滇重楼高效液相色谱指纹图谱研究

目的建立滇重楼根茎的HPLC指纹图谱,控制其质量。方法采用HPLC法,Eclipse XDB C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温25℃,体积流量1.0 mL/min。通过外标法对各批次样品中的重楼皂苷I、H、甾体皂苷Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷进行测定。结果 18批滇重楼相似度小于0.9,说明不同批次样品差异较大。同时确定了6个共有峰,并通过对照品对其进行了归属。甾体皂苷Ⅱ在S8、S9批次中的量最高,重楼皂苷I在S7批次中的量最高,甾体皂苷Ⅵ只在4个批次中检测出。结论该方法简便、准确,具有良好的精密度、重复性、稳定性,可用于滇重楼的质量控制及综合评价。     

三七不同部位及总皂苷提取物HPLC指纹图谱研究

目的:建立三七不同部位及总皂苷提取物的HPLC指纹图谱分析方法。方法:三七不同药用部位(主根、筋条、剪口、叶、花)和不同规格(20～100头)及总皂苷提取物采用甲醇提取,RP-HPLC/UV法测定,Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;乙腈和水(v/v)线性梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:203 nm;进样量:20μL。结果:在三七的色谱图中共确定了17个特征峰,主要峰分离良好,经对照品和HPLC/MS判定峰4～11的归属。以峰4三七皂苷R1为参照峰(S),计算17个特征峰的相对保留时间和相对峰面积,各峰精密度、稳定性和测定重现性RSD均小于6.47%。通过相似度软件评价,不同规格三七根(20～100头)和剪口、筋条的指纹图谱近似,相似度大于0.971,但三七根和根茎与花和叶差异很大,相似度分别为0.596和0.564。三七总皂苷提取物因药用部位及生产工艺不同,其主要特征峰的峰面积及比例存在较大差异。结论:该方法简便、准确,重现性良好,可用于准确分辨三七不同药用部位及其总皂苷提取物的质量。     

人参总皂苷提取物指纹图谱研究

目的:采用高效液相色谱法建立人参总皂苷提取物的指纹图谱。方法:色谱柱Hypersil C₁₈(4.6mm×250mm,5μm),流动相:A为乙腈,B为0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱0～30min19%A,30～35min19%～24%A,35～60min24%～40%A。柱温:35℃,检测波长:203nm,流速:1.3mL·min^-1。结果:人参总皂苷提取物指纹图谱共检出10个峰,峰面积之和大于总峰面积的90%,其精密度、稳定性、重复性均良好。结论:该方法可作为控制人参总皂苷提取物内在质量的标准。     

三七药材、总皂苷及其制剂HPLC指纹图谱的研究

[目的]采用高效液相色谱(HPLC)法对三七药材、三七总皂苷及血塞通氯化钠注射液进行指纹图谱研究,并分别对其相似度进行考察,为科学评价与有效控制血塞通氯化钠注射液提供方法。[方法]色谱条件:LunaC18柱(250mm×4.6mm,Ф5μm),乙腈-水二元梯度洗脱,检测波长203nm,流速1.0mL/min,柱温30℃,进样量20μL;并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版对其相似度进行分析。[结果]建立了三七药材、三七总皂苷及血塞通氯化钠注射液HPLC指纹图谱,且相似度较好。[结论]此方法能够作为三七药材、三七总皂苷及血塞通氯化钠注射液指纹图谱的检测标准,为全面控制血塞通氯化钠注射液质量提供了依据。     

三七总皂苷指纹图谱及含量测定HPLC条件的耐用性考察

目的：测试三七总皂苷指纹图谱HPLC条件的耐用性。方法：在不同品牌的HPLC仪器和十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上，对梯度条件和柱温进行网格搜索。结果：在不同品牌的仪器、色谱柱上，可得到分离效果基本一致的指纹图谱，可以同时对人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re5个成分进行准确定量。结论：通过优化实验，可以保证三七总皂苷的HPLC指纹图谱在不同的仪器、不同品牌的色谱柱上重现．从而保证三七指纹图谱质量标准的顺利执行。     

三七总皂苷HPLC数字化指纹图谱研究

目的:建立三七总皂苷HPLC数字化指纹图谱。方法:采用反相高效液相色谱法。大连江申Century-SIL C18BDS(250mm×4.6mm,5μm),流动相为水—乙腈梯度洗脱,流速0.9mL/min。紫外检测波长203nm,柱温(40.0±0.5)℃,进样量5μL。以"中药指纹图谱超信息特征数字化评价系统"软件进行评价。结果:以人参皂苷Rb1峰为参照物峰,确定22个共有峰,建立了三七总皂苷HPLC数字化指纹图谱。应用色谱指纹图谱指数F等参数对不同批次三七总皂苷HPLC指纹图谱的超信息特征进行了数字化评价,同时应用双定性双定量相似度法和系统指纹定量法评价三七总皂苷质量。结论:所建立HPLC数字化指纹图谱具有较好的精密度和重现性,适用于三七总皂苷的质量控制。     

两面针总生物碱HPLC指纹图谱研究

目的对两面针总生物碱进行高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱的研究,为科学评价及有效控制两面针质量提供可靠方法。方法采用HPLC梯度洗脱进行两面针总生物碱指纹图谱的研究,测定了33批两面针药材。色谱柱：UltimateTM×BC8柱（5μm,4.6 mm×250 mm）;流动相：乙腈-水相（0.2%磷酸＋0.2%三乙胺）;分析时间：45 min;柱温：35℃;检测波长：250 nm。结果 HPLC指纹图谱标定了24个共有特征峰。结论方法学考察结果表明指纹图谱精密度较高,24 h稳定性较好,系统重复性良好,说明本法能有效控制两面针质量,为完善其质量评价提供依据。     

红穿破石HPLC指纹图谱研究

目的研究红穿破石药材的HPLC指纹图谱,为合理评价及有效控制其质量提供参考数据。方法采用Agilent TC-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0mL/min,在291nm波长下检测,测定10批次不同产地红穿破石药材,并运用计算机辅助相似性评价系统计算图谱之间的相似度。结果 10批红穿破石药材指纹图谱之间的相似度较高。结论该方法重复性好,具有一定的专属性,可作为红穿破石药材鉴别的依据。     

桃儿七HPLC指纹图谱研究

目的建立桃儿七的HPLC指纹图谱分析方法,为该药材的鉴别及质量评价提供依据。方法采用Thermo Hy PURITY C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.4%磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,柱温25℃,体积流量0.8 m L/min,检测波长290 nm,进样量10μL。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2004 A)和SPSS 19.0统计软件中的聚类分析对指纹图谱进行相似度分析。结果建立桃儿七的HPLC指纹图谱,确定了17个共有峰,并指认了其中8个共有峰,经相似度评价,19批桃儿七药材指纹图谱与共有模式比较的相似度均在0.9以上,整体相似度较好,聚类结果与相似度评价结果基本一致。结论该研究建立的桃儿七HPLC指纹图谱可为该药材的鉴别及质量评价提供更全面的参考。     

双山颗粒剂HPLC指纹图谱研究

目的:建立双山颗粒HPLC指纹图谱分析方法,科学评价并有效控制双山颗粒剂质量。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长340 nm,柱温25℃。结果:以绿原酸为参照峰,建立了双山颗粒剂HPLC指纹图谱,确立了13个共有峰,供试品之间的共有峰相似度>0.98。结论:该方法准确,精密度、重复性较好,可作为控制双山颗粒质量的依据。     

云南重楼的甾体皂苷类成分

目的：对重楼属（Paris）植物云南重楼（Pads polyphylla Smith vat. yurmanensis）的甾体皂苷类成分进行研究。方法：采用大孔树脂，硅胶柱色谱，Sephadex LH-20及RP-C18等技术分离纯化单体化合物，根据理化性质、波谱数据鉴定其结构。结果：从云南重楼乙醇提取物中分离并鉴定了9个甾体皂苷类化合物：（23S．25s） -3β3,23,27-trihydroxyspirost-5-en-3- O-β- D-glueopyranosyl- （1→6） -β- D-glueopyranoside （ 1 ）、重楼皂苷Ⅰ（2）、重楼皂苷Ⅱ （ 3 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranoside （ 4 ）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-αrabinofuranosyl （ 1 → 4 ）-β- D- glueopyranoside （5）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2） -β- D-glueopyranoside （6）, （ 25 R ） diosgenin-3- O-β- D-glueopyranosyl （ 1 → 3 ） [ α- L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2 ） ]-β- D-glueopyranoside （ 7 ）, （ 25 R ） permogenin-3- O-α- L - arabinofuranosyl （ 1 → 4） [ a-L-rhamnopyranosyl （ 1 → 2）-β-D-glueopyranoside （8）, （ 25R ） permogenin-3-O-α-L- rhamnopyranosyl （ 1→4）-α-L-rhamnopyranosyl （ 1→4）-[ α- L-rhamnopyranosyl（1→2） ]-β-D-glueopyranoside（9） 。结论：化合物1为新化合物。     

华重楼中一个新的类胆甾烷皂苷

目的：从华重楼Paris polyphylla var.chinensis中分离活性成分皂苷类化合物。方法：药材用95％乙醇提取，提取物经D101大孔树脂柱，硅胶柱和ODS柱反复柱层析，得到化合物(1)。结果与结论：通过化学方法和波谱方法鉴定该化合物为一个新的类胆甾烷皂苷，命名为：Parispolyside E。该化合物结构为：3-氧-α-L-阿拉伯糖(1→4)[α-L-鼠李糖(1—2)]-β-D-葡萄糖-β-D—chacotriosyl-26-氧-β-D-葡萄糖苷，是在重楼属发现的第一个具有芳香环的类胆甾烷型的皂苷。     

HPLC同时测定不同产地滇重楼中的6种重楼皂苷

目的对不同产地滇重楼的质量进行评价研究,摸清目前云南省境内的滇重楼资源情况,为滇重楼资源合理利用和保护提供科学依据。方法收集产自云南省境内13个州(市、地区)的滇重楼样品进行分析,采用HPLC方法测定其6种重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ,PA,H。结果不同产地滇重楼皂苷含量差异较大。结论 重楼皂苷质量受产地、环境因素影响较大,滇重楼品质表现出一定的地域及生境依赖性。     

不同种植基地滇重楼根茎中甾体皂苷有效成分差异的研究

目的:探讨不同种植基地滇重楼根茎中甾体皂苷有效成分的差异。方法:采用超高效液相色谱法(UHPLC)测定不同种植基地滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及总皂苷的含量,并用液质联用(LC-MS)技术定性分析其甾体皂苷有效成分的差异。结果:不同种植基地滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ及总皂苷含量差异较小,重楼皂苷Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量差异较大;重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅲ(薯蓣皂苷)、重楼皂苷Ⅴ、重楼皂苷Ⅶ是不同种植基地滇重楼根茎中甾体皂苷的主要存在形式,不同种植基地滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、纤细薯蓣皂苷差异较大;根据不同种植基地滇重楼根茎正离子模式下液质数据的主成分分析(PCA)模型可将其分为四类。结论:不同种植基地滇重楼根茎中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及总皂苷的含量、甾体皂苷有效成分及化学成分种类差异较大。     

小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱研究

目的建立小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱。方法以Kromasil C18为色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长260 nm。结果建立了小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱,确定了14个共有峰,共有峰相对保留时间的RSD为0.02%~1.49%,相对峰面积的RSD为6.12%~58.75%,10批样品的相似度均大于0.9。结论本方法简单可靠,可用于小叶黑柴胡药材的质量控制。     

不同生境滇重楼根际解磷菌的筛选与鉴定

二级濒危药用植物滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis野生资源严重匮乏,引种栽培可缓解市场需求,筛选滇重楼根际土壤解磷菌,为开发高效微生物菌肥提供数据支撑.该研究从云南、四川和贵州3个地区10个不同地点的野生和移栽品种的滇重楼根际土壤中分离筛选具有矿化有机磷能力的根际解磷菌,经分离纯化后...     

植物粗提物杀灭滇重楼根茎线虫的研究

目的：研究黄柏、雷公藤等16种植物粗提液对课题组分离、鉴定和培养的与滇重楼Paris polyphylla Smith var．yunnansensis（Franch．）Hand．-Mazz．根茎腐烂有密切关系的主要害虫小杆线虫Rhabditissp．的毒杀作用。方法：各种植物汁液原液配成10倍、50倍、100倍、500倍的浓度梯度,用浸液法测试杀线效果。结果：药效试验显示16种植物粗提液均有毒杀效果;马缨丹花叶、万寿菊、杜鹃粗提液在72h后,对小杆线虫的致死率分别为71．4％-92．0％、83．7％～91．4％、73．3—89．0％。结论：植物杀线虫物质的成份和活性不仅与提取的植物种类、部位有关,也与植物新鲜度、粉碎度、提取时间、提取温度、提取液浓度及其作用线虫时间等因素也不同程度地影响着植物杀线虫物质的作用。     

光枝勾儿茶高效液相色谱指纹图谱研究

目的 建立光枝勾儿茶的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,以评价其药材的质量.方法 应用高效液相色谱法,双波长阵列检测器(DAD),乙腈-甲醇-磷酸缓冲液梯度洗脱,测定了10批光枝勾儿茶样品.色谱条件为:Agilent XDBC<,18>(4.6 mm×150 mill,5μm),柱温25℃;流动相A相为乙腈,B相为甲醇,C相为0.05%磷酸梯度洗脱(80%～25%C),分析时间95 min;流速1 ml/min,检测波长280 nm.结果 10批光枝勾儿茶样品得到的高效液相指纹图谱有18个共有峰,经相似度计算,10批药材整体相似性较好.结论 光枝勾儿茶药材的指纹图谱特征性及专属性强,可为光枝勾儿茶的质量控制提供依据.     

利用转录组测序分析与华重楼种子休眠解除相关差异基因

为探究华重楼种子休眠解除过程中差异基因的表达情况及相关代谢通路,以华重楼休眠解除前后种胚为材料,利用新一代高通量测序手段对供试样品进行转录组测序并进行系统生物信息学分析。从cDNA文库中分别获得62 882 650,62 263 366个clean reads,共得到69 248个差异表达基因,上调的表达基因有56 426个,下调的表达基因有12 822个。共有138 267个差异表达基因被GO功能注释到生物进程、分子功能和细胞组分3个大类58个亚类,注释的差异表达基因与代谢过程、生物调控、细胞组分合成和酶催化活性等密切相关。对58 722个差异表达基因进行pathway显著性富集分析,共发现139个代谢通路,休眠前后的DEGs主要富集在碳代谢、次生代谢产物生物合成和多糖代谢等途径。基于KEGG数据库中注释结果,共发现16条与华重楼休眠解除相关的代谢通路。华重楼种子发育与休眠解除过程中大量与种胚形态建成、多糖分解及蛋白质合成的差异基因参与表达,涉及到多个代谢途径的相互作用,构成复杂的休眠解除调控网络。