不同炮制方法对甘遂急性毒性影响的研究

目的考察不同炮制方法对甘遂的急性毒性影响。方法采用测定小鼠半数致死量的方法对甘遂生品及其各炮制品急性毒性进行研究。结果石油醚部位是甘遂的毒性部位,生品的半数致死量为36.4 g/kg;醋炙品的半数致死量为65.3 g/kg;清炒品的半数致死量为53.9 g/kg;清炒拌醋品的半数致死量为59.8 g/kg;生拌醋品的半数致死量为43.8 g/kg。结论甘遂经醋炙后毒性显著降低,加热是使甘遂炮制减毒的主要影响因素。     

甘遂醋炙对正常及癌性腹水模型大鼠毒性的影响

目的:考察甘遂醋炙前后对正常及癌性腹水模型大鼠毒性的差异。方法:以正常及癌性腹水模型大鼠为研究对象,分组后连续7 d灌胃生、醋甘遂粉末及其提取物,各给药组按0.34 mg·g-1灌胃,空白组与模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠。考察给药后对大鼠肝、胃、肠组织病理形态学、血清肝功能指标、氧化损伤指标的影响。结果:与空白组比较,各正常给药组大鼠肝、胃、肠组织均出现显著损伤,血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活力显著升高,谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量显著降低,丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量显著升高;其中生甘遂粉末作用最为显著,醋甘遂该作用显著降低。与模型组比较,各模型给药组大鼠组织损伤有所减轻,血清AST,ALT,ALP活力显著降低,GSH和SOD含量显著升高,MDA和LDH含量显著降低;其中模型生、醋粉组功效最为显著,且两组间无显著性差异。结论:甘遂醋炙后对正常动物的毒性较生甘遂低;在模型动物上,生、醋甘遂均可显著缓解模型的损伤。     

甘遂对水负荷小鼠排尿以及肾脏AQP2,IL-1β,TNF-αmRNA表达的影响

目的:观察甘遂醇提取物对水负荷小鼠利尿排水以及肾脏相关因子表达的作用,以探讨其对肾脏的影响。方法:利用腹腔注射生理盐水负荷小鼠模型和正常小鼠,分别观察甘遂灌胃给药后利尿以及肾脏相关组织细胞因子的变化。结果:甘遂醇提取物对水负荷小鼠具有促进利尿的作用。同时升高外周血清肌酐,组织切片观察未见到明显的病理变化。对下调肾集合管AQP2表达有一定的作用趋势,并能够促进表达TNF-α。结论:甘遂大剂量对肾脏具有确实的作用,并可能伴随有一定的病理反应,其中以1.2 g.kg-1剂量明显。这种病理反应与血清肌酐升高和TNF-α表达变化相关。     

醋炙对芫花毒性和药效影响的实验研究

目的:考察醋炙芫花对毒性和药效的影响。方法:急性毒性试验采用BLiss法计算芫花和醋芫花的半数致死量;采用利尿试验试验,观察芫花和醋芫花不同极性溶剂提取物和不同极性部位对小鼠利尿作用的影响。结果:醋炙后芫花毒性明显毒性降低,乙酸乙酯部位是芫花的毒性部位。与对照组相比,芫花、醋芫花醇提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位可明显促进利尿作用。与生品比较,醋炙后各组利尿作用皆明显增强。结论:芫花醋炙后毒性显著降低,药效增强。芫花的乙酸乙酯部位既是其毒性部位,又是其药效学主要部位。     

醋甘遂不同提取物对斑马鱼幼鱼的毒性

目的:研究非致死剂量醋甘遂对斑马鱼幼鱼的毒性及毒性可逆性,并验证斑马鱼模型用于中药毒性快速评价的可行性。方法:用索氏提取器以不同极性溶剂依次提取样品,制备不同提取物。将健康斑马鱼成鱼配对产卵,以正常发育受精后3 d的斑马鱼幼鱼为模型,用醋甘遂不同极性提取物处理斑马鱼幼鱼,统计给药72 h死亡率,对毒性最强的提取部位观察评价其对斑马鱼心血管系统、肝脏、神经系统、胃肠道系统、肾脏及其他脏器系统的毒性特征及可逆性。结果:醋甘遂不同溶剂提取物毒性顺序依次为石油醚提取物二氯甲烷提取物乙酸乙酯提取物乙醇提取物,与空白组比较,石油醚提取部位处理后的幼鱼给药组肝区相对光强度随给药浓度的升高而降低,肝脏颜色变暗(P0.01);肝脏经苏木精-伊红染色后,在石油醚提取部位0.054 mg·L~(-1)给药组中有轻微的肝损伤,在恢复组中肝损伤明显好转。与空白组和石油醚提取部位0.004 mg·L~(-1)组比较,肠道尼罗红排泄实验显示残留率在石油醚提取部位0.012,0.036,0.054 mg·L~(-1)组中显著下降(P0.01),胃肠道被促进排空。其他系统毒性特征不明显,差异均无统计学意义。结论:醋甘遂的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙醇提取物中,石油醚提取物毒性最大,且主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性,肝毒性造成肝变性,具有可逆性。斑马鱼模型快速评价中药毒性具有较好的应用前景。     

醋炙降低甘遂对小鼠胃肠道氧化损伤作用机制研究

目的:研究醋炙降低甘遂乙酸乙酯部位对小鼠胃肠道氧化损伤的作用机制.方法:将小鼠分为空白对照组、甘遂组(256,160,100 g·kg-1)、醋甘遂组(256,160,100 g·kg-1),灌胃给药7d后,取小鼠胃、肠匀浆测定乳酸脱氢酶(LDH)活力、超氧化物歧化酶(soD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量.取胃、肠组织进行HE染色,光镜观察其组织形态学改变.结果:空白对照组小鼠体重无明显减轻,大便性状正常,甘遂和醋甘遂各剂量组出现体重明显减轻和大小便失禁,但与甘遂组比较,醋甘遂各剂量组体重减轻较少,泻下作用有所缓和.与空白对照组比较,甘遂各剂量组胃肠SOD活力、GSH含量明显降低,MDA含量、LDH活力明显增高(P＜0.05,P＜0.01);与甘遂组比较,醋甘遂各剂量组胃肠SOD活力、GSH含量明显增高,MDA含量、LDH活力明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).与空白对照组比较,甘遂各剂量组胃肠黏膜损伤显著加重(P＜0.05,P＜0.01);与甘遂组比较,醋甘遂各剂量组胃肠黏膜损伤显著减轻(P ＜0.05,P＜0.01).结论:醋炙能明显降低甘遂乙酸乙酯部位对小鼠胃肠道的氧化损伤,为后续进一步探讨甘遂醋炙减毒机制提供了一定的依据.     

甘遂对正常小鼠肝脏相关炎性因子表达的影响

目的:观察甘遂醇提取物对正常小鼠肝脏功能及其相关炎性因子表达的影响,以探讨其对肝脏的安全性.方法:分别给小鼠灌胃给药(1.2、0.6、0.3 g·kg-1)2 h、4h和7d,取血清测ALT,取肝脏做组织学观察,并提取RNA,Real time PCR测IL-β、TNFα和Caspase3表达的变化.结果:甘遂醇提取物给药不同时间对正常小鼠肝脏组织形态影响不明显,给药2h大剂量对ALT明显升高,对炎性因子IL-β的mRNA表达明显上调,对凋亡相关因子Caspase3的mRNA表达影响不明显.结论:甘遂对正常小鼠肝脏具有确实的毒性.其作用特点主要与炎性损伤有关,与凋亡关系不明显.     

基于斑马鱼幼鱼模型的甘遂毒性评价

[目的]以模式生物斑马鱼幼鱼为模型,评价甘遂不同溶剂连续提取物毒性差异及毒性特征。[方法]采用索氏提取法获得甘遂不同溶剂连续提取物。通过预实验,确定各提取物72 h最大不致死浓度和最小全致死浓度。在此区间设定6~8个药物浓度,建立致死曲线,计算半数致死浓度(LC50)。以毒性最大提取物的10%致死浓度(LC10)、最小致死浓度(LC1)、1/3 LC1和1/10 LC1为给药浓度,同时设立空白组和溶剂对照组,连续给药72 h,观察甘遂毒性特征。停药后将幼鱼置于养殖水中恢复48 h,观察毒性可逆性。[结果]甘遂不同提取部位毒性顺序为石油醚二氯甲烷乙酸乙酯乙醇提取物。甘遂的主要毒性为肝毒性和胃肠道刺激性。肝毒性既可造成肝肿大,又可导致肝变性,肝肿大不可逆,而肝变性具有可逆性。[结论]本实验首次利用单个模型以相同浓度单次给药,同时评价了甘遂对心脏、肝脏、肾脏、神经系统和胃肠道等脏器系统的毒性作用及可逆性。实验结果证实了甘遂的毒性集中于石油醚提取部位,并可对肝脏和胃肠道造成实质性损伤。本实验为斑马鱼模型在中药毒性评价中的应用提供了参考。     

甘遂半夏汤加减甘遂及不同品种甘草对腹水模型大鼠肝脏CYP450m RNA的影响

目的观察含不同品种甘草的甘遂半夏汤加减甘遂甘草反药组合对腹水模型大鼠肝脏CYP450 mRNA的影响。方法采用Walker-256细胞制造癌性腹水模型,将Wistar大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、阳性对照组、全方炙甘草组、全方炙光果甘草组、全方炙胀果甘草组、去遂炙甘草组、去遂炙光果甘草组、去遂炙胀果甘草组、去炙甘草组、去炙甘草醋甘遂组,共计11组。空白组和模型组灌胃蒸馏水,其余各给药组灌胃相应药物。给药11天后,摘取肝脏,液氮保存,进行PCR实验。结果在CYP2E1 mRNA表达方面,全方炙甘草组、全方炙胀果甘草表达下调,且优于全方去掉一味或两味反药。三个甘草品种的甘遂半夏汤的CYP3A1 mRNA、CYP3A2 mRNA表达上调,且优于全方去掉一味或两味反药。结论 (1)全方炙甘草组、全方炙胀果甘草组在CYP450表达方面表现出一定的药效作用,其中全方炙甘草组优于全方炙胀果甘草,且均优于全方去掉一味或两味反药组。(2)全方炙光果甘草组则未表现出一定的药效作用,但也未表现出毒性作用,弱于去掉一味或两味反药。     

醋制甘遂用醋量对其毒性及药效的影响

目的：考察不同醋量炮制甘遂对其毒性及药效的影响.方法：采用急性实验（测LD50）、祛痰实验,酚红排泌法,及利尿实验,滤纸法,.结果：甘遂醋制后毒性明显降低,利尿作用有所缓和,生品和30%（每100,kg甘遂用醋30kg）醋量甘遂醋制品祛痰效果较好,而50%（每100,kg甘遂用醋50kg）、100%（每100kg甘遂用醋100kg）醋量甘遂醋制品较生品差.结论：甘遂炮制以30%醋制.     

醋甘遂与炙甘草免煎颗粒配伍对大鼠肾功能及醛固酮含量的影响

目的:通过检测大鼠肾功能指标和血清醛固酮、钠钾离子的含量,初步观察醋甘遂与炙甘草免煎颗粒配伍对肾脏的损伤。方法:将大鼠按体重随机分为正常组、炙甘草组(免煎颗粒剂)、醋甘遂组(研末)、醋甘遂-炙甘草组、甘遂半夏汤组。其中正常组给予生理盐水灌胃,其余各组给予相应药液灌胃,连续给药14天。实验结束时,腹主动脉取血分离血清和血浆检测肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、乳酸脱氢酶(LDH)、醛固酮(ALD)的含量以及血清中Na+、K+含量;取一侧肾组织用福尔马林固定观察肾组织细胞病理形态。结果:与正常组相比,炙甘草组、醋甘遂组、醋甘遂-炙甘草组Cr含量有升高趋势,但差异无统计学意义(P0.05),BUN含量各组均有升高趋势,醋甘遂-炙甘草组升高显著,差异有显著统计学意义(P0.01),且与醋甘遂组比较,亦显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。尿酸含量各组之间无明显变化,LDH含量显著降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。血清Na+、K+含量:与正常组比较,各给药组之间无显著性变化,差异无统计学意义(P0.05)。醛固酮(ALD)含量:与正常组比较,各给药组均显著降低,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。其中甘遂半夏汤组较醋甘遂-炙甘草组显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:甘遂确实对肾脏造成了损伤,但醋甘遂与炙甘草配伍未表现出明显的毒性增强作用,说明二者配伍不存在增毒作用,是否有增效作用需要配合病理状态的研究来深入探讨。     

基于1H-NMR的代谢组学方法对醋制甘遂解毒作用的研究

甘遂为有毒中药,临床上常经醋制后入药以降低其毒性。该文采用代谢组学方法比较生甘遂和醋甘遂对正常大鼠的损伤情况,研究醋制对甘遂毒性的缓解作用。连续7 d以生甘遂（EK）、醋甘遂（VEK）的水提取物对大鼠灌胃给药,药量均为9 g·kg^-1·d^-1（按生药量计）,对照组给予生理盐水。停止灌胃后继续观察7 d,收集14 d白天尿液,用于¹H-NMR检测;于第8天将每组大鼠处死一半,第15天处死另一半,采集肝脏,一部分用于¹H-NMR检测,另一部分用于病理学切片检测。病理学切片检测结果显示在本实验剂量下甘遂及醋制甘遂对大鼠肝脏没有造成损伤,但代谢组学方法分析发现在实验的第2周甘遂造成大鼠肝、肾及消化系统内部内源性代谢产物谱的紊乱;同时发现醋甘遂的毒性要比生甘遂低得多,传统醋制可以降低甘遂的毒性。该研究显示代谢组学方法有助于评价甘遂的毒性及醋制对甘遂的解毒作用。     

醋炙减弱甘遂醋酸乙酯部位对小鼠胃肠黏膜通透性影响的研究

目的探讨醋炙减弱甘遂醋酸乙酯部位对小鼠胃肠道黏膜通透性影响的机制。方法将小鼠分为对照组、甘遂组、醋甘遂组,ig给药7 d后,取小鼠胃、肠组织进行透射电镜观察;并通过免疫组化的方法,测定胃肠组织中E-钙黏蛋白和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达。结果透射电镜观察结果显示,甘遂组胃固有腺体上皮排列紊乱,细胞质电子密度不均匀,细胞核形态不规则,腺上皮表面有大量溶酶体出现;醋甘遂组胃固有形态上皮细胞形态规则,部分线粒体畸形;甘遂组肠黏膜表面微绒毛高度变矮,细胞间连接丰富,但近表面的紧密连接较短;醋甘遂组肠上皮细胞排列规则,细胞形态一致,表面微绒毛数量减少、高度变矮,但较规则,线粒体结构良好。免疫组化检查结果显示,与对照组相比,甘遂组E-钙黏蛋白表达降低,VCAM-1蛋白表达增强(P<0.05、0.01);与甘遂组相比,醋甘遂组E-钙黏蛋白表达增强(P<0.05、0.01),VCAM-1表达降低(P<0.05、0.01)。结论醋炙能明显降低甘遂对小鼠胃肠黏膜上皮细胞的刺激,减弱对胃肠黏膜通透性的影响,从而降低甘遂的刺激性。     

新疆软紫草石油醚提取物对小鼠及其靶器官的毒性影响

目的:考察新疆软紫草石油醚提取物对小鼠的急性毒性和蓄积毒性影响,探讨其主要靶器官的毒性作用。方法:急性毒性实验:采用改良寇氏法进行半数致死量(LD50)的测定;蓄积毒性实验:采用剂量递增法给药,对照组给以4%吐温-80水溶液,观察实验期间一般生理情况,以及组织病理学变化,进行血清生化指标检测。结果:新疆软紫草石油醚提取物单次灌胃小鼠的半数致死量(LD50)=3.48g/kg,LD5095%的可信区间为3.46~3.50g/kg。蓄积毒性实验结果表明新疆软紫草石油醚提取物在小鼠体内的蓄积系数K=3.76,为中等蓄积毒性,小鼠17天累积灌胃新疆软紫草石油醚提取物13.08g/kg可引起小鼠摄食量减少,体重下降,小鼠肝脏、脾脏和胃肠道均有不同程度的损伤和病变。结论:新疆软紫草石油醚提取物对小鼠的毒性作用主要表现在肝毒性和胃肠道毒性,表明肝脏和胃肠道可能是其毒性作用的主要靶器官。     

醋炙对甘遂3种三萜类成分的影响及肠上皮细胞的毒性

目的研究甘遂醋炙前后3种三萜类成分(大戟二烯醇、kansenone、11-oxo-kansenonol)含有量变化及其对肠上皮细胞的毒性。方法采用HPLC法分别在210、255、270 nm测定甘遂和醋甘遂饮片中该3种成分的量。采用MTT法检测3种成分对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6细胞增殖的影响。结果醋炙后大戟二烯醇、kansenone、11-oxokansenonol含有量均降低,降低率分别为13.43%、15.15%、14.79%。对IEC-6细胞的IC50分别为71.41、15.27和14.53μmol/L。结论甘遂醋炙后3种三萜类成分含有量的降低与醋炙减毒有一定的相关性。     

甘草反甘遂及其分子复合物

<正> 甘草反甘遂是中药十八反之一,本文初步研究其作用机制。一、甘草酸反甘遂:文献记载,甘草中合甘草酸6～14%,为计算方便起见,以含甘草酸10%计算。1.甘草酸液(10mg生药)和甘遂水煎液((10mg生药)分别腹腔注射时,对小鼠均未见致死作用,当它们混合后给药时,也未见毒性明显增加。2.甘遂的无水乙醇提取液,毒性极强,当剂量为5mg生药时(0.25g/kg),死亡数为2/10,当以甘草10mg和甘遂5mg(生药)混合给药时,毒性更强。3.甘草酸和甘遂的醇溶性甾萜能形成分子复合物(见下文所述),当它们以甘草1vmg和甘遂5mg(生药)混合制成复合物时,其毒性与相同生药比但临用混合相比,未见显著差异,当将该分子复合物的剂量降低一半时,毒性也下降。二、甘草酸溶出甘遂:曾报道,当小鼠腹腔注射50%乙醇浸出液(蒸去乙醇),LD_(50)=18.459±0.369     

基于毒性成分转化的甘遂醋炙工艺优选

优选基于代表性毒性二萜成分转化的醋甘遂最佳炮制工艺,为醋甘遂的标准化生产提供参考。以甘遂中毒性较大的代表性二萜成分3-O-(2′E,4′Z-癸二烯酰基)-20-O-乙酰基巨大戟二萜醇(3-O-EZ)和大戟萜酯C(KPC)及其醋炙转化产物巨大戟二萜醇(ingenol)和20-去氧巨大戟二萜醇(20-deoxyingenol)为研究对象,分别采用人正常结肠黏膜上皮细胞(NCM460)和人结肠癌细胞(HT-29)进行肠毒性和泻水药效评价,并建立毒性成分转化的HPLC评价方法,探究甘遂醋炙转化规律。基于该转化规律,以转化产物ingenol和20-deoxyingenol总含量为目标,以炮制温度、炮制时间和醋用量为关键工艺参数,运用Box-Behnken响应面法优选醋甘遂的最佳炮制工艺并进行验证。结果显示甘遂醋炙后,毒性较大的双酯型3-O-EZ和KPC经酯键断裂先转化为单酯型3-O-(2′E,4′Z-癸二烯酰基)巨大戟二萜醇(3-EZ)和5-O-苯甲酰基-20-去氧巨大戟二萜醇(5-O-Ben),最终转化为几乎无毒性的ingenol和20-deoxyingenol,同时,其泻水药效得以保留。所建...     

甘遂不同炮制品中二萜类成分的变化研究

目的比较甘遂炮制前后各炮制品中二萜类成分甘遂萜酯B和甘遂萜酯A含有量的变化,以期揭示上述成分与甘遂醋炙减毒作用的关联性。方法采用HPLC法测定甘遂各炮制品中二萜类成分甘遂萜酯A、甘遂萜酯B,以X TerreRP C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)为固定相;流动相为甲醇(A)-水(B)二元梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长235 nm,柱温38℃。结果假白榄烷型二萜类成分甘遂萜酯A和甘遂萜酯B经炮制后均有所降低,其质量分数高低顺序为生品>清炒品>醋润品>醋炙品。结论甘遂醋炙前后甘遂萜酯A与甘遂萜酯B的含有量变化与甘遂醋炙减毒有一定的关联性。     

人参乳油的急性毒性实验

目的评价人参乳油的急性毒性。测定其半数致死量(LD50)与最大耐受量(MTD)。方法对小鼠给药一次人参乳油,分别采用灌胃和腹腔注射两种给药方式,观察7 d内小鼠的毒性反应及死亡情况。结果小鼠对人参乳油的半数致死量(LD50)未测出,最大耐受量(MTD)为0.02 L·kg-1。结论从药物的毒性作用来看,人参乳油安全无毒,有着巨大的开发利用价值。     

甘遂半夏汤加减甘遂甘草不同给药次数对腹水大鼠水通道蛋白-2基因及肾凋亡的影响

目的观察不同给药次数条件下的甘遂半夏汤加减甘遂甘草反药组合对腹水模型大鼠肾脏水通道蛋白(aquaporin,AQP)-2 mRNA表达及肾组织凋亡的影响。方法采用Walker-256细胞制造癌性腹水模型,将Wistar大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、阳性对照组、全方给药一次组、去草给药一次组、去遂给药一次组、去草遂给药一次组、全方给药二次组、去草给药二次组、去遂给药二次组、去草遂给药二次组,共计11组。给药一次组每天上午给药一次,给药二次组上午下午各给药一次,一二次组每天给药总量一致。腹水长成14天取材,摘取肾脏,液氮保存,进行PCR和免疫组化实验。结果甘遂半夏汤全方给药一次组和全方给药二次组的AQP-2 mRNA表达及肾组织凋亡无明显差异。但全方组的AQP-2 mRNA表达及肾组织凋亡均较全方去一味或两味反药组有降低趋势。结论含甘遂甘草反药组合的甘遂半夏汤全方给药一次组和给药二次组抑制AQP-2mRNA表达和对癌性腹水造成的肾组织细胞过度凋亡的减缓作用无明显差异,且均优于全方去掉一味或两味反药组。