E1）活性的影响。方法：采用紫外分光光度法和体外温孵反应,测定并比较了给药组和对照组小鼠在肝脏系数、微粒体蛋白含量、CYP450含量及甲醛生成速率方面的差异。结果：两种剂量脉络宁对小鼠肝脏系数和CYP450含量影响都不显著,但均能提高微粒体蛋白含量;两种剂量脉络宁均可抑制CYP2E1的活性,临床等效用量时对CYP3A活性影响不显著,高剂量时可能抑制CYP3A活性。结论：脉络宁注射液对CYP3A和CYP2E1亚型活性有影响。     

基于Nrf2信号通路探讨异甘草酸镁对雷公藤甲素损伤L-02细胞中相关蛋白表达的影响

目的基于Nrf2-ARE信号通路探讨异甘草酸镁对雷公藤甲素损伤L-02细胞的保护作用及相关机制。方法体外培养正常人肝L-02细胞,通过免疫荧光技术检测异甘草酸镁(60μmol·L^-1)对雷公藤甲素(80nmol·L^-1)损伤L-02细胞中Nrf2核转移的影响;采用Western blotting测定细胞核中Nrf2及细胞中细胞色素P450 3A4(CYP3A4)、多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance associated protein 2,MRP2)和胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)的蛋白表达。结果雷公藤甲素对L-02细胞核中Nrf2具有诱导作用(P<0.01),并促进Nrf2核内转移;异甘草酸镁预处理组较雷公藤甲素组降低L-02细胞核中Nrf2的表达(P<0.01);异甘草酸镁预处理后对雷公藤甲素损伤L-02细胞中CYP3A4、MRP2和BSEP蛋白表达具有诱导作用(P<0.01)。结论异甘草酸镁可减轻雷公藤甲素对L-02细胞造成的损伤作用,其机制可能与诱导细胞核中Nrf2以及细胞中CYP3A4、MRP2和BSEP受体有关。     

益母草碱对小鼠肝药酶含量的影响

摘 要 目的：研究益母草碱对小鼠肝药酶含量的影响。 方法: 将40只ICR小鼠随机分为5组：空白对照组、益母草碱高（120 mg·kg-1）、中（90 mg·kg-1）、低剂量组（60 mg·kg-1）、阳性对照组（苯巴比妥钠,80 mg·kg-1）,每组8只。益母草碱组灌胃给药,1次/d,连续进行7 d;阳性对照组腹腔注射给药,1次/d,连续进行5 d;空白对照组给予同等体积的生理盐水。检测肝微粒体蛋白、细胞色素P450酶（CYP450）、细胞色素b5（CYPb5）、氨基比林N 脱甲基酶（ADM）、红霉素N 脱甲基酶（ERD）、谷胱甘肽S 转移酶（GST）含量。结果: 与空白对照组相比,益母草碱各剂量组肝微粒体蛋白含量变化不明显（P>0.05）,CYP450、CYPb5、ADM含量显著降低（P<0.01）,中、高剂量组的ERD和高剂量组的GST含量显著降低（P<0.01）。益母草碱各剂量组与阳性对照组相比,以上各指标差异均有统计学意义（P<0.01）。 结论: 益母草碱能明显降低小鼠肝微粒体肝药酶的含量,下调CYP3A和CYP2E1的表达,其作用效果与益母草碱给药剂量相关。     

联苯双酯与环孢素合用对大鼠肝药物代谢酶的影响

目的:阐明联苯双酯与环孢素合用对药物代谢酶的影响.方法:采用分光光度法测定联苯双酯、环孢素及两者合用时大鼠肝微粒体红霉素N-脱甲基酶(erythromycin demethylase,ERD)、氨基比林Ⅳ-脱甲基酶(aminopyrence N-demethylase,ADM)和谷胱甘肽s转移酶(glutathione S transferenase,GST)的含量或活性.结果:灌胃给药8 d,联苯双酯(200 mg·kg-1)对ADM和GST没有明显诱导作用,但对ERD有显著诱导作用(P<0.01);环孢素(20 mg·kg-1)对ERD和GST没有显著抑制作用(P<0.01);但对ADM有显著抑制作用;联苯双酯与环孢素合用对ADM和GST均有明显抑制作用(P<0.01).结论:BFD是药物代谢酶ERD(CYP3A4)的诱导剂,是ADM(CYP1A1,281,2C11)的抑制剂;BFD与环孢素合用可以抑制ADM(CYP1A1、2B1、2C11)和GST的活性.     

丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏CYP450酶的影响

目的 研究丁香酸和柠檬苦素对小鼠肝脏细胞色素P450主要亚型mRNA及蛋白表达水平的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、丁香酸组、柠檬苦素组和苯巴比妥组,连续灌胃给药2周,末次给药后处死,提取小鼠肝脏总RNA及肝微粒体,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术和蛋白质免疫印迹(Western blot)测定CYP450酶主要亚型mRNA和蛋白表达水平.结果 在mRNA水平上,丁香酸对Cyp1a2、Cyp2c37、Cyp2d9 mRNA表达没有明显作用,柠檬苦素对Cyp1a2 mRNA的表达有显著诱导作用;在蛋白水平上,丁香酸对CYP1A1、CYP1A2、CYP3A、CYP2D和CYP2E1蛋白的表达有明显的诱导作用,柠檬苦素对CYP1A1、CYP1A2、CYP2A、CYP2D和CYP2E1有显著的诱导,对CYP2B和CYP2C蛋白表达产生抑制作用.结论 丁香酸和柠檬苦素对细胞色素P450主要亚型均具有不同程度的诱导和抑制作用.     

地塞米松对大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450的诱导效应

目的:观察地塞米松(dexamethasone,DEX)对细胞色素P-450(cytochrome P450,CYP450)的诱导效应,并探讨其诱导机制.方法:雄性Wistar大鼠分别以DEX 0,25,50和100mg·kg-1·d-1诱导处理(ip)4d后,测定大鼠肝脏总CYP450含量,CYP3A1,CYP3A2和CYP2B 1/2的mRNA及蛋白的表达水平,肝脏ERD(CYP3A活性),PROD(CYP2B活性)和BROD(总CYP450活性).结果:CYP450含量、ERD、PROD和BROD活性在DEX多次诱导后都有升高.CYP3A1 mRNA表达水平、蛋白含量和酶活性有明显的升高,剂量效应关系明显;CYP3A2蛋白明显升高,但mRNA表达水平却无明显变化.PROD和CYP2B1/2的mRNA表达水平以及总CYP450含量均在50mg·kg-1·d-1剂量组达到最高值.结论:DEX对雄性大鼠主要诱导CYP3A1和CYP3A2两个CYP450成员表达上调,对CYP2B1/2也有一定的诱导作用,其诱导作用主要表现在酶活性、酶蛋白含量和mRNA表达水平的升高.CYP3A1和CYP3A2的诱导方式可能不同.     

加替沙星和环丙沙星对大鼠肝细胞色素P450酶系的影响

目的 研究加替沙星和环丙沙星对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响。方法 加替沙星和环丙沙星400 mg.kg-1灌胃给药大鼠,qd,7天后,用差速离心法制备大鼠肝微粒体,用Lowry法测定蛋白浓度,用分光光度计法检测6种肝微粒体细胞色素P450酶含量及活性,并用单因素方差分析进行统计。结果 加替沙星组的6种细胞色素P450酶的活性与空白对照组相比差异无统计学意义;而环丙沙星能抑制6种细胞色素P450酶中的b5、NADPH-CytC还原酶、氨基比林N-脱甲基酶、红霉素N-脱甲基酶和7-乙氧基香豆素脱烃酶的活性,对CYP450酶系有选择性抑制作用。结论 加替沙星对大鼠肝微粒体CYP450酶系无显著性影响,而环丙沙星对CYP450酶系有选择性抑制作用。     

慢性间断性低氧对大鼠肝脏细胞色素P450的影响

目的观察慢性间断性低氧对大鼠肝脏P450同工酶的影响。方法♂SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组分别低氧3、7、14、28d。采用酶法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,分光光度法测定大鼠肝微粒体红霉素N-脱甲基酶(ERD)、苯胺羟化酶(ANH)活性,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肝脏细胞色素P4503A2、2E1的mRNA表达水平。结果慢性间断性低氧对血清ALT和AST活性无明显影响;低氧7d后,大鼠肝脏ERD和ANH活性明显升高,28d时诱导率分别为155·5%和42·2%;同时CYP3A2和CYP2E1mR-NA的表达水平,也分别增加了220·5%和102·8%。结论慢性间断性低氧能明显增加大鼠肝脏ERD(CYP3A2)和ANH(CYP2E1)活性,其机制可能与其在转录水平上提高肝脏CYP3A2和CYP2E1的基因表达水平有关。     

雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢及酶促反应动力学研究

目的:研究雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢及酶促反应动力学。方法:将雷公藤甲素与5种不同诱导剂(地塞米松(DEX)、苯巴比妥(PB)、β-萘黄酮(β-NF)、吡啶(PD))诱导的大鼠肝微粒体进行体外共孵育;并与8种选择性CYP酶抑制剂(酮康唑、醋竹桃霉素、磺胺苯吡唑、二乙基二硫代氨基甲酸酯(盐)、奎尼丁、呋拉茶碱、毛果芸香碱、奥芬那君)在空白肝微粒体中共孵育。采用液相色谱-质谱联用技术测定孵育后剩余雷公藤甲素的含量。结果:酮康唑和醋竹桃霉素能明显抑制雷公藤甲素的代谢;磺胺苯吡唑和奥芬那君对其代谢也有一定抑制作用,但不及酮康唑和醋竹桃霉素。结论:雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢主要由CYP3A介导,其次由CYP2C和CYP2B介导。     

淫羊藿苷对不同月龄大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的 揭示淫羊藿苷(Ica)对大鼠肝微粒体细胞色素P450的含量及部分亚型的影响,并比较月龄的差异.方法 ig给予6月龄和18月龄的♂SD大鼠Ica( 60 mg· kg -1),4周后取肝脏,用钙沉淀法提取肝微粒体,BCA法测定微粒体蛋白浓度;用一氧化碳还原差示光谱法测定CYP450的含量;用ELISA法测定CYP1 A1、CYPb5的含量;用比色法测定苯胺羟化酶(反映CYP2E1活性)和红霉素-N-脱甲基酶(反映CYP3A活性)的活性;用real - time RT - PCR检测CYP1 A1、CYP2A3、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2和CYP4B1 mRNA的表达.结果 60 mg· kg-1 Ica明显增加了CYP450的总酶和CYP1 A1的含量、CYP3A的活性及CYP1 A1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA的表达,降低了CYP2E1的活性及其mRNA的表达;但Ica对上述各指标的诱导或抑制作用在大鼠月龄方面差异不明显;Ica对CYPb5的含量及CYP2A3、CYP4B1 mRNA的表达未见明显影响.结论 Ica对大鼠肝微粒体CYP450总酶、CYPI A1和CYP3A具有诱导作用,对CYP2E1具有抑制作用,该作用未见明显月龄差异.     

因宁片对甲亢性肝损害模型大鼠肝脏细胞色素P450基因表达的影响

目的:研究因宁片对甲亢性肝损害模型大鼠肝脏细胞色素P450(CYP450)基因表达的影响。方法:采用L-甲状腺激素钠灌胃以复制甲亢性肝损害大鼠模型。实验分为6组,即空白对照、模型、甲亢灵和因宁片高、中、低剂量(2.4、1.2、0.6g.kg-1)组。通过实时荧光定量聚合酶联反应(PCR)方法检测因宁片对肝组织内CYP1A2、CYP2E1和CYP3A2基因表达的影响。结果:与模型组比较,因宁片高、中剂量组大鼠肝脏CYP2E1的表达显著减弱(P<0.05),CYP1A2和CYP3A2的表达无明显改变(P>0.05)。结论:因宁片能下调甲亢大鼠肝脏CYP2E1基因的表达,这可能是因宁片治疗甲亢性肝损害的分子作用机制之一。     

淫羊藿总黄酮对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响

评估淫羊藿总黄酮对大鼠肝细胞色素P450及其主要亚型活性的潜在影响。淫羊藿总黄酮以300mg／kg／d的剂量对SD大鼠进行连续灌胃处理15天，测定肝微粒体中cYP450含量与CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1亚型活性，观察淫羊藿总黄酮的效应。CYP1A2的活性用荧光比色法进行测定，CYP3A4和CYP2E1的活性用紫外可见分光光度法测定。淫羊藿总黄酮处理后的大鼠肝脏CYP450含量及CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1亚型活性均明显增高，其中CYP1A2和CYP2E1活性升高显著（P〈0．01）。淫羊藿总黄酮对大鼠肝脏CYP450及主要亚型CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性均有诱导效应。     

抗肿瘤活性物CH330331在大鼠肝微粒体代谢及对药酶影响作用的研究

目的：体外研究大鼠肝微粒体中CH330331代谢的酶促动力学,并利用＂Cocktail＂探针药物模型,研究CH330331对主要CYP450亚型的体外抑制作用。方法：优化CH330331在大鼠肝微粒体中孵育的条件,并进行酶促动力学研究;探讨体外＂Cocktail＂探针药物模型的组成,并研究CH330331对CYP450亚型的体外抑制作用。结果：CH330331代谢的酶促动力学参数：最大反应速率（Vmax）为2.08μmol/（min.mgpro-tein）,米氏常数（Km）为18.96μmol/L。CH330331对大鼠CYP1A2、CYP2C9和CYP2D6有弱抑制作用,对大鼠CYP2C19、CYP2E1和CYP3A4没有抑制作用。结论：临床使用中CH330331可以增加主要通过CYPCYP1A2,CYP2C9和CYP2D6代谢的药物浓度。     

半枝莲粗提物对小鼠肝脏药物代谢酶的调节作用

目的通过研究半枝莲水提物和乙醇提取物对昆明（KM）小鼠细胞色素P450酶（CYP）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性的抑制作用,研究半枝莲与其他药物合用时可能发生的相互作用。方法按照随机对照原则,以半枝莲水提物和乙醇提取物1、2和5g·kg^-1·d^-1剂量为低、中和高剂量连续灌胃给药5d,以HPLC方法检测探针药及其代谢产物量来表示相应酶的活性;以分光光度法测定细胞溶质中GST酶活性。结果与对照组比较,中、高剂量半枝莲水提物组与乙醇提取物组CYP2C与CYP3A活性显著下降;高剂量水提物组GST活性显著下降;而各组CYP2D与CYP2E1活性未见改变。结论半枝莲水提物和乙醇提取物对KM小鼠的细胞色素P450酶和GST活性都有不同程度的抑制作用,呈现出剂量相关性。     

丹参注射液对家兔体内CYP1A2、CYP2D6和CYP3A4活性的影响

目的：用Cocktail探针药物法研究丹参注射液对家兔细胞色素P450亚型酶活性的影响。方法：将家兔随机分成四组,耳缘静脉注射给予丹参注射液,分低、中、高剂量三个实验组,空白对照组给予生理盐水。用HPLC法测定各组Cock-tail探针药物（咖啡因、美托洛尔和氨苯砜）的血药浓度,比较药时曲线及药代动力学参数的变化,评价各组细胞色素P450亚型酶的活性。结果：丹参注射液低、中、高剂量组CYP2D6的活性与对照组相比降低,具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;CYP1A2和CYP3A4的活性与对照组相比差异均无统计学意义。结论：丹参注射液对家兔CYP2D6有抑制作用,对CYP1A2和CYP3A4的影响不显著。提示临床应用丹参注射液时,应关注其对CYP2D6的抑制作用,避免联合用药引发CYP2D6介导的药物相互作用,促进临床安全合理用药。     

同分异构体齐墩果酸和熊果酸对CYP450酶抑制作用的差异

目的:比较同分异构体齐墩果酸和熊果酸对人肝微粒体CYP450酶的抑制作用。方法:以人肝微粒体孵育体系为模型,加入齐墩果酸或熊果酸与CYP450探针底物共同孵育;以不同浓度的齐墩果酸对不同浓度的CYP3A4探针底物咪达唑仑的抑制,计算抑制率(Ki)。结果:熊果酸对CYP450酶没有明显的抑制作用;齐墩果酸可轻微抑制CYP1A2的活性,明显抑制CYP3A4酶的活性,Ki为39.2μmol.L-1。结论:齐墩果酸对CYP450酶的抑制作用强于熊果酸。