五种定期移植法保存非苛养菌的效果比较

菌种保存是从事微生物研究、检验及教学工作中所不可缺少的重要环节 ,定期移植保存法 (又称传代培养保存法 )为最常用的菌种保存方法 ,由于其操作简便 ,无需特殊设备和技术 ,因而被各级微生物实验室和检验室所普遍采用。该法包括斜面培养、半固体穿刺培养、液体培养等多种方法 ,我们就常用的 5种定期移植方法对非苛养细菌的保藏效果进行了长达 6年的对比观察 ,现报告如下 :1　材料与方法1 1　菌种　共 14种 (见附表 ) ,均由中国医学细菌保藏中心(ＣＭＣＣ -Ｂ)提供。1 2　培养基　营养肉汤培养基、半固体琼脂培养基、营养琼脂培养基 ,均购自…     

放射免疫沉淀试验检测小肠结肠炎耶氏菌对鼠疫F_1的交叉反应性观察

利用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫F_1抗体有很高的敏感性与特异性。本文将小肠结肠炎耶氏菌抗原用鼠疫抗血清吸收后用RIP和IHA试验测定残留效价,观察小肠结肠炎耶氏菌对鼠疫F_1的交叉反应性。材料与方法一、吸收抗原本室保存小肠结肠炎耶氏菌100株、标准株7株,均以半固体培养基传代保存,将菌株移种营养琼脂斜面培养物转种琼脂平皿,37℃     

菌种保存方法的比较

对于以微生物为对象的研究工作,具体的研究材料乃是属于某一系统的微生物即菌株。每株菌种性质各不相同,其基础的研究及其应用或关于病原微生物的研究也必须靠菌种重复实验结果。要使菌种长期保存,并遗传性质不变,必须选择更好更稳定保存方法,现介绍两种日常菌种保存方法:1 材料与方法1.1 材料l.1.1 高层半固体琼脂 成份:蛋白胨1％,氯化钠0.5％,琼脂粉0.3％,pH7.4～7.6,在小试管中制成2/3以上高层半固体琼脂,15磅15min备用。1.1.2　000号无菌橡皮塞1.1.3　菌种管处理 先经清洁液浸泡,清水冲洗,肥皂水煮沸用自来水冲洗后,蒸馏水浸泡过夜,以达中性,然后管口塞上棉花,160℃～170℃2h灭菌备用。1.1.4 保护剂牛奶准备 从牛奶场直接接取原牛奶,经     

小牛血清甘油低温保存菌种方法介绍

目的 :寻求一种有效易行的菌种保藏方法 ,以适用于繁忙的实验室工作。方法 :选择 1989年 6月购自北京中国药品生物制品检定所的真空冷冻干燥菌株 2 8株 ,用小牛血清甘油液低温保存法与传统的半固体营养琼脂和血琼脂斜面法进行比较。结果 :球菌的复苏情况与杆菌相似 ,保存期 12个月复苏良好 ,生物学性状稳定。比较传统的半固体营养琼脂和血琼脂斜面法 ,大大延长细菌的保存期 ,特别是球菌可以从通常的血琼脂斜面液蜡的 4个月的 37.5 %提高到 14个月的87.5 % ,间隔半年时间冻融 6次以下对菌株继续低温保存影响不大。基质量少 (约 0 .4 m l)冻融时间短 ,菌体受伤程度低 ,有利复苏。复苏增菌不需另配营养基质 ,直接在小牛血清甘油液中进行 ,污染少 ,操作简便。结论 :小牛血清甘油保存菌种对大部分常用细菌保存期可达 12个月以上 ,而且球菌和杆菌差异不大 ,非常适合球菌的保存。     

一株不典型金黄色葡萄球菌的鉴定

对一株不典型金黄色葡萄球菌进行了鉴定,菌株为山东省卫生防疫站下发质控菌种。实验部分一、菌种:半固体菌种,直观无金黄色色素。二、初步鉴定:将菌种做革兰氏染色,接种羊血琼脂平板,生化反应及血浆凝固酶试验。结果:染色镜检为革兰氏阳性散状球菌,羊血琼脂平板37℃24h培养不溶血,24—72h未出现金黄色色素,血浆凝固酶试验阳性,发酵葡萄糖、     

香港海鸥菌不同保存方法效果比较

目的比较不同方法对香港海鸥菌的短期和长期保存效果,以期建立该菌的简单、实用和经济的短期和长期保存方法。方法采用半固体石蜡封存法,磁珠菌种保存管、10%甘油、15%甘油肉汤和30%甘油肉汤等5种方法保存香港海鸥菌,其中,半固体石蜡封存法的保存温度为室温和4℃,其他方法均在-20℃和-80℃进行菌种保存。定期进行菌种复苏,采用活菌菌落计数比较不同方法的保存效果,观察期为12个月。结果半固体石蜡封存法在室温环境下保存的活菌数在6个月内呈缓慢下降趋势(活菌数的对数值下降幅度1),但6个月以后活菌数急速下降且菌落变小,至第9个月时为0 CFU/mL;而4℃保存的第1个月活菌数下降幅度小,但到第3个月时活菌数为0 CFU/mL;在12个月内,磁株及3种不同甘油浓度保存的活菌数在-80℃下保持相对稳定,但-20℃下保存时间短、效果差。结论室温条件下的半固体石蜡封存法适合短期保存香港海鸥菌,而-80℃低温条件下的磁株或甘油适合长期保存。     

不同琼脂浓度对常见细菌动力试验的影响

在微生物检验中,动力试验是重要鉴定项目之一。我们对常见的25种细菌,用不同琼脂浓度半固体进行穿刺动力试验,现将结果报道如下。 材料与方法 一、材料 1.培养基:血平板、SS琼脂平板、普通营养琼脂平板、TCBS平板、不同琼脂浓度半固体。 2.菌株来源:(1)埃尔托型霍乱弧菌稻叶型、小川型,副溶血性弧菌为舟山市本地从腹泻病人的粪便中分离得到,(2)淋病双球菌、志贺氏菌从舟山医院门诊病人的分泌物及粪便中分离得到,(3)不凝集弧菌从河水中分离得到,(4)其他肠杆菌细菌、假单胞菌、气单胞菌,G~ 球菌及黄杆菌均为“WHO”浙江省临床微生物质控标本菌种。     

低温对常见致病弧菌菌种保存的影响

致病弧菌是人和水产动物的常见病原菌。其中 ,比较常见的有霍乱弧菌、副溶血弧菌等。由于对人的健康和水产动物危害严重 ,有关研究也越来越多。病原学研究必然用到菌种 ,菌种的保藏是这些工作不可分割的一部分。菌种保藏有多种方法 ,但对于基层实验室来说 ,比较普遍的方法是接种半固体或营养琼脂斜面后 ,放 4～ 6℃冰箱保存。但用这种方法保存弧菌 ,在较短时间 ,用常规方法即检测不到[1,2 ] ,通常认为已经死亡。近年来研究发现 ,霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌等细菌 ,在低温水中能变成另 1种存活形式即活的非可培养状态 ,处于这种状态的细…     

对“半固体培养基保存肠道杆菌菌种方法”的改进

<正> 我们试用半固体培养基穿刺双密封法保存肠道杆菌可延长保存时间达二年,比常法延长时间4—8倍,解决了农村山区基层医疗卫生单位无法长期保存肠道杆菌菌种的困难,现介绍如下: 材料与方法一、材料: 1.无菌试管: 大试管(18×180mm) 中试管(12×100mm) 2.液体石腊 3.肌皮胶帽 4.胶塞、塑料袋。 5.半固体培养基、普通肉汤培养基二、方法: 将要保存的菌株按常法穿刺接种于制备好的半固体培养基内,放37℃16小时培养观察生长良好则可按下法处理保存:首先将各管加无菌肉汤1—2毫升,上面加无菌液体石腊厚约1厘米。无菌手续盖上无菌小胶塞,然后将此管放入无菌大试管内塞上无菌胶塞,带上肌皮胶帽,再装入塑料袋内捆紧放4℃冰箱保存观察,最长时间为二年。     

空肠弯曲菌的一种简易保存法

<正> 空肠弯曲菌是引起人类腹泻的常见病原菌之一。但因本菌分离后死亡较快,难于保存,影响了有关研究工作的开展。采用半固体酵母浸膏培养基保存于37℃,该菌可存活半年以上,获得较满意的效果。菌种来源:20株空肠弯曲菌自腹泻病人粪便中分离,6株自鸡粪便中分离,全部菌株均经生化试验鉴定符合空肠弯曲菌特征。菌种保存用培养基——半固体酵母浸膏培养     

培养基的不同储存条件对细菌检测结果的影响

营养琼脂培养基是日常工作中最常用的细菌计数用培养基,按照国家标准[1],营养琼脂培养基配制后宜新鲜使用或保存于冰箱冷藏室48 h内使用,而在实际工作中较难做到。为此,我们用不同温度和时间来存放配制好的营养琼脂培养基,并观察各种存放条件对细菌检测效果的影响,现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料营养琼脂培养基干粉购自杭州天和微生物试剂有限公司;实验用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌由本室分离鉴定,用半固体培养基保存于4℃冰箱。1.2方法[2]按常规法配制倾注的营养琼脂培养基用密封筒包装,分别于冰箱冷藏室(4℃)、恒温箱(18~22℃)及室…     

非O1群霍乱弧菌半固体培养基生存11年观察

198 5年 7月 ,从 1例急性腹泻患者粪便中分离出 1株非Ｏ1群霍乱弧菌 (ＶＢＯ12型 ) ,将其置半固体培养基室温保存。1998年 9月对其再次进行生物学特性检验、抗生素敏感试验、毒力试验 ,结果如下。将菌种分别接种于 4号琼脂 ,碱性胆盐琼脂及血琼脂平板 ,37℃ 18ｈ培养后 ,菌落形态与菌体形态与初分离时基本相同 ,并且生长旺盛。生化反应结果与初分离时完全相同。氧化酶 ( ) ,粘丝试验 ( ) ,乳糖 (- ) ,蔗糖 ( ) ,葡萄糖 ( ) ,甘露糖 (- ) ,阿拉伯糖 (- ) ,靛青质 ( ) ,动力 ( )。耐盐试验结果与初分离时相同。无ＮａＣｌ胨水 ( ) ,3%ＮａＣｌ…     

1997～2002年上海市卢湾区细菌性腹泻病原谱分析

为了解卢湾区细菌性腹泻病原菌分布 ,为防治腹泻病提供科学的依据 ,现将卢湾区 1997～ 2 0 0 2年 42 10份肠道门诊腹泻病人粪便多种病原菌检测结果报告如下 :1　材料与方法1.1　标本来源由卢湾区具备肠道门诊的一、二级医院医生对腹泻病人采集肛拭标本 ,保存于Carry -Blair半固体运送培养基进行运送培养。1.2　检验项目沙门菌、志贺菌、致病性弧菌及病原性大肠杆菌。培养基和血清 :WS琼脂、SS琼脂、SF增菌液、副溶血性弧菌增菌液、副溶血性弧菌选择琼脂、双氢链霉素洗衣粉琼脂、Mac琼脂、Smac琼脂、AP(碱性蛋白胨水 )增菌液、O15 7诊…     

微生物菌种保藏方法及标准菌种管理

目的阐明微生物菌种保藏及管理的重要性。方法液体石蜡保藏法,沙土保藏法,冷冻真空干燥保藏法,斜面低温保藏法,半固体穿刺保藏法,脱脂奶保藏法。结果菌种保藏方法得当,菌种管理工作有条不紊。结论菌种的保藏及标准菌株的管理工作更加科学化、合理化。     

一种实用菌种的保存方法

菌种保存是细菌学检验、教学与科研的基础之一。菌种保存方法有多种 ,最理想的为真空冷冻干燥法[1] ,但操作技术难度大 ,花费高 ,需特殊设备 ,一般单位不宜做到。而常规琼脂斜面保存法[2 ] ,常因传代次数多 ,易污染 ,易变异 ,给保存带来诸多不便。近几年来我们采用卵黄液普通安瓿熔封法超低温保存菌种 ,效果很好。现介绍如下 :1　材料与方法1.1　材料1.1.1　供试菌种　金黄色葡萄球菌 2 6112、枯草杆菌 63 5 0 1、费地劳枸橼酸杆菌 480 0 8、绿脓假单胞菌 10 2 11、阴沟杆菌 45 3 0 1、大肠埃希杆菌 44 113、肺炎链菌球 3 112 6、肺炎克雷伯…     

微生物菌种保藏方法及标准菌种管理

目的阐明微生物菌种保藏及管理的重要性。方法液体石蜡保藏法，沙土保藏法，冷冻真空干燥保藏法，斜面低温保藏法，半固体穿刺保藏法，脱脂奶保藏法。结果菌种保藏方法得当，菌种管理工作有条不紊。结论菌种的保藏及标准菌株的管理工作更加科学化、合理化。     

沙门菌鉴定卡的研究与开发

目的:研究沙门菌快速简易的鉴定方法,并开发出具有应用价值的沙门菌鉴定卡。方法:应用硫化氢琼脂(H2S)、赖氨酸琼脂(LDC)、TTC琼脂(M)、甘露醇琼脂(MAN)、β-半乳糖苷琼脂(ONPG)、蔗糖琼脂(SAC),作为沙门菌鉴定的系列生化制备成鉴定卡。对22株标准菌种和72株本室分离的菌种进行鉴定,并进行了样品检测菌株的鉴定。结果:鉴定卡对菌种的鉴定表明沙门菌在鉴定模式之内;非沙门菌在鉴定模式以外,符合率达100%;样品检测表明鉴定卡和常规法结果一致,符合率也达100%。结论:该鉴定卡敏感性高、特异性强,而且操作简便,鉴定快速。     

糖对椰酵假单胞菌产毒性能的影响研究

以半固体ＬＡ和营养琼脂为基础培养基，分别加入葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、甘油等４种成分，研究糖分对椰酵假单胞菌产毒性能影响。结果表明，椰酵假单胞菌在营养琼脂和ＬＡ半固体基础培养基上基本不产毒或产毒量很低，而葡萄糖和甘油的加入使椰酵假单胞菌的产毒能力大幅度提高，产毒量不低于在马铃薯葡萄糖琼脂（ＰＤＡ）中，提示了糖代谢在椰酵假单胞菌生长和产毒过程中的重要作用。建议将ＬＤＡ（含葡萄糖的ＬＡ，新设计）半固体做为一种新的椰酵假单胞菌产毒培养基，有利于实验室研究及不同实验室间的质量控制     

生化快速检测法鉴定沙门菌和志贺菌

1 材料与方法，1．1 材料，1．1．1 沙门菌、志贺菌两用增菌液，SS琼脂，麦康克琼脂，三糖铁琼脂，动力靛基质尿素(MIU)琼脂，赖氨酸培养基及对照，氰化钾培养基及对照，ONPG，山梨醇、水杨素、苯丙氨酸脱氨酶培养基，葡萄糖铵培养基，0．7％～0．8％半固体琼脂，以上试剂均购自浙江天和微生物有限公司。均在有效期内。     

空肠弯曲菌菌种的保存方法

空肠弯曲菌（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ）作为急性腹泻的重要病原菌,越来越受到重视,已成为教学实践的重要内容。为便于观察该菌的形态、动力等特性,常需保存足够的菌株。空肠弯曲菌在实验室中存活时间短,不易保存,过去我们常用黄氏保存培养基（ＷＴＭ）和双相保存培养基（ＰＢＭ）。但只能使该菌种存活３０ｄ左右。为能长期稳定地保存该菌,避免因反复传代所致的变异,有必要研制新的保存培养基。笔者以改良Ｓｋｉｉｒｏｗ培养基为基础,试制成一种新的保存培养基－改良Ｓｋｉｉｒｏｗ斜面加半固体覆盖,该方法制作简单…