半枝莲黄酮类化学成分分析

目的分析半枝莲黄酮类化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20等多种色谱方法,依据波谱数据对其结构进行分析和鉴定。结果半枝莲中共分离了12个化合物,分别为圣草酚、野黄芩素、三裂鼠尾草素、黄芩苷、芹菜素、汉黄芩素、4'-羟基汉黄芩素、木犀草素、4',5-二羟基-3',5',6,7-四甲氧基黄酮、柚皮素、7-羟基-5,8,2'-三甲氧基黄烷酮、大波斯菊苷。结论分离得到的化合物类型均为黄酮苷元和苷类化合物,可为半枝莲的黄酮成分分析提供一定的科学依据。     

半枝莲总黄酮微丸的制备及含量测定

目的:制备半枝莲总黄酮微丸并建立其含量测定方法.方法:采用挤出滚圆法制备半枝莲总黄酮微丸,采用正交实验法优化最佳制备工艺,采用吸光光度法测定半枝莲总黄酮(以野黄芩苷和木犀草素计)含量.结果:按照最佳工艺制得的半枝莲总黄酮微丸外形美观,圆整度良好,大小均匀,平均得率为97.06％;半枝莲总黄酮含量以野黄芩苷计5.02 mg/g,RSD为1.60％;以木犀草素计2.03 mg/g,RSD为0.84％.结论:最佳制备工艺稳定可行,所建立的含量测定方法准确可靠,可用于半枝莲总黄酮微丸制备及质量控制.     

HPLC法同时测定半枝莲中黄酮和生物碱类成分

目的 建立同时测定半枝莲饮片中木犀草素、芹菜素、汉黄芩素、半枝莲生物碱A和半枝莲生物碱B的HPLC法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenon C₁₈柱(250 mm×4.60 mm,5 μm),以乙腈-水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃;木犀草素、芹菜素检测波长为355 nm,汉黄芩素、半枝莲生物碱A和生物碱B检测波长为264 nm。结果 木犀草素、芹菜素、汉黄芩素、半枝莲生物碱A和生物碱B分别在0.0374~2.40 μg、0.0312~2.00 μg、0.0312~2.00 μg、0.0062~0.40 μg和0.0062~0.40 μg内线性关系良好。精密度,重复性及加样回收均符合要求。结论 此方法快速简便,重现性好,可用于半枝莲饮片的质量控制。     

同时测定黄芩提取液中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素含量的高效液相色谱方法的建立

目的 建立同时测定黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷含量的高效液相色谱(HPLC)方法,并对不同黄芩提取液中三种成分的含量进行测定。方法 采用不同浓度的乙醇及蒸馏水提取黄芩,减压浓缩制备黄芩提取液,通过专属性考察、线性关系测定、精密度测定、稳定性考察等建立黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷同时测定的HPLC-紫外检测法,并采用该方法测定不同提取液中三种成分含量。结果 同时测定黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷的HPLC条件为:色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(25∶75);流速1.00 mL/min;紫外检测波长275 nm;进样量10 μL;柱温30℃。不同溶剂对黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷的溶出有很大影响。黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷质量浓度在0.97～19.45,1.71～34.10,0.61～12.25 μg/mL内线性关系良好,仪器的精密度,方法的重复性、稳定性良好,RSD均在2.0%以内。结论 HPLC-紫外检测法灵敏度高,精密度好,专属性强,可用于黄芩不同提取液中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷含量的测定。     

葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分在大鼠肝代谢的影响

目的 研究葛根芩连汤中葛根和甘草对黄芩有效成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体代谢的影响,探讨该复方配伍机制。方法 采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法,分别考察葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在大鼠肝微粒体中代谢的影响,利用超高效液相色谱（UPLC）法测定大鼠肝微粒体中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的量。结果 温孵时间黄芩苷在0～90 min,汉黄芩苷在0～60 min,黄芩素在0～10 min,汉黄芩素在0～40 min呈线性消除。对照组各成分代谢速率大小顺序为：黄芩素＞汉黄芩素＞汉黄芩苷＞黄芩苷。与对照组相比,葛根对汉黄芩苷、黄芩素的代谢具有抑制作用,对黄芩苷及汉黄芩素的代谢具有诱导作用;甘草对汉黄芩素的代谢具抑制作用,对黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的代谢则呈现诱导作用。结论 黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素可以被大鼠肝微粒体代谢,葛根芩连汤中葛根、甘草对黄芩有效成分的代谢过程有影响。     

黄芩炮制前后6种黄酮类成分含量的比较

目的考察黄芩酒制、炒炭炮制前后6种黄酮类成分含量的变化并探讨其炮制机理。方法采用Hedera ODS-2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%(体积分数)甲酸为流动相梯度洗脱,检测波长275 nm,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,进样量5μL。结果 6种黄酮类成分野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A分别在选定范围内线性关系良好,平均加样回收率介于97.8%～101.2%之间,RSD均小于3.0%。黄芩酒制后野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A的质量分数有所下降,黄芩素、汉黄芩素的质量分数则稍有增加;黄芩炒炭后野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷的质量分数明显下降,黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A的质量分数显著升高。结论本方法简便、重复性好,能准确测定黄芩及其炮制品中6种成分的含量,为评价黄芩炮制前后成分变化提供了分析方法。炮制后所得酒黄芩和黄芩炭6种成分的质量分数均发生了变化,也为黄芩炒炭后发生质变的进一步研究奠定了基础。     

高效液相色谱法测定不同产地和生长年限黄芩中6种化学成分的含量

目的:采用高效液相色谱法测定不同产地、不同生长年限黄芩中6种主要黄酮类化学成分(野黄芩苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素和千层纸素A)的含量,为全面评价黄芩药材质量提供依据.方法:采集山西运城、山西平顺、河北承德、内蒙古赤峰生长年限分别为1年、2年、3年共12批黄芩样品,黄芩药材粉末经乙醇(每次20 min)超声提取2次,合并提取液.利用岛津C18色谱柱(250 mm×4.6μm,5 μm),流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱的色谱条件;体积流量1.0 mL· min-1,检测波长为274 nm;柱温30℃.结果:所测6种主要有效成分在测定质量浓度范围内线性关系良好,精密度、重复性和稳定性良好;平均回收率为97.85％～ 99.08％,RSD为0.96％～ 1.53％.其中野黄芩苷、黄芩苷、白杨素、千层纸素A含量随年限增长而增长,黄芩素、汉黄芩素随年限延长而下降;山西运城、山西平顺、河北承德产黄芩中黄芩苷平均含量远远高于内蒙古赤峰.结论:高效液相色谱法测定黄芩中6种化学成分的含量准确度高,灵敏度好,不同年限和产地黄芩主要有效成分含量不同,为黄芩质量评价提供依据.     

生物碱和黄酮类成分在泻心汤复方配伍中的含量研究

目的 建立同时测定泻心汤中黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量的方法,并探索配伍对各成分含量的影响.方法 采用C18柱,流动相:甲醇-2%甲酸水溶液(0.1%三乙胺)梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:40℃;检测波长:346 nm;不同配伍之间的差异采用SPSS软件进行方差分析.结果 建立了同时测定生物碱和黄酮类成分含量的方法,这7个成分在一定浓度范围内线性关系良好,高、中、低质量浓度加样回收率稳定.与单味黄连、黄芩相比,复方中7个成分含量均降低.大黄使黄连碱、小檗碱、巴马汀、黄芩苷和汉黄芩苷含量降低,使黄芩素和汉黄芩素含量增加;黄连使黄芩素和汉黄芩素的含量降低,使汉黄芩苷含量增加,对黄芩苷影响不大;黄芩使黄连碱、小檗碱和巴马汀的含量降低.结论 本法准确可靠,重现性好,结果稳定,适合于泻心汤中生物碱和黄酮类成分的分析.不同配伍对各成分含量有影响,其影响非常复杂.     

半枝莲化学成分的研究

目的 研究半枝莲Scutellaria barbata的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱及制备高效液相色谱等手段分离纯化,通过理化常数测定结合光谱分析鉴定化合物的结构.结果 从半枝莲中分离得到20个化合物,已鉴定其中17个化合物,其中10个为黄酮类化合物.分别鉴定为:β-谷甾醇(β-sitosterol,I)、对羟基苯甲醛(4-hydroxybenzaldehyde,Ⅱ)、苯甲酸(benzoic acid,Ⅲ)、胡萝卜苷(daucostero,Ⅳ)、肉桂酸(cinnamic acid,Ⅴ)、绿原酸(chlorogenic,Ⅵ)、香草酸(vanillic acid,Ⅶ)、汉黄芩素(wogonin,Ⅷ)、槲皮素(quercetin,Ⅸ)、芹菜素(apigenin,Ⅹ)、黄芩素(baicalein,Ⅺ)、柚皮素(naringenin,Ⅻ)、木犀草素(luteolin,ⅩⅢ)、野黄芩苷(scutellarin,ⅩⅣ)、黄芩苷(baicalin,ⅩⅤ)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(luteilin-7-O-β-D-glucopyranoside,ⅩⅥ)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside,ⅩⅦ).结论 化合物Ⅲ、Ⅴ～Ⅶ、Ⅸ、ⅩⅥ均为首次从该植物中分离得到.     

黄芩主要成分体外抗甲型流感病毒作用的研究

目的比较黄芩的主要成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素体外抗甲型流感病毒FM1感染的作用,明确黄芩抗流感病毒的主要有效成分。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对狗肾细胞株(MDCK)的最大无毒浓度(TC0)及半数中毒浓度(TC50),通过细胞病变效应(CPE)法观察药物对病毒致细胞病变作用的影响。MTT法检测药物不同浓度的抗病毒有效率,Probit回归法计算黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对病毒感染的半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),荧光法检测黄芩苷对病毒神经氨酸酶活力的影响。结果黄芩苷对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,当黄芩苷浓度在0.0156～0.1250g/L时,细胞存活率明显高于病毒感染组,其中以0.1250g/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达94.6%,其IC50为0.0162g/L,TI为21.34;黄芩素对流感病毒所致的细胞病变有一定的抑制作用,当黄芩素浓度在0.0860g/L时,抗病毒有效率达48.72%,其IC50为0.0778g/L,TI为8.89;汉黄芩素对流感病毒所致的细胞病变无抑制作用,其IC50为0.0236g/L,TI为0.051。当黄芩苷浓度?0.0313g/L时,能明显降低病毒神经氨酸酶的活力。结论黄芩主要成分中抗流感病毒的作用为黄芩苷黄芩素汉黄芩素,说明黄芩抗流感病毒的主要有效成分是黄芩苷。     

基于CYP1B1酶抑制活性的泽泻95%乙醇提取物化学成分的UPLC-IT-TOF/MS分析

目的 研究泽泻95%乙醇提取物化学成分及抑制CYP1B1酶的活性。方法 采用酶孵育反应实验测定泽泻醇提取物对CYP1B1酶的抑制活性,并通过超高效液相色谱串联离子阱飞行时间质谱（UPLC-IT-TOF/MS）技术,使用ESI离子源,Shimadzu Composition Formula Predictor软件定性分析活性物质。结果 泽泻醇提取物具有显著抑制CYP1B1酶的活性,抑制率为93.96%。通过多级质谱数据分析,结合氮规则和Scifinder数据库检索,从泽泻醇提取物中鉴定了25个原萜烷型三萜类成分,可能是抑制CYP1B1酶的主要成分之一。结论 本研究快速、准确分析了泽泻醇提取物中原萜烷型三萜类成分,为其药效物质基础和质量控制提供了依据。     

探讨半枝莲醇提物对小鼠细胞色素P450酶和谷胱甘肽S-转移酶活性的影响

目的探讨半枝莲醇提物对小鼠细胞色素P450酶和谷胱甘肽S-转移酶活性的影响。方法于2017年2月将40只雄性SD小鼠随机分为4组,分别为对照组(10只)和试验组(30只)。试验组每天按照1 g/kg、5 g/kg、10 g/kg的用药量给所有小鼠进行灌胃,持续给药5 d。对照组予以等量生理盐水,第6天采用颈椎脱臼法处死小鼠,收集肝脏组织供后续研究,检测肝脏组织中细胞色素P450以及谷胱甘肽S-转移酶活性。结果与对照组相比,试验组低剂量组细胞色素P450含量和活性不存在差异(P0.05),而中剂量组和高剂量组小鼠细胞色素P450含量和活性出现显著下降趋势(P0.05)。与对照组相比,试验组小鼠谷胱甘肽S-转移酶活性没有出现显著差异(P0.05),但中剂量组和高剂量组活性出现下降趋势。结论半枝莲醇提物对小鼠细胞色素P450酶和谷胱甘肽S-转移酶的活性有一定的抑制作用,且抑制作用随着浓度增长而不断增大,即半枝莲醇提物浓度越高,对小鼠细胞色素P450酶和谷胱甘肽S-转移酶活性抑制程度越高。     

CYP1A2抑制剂预测模型的建立及评价

CYP1A2酶在药物代谢中起着重要作用,抑制CYP1A2会引起被CYP1A2代谢的其他药物代谢率降低,从而导致这些药物的血浆浓度增加,进而使药物的生物效应增强,可能产生药物毒性。因此识别区分CYP1A2抑制剂成为新药早期评选及药物安全性评估的研究重点。本研究利用674个已知CYP1A2抑制活性的化合物构建CYP1A2抑制剂配体库,从基于受体和基于配体的角度,采用分子对接和药效团的方法,利用Pipeline Pilot软件建立自动化筛选预测流程,简单全面地从蛋白-配体结合角度快速准确预测出CYP1A2的抑制剂分子。最终从配体库中共预测出16个目标化合物,其中14个化合物具有CYP1A2抑制活性。研究最后对美国成药数据库进行综合预测,共发现4个药物是已报道的CYP1A2抑制剂。说明本模型对CYP1A2抑制剂具有很好的预测能力,可以应用于CYP1A2抑制剂的预测。     

半枝莲水提液体外抑菌及抑菌稳定性研究

目的 探究半枝莲水提液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、耻垢分枝杆菌的体外抑菌活性及抑菌稳定性,为临床应用及开发植源性抑菌药物提供研究基础。方法 采用纸片扩散法测定半枝莲水提液对供试菌的抑菌活性,琼脂稀释法测定其最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）;同时以抑菌圈直径为指标,探究盐浓度、紫外光照射和不同pH对半枝莲水提液抑菌稳定性的影响。结果 半枝莲水提液对4种供试菌有抑菌活性,抑菌圈直径分别为（18.27±0.25）、（18.0±0.50）、（17.7±0.26）、（18.0±0.00）mm,为高度敏感,MICs分别为5.41、6.08、6.08、5.41mg/ml。抑菌稳定性实验结果表明,盐浓度、紫外光照射、pH对半枝莲水提液体外抑菌活性均无显著影响（P>0.05）,抑菌活性保留率均>95.0%。结论 半枝莲水提液对4种供试菌有良好的体外抑菌活性和抑菌稳定性。     

补骨脂富含的异戊烯基成分对CYP1A1活性的影响及分子对接验证

目的  考察补骨脂富含的异戊烯基成分对CYP1A1活性的影响, 并采用分子对接技术进行验证。方法  以7-乙氧基试卤灵为CYP1A1的探针底物, 采用超高效液相串联三重四级杆质谱(UHPLC-TQD-MS)对代谢产物试卤灵的质谱条件进行优化; 应用CYP1A1体外孵育体系, 评价补骨脂富含的补骨脂二氢黄酮、补骨脂定、异补骨脂查尔酮、异补骨脂二氢黄酮和补骨脂二氢黄酮甲醚在不同浓度(1、10、100 μmol·L-1)对CYP1A1活性的影响; 采用不同的抑制动力学模型计算相关的抑制常数(K_i); 应用Autodock 4.2软件, 将活性成分与CYP1A1进行分子对接。结果  初筛结果显示, 补骨脂二氢黄酮、补骨脂定、异补骨脂查尔酮、异补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚对CYP1A1均表现出抑制活性, IC₅₀值分别为0.28、0.49、0.36、2.24、4.07 μmol·L-1; 根据最小赤池信息量准则(AIC)和施瓦茨信息准则值(SC)即为最佳模型的原则, 补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮对CYP1A1的抑制为竞争性抑制, K_i常数分别为0.12、0.23 μmol·L-1; 补骨脂定对CYP1A1表现出非竞争性抑制, 抑制常数K_i为0.59 μmol·L-1; 分子对接结果显示, 补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮与CYP1A1蛋白之间均能产生氢键、π-π键以及疏水作用, 结合自由能分别为-10.145、-8.286 kcal·mol-1(1 kcal=4.2 kJ), 这可能是它们与CYP1A1亲和力较强进而产生强抑制活性的原因。结论  补骨脂富含的异戊烯基成分是CYP1A1强抑制剂(IC₅₀ < 5 μmol·L-1); 异戊烯基成分C环1位和2位脱水开环会增加对CYP1A1的抑制活性; A环C-6位异戊烯基取代的化合物比C-8位取代的化合物表现出更强的CYP1A1抑制活性; A环7-OH甲基化会减弱CYP1A1的抑制活性; 分子对接结果也证实了补骨脂二氢黄酮和异补骨脂查尔酮与CYP1A1有较强的亲和力。      

燕窝提取物抗H5N1禽流感病毒的作用及机理研究

【目的】观察燕窝提取物体外抑制H5N1禽流感病毒的作用。【方法】制备燕窝水提物、燕窝水提物人工胃液消化物、燕窝水提物人工肠液消化物。通过体外293T细胞转染方法,应用荧光素酶检测试剂盒检测3种燕窝提取物对H5N1禽流感假病毒、VSV-G假病毒活性的影响;观察禽流感病毒H5、H7、H9 3种亚型抗原凝血反应及3种燕窝提取物对其抑制作用;应用神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒检测3种燕窝提取物对N1型神经氨酸酶(NA)活性的影响。【结果】3种燕窝提取物对H5N1禽流感假病毒活性均有抑制作用,抑制作用的强度随燕窝提取物浓度增高而增加,其中人工肠液消化物作用最强,水提取物最弱,但对VSV-G假病毒活性均无显著抑制作用。H5、H7型抗原凝血价为1∶128,H9型抗原凝血价为1∶256,3种燕窝提取物在一定浓度条件下对H5、H7、H9抗原血凝反应均有抑制作用,但对NA均没有抑制作用。【结论】燕窝提取物抗病毒的作用可能是通过抑制血凝素的活性而实现的。     

甘遂配伍甘草对大鼠肝脏CYP2E1表达及活性的影响

目的通过检测细胞色素氧化酶CYP2E1的表达和活性变化,从分子水平探讨中药配伍禁忌"十八反"理论中甘遂配伍甘草的药理机制.方法利用RT-PCR检测大鼠肝脏CYP2E1 mRNA水平;通过Western blot检测大鼠肝脏CYP2E1蛋白表达;采用高效液相色谱(HPLC)法测定CYP2E1酶活性.结果甘遂组、甘草组和甘遂甘草配伍组均明显诱导大鼠肝脏CYP2E1的表达与活性上升,并发现甘草组和甘遂甘草配伍组对CYP2E1活性的诱导作用显著高于甘遂组.结论甘遂可能通过诱导肝脏CYP2E1的表达与活性上升,促使其所含的前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物,导致对机体的毒性作用;甘遂甘草配伍使用时,甘草对CYP2E1活性的诱导能力更强,故而甘草可促进甘遂所含前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物的过程,并导致对机体毒性作用的增强,从而表现出"十八反"中药物配伍禁忌的特征.     

汉黄芩素对肺癌细胞株A549的体外作用研究

目的:探讨体外汉黄芩素对肺癌细胞株A549增殖、侵袭及凋亡的影响。方法:应用MTT(噻唑蓝)法检测汉黄芩素对于A549细胞增殖活性;用形态学方法观察汉黄芩素对A549细胞的促凋亡作用;应用Transwell法观察细胞侵袭能力。结果:汉黄芩素对A549细胞增殖和侵袭活性具有明显抑制作用,对肺癌细胞有明显促凋亡作用,镜下可见染色体聚集及细胞核碎裂。结论:汉黄芩素对肺癌A549细胞的增殖迁移均有明显抑制作用并可促进肿瘤细胞凋亡。     

合成冰片对大鼠肝CYP450酶含量及CYP3A1 mRNA表达的影响

[目的]研究冰片对大鼠肝脏细胞色素氧化酶(cytochromeP450,CYP450)含量及其亚型CYP3A1m RNA表达的影响。[方法]istar大鼠合成冰片(设0.3gk/g和0.03gk/g剂量组,1次d/,连续7d)灌胃,以溶媒羧甲基纤维素纳(CM C-Na)和苯巴比妥钠为对照组,钙沉积法提取肝微粒体,紫外分光光度法测定CYP450含量,实时定量RT-PCR法检测肝脏CYP3A1m RNA的表达。[结果]0.3gk/g合成冰片口服可诱导大鼠肝脏CYP450酶含量增高(P<0.05),CYP3A1m RNA表达上调(P<0.05)。[结论]高剂量合成冰片口服可能影响肝脏药物代谢。