白藜芦醇减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤

目的观察白藜芦醇在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)小鼠中的作用,以及白藜芦醇对小鼠肺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法将小鼠分为对照组,ALI模型组(经气管滴注5 mg/kg的LPS建立小鼠ALI模型),白藜芦醇干预组(经腹腔注射30 mg/kg白藜芦醇,2 h后,经气管滴注5 mg/kg的LPS)。检测小鼠呼吸功能;HE染色及病理评分观察小鼠肺组织形态的变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、总细胞数及中性粒细胞数目,并观察中性粒细胞的活化; ELISA检测BALF中IL-1β和IL-18的蛋白水平;real-time PCR检测小鼠肺组织IL-1β、IL-18、nlrp3、asc及pro-caspase-1 mRNA的表达;Western blot检测肺组织IκB的蛋白表达。结果白藜芦醇可改善ALI小鼠的呼吸功能;减轻LPS诱导的肺部病理损伤;降低ALI小鼠BALF中IL-1β和IL-18的蛋白水平(P0.05);减少ALI小鼠肺组织NLRP3、ASC、pro-caspase-1的表达,增加IκB的蛋白表达(P0.05)。结论白藜芦醇可能抑制NLPR3炎性反应小体活化后产物的表达,最终可减轻LPS诱导的小鼠ALI。     

右美托咪啶减轻急性肺损伤的机制研究

目的探讨右美托咪啶(Dex)对小鼠急性肺损伤(ALI)的影响及潜在作用机制。方法将32只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组(Sham组)、右美托咪啶组(Dex组)、脂多糖组(LPS组)和药物干预组(LPS+Dex组)。LPS组和LPS+Dex组小鼠通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建小鼠ALI模型,Dex组及LPS+Dex组小鼠腹腔注射Dex(40μg/kg),Sham组和LPS组注射等剂量生理盐水。LPS注射12 h后,采用HE染色比较各组小鼠肺损伤状况;qRT-PCR检测各组小鼠肺组织中促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6和MCP-1 mRNA的表达;Western blot检测各组小鼠肺组织中GPX4、COX2和转录因子红系2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达。结果与Sham组相比,LPS组小鼠肺损伤评分明显升高(P0.05),促炎性细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6和MCP-1mRNA表达水平均明显升高(P0.05),肺组织铁死亡标志物GPX4蛋白表达水平明显降低(P0.05),COX2蛋白表达水平则明显升高(P0.05),肺组织中Nrf2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与LPS组相比,LPS+Dex组小鼠肺损伤评分明显降低(P0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6和MCP-1 mRNA表达水平明显降低(P0.05),GPX4的蛋白表达水平明显升高(P0.05),COX2蛋白表达水平则明显降低(P0.05),Nrf2的蛋白表达水平也明显升高(P0.05)。结论 Dex可能通过激活Nrf2抑制小鼠肺组织铁死亡,进而发挥肺保护作用。     

IL-18在脓毒症肺损伤发生发展过程中的作用及机制研究北大核心CSCD

目的:研究IL-18在脓毒症肺损伤发展过程中的作用及调控机制。方法:成年雄性野生型C57BL/6(WT)和IL-18基因敲除(IL-18-/-)小鼠分为野生型小鼠对照组(WT组)、脂多糖(LPS)处理的野生型小鼠组(WT LPS组)、IL-18基因敲除的小鼠对照组(IL-18-/-组)、LPS处理的IL-18基因敲除小鼠组(IL-18-/-LPS组)。腹腔注射LPS(15 mg/kg)建立小鼠脓毒症模型,对照组注射等量生理盐水。观察各组小鼠72 h生存率并处死小鼠,HE染色观察肺部病理组织变化,RT-PCR及Western blot检测各组小鼠肺组织IL-18 mRNA及蛋白表达,免疫荧光检测肺组织IL-18表达及定位,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡,流式细胞术检测肺组织Treg/Th17比例,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-17A、TGF-1β、IL-10表达。Western blot检测各组小鼠肺组织RORγt、FoxP3蛋白表达及STAT3磷酸化水平。结果:LPS诱导后,小鼠肺组织高表达IL-18。与WT LPS组相比,IL-18-/-LPS组小鼠生存率显著提高,肺组织病理损伤减轻,凋亡细胞显著减少,Treg/Th17比例提高,抑炎因子TGF-1β、IL-10表达增加,而促炎因子TNF-α、IL-17A表达明显减少,肺组织RORγt蛋白表达增加,而STAT3磷酸化水平降低。结论:IL-18可通过上调STAT3磷酸化水平,促进Treg/Th17免疫失衡及炎症因子分泌,从而加剧脓毒症急性肺损伤。     

木香烃内酯通过抑制NLRP3 缓解LPS 诱导小鼠巨噬细胞的炎症反应

目的:探讨木香烃内酯(Cos)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠原代巨噬细胞炎性小体激活和炎症反应的影响。方法:提取并培养小鼠腹腔原代巨噬细胞,用不同浓度Cos预处理巨噬细胞1 h后,1 mg/L LPS处理,分为空白对照组、模型组(单用LPS)、不同浓度(5、10和20μmol/L) Cos+LPS组; ELISA法检测培养液上清中TNF-α/IL-6的含量,q PCR法检测TNF-α/IL-6 mRNA表达;为明确Cos对LPS诱发的炎症反应的保护机制,增加NLRP3抑制剂MCC950组(10μmol/L),LPS刺激4h、6 h,Western blot检测NLRP3、ERK及IκB的激活,细胞免疫荧光实验观察NLRP3的蛋白水平。结果:与LPS组比较,LPS+Cos组TNF-α/IL-6的mRNA表达及细胞培养液上清TNF-α/IL-6分泌均显著降低(P 0. 05); Western blot和细胞免疫荧光实验结果表明,与LPS组比较,LPS+Cos组的NLRP3蛋白水平显著降低,其抑制效果与NLRP3抑制剂MCC950相当(P 0. 05); Western blot结果表明,与LPS组比较,LPS+MCC950组和LPS+Cos组的ERK及IκB的激活均显著降低(P 0. 01)。结论:Cos能有效抑制LPS诱导的巨噬细胞炎性小体和NF-κB的激活而缓解炎症反应。     

右美托咪定改善感染性休克大鼠急性肺损伤及对TLR9/NF-κB通路表达的影响

目的用,并探讨其可能的机制。方法将SD大鼠分为假手术组(Sham),模型组(LPS)和DMED治疗组(LPS+DMED);称重并计算各组大鼠肺系数、肺组织湿/干重比(W/D)和含水量;HE染色检测各组大鼠肺组织病理变化;ELISA检测各组大鼠肺组织IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白的表达;免疫荧光化学法染色各组大鼠肺组织NF-κB(p65)的表达;Western blot法检测TLR9和NF-κB(p65)的蛋白表达。结果与LPS组比较,DMED明显降低感染性休克大鼠的肺系数、肺组织湿/干重比(W/D)和含水量,改善感染性休克大鼠肺组织病理变化,显著降低IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平,减弱肺组织中NF-κB(p65)的活化,抑制TLR9和NF-κB(p65)的蛋白表达。结论 DMED对感染性休克大鼠急性肺损伤的保护作用,与减轻炎症因子和抑制TLR-9/NF-κB信号通路相关。     

皮质酮抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3表达及与XO的关系

目的:探讨皮质酮(CORT)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的抑制作用及与黄嘌呤氧化酶(XO)的关系。方法:用LPS构建小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎症模型。运用不同浓度(0~900μg/L)的CORT处理巨噬细胞后提取细胞总蛋白,Western blot法检测细胞NLRP3和caspase-1的蛋白水平;按处理因素分组为:对照组、LPS组、LPS+CORT组和LPS+别嘌呤醇(allopurinol)组,分别于0、0.5、1、1.5和2 h提取细胞成分,运用real-time PCR和Western blot法检测细胞NLRP3和XO的m RNA和蛋白水平。结果:高于700μg/L的CORT可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中NLRP3的表达及caspase-1的活化(P0.05);与LPS组相比,LPS+CORT在下调LPS诱导的巨噬细胞NLRP3表达的同时抑制XO的表达(P0.05),LPS+allopurinol组巨噬细胞NLRP3的表达减少(P0.05)。结论:较高浓度的CORT能抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞NLRP3的表达,而CORT的抑制作用可能与其下调XO的表达水平有关。     

重楼皂苷Ⅰ对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用研究北大核心CSCD

目的:探究重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用机制。方法:将小鼠随机分为对照(Control)组、LPS组、PPⅠ5 mg/kg组、PPⅠ10 mg/kg组、PPⅠ20 mg/kg组和地塞米松(DEX)组,每组8只。PPⅠ各组小鼠灌胃相应剂量PPⅠ,DEX组灌胃2 mg/kg DEX,对照组灌胃生理盐水预处理7 d,鼻腔滴入LPS(5 mg/kg)建立小鼠ALI模型。24 h后处死小鼠,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),检测肺湿/干重(W/D)值;HE染色观察肺组织损伤情况并评分;检测BALF中总蛋白含量、白细胞和巨噬细胞数;试剂盒检测一氧化氮(NO)、髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测小鼠肺组织中p38和AMPK的磷酸化及NLRP3、caspase-1、Nrf2和KEAP1的蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS组小鼠肺组织发生病理性变化,肺损伤评分、W/D值、BALF中总蛋白含量、炎症细胞、氧化应激水平和炎症细胞因子含量明显升高(P<0.05,P<0.01),p38磷酸化水平、NLRP3、caspase-1和KEAP1蛋白表达显著上调(P<0.01),AMPK磷酸化水平和Nrf2蛋白表达显著下调(P<0.01)。与LPS组比较,PPⅠ(10 mg/kg和20 mg/kg)和DEX减轻了LPS诱导的ALI,肺损伤评分、W/D值、BALF中总蛋白含量、炎症细胞、氧化应激水平和炎症细胞因子含量明显降低(P<0.05,P<0.01),p38磷酸化水平、NLRP3、caspase-1和KEAP1蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01),AMPK磷酸化水平和Nrf2蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论:PPⅠ能够减轻LPS诱导的小鼠ALI,可能与p38-NLRP3/caspase-1和AMPK-Nrf2/KEAP1信号途径有关。     

N-乙酰半胱氨酸通过抑制ROS-NLRP3信号通路诱导巨噬细胞的M2型分化改善脓毒症肺损伤

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对脓毒症肺损伤的作用及机制。方法 48只Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组、NAC低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药组(n=8)。给予LPS前1 h,腹腔注射药物干预研究。给予LPS 6 h后麻醉,收集肺泡灌洗液(BALF)和血清。苏木精-伊红染色检测肺损伤病理变化;ELISA检测BALF和血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量;Western blot检测组织中NLRP3、Caspase1和ASC蛋白水平;流式细胞术分析M2型巨噬细胞表型;商用试剂盒测量组织中MDA、MPO、SOD、GSH和ROS含量。结果与模型组比较,NAC组小鼠肺损伤显著缓解,且BALF和血清中TNF-α、IL-6和IL-1β含量减少。NAC组较模型组小鼠BALF中M2型巨噬细胞表型增强,且NLRP3、Caspase1和ASC蛋白下调。NAC组小鼠肺组织中MDA、MPO和ROS含量减少,同时,SOD和GSH含量增加。结论 N-乙酰半胱氨酸对急性肺损伤具有保护作用,且可能与抑制ROS-NLRP3信号通路诱导巨噬细胞的M2型分化有关。     

芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解哮喘小鼠气道炎症的作用机制

目的 探讨芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导的哮喘小鼠模型的气道炎症。方法 将40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机分为5组,分别为正常组(control)、OVA模型组、芝麻素低剂量组(50 mg/kg)、芝麻素高剂量组(100 mg/kg)、阳性对照地塞米松(dexamethasone, DEX)治疗组(1 mg/kg),每组8只。使用Diff-Quick染色法对每组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中的各种炎症细胞进行分类、计数;小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量使用ELISA法进行检测;流式细胞术测定小鼠肺组织CD4阳性细胞群中细胞因子的阳性百分率;对各组小鼠的肺组织进行HE、PAS染色,并观察其病理学改变;对小鼠肺组织进行免疫组织化学染色,观察NLRP3蛋白的表达分布情况;Western blot方法检测AMPK、p-AMPK、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达水平。结果 芝麻素能够减少OVA引起的哮喘小鼠BALF中各种炎症细胞数量,降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13...     

芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解哮喘小鼠气道炎症的作用机制

目的 探讨芝麻素通过AMPK/NLRP3信号通路缓解卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导的哮喘小鼠模型的气道炎症。方法 将40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机分为5组,分别为正常组(control)、OVA模型组、芝麻素低剂量组(50 mg/kg)、芝麻素高剂量组(100 mg/kg)、阳性对照地塞米松(dexamethasone, DEX)治疗组(1 mg/kg),每组8只。使用Diff-Quick染色法对每组小鼠肺泡灌洗液(BALF)中的各种炎症细胞进行分类、计数;小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的含量使用ELISA法进行检测;流式细胞术测定小鼠肺组织CD4阳性细胞群中细胞因子的阳性百分率;对各组小鼠的肺组织进行HE、PAS染色,并观察其病理学改变;对小鼠肺组织进行免疫组织化学染色,观察NLRP3蛋白的表达分布情况;Western blot方法检测AMPK、p-AMPK、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达水平。结果 芝麻素能够减少OVA引起的哮喘小鼠BALF中各种炎症细胞数量,降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13...     

过表达SIRT1通过增强自噬水平调控巨噬细胞M2型极化减轻脓毒症诱导的急性肺损伤

目的：探究过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对脓毒症诱导的急性肺损伤（ALI）巨噬细胞表型转化的影响及调控机制。方法：体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,LPS+IFN-γ与IL-4定向诱导其M1与M2型极化，Western blot检测细胞SIRT1和M1型标志物iNOS、CD86与M2型标志物Arg1、Mcr1蛋白表达。转染过表达SIRT1的质粒，RT-PCR检测转染效率，LPS诱导脓毒症ALI体外细胞模型，并分为4组：LPS组、LPS+pcDNA3.1-SIRT1组、LPS+pcDNA3.1-NC组和Control组，Western blot检测各组细胞iNOS、CD86与Arg1、Mcr1和自噬标志物LC3B-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1与p62及SIRT1/FOXO1信号通路SIRT1、FOXO1蛋白表达。免疫荧光检测各组细胞LC3B荧光表达。采用盲肠结扎穿孔（CLP）术构建脓毒症ALI小鼠模型，通过慢病毒在小鼠体内过表达SIRT1，并分为4组：假手术（Sham）组、CLP组、CLP+LV-NC组、CLP+LV-SIRT1组，RT-PCR、HE染色、ELISA检测各组小鼠肺...     

人参皂甙RB2 抑制NF-κB 的激活对LPS 诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫调节作用

目的:研究人参皂苷RB2对脂多糖(LPS)诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫功能的影响及相关分子机制。方法:将新生小鼠随机分为四组:健康组(Ctrl);人参皂苷单独处理组(GR2):健康小鼠腹腔注射GR2 50 mg/kg BW; LPS诱导组(LPS):腹腔注射0. 6 mg/kg BW的LPS,连续5 d; LPS+GR2组:模型小鼠腹腔注射人参皂苷50 mg/kg BW。HE染色观察肺组织损伤情况; TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡; Western blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达; ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10的含量; Western blot检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和NF-κBp 65的表达水平。结果:LPS组与对照组相比,肺组织出现明显的损伤,肺泡壁明显增厚,出现大量炎性细胞浸润;染色呈阳性的凋亡细胞比率显著提高; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著上调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著上升,IL-10的含量没有明显变化; HMGB1和MIF的表达显著上调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著上调。LPS+GR2组与LPS组相比,肺组织损伤明显得到缓解,多数肺泡结构完整,仅有少量炎性细胞浸润;凋亡细胞的比率显著下降; Caspase-3和Caspase-9的表达水平显著下调;炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的含量显著下降,IL-10的含量没有明显的变化; HMGB1和MIF的表达显著下调;磷酸化的NF-κB p65的表达显著下调。结论:人参皂苷RB2抑制NF-κB的激活,进而调节LPS诱导的新生小鼠急性肺损伤的免疫反应。     

LPS与ATP共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的建立

目的：探索脂多糖（LPS）和三磷酸腺苷（ATP）共同诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞焦亡模型的最佳条件。方法：采用流式细胞仪F4/80和CD-11b染色检测巨噬细胞纯度,Annexin V-PE/7-AAD双染色法筛选出LPS和ATP共同诱导细胞焦亡的最适浓度及时间。巨噬细胞随机分为control组、LPS组、ATP组和LPS+ATP组;Western blot检测GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1蛋白表达水平;ELISA检测培养上清中IL-1β和TNF-α表达水平;透射电镜（TEM）和扫描电镜（SEM）观察巨噬细胞焦亡形态。结果：巨噬细胞的纯度达到90%;500 ng/ml LPS 24 h+5 mmol/L ATP 4 h为诱导巨噬细胞焦亡的最佳组合方式;LPS+ATP组的GSDMD、caspase-1、caspase-11、NLRP3、ASC、pro-IL-1β、pro-IL-18和HMGB1的蛋白表达量明显高于对照组（P<0.05）;培养上清中IL-1β和TNF-α表达量显著高于对照组（P&...     

microRNA-1285-3p在脓毒症急性肺损伤中的表达及其与炎症因子水平的相关性

目的探讨microRNA(miRNA)-1285-3p在脓毒症急性肺损伤(ALI)中的表达及其与炎症因子、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6水平的相关性。方法对大鼠进行腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠模型,选取相同数量的大鼠作为对照组;各模型组大鼠注射LPS 4 h、8 h、12 h以及24 h后,观察各组大鼠肺组织病理学变化,并检测肺组织中microRNA-1285-3p、TNF-α与IL-6的含量变化。利用LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383细胞),在4 h、8 h、12 h以及24 h不同时间点检测细胞中microRNA-1285-3p、TNF-α与IL-6的含量变化,并分析细胞中microRNA-1285-3p的表达与TNF-α、IL-6表达的相关性。以生物信息学方法对microRNA-1285-3p及其靶基因进行预测,上调或下调NR8383细胞microRNA-1285-3p表达,以LPS刺激后,12 h后观察microRNA-1285-3p的表达变化,利用蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测24 h后细胞中microRNA-1285-3p靶蛋白与NF-κB的表达变化。结果 LPS 4 h组、LPS 8 h组、LPS 12 h组、LPS 24 h组肺组织及NR8383细胞系中的microRNA-1285-3p表达量均分别低于对照组(P0.05),而TNF-α、IL-6水平均高于对照组(P0.05);microRNA-1285-3p表达与TNF-α、IL-6均呈负相关关系(均P0.05);microRNA-1285-3p mimic组Notch1蛋白(Notch信号通路受体蛋白之一)的表达低于对照组(P0.05);microRNA-1285-3p抑制剂(inhibitor)组Notch1蛋白的表达水平高于对照组(P0.05)。结论microRNA-1285-3p可能通过调控脓毒症急性肺损伤大鼠的Notch1蛋白的表达,影响炎症因子TNF-α与IL-6的表达,参与其免疫炎症调控过程。     

甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过NF-κB信号通路促进小鼠巨噬细胞活化和炎症反应

目的研究参与腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(m~6A)的甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在巨噬细胞活化中的作用。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并以1μg/mL脂多糖(LPS)刺激0、 2、 4、 6 h,检测METTL3的表达情况。设计合成的针对小鼠METTL3的小干扰RNA(siRNA)敲低METTL3的表达,通过实时定量PCR和Western blot法检测干扰效率;利用siRNA下调METTL3表达48 h后,以1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞,采用实时定量PCR检测白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-12、IL-1β的mRNA水平, Western blot法检测核因子κB (NF-κB)信号通路中p65和磷酸化p65蛋白水平。结果 LPS刺激后RAW264.7细胞METTL3的表达上调,设计合成的METTL3 siRNA能有效敲低METTL3的水平。敲低METTL3后,巨噬细胞LPS刺激诱导表达的IL-6、 IL-12、 TNF-α和IL-1β显著降低,同时伴有NF-κВ信号通路p65蛋白的磷酸化水平降低。结论 METTL3通过激活NF-κВ信号通路促进LPS刺激的巨噬细胞活化和炎症反应。     

血管活性肠肽对肺泡巨噬细胞活化和p38MAPK信号通路影响的实验研究

目的 研究血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）对肺泡巨噬细胞活化的影响。方法 原代小鼠肺泡巨噬细胞分为Normal组（正常对照）、LPS组（脂多糖刺激巨噬细胞活化）、LPS+VIP组(脂多糖刺激巨噬细胞活化后,10^-6mol/L VIP干预)。3 C57BL/6小鼠随机分为Normal组（正常对照）,ALI组（急性肺损伤）,ALI+VIP组(急性肺损伤后,10^-8mol/L VIP气管滴入)。免疫荧光法检测肺泡巨噬细胞标记物CD86和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）的表达;ELISA法检测细胞培养上清和血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、IL-6的含量;RT-PCR法检测巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase, MAPK）mRNA的表达水平;Western blot法检测各组巨噬细胞和肺组织内TNF-α、IL-6、p38MAPK、p-p...     

柯萨奇病毒B3(CVB3)通过激活NADK2促进小鼠巨噬细胞NLRP3的活化

目的 研究在柯萨奇病毒B3(CVB3)刺激下，小鼠巨噬细胞中含pyrin结构域NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的变化及机制。方法 CVB3刺激RAW264.7细胞、小鼠原代(骨髓来源或腹腔)巨噬细胞以及感染NLRP3短发夹RNA(shRNA-NLRP3)慢病毒的RAW264.7细胞，实时荧光定量PCR检测NLRP3和白细胞介素1β(IL-1β)表达水平；ELISA检测细胞上清中IL-1β的含量；Western blot法检测NLRP3蛋白的变化，免疫共沉淀(Co-IP)法检测NLRP3相互作用蛋白的表达。结果CVB3刺激RAW264.7细胞、骨髓来源或腹腔巨噬细胞后，NLRP3和IL-1β表达明显升高；下调NLRP3后，IL-1β分泌明显减少；NLRP3抗体Co-IP所得复合物银染，组间差异蛋白经质谱分析鉴定为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶2(NADK2),证明CVB3诱导NADK2与NLRP3相互作用。结论 CVB3通过激活NADK2促进巨噬细胞NLRP3活化，增加炎症因子IL-1β表达和释放。     

Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著上升,显著高于正常对照组(0.05);相比于急性肺损伤组小鼠,Wortmannin处理组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(0.05)。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达。     

天抗(TK)对脂多糖诱导小鼠炎症模型的抗炎作用及其机制

目的研究天抗(TK)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠炎症模型的抗炎作用及机制研究。方法将42只昆明小鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(LPS)组、地塞米松(DXM)组、天抗低(TK-L)、中(TK-M)和高(TK-H)剂量组(0.2,0.8和3.2 g/kg)。各组分别灌胃给药7 d后,腹腔注射30 mg/kg的LPS诱导小鼠急性炎性模型,6 h后处死小鼠,检测小鼠脾脏指数,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;生化法检测小鼠血清中SOD和MDA的表达;qRT-PCR检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p65、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;Western blot检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p-p65和p65蛋白表达水平。结果与LPS组相比,TK组小鼠的脾脏指数明显降低,血清和脾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平显著下降,SOD水平明显升高,小鼠脾脏组织的TLR4、MyD88、TRAF6和p-p65等蛋白及mRNA表达水平均明显降低。结论天抗对LPS诱导的小鼠急性炎症模型具有抗炎作用,其作用机制可能是通过TLR4/MyD88/NF-κB(p-65)信号通路抑制炎症因子的释放。     

甘草素对急性肾损伤小鼠的保护机制研究

目的 探究甘草素对脂多糖（LPS）诱导的急性肾损伤小鼠的保护作用机制。方法 将雄性昆明小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+甘草素3.75 mg/kg组、LPS+甘草素7.5 mg/kg组、LPS+甘草素15 mg/kg组和LPS+地塞米松组,每组8只。苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理变化;全自动生化分析仪检测血清肌酐和血清尿素氮水平。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测肾组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平;Western blot检测肾组织中IκBα和NF-κBp65蛋白的磷酸化水平和Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组小鼠肾组织中有大量炎症细胞浸润,血清肌酐、血清尿素氮、IL-6、IL-1β、TNF-α水平及p-IκBα/IκBα、p-NF-κBp65/NF-κBp65、TLR4、NLRP3、Caspase-1、IL-1β均显著上调,差异均有统计学意义（P<0.05）。然而在LPS+甘草素7.5 mg/kg组、LPS+甘草素15 mg/kg组和LPS...