宫颈癌组织P16、P15蛋白检测的临床价值研究

目的 研究P16、P15在宫颈癌组织中的表达与组织学分级和临床分期的关系.方法 选择宫颈癌标本82份为宫颈癌组,并选择50份正常宫颈组织为正常组,用免疫组化法检测两组组织P15和P16的表达,分析宫颈癌组P15和P16表达与病理组织学分级、临床分期、有无淋巴结转移和癌栓的关系.结果 P15、P16在正常组和宫颈癌组中的阳性表达率分别为98.00％和50.00％、96.00％和51.22％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;肿瘤组织P15和P16蛋白的阳性表达率与组织学分级、临床分期、有无淋巴结转移、有无癌栓有关,其中组织学分级Ⅲ级＜Ⅱ级＜Ⅰ级（P＜0.05）,有淋巴结转移者＜无淋巴结转移（P＜0.05）,有癌栓者＜无癌栓者（P＜0.05）.结论 P16、P15在宫颈癌组织中表达的阳性率明显低于正常组织,缺失越严重其组织学分级和临床分期越高、有淋巴结转移和癌栓的可能性增大;因此宫颈癌组织进行P15、P16蛋白检测对宫颈癌预后的判断可能具有一定的临床价值.     

骨肉瘤中Bcl-2和ILK表达的生物学意义研究

目的研究骨肉瘤中细胞凋亡调控基因Bcl-2和整合素连接激酶（ILK）表达的生物学意义。方法用免疫组织化学S-P法,研究2002~2009年辽宁省4家医院收治的30例骨肉瘤标本与15例正常骨中Bcl-2和ILK表达情况对照。结果骨肉瘤组与正常组相比,Bcl-2差异有显著性（P〈0.05）。骨肉瘤Ⅱ、Ⅲ级组与Ⅰ级组,骨肉瘤生存组与死亡组相比,Bcl-2差异无显著性（P〉0.05）。骨肉瘤中Bcl-2和ILK表达呈显著相关性（P〈0.05）。结论细胞凋亡抑制和过度增殖协同作用导致骨肉瘤的发生。ILK可作为反映骨肉瘤分级和预后的指标。Bcl-2不能作为判断骨肉瘤分级和预后的指标。     

肺鳞癌中Bcl-2、Bax蛋白的表达与细胞凋亡的临床意义

目的检测Bcl-2、Bax蛋白及细胞凋亡在鳞癌中的表达,探讨其在鳞癌的发生、发展机制方面的作用。方法随机选择50例鳞癌手术标本及30例癌旁正常组织,应用免疫组化pv-9000法检测Bcl-2、Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡指数（AI）。结果鳞癌中Bcl-2、Bax、AI的表达均高于正常组织（P〈0.05）;Bcl-2、Bax、AI在不同分化程度、TNM分期、淋巴结是否转移组中差异有统计学意义（P〈0.05）;AI在鳞癌不同直径组差异有统计学意义（P〈0.05）;鳞癌中Bcl-2积分与AI成负相关关系（r=-0.73,P〈0.05）,Bax积分与AI成正相关关系（r=0.78,P〈0.05）。结论 Bcl-2可能参与了肺癌初期的发生、发展并抑制了细胞凋亡;Bax与进展中肺癌细胞凋亡水平的升高有关。     

凋亡相关蛋白FLIP和NF-κB在人骨肉瘤中表达及其与凋亡的关系研究

目的探讨FLIP、NF-κB蛋白在人骨肉瘤组织中的表达以及与骨肉瘤细胞凋亡的关系。方法免疫组化方法检测FLIP、NF-κB蛋白在骨肉瘤及骨软骨瘤中的表达;用TUNEL方法通过激光扫描共聚焦显微镜检测骨肉瘤及骨软骨瘤细胞凋亡并计算细胞凋亡指数(AI)。结果骨肉瘤组织FLIP蛋白表达强度(0.276±0.013)高于骨软骨瘤(0.171±0.007)(t=26.122,P<0.05)。NF-κB蛋白表达也高于骨软骨瘤〔(0.754±0.026)和(0.318±0.009)〕(t=56.700,P<0.05)。骨肉瘤中AI显著低于骨软骨瘤(P<0.01)。骨肉瘤中FLIP蛋白表达与细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.949,P<0.01);NF-κB蛋白表达与细胞凋亡指数之间也呈负相关(r=-0.877,P<0.01)。结论 FLIP、NF-κB均参与细胞凋亡的调控过程,二者均可抑制骨肉瘤细胞凋亡;骨肉瘤组织中FLIP及NF-κB蛋白均呈过表达,对其发生、发展中起促进作用。     

生存素在骨肉瘤的表达及意义

目的　探讨生存素在骨肉瘤中的表达与骨肉瘤的生物学特性的关系。　方法　采用免疫组织化学SP法检测5 2例骨肉瘤、15例骨软骨瘤及15例正常骨质标本的生存素蛋白表达。　结果　生存素蛋白在骨肉瘤中的表达显著高于骨软骨瘤和正常骨质(P <0 .0 5 ) ,在肿瘤的侵袭转移方面差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,而在性别、年龄、肿瘤直径、病理类型、病理分级及临床分期等方面差异无显著性(P >0 .0 5 )。　结论　生存素在侵袭转移的骨肉瘤呈高表达,提示其在骨肉瘤的发生和发展中起重要作用。     

HIF-1α和PTEN在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨低氧诱导因子-1α、抑癌基因PTEN在骨肉瘤中的蛋白表达及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测30例骨肉瘤组织、15例骨软骨瘤组织中HIF-1α、PTEN蛋白的阳性表达,并分析两者的相关性。结果HIF-1α的阳性表达率在骨肉瘤中为50.0%（15/30）,在骨软骨瘤中为0,两者比较有统计学意义（“P〈0.05”）;PTEN的阳性表达率在骨肉瘤中为56.7%（17/30）,在骨软骨瘤中为93.3%（14/15）,两者比较有统计学意义（“P〈0.05”）;在骨肉瘤中,HIF-1a与PTEN的表达呈负相关（r=-0.451,“P〈0.05”）。HIF-1a与骨肉瘤Enneking外科分期、病理分级密切相关（“P〈0.05”）,而PTEN则无关（P〉0.05）;二者均与肺转移密切相关（“P〈0.05”）,而与年龄、性别、肿瘤的大小、Dahlin分型无关（“P〉0.05”）。结论HIF-1α和PTEN与骨肉瘤的发生、发展和转移密切相关,且两者呈负相关。联合检测HIF-1α和PTEN的表达将对骨肉瘤的早期诊断、预后判断提供有价值的参考。     

结直肠癌RASSF1A与cyclin D1蛋白的表达及意义

[目的]研究RASSF1A和cyclin D1蛋白在结直肠癌组织中的表达及相关性。[方法]收集结直肠癌标本50例,腺瘤标本20例,正常黏膜标本20例,采用免疫组化检测RASSF1A和cyclin D1蛋白的表达。[结果]①RASSF1A蛋白阳性率：结直肠癌组显著低于腺瘤及正常黏膜组（P〈0.05或P〈0.01）;RASSF1A蛋白表达与肿瘤Duke’s分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）,与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学分型和分化程度等无关（P〉0.05）;②cyclin D1蛋白阳性率：结直肠癌组显著高于腺瘤及正常黏膜组（P〈0.05）;cyclin D1蛋白表达与肿瘤分级、Duke’s分期及淋巴结转移有关（P〈0.05）,与性别、年龄、肿瘤部位及组织学分型等无关（P〉0.05）;③结直肠癌RASSF1A与cyclin D1蛋白表达呈显著负相关（r=-0.313,P〈0.05）。[结论]RASSF1A及cyclin D1蛋白在结直肠癌的异常表达,对肿瘤发生发展起到重要作用。     

细胞间隙连接蛋白43、增殖细胞核抗原在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨细胞间隙连接蛋白43（Cx43）、增殖细胞核抗原（Ki-67）在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学（EnVisionTM）法分别检测70例骨肉瘤组织及30例骨肉瘤旁组织中Cx43、Ki-67的表达情况。结果 Cx43在骨肉瘤组织、骨肉瘤旁组织中阳性表达率分别为14.29%、86.67%,二组之间差异有统计学意义（χ2=47.75,P〈0.01）;Ki-67在骨肉瘤组织、骨肉瘤旁组织中阳性表达率分别为71.43%、16.67%,二组之间差异有统计学意义（χ2=25.45,P〈0.01）。在临床病理因素中,Cx43的表达与年龄、性别、组织学类型无关,差异无统计学意义（P〉0.05）,但与肿瘤直径、临床分期、肺转移有关,差异有统计学意义（P〈0.05）;Ki-67的表达与年龄、性别、肿瘤直径、组织学类型无关,差异无统计学意义（P〉0.05）,但与临床分期、肺转移有关,差异有统计学意义（P〈0.05）。Cx43、Ki-67在骨肉瘤组织中的表达呈显著负相关（r=-0.56,P〈0.01）。结论骨肉瘤组织中Cx43呈现低表达,Ki-67呈现过表达,两者均与临床分期、肺转移有关,因而,检测两者表达情况有利于判断患者的病情发展。     

幕上星形细胞瘤细胞凋亡及bcl—2表达的临床意义

目的：探讨幕上星形细胞瘤的细胞凋亡以及凋亡抑制基因（bcl-2）表达的临床意义。方法：对56例幕上星形细胞瘤的病理标本采用免疫组化TUNEL法检测凋亡细胞、SP法检测bcl-2。结果：细胞凋亡指数（AI）随着肿瘤级别的增高而增加,各级别肿瘤间AI的差别均有显著性意义（均P＜0．01）,死亡组与存活组AI的差别有显著性意义（P＜0．01）,AI＞0．5％组与AI＜0．5％组术后1年生存率的差别有显著性意义（P＜0．05）。bcl-2阳性组与阴性组的AI、1年生存率的差别均无显著性意义（均P＞0．05）。结论：AI可以作为提示预后的独立性指标,并对判断幕上星形细胞瘤的生物学行为及肿瘤分级有指导意义;bcl-2在幕上星形细胞瘤凋亡中的作用有待于进一步探讨。     

E-cadherin和HER-2在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨上皮钙黏蛋白（E-cadherin）和人表皮生长因子受体2（HER-2）蛋白在肾细胞癌中的表达情况及两者的相关性。方法采用SP法检测89例肾细胞癌和53例对照组中E-cadherin和HER-2的表达情况。结果 E-cadherin在肾细胞癌组中阳性表达率显著低于对照组（〈0.01）,并且随组织学分级增高、淋巴结发生转移及临床分期进展表达降低（〈0.05）;HER-2肾细胞癌组中达阳性表率显著高于对照组（〈0.01）,并且随组织学分级增高、淋巴结发生转移及临床分期进展表达增强（〈0.05）。免疫组织化学显示在肾癌组中两者阳性表达呈弱负相关（=―0.345,〈0.05）。结论 E-cadherin和HER-2蛋白表达异常可能共同参与了肾癌的发生、发展、侵袭和转移;联合检测两种蛋白对于评价肾细胞癌的恶性程度、判断其转移潜能和预后具有一定的参考价值。     

LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤中的表达和临床意义及对肿瘤生物学的影响

摘要：目的：探讨LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤患者中的表达、临床意义及对肿瘤生物学的影响。方法：回顾性收集2012年1月到2014年1月于我院骨科诊治的骨肉瘤66例患者病理组织样本和临床资料,qRT-PCR法检测病理组织中LncRNA CBR3-AS1表达,并将患者分为LncRNA CBR3-AS1高低表达两组,卡方检验LncRNA CBR3-AS1表达情况与骨肉瘤临床参数的相关性,Kaplan-Meier 生存分析法比较LncRNA CBR3-AS1高低表达骨肉瘤患者生存率的差异。体外实验敲低LncRNA CBR3-AS1表达对骨肉瘤细胞系U-2 OS肿瘤生物学行为影响。结果：LncRNA CBR3-AS1在骨肉瘤组织和细胞系中高表达（P<0.001）;LncRNA CBR3-AS1表达与Enneking分期（P<0.001）、远处转移（P=0.004）和组织学分级（P=0.036）显著性相关;LncRNA CBR3-AS1高表达与骨肉瘤患者总生存率呈负相关（P <0.01）;LncRNA CBR3-AS1高表达是骨肉瘤患者的不良预后因素（HR= 1.558, 95％CI:1.041-2.641,P=0.013）;敲低LncRNA CBR3-AS1表达可抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞增殖、迁移和侵袭、并促进细胞凋亡（P<0.001）;骨肉瘤组织中LncRNA CBR3-AS1和CBR3mRNA表达之间正相关（r=0.44,P=0.036）,敲低LncRNA CBR3-AS1对骨肉瘤细胞CBR3 mRNA和蛋白质表达降低。结论：LncRNA CBR3-AS1具有调节骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的致癌作用,是骨肉瘤患者预后独立危险因素。     

骨肉瘤中survivin、Caspase-8的表达及其与凋亡的相关性研究

目的探讨survivin mRNA、Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法分别采用RT-PCR和免疫组化技术检测40例骨肉瘤及正常组织中survivin mRNA和Caspase-8蛋白的表达,运用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果77.5%的骨肉瘤组织survivin mRNA呈阳性表达,显著高于正常组织;Caspase-8蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为27.5%和85%(P<0.05);在骨肉瘤组织中,survivin mRNA和Caspase-8蛋白表达呈负相关;survivin mRNA阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显低于survivin mRNA阴性组(P<0.05);Caspase-8蛋白阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase-8蛋白阴性组(P<0.05)。结论survivin、Caspase-8均参与骨肉瘤的发生、发展变化,survivin是通过抑制Caspase-8的活性而发挥其抑制细胞凋亡作用的。     

MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨microRNA-199a-3p (miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响?方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照?转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析?结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡?     

抑凋亡蛋白Survivin及P-糖蛋白在骨肉瘤中的表达与骨肉瘤化疗耐药性关系的研究

目的探讨抑凋亡蛋白Survivin及多药耐药基因mdr1表达的P-糖蛋白(P-gp)的表达与骨肉瘤临床病理特征间的关系。方法应用免疫组织化学技术(SP法)检测34例骨肉瘤组织及30例骨软骨瘤(对照组)组织中抑凋亡蛋白Survivin及多药耐药基因mdr1表达的P-糖蛋白的表达,统计分析Survivin、P-gp在骨肉瘤组织中表达的相关性和其表达情况与病例临床特征的相关性。结果①34例骨肉瘤组织标本中19例Survivin蛋白表达阳性为55.9%(19/34),27例P-gp表达阳性为79.4%(27/34);对照组30例标本中未检测到Survivin蛋白表达、P-gp表达(P<0.01)。②39例骨肉瘤患者中发生转移的病例16例,其Survivin蛋白、P-gp表达水平显著高于未发生转移病例(P<0.05)。结论抑凋亡蛋白Survivin及多药耐药基因mdr1表达的P-gp的在骨肉瘤组织中呈现高表达,且两者表达水平与骨肉瘤病理分级和转移成正比。     

下调Notch3表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察Notch3在骨肉瘤细胞中的表达及下调Notch3表达后对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭迁移的影响,探讨Notch3在骨肉瘤细胞生物学功能中的作用.方法 体外培养人骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S,采用Real-time PCR和Western blot检测3种骨肉瘤细胞系中Notch3的mRNA和蛋白表达水平;利用siRNA敲低Notch3在骨肉瘤U20S细胞中的表达,并将细胞分为siNotch3组和阴性对照组,检测下调Notch3的表达后骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭、迁移等生物学特性的变化.结果 Notch3在骨肉瘤细胞MG63、Saos2、U20S中均呈阳性表达,并且在低级别骨肉瘤细胞系MG63中的表达明显低于高级别细胞系Saos2和U20S(P ＜0.05),下调Notch3的U20S细胞(siNotch3组)增殖、侵袭、迁移能力较阴性对照组减弱,凋亡率增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在骨肉瘤细胞U20S中下调Notch3的表达可明显抑制细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进凋亡.Notch3可能是Notch 通路在骨肉瘤中的关键受体之一,并参与了骨肉瘤的发生、发展.     

CyclinD1、CDK4、P16在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的探讨CyclinD1、CDK4和P16在骨肿瘤中的表达及临床意义。方法应用免疫组化和原位杂交方法检测105例骨肿瘤组织中的CyclinD1、CDK4和P16的表达,并对其中85例骨肉瘤主要临床资料、病理分级及临床相关参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理。结果骨肉瘤中CyclinD1、CDK4蛋白及mRNA阳性表达明均显高于骨软骨瘤(P<0.01);骨肉瘤临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期均高于Ⅰ期、Ⅱa期(P<0.01);随着病理分级恶性程度增高而显著增加(P<0.01);且在软组织浸润和转移组中明显高于非浸润和非转移组(P<0.01)。P16蛋白及mRNA阳性表达骨软骨瘤明显高于骨肉瘤(P<0.01);骨肉瘤的临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期均低于Ⅰ期、Ⅱa期(P<0.01);随着病理分级恶性程度增高而显著降低(P<0.01);软组织浸润和转移明显低于非浸润和非转移组(P<0.01)。结论 CyclinD1、CDK4、P16的蛋白及mRNA在骨肉瘤中不同程度异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润、转移有一定关系。提示CyclinD1、CDK4和P16蛋白及其mRNA高表达在骨肉瘤的发生、发展和浸润转移过程中发挥重要作用。     

骨肉瘤组织中survivin与VEGF的表达及相关关系的研究

目的检测survivin与VEGF在骨肉瘤中的表达,探讨二者对骨肉瘤血管生成和转移的作用及其关系.方法采用原位杂交、免疫组织化学技术检测38例骨肉瘤组织survivin mRNA表达及VEGF、CD34蛋白表达,计数微血管密度(MVD)、,并与主要临床病理参数进行比较.结果骨肉瘤中survivin mRNA和VEGF表达率均为65.8%,二者表达呈正相关(r=0.546,P＜0.01);骨肉瘤MVD均值为71.5(28～152),高MVD组survivin表达率显著高于低MVD组(P＜0.01).骨肉瘤中survivin mRNA、VEGF表达及MVD与组织学分级无关,与组织学分型(WHO分型)和转移有关.结论survivin基因选择性高表达于骨肉瘤组织,通过抑制细胞凋亡,参与骨肉瘤的发生发展;其对骨肉瘤血管生成和转移的作用可能与VEGF存在密切相关;survivin可能是评价骨肉瘤预后的重要参考指标.     

Effect of Exogenous pl6ink4a and hRbl Genes on Cell Cycle Regulation of Osteosarcoma Cell

To study the effect on regulation of cell cycle of osteosarcoma cell line MG63 tranceduced with exogenous p16ink4a and hRbl genes, pIRES-p16ink4a-hRb1, pIRES-p16ink4a and pIREShRbl plasmids were constructed by gene recombination technology. The recombinant plasmid was transferred into osteosarcoma cell line MG63 by metafectene, and the resistant clones were selected by G418 selective medium, mRNA and protein expression of osteosarcoma cell line were assayed by RT-PCR and Western-Blot respectively. Cell cycle and apoptosis were analyzed by subG1 flow cytometric. Cell proliferation was tested by MTT. In the genome of these transfected target cells, the expression of p16ink4a and hRb1 mRNA and protein were detected respectively in vitro. It was demonstrated with subG1 flow cytometric analysis and MTT method that p16ink4a and hRbl genes cooperation more significantly inhibited cell growth and induced a more marked G1 arrest and apoptosis than p16ink4a/hRb1 alone （P〈0.01）. Coexpression of exogenous p16ink4a with hRbl broke the regulatory feedback loop of p16ink4a-cyclinD1/CDK-hRbl and played a more significant role in inhibiting cell growth as well as inducing cell apoptosis than p16ink4a or hRbl did alone in vitro.     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。