复方大果木姜子软胶囊抗流感病毒作用的体外实验研究

目的对复方大果木姜子软胶囊进行体外抗流感病毒实验研究,开发安全有效的抗流感病毒的中药新药。方法细胞培养实验方法。结果复方大果木姜子软胶囊在MDCK细胞中的半数中毒浓度(TC50)为1.248 mg.m l-1;预防组抗流感病毒的半数有效浓度(EC50)为0.117 mg.m l-1;治疗指数(TI)为10.67;感染病毒0~7 h后均有明显的抑制FM1在MDCK细胞中增殖的作用。结论复方大果木姜子软胶囊对流感病毒FM1在MDCK细胞中的增殖具有明显的抑制作用。     

桂枝挥发油抗甲型流感病毒作用

目的:观察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的影响及对该流感病毒株感染小鼠的治疗作用。方法:MTT法检测受试药物对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定两种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。计算肺指数及HE染色观察药物对流感病毒(H1N1)感染小鼠的治疗作用。结果:桂枝挥发油和桂皮醛对MDCK细胞的TC50分别为5.38×10-3mg/ml和5.49×10-3mg/ml,TC0均为2.5×10-3mg/ml。桂枝挥发油和桂皮醛能抑制流感病毒在MDCK细胞内的增殖,其IC50分别为5.80×10-5mg/ml与5.31×10-5mg/ml,TI分别为92.82和103.35。桂枝挥发油0.174mg/kg和桂皮醛0.132mg/kg连续灌胃5d,明显降低病毒感染小鼠的肺指数,抑制率分别为26.7%和27.4%,并对病理组织形态有改善作用。结论:桂枝挥发油与桂皮醛体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,并对流感病毒株感染小鼠有较好的治疗作用。表明桂枝挥发油及桂皮醛具有抗甲型流感病毒作用,桂皮醛是桂枝挥发油抗病毒效应的主要有效成分之一。     

黄芩-干姜药对的体外抗流感病毒作用

目的探讨黄芩-干姜药对水提物和醇提物(HGW和HGE)的体外抗流感病毒作用。方法血凝试验考察HGW和HGE对流感病毒感染的鸡胚尿囊液血凝滴度的影响,MTT法考察两者对流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响。结果血凝试验显示,与病毒对照组相比,HGW和HGE在100 mg/m L质量浓度时均可使鸡胚尿囊液的血凝滴度降至阴性。MTT法显示,HGW和HGE的最大无毒浓度(TC0)均为2.5 mg/m L,药物的半数有效浓度(EC50)分别为0.767 mg/m L和2.46 mg/m L。结论 HGW和HGE均具有一定的抗流感病毒作用,且HGW优于HGE。     

中药复方有效部位的体外抗流感病毒作用

目的:研究中药复方有效部位(TCM-ES)的体外抗流感病毒FMI株(IFV-FM1)的作用.方法:采用微量细胞病变抑制法、中性红染色法、空斑抑制法,从TCM-ES的最大无毒浓度开始,按Reed-Muench法计算药物对FM1感染狗肾传代细胞(MDCK)的半数有效浓度(EC50),最小有效浓度(MTC),治疗指数(TI).进行空斑计数(PFU),计算其半数抑制浓度(IC50).结果:微量细胞病变抑制法表明,TCM-ES抗FMI的EC50为(300±18.3)mg/L,MTC为(75 ± 6.8)mg/L,TI为(7.1 ± 0.7);而利巴韦林的3项指标分别为(52.3 ± 10.1)mg/L、(25±4.1)mg/L和(20.8±5.1).中性红染色法显示,两药物的IC50分别为(285.0±19.2)ms/L和(45.3±4.9)mg/L,TI分别为(7.2 ±0.6)和(21.2 ± 3.1).两种方法测定的TCM-ES和利巴韦林的TI值无统计学差异(P＞0.05).通过PFU计数,TCM-ES的半数抑制浓度(IC50)为300 mg/L,利巴韦林的IC50为50 mg/L,与前述结果亦无统计学差异(P＞0.05).结论:TCM-ES体外具有一定的抗流感病毒作用,可作用于细胞内病毒,但其效果略差于利巴韦林,具有进一步研究和开发的价值.     

荆芥挥发油体外抗甲型流感病毒作用及机制的研究

目的:观察荆芥挥发油及其主要成分胡薄荷酮与薄荷酮体外对甲型流感病毒(H1N1)增殖的影响,并探讨其TLR/IFN信号通路机制。方法:MTT法检测受试药对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定三种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。Real-Time PCR法观察药物对H1N1感染MDCK细胞后8h细胞TLR7、IFN-βmRNA表达水平的影响。结果:荆芥挥发油、胡薄荷酮和薄荷酮对MDCK细胞的TC50分别为0.20mg/ml、0.36mg/ml与0.43mg/ml,TC0分别为0.10mg/ml、0.10mg/ml与0.25mg/ml。荆芥挥发油和胡薄荷酮3.1×10-3～0.1mg/ml浓度时能抑制流感病毒增殖,其IC50分别为1.7×10-3mg/ml与1.9×10-3mg/ml,TI分别为120.83、184.54,呈一定量效关系;薄荷酮对流感病毒染毒的MDCK细胞几乎无保护作用。荆芥挥发油3.1×10-3～0.10mg/ml浓度,胡薄荷酮1.3×10-2～0.10mg/ml及薄荷酮7.8×10-3～0.10mg/ml浓度时对流感病毒具有明显直接杀灭作用,其IC50分别为3.1×10-3、7.2×10-3与1.9×10-3mg/ml,TI分别为63.99、50.00和82.88。荆芥挥发油和胡薄荷酮0.1mg/ml浓度时均显著提高TLR7、IFN-βmRNA表达水平,0.25mg/ml薄荷酮显著提高TLR7mRNA表达水平。结论:荆芥挥发油与胡薄荷酮体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,薄荷酮作用不明显;三者均对流感病毒有显著直接杀灭作用。其抗病毒作用机制可能与其激活TLR7,诱导IFN-β高表达,激活病毒模式识别系统有关。     

小儿宝泰康颗粒对流感病毒感染细胞的抗病毒作用研究

目的：观察小儿宝泰康颗粒对流感病毒感染细胞的抑制作用。方法：通过细胞培养技术观察不同浓度的小儿宝泰康颗粒对Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞的细胞毒性作用,采用MTT法并结合CPE法检测细胞成活率和病毒抑制率,计算药物的抗病毒指数TI,以利巴韦林作为阳性对照药物,评价该药物对甲、乙型流感病毒的抗病毒活性。结果：小儿宝泰康颗粒对MDCK细胞的半数细胞毒性浓度（CC50）为5.6 mg/mL,对甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞的半数有效浓度（EC50）为2.1 mg/mL,而对乙型流感病毒的EC50为1.44 mg/mL,抗病毒指数分别为2.64和3.89。在阳性对照药物实验中,利巴韦林在200 μg/mL时,对甲、乙型流感病毒的抑制率均达到70%以上。结论：小儿宝泰康颗粒是一种对不同型流感病毒感染有抗病毒作用的药物,有临床应用前景和进一步研究的价值。     

复方龙芩草微乳提取液体外抗H1N1流感病毒的作用研究

[目的]考察生物相容性微乳及复方龙芩草微乳提取液体外抗H1N1流感病毒的效果。[方法]运用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测微乳和复方龙芩草微乳提取液对A549细胞的最大无毒浓度(TC_0)及半数抑制浓度(TC_(50)),采用细胞病变效应(CPE)法表示药物对病毒感染细胞的作用,MTT法检测细胞病变抑制率(ER)。采用Probit回归法计算受试药物在体外抗H1N1流感病毒的半数抑制浓度(IC_(50))和治疗指数(TI)。[结果]微乳在一定程度上抑制H1N1流感病毒对细胞的感染作用,IC_(50)为769.178 mg/L(以含微乳量计),TI为9.078;复方龙芩草微乳提取液具有显著的抗H1N1流感病毒的效果,当浓度为1 250 mg/L(以含微乳量计)时,抗病毒效率达到91.37%,IC_(50)为314.808 mg/L,TI为20.889。[结论]复方龙芩草微乳提取液体外抗H1N1流感病毒的效果显著,微乳具有一定的抗流感病毒的效果,在复方龙芩草微乳提取液中或许起到辅助作用。     

牡蛎多糖抑制流感病毒增殖的实验研究

目的 研究牡蛎多糖对流感病毒在MDCK细胞中增殖的抑制作用.方法 采用血凝滴度测定牡蛎多糖对MDCK细胞培养甲型流感病毒增殖的抑制作用;通过联合用药试验研究牡蛎多糖对利巴韦林抗流感病毒的协同效应.结果 牡蛎多糖能显著降低MDCK细胞培养流感病毒的血凝滴度;牡蛎多糖与利巴韦林联合使用时,能显著抑制MDCK细胞培养流感病毒的增殖并具有相加效应.结论 牡蛎多糖能明显抑制MDCK细胞培养流感病毒的增殖,对利巴韦林抗流感病毒具有相加效应,具有开发成抗流感病毒生物制剂的前景.     

柴莪退热栓抗病毒实验研究

目的:用现代实验学方法对柴莪退热栓体内外抗流感病毒的实验观察,探讨柴莪退热栓抗流感病毒作用的机理,为临床治疗病毒性上呼吸道感染提供实验依据.方法:接种流感病毒FM1株于MDCK(狗肾细胞),观察柴莪退热栓体外抗流感病毒作用;体内抗病毒实验以病毒滴鼻感染小鼠,观察柴莪退热栓对肺指数、血凝滴度的影响.结果:体外实验通过毒性实验观察到药物煎剂在MDCK上的半数毒性浓度为12.5mg/mL,在该浓度下,药物对甲型流感病毒无抑制作用.体内实验研究表明柴莪退热栓的肺指数抑制率为20%,提示本药在体内有明显的抗病毒作用.结论:柴莪退热栓的抗病毒作用可能需要体内免疫机制的参与.     

KGTR颗粒体外抗流感病毒作用

目的:观察KGTR颗粒体外抗流感病毒作用,为开发中药新药提供实验基础。方法:以5μg/mL病毒唑作为阳性对照药物,体外抗甲型和乙型流感病毒作用,观察药物及药物血清对流感病毒致细胞病变效应的抑制作用。结果:KGTR颗粒的最大无细胞毒性浓度为10mg/mL,抗甲型流感病毒的有效浓度为0.5mg/mL,抗乙型流感病毒的有效浓度为2mg/mL,可以抑制流感病毒在细胞中的增殖;药物血清显示良好的抗甲型流感病毒作用,而抗乙型流感病毒作用较弱。结论:KGTR颗粒具有明显的体外抗流感病毒作用,而且抗甲型流感病毒较抗乙型流感病毒效果更好。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对甲型流感病毒致宿主细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在体外对甲型流感病毒感染后氧化应激的影响,初步探讨EGCG抗流感病毒的发生机制。方法:以1×104个细胞密度接种96孔板,在体外用MTT法检测不同浓度EGCG对狗肾传代细胞(MDCK)的毒性浓度;病毒感染28 h后,用CPE观察法、血凝法、实时定量荧光PCR法评价EGCG对甲型流感病毒的抑制作用;并通过共聚焦显微技术和流式细胞术,探寻EGCG对甲型流感病毒感染后氧化应激的影响。结果:EGCG在体外能有效抑制甲型流感病毒的复制,病毒抑制率与感染后加药时间正相关(P<0.05);与病毒对照相比,20 mg.L-1EGCG处理后流感病毒感染的MDCK细胞中活性氧的水平下降54%,继而有效抑制流感病毒引起的细胞凋亡。结论:EGCG主要抑制流感病毒的早期复制,可通过调控氧化应激,抑制流感病毒所致MDCK细胞凋亡。     

滨蒿总黄酮提取物的抗流感病毒作用

目的:观察滨蒿总黄酮提取物(滨蒿总黄酮)在体内外的抗流感病毒作用。方法:体外抗病毒实验观察样品对狗肾传代细胞(MDCK)的毒性,观察病毒致细胞病变(CPE)法测定样品在体外抑制甲、乙型流感病毒的半数抑制浓度(IC50),并计算选择指数(SI)。体内抗病毒实验用流感病毒鼠肺适应株(PR8)滴鼻感染小鼠建立流感病毒性肺炎模型,以死亡保护率、生命延长率和肺指数等为指标,评价样品的保护作用。结果:滨蒿总黄酮对甲、乙型流感病毒致细胞病变的IC50分别为74.6μg/mL、98.5μg/mL,SI分别为16.8、12.7;滨蒿总黄酮以200、400mg/kg剂量灌胃给药对小鼠流感病毒性肺炎模型有明显的保护作用,其死亡保护率分别为36.4%、54.5%;生命延长率分别为29.0%、38.2%;滨蒿总黄酮400mg/kg剂量对流感病毒性肺炎小鼠肺指数有明显的抑制作用,抑制率为25.9%。结论:滨蒿总黄酮在体内外均有明显的抗病毒作用。     

锦带花体外抗流感病毒有效部位研究

目的:筛选锦带花抗流感病毒的有效部位,为锦带花药效物质基础阐明提供依据。方法:体外用MTT法检测锦带花有效部位对传代狗肾细胞MDCK的毒性浓度,观察锦带花有效部位抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用(CPE),MTT检测锦带花有效部位对流感病毒的抑制率。结果:锦带花的各有效部位均有抗流感病毒(H1N1)的作用,其中锦带花乙酸乙酯提取物的抑制流感病的作用与利巴韦林相似;而石油醚提取物的抑制作用最弱。结论:锦带花具有确切的抗流感病毒作用,锦带花的乙酸乙酯提取物为抗流感病毒的有效成分集中部位。     

药效组分中药“黄金菊”对甲型流感病毒的抑制作用

目的：研究“黄金菊”抗甲型流感病毒PR8（A／PR8／34／H1N1）的活性,为药效组分中药的发现提供科学依据。方法：采用MTT掺入比色法测定药效组分中药“黄金菊”对狗肾传代细胞（MD—CK）的毒性及对PR8的有效性,同时设定阳性药物对照组及空白对照组;采用生物效价二剂量法对该药物与阳性药物的等效剂量进行比较。结果：该药物对MDCK细胞的TD50为1．9061mg·mL^-1;TD0为0．625mg·mL^-1;对流感病毒PR8的MIC为312．5μg·mL^-1,IC50为112．8694μg·mL^-1。双黄连粉针与“黄金菊”等反应剂量比为184．91％;病毒唑与“黄金菊”等反应剂量比为46．17％。结论：“黄金菊”具有对甲型流感病毒的直接抑制作用,且存在明显的量效反应关系,作用优于市场应用较广泛的双黄连粉针,开发前景广阔。     

牛蒡苷元体外抗流感病毒活性

目的：体外观察牛蒡苷元（arctigenin,ACT)抗甲1流感病毒作用，为进一步确认ACT是牛蒡子Fructus arctii解表功能有效成分提供实验依据。方法：采用MDCK细胞培养法，通过红细胞凝集实验，以流感病毒血浆滴度为指标，观察ACT对流感病毒复制的抑制作用。结果：ACT浓度(mmol/L)为6．7，13．4，26．8和53．6的血凝滴度抑制率（％）分别为0．75，87．5和100。结论：ACT在体外有直接抑制流感病毒复制的作用，是牛蒡子解表功能的有效成分，对其进行含量测定作为牛蒡子质量标准的定量指标是适宜和可行的。     

云南特色中药臭灵丹体外抗甲型H1N1 流感病毒的实验研究

臭灵丹Laggera pterodonta,一种民间常用的治疗感冒的具有民俗特色的中药。为了检测臭灵丹不同溶剂萃取物对甲型H₁N₁流感病毒在体外的中和杀伤作用和增殖抑制作用,本研究采用中和抑制实验和增殖抑制实验,用狗肾传代MDCK细胞培养法观察臭灵丹萃取物抑制甲型H₁N₁流感病毒的致细胞病变作用(CPE),观察2种实验中臭灵丹萃取物在体外对甲型H₁N₁流感病毒血凝效价的影响,同时采用Real time RT-PCR定量检测流感病毒的拷贝数,比较臭灵丹不同溶剂萃取物对甲型H₁N₁流感病毒在体外增殖的影响。结果显示,臭灵丹乙酸乙酯萃取物及石油醚萃取物作用72 h后,中和实验组H₁N₁病毒血凝效价下降了8倍,而增殖抑制组,H₁N₁病毒血凝效价也分别下降了2倍和4倍;Real time RT-PCR的检测结果表明,臭灵丹乙酸乙酯萃取物中和H₁N₁病毒的抑制率为72.5%,而增殖抑制组的抑制率为25.3%,石油醚萃取物中和H₁N₁病毒的抑制率为60.2%,增殖抑制组为81.4%。由此可以得出,臭灵丹乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物在体外对甲型H₁N₁流感病毒有明显的中和作用及直接的抑制增殖作用。     

绵马贯众中间苯三酚类化合物抗流感病毒的活性筛选

目的基于绵马贯众中间苯三酚类成分寻找具有良好抗流感病毒活性的化合物。方法将25个绵马贯众中间苯三酚类化合物与12种流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)进行分子对接,通过评价结合能、结合模式及发生相互作用的重要氨基酸等指标进行虚拟筛选。通过神经氨酸酶抑制实验验证其中4个候选化合物体外抑制NA的活性,在此基础上,采用犬肾MDCK细胞通过细胞病变(CPE)法对候选化合物M22的抗病毒活性进行进一步的验证。结果通过分子对接筛选出5个与NA有较好结合能力的候选化合物;NA抑制实验结果表明候选化合物中M22对NA抑制作用最显著;CPE实验结果表明M22对多种流感病毒毒株均具有较好的抑制作用。结论绵马贯众中候选化合物M22具有较好的抗流感病毒作用,为开发新的抗流感病毒药物的深入研究奠定了基础。     

空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒作用

[目的]以空心莲子草有效部位提取物为研究对象,进一步验证其抗甲型H3N2流感病毒的生物活性,为其开发应用提供依据。[方法]以利巴韦林注射液作为空心莲子草有效部位提取物抗病毒实验的阳性对照药物,观察甲型H3N2流感病毒感染幼犬肾（MDCK）细胞后引起的细胞病变效应（CPE）,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活性,采用治疗指数（TI）作为药物抗病毒效果的评价指标,评价空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒的生物活性。[结果]空心莲子草有效部位提取物对流感病毒有明显抗病毒生物合成作用,其TI为（2．43±0．01）,但其阻止流感病毒吸附与直接杀伤流感病毒的作用不明显。[结论]空心莲子草有效部位提取物有较强的抗流感病毒作用,其作用方式为抗病毒生物合成,且呈剂量依赖性。