学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠空间认知能力及脑组织的保护作用

目的：探讨学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠行为学变化和海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达的影响。方法：实验于2004-04／07在武汉大学医学院神经生物学实验室完成。选取86只大鼠运用淀粉样B蛋白双侧海马注射建立大鼠阿尔茨海默病模型，随机抽取造模成功大鼠56只分为阿尔茨海默病训练组40只、阿尔茨海默病对照组16只。未建立阿尔茨海默病模型16只大鼠为正常对照组。用Y型迷宫对阿尔茨海默病大鼠进行学习记忆训练4周，分别在训练第7，14，21，28天观察各组大鼠行为学变化和脑内异常磷酸化tau蛋白和海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达情况。结果：参加实验动物100只，模型制备成功72只进入结果分析。①训I练第28天时，阿尔茨海默病训练组Y型迷宫检测达标训I练次数，错误反应次数，潜伏期，全天总反应时间[15．82&;#177;2．64．4．18&;#177;1．75，(6．18&;#177;4．86)s，(1236．78&;#177;97．26)s]均接近正常对照组[16.10&;#177;3．94，3．90&;#177;1．72，(5．87&;#177;4．08)s，(1175．40&;#177;81．76)s，(P&;gt;0．05)】，而与阿尔茨海默病对照组大鼠比较差异显著[48．33&;#177;5．10．8．83&;#177;2，98，(11．32&;#177;12．23)s，(2264．32&;#177;244．60)s，(P&;lt;0．05)]。②训练第28天时阿尔茨海默病训练组大鼠脑海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性信号的积分吸光度(19．33&;#177;3．14，213．59&;#177;24．38)接近于正常对照组[(16．27&;#177;2．55)，(233．46&;#177;25．83)，P&;gt;0．05]。结论：学习记忆训练能明显改善海马注射淀粉样B蛋白l～40致阿尔茨海默病模型大鼠的空间学习记忆能力，减轻淀粉样B蛋白1～40诱导异常磷酸化tau蛋白的形成，提高海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的表达。说明学习记忆训练能通过改善阿尔茨海默病认知障碍的主要病理特征的物质基础，从而提高模型大鼠学习记忆力。     

大鼠性别及去势对基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元形态与数量及学习记忆功能的影响

目的:比较正常雌、雄大鼠以及去势大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的变化,为阐明学习记忆的神经内分泌学特点提供形态学资料。方法:实验于2001-03/2002-03在广州中山大学基础医学院人体解剖教研室脑研究室完成。将60只成年健康SD大鼠随机分为6组,正常雌性组、去卵巢2周组、去卵巢4周组、正常雄性组、去睾丸2周组、去睾丸4周组,每组10只。应用组织化学染色法观察各组大鼠基底前脑的内侧隔核、斜角带垂直支及斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元形态和数目。结果:60只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元形态变化:组织化学染色法显示一氧化氮合酶阳性神经元的胞体和突起均呈紫蓝色,胞体多为圆形、椭圆形、双极形或多极形,常由胞体发出1～3支初级树突,但轴突未被染色。各组大鼠一氧化氮合酶阳性神经元的胞体和树突均相似。②各组大鼠基底前脑的内侧隔核、斜角带垂直支及斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数目:经组织化学染色法观察,正常雄性、雌性大鼠内侧隔核、斜角带垂直支及水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数基本一致犤(38.5±4.0)个/切片,(33.0±3.1)个/切片;(45.5±6.0)个/切片,(42.8±4.9)个/切片;(63.8±8.1)个/切片,(58.9±7.8)个/切片,(P>0.05)犦。去睾丸2周组内侧隔核、斜角带垂直支的一氧化氮合酶阳性神经元数明显高于去卵巢2周组犤(45.8±5.8)个/切片,(18.9±3.8)个/切片;(58.4±7.2)个/切片,(28.3±5.0)个/切片,(P<0.01)犦;而去睾丸2周组斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数高于去卵巢2周组犤(60.3±8.5)个/切片,(45.8±6.2)个/切片,(P<0.05)犦。去睾丸4周组内侧隔核、斜角带垂直支及水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数依然高于去卵巢4周组犤(35.1±5.5)个/切片,(23.1±4.2)个/切片;(45.7±8.0)个/切片,(27.8±6.5)个/切片;(53.5±6.3)个/切片,(40.2±7.2)个/切片,(P<0.05)犦。结论:不论去势与否,一氧化氮合酶阳性神经元脑体和树突的形态变化不存在性别差异。正常雌雄大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元数不存在性别差异,但去势后一氧化氮合酶阳性神经元数则出现性别差异。这种差异不仅与卵巢雌激素和睾丸雄激素在雌雄个体中所发挥的不同作用密切相关,而且还有可能是促使雌雄个体表现出特征性的学习记忆功能性别差异的形态学基础。     

雌性大鼠去势后下丘脑视上核一氧化氮合酶阳性神经元的表达

目的:观察雌性大鼠行卵巢切除术后下丘脑视上区反映动物功能状态的一氧化氮合酶阳性神经元形态和数量的变化。方法:实验于2003-07/2004-01在山西医科大学神经解剖学科研室进行。将20只Wistar雌性大鼠随机分为两组:对照组和卵巢切除术后组,每组10只。将大鼠麻醉后取完整脑组织,制备冰冻切片,在光学显微镜下对两组大鼠下丘脑视上核的一氧化氮合酶阳性神经元进行形态观察和细胞计数,采用图像分析系统测定一氧化氮合酶阳性神经元免疫反应产物的平均灰度值。结果:20只大鼠均进入结果分析。①大鼠下丘脑视上区的一氧化氮合酶阳性神经元分布和形态观察:对照组分布广泛,以视上核的一氧化氮合酶阳性神经元表达较强,大量胞体呈椭圆形,密集成簇。卵巢切除术后组视上核一氧化氮合酶阳性神经元数目显著增多,胞体的截面积显著增大,轮廓很清晰;胞体上发出的突起粗且长,有个别纤维可见到明显的髓鞘。②下丘脑视上核一氧化氮合酶阳性神经元数目:卵巢切除术后组明显多于对照组犤(18.00±4.09)个/视野,(9.00±3.15)个/视野,t=5.514,P<0.0001犦。③下丘脑视上核一氧化氮合酶阳性产物的平均灰度值:卵巢切除术后组与对照组基本接近犤82.00±10.48,90.00±3.15,(t=0.985,P>0.5)犦。结论:雌性大鼠卵巢切除术后下丘脑视上核一氧化氮合酶阳性神经元数目反应性增多。     

血管性痴呆大鼠模型学习记忆障碍与海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白的表达空白对照及量化盲法评估

目的定量测定血管性痴呆大鼠的学习记忆成绩,同时观察海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白在血管性痴呆大鼠海马中的表达及其意义.方法实验于2004-01/11在中国医科大学动物实验室进行,取健康雄性SD大鼠100只,随机分正常对照组(n=28,仅分离双侧颈总动脉)、假手术组(n=28,仅麻醉,不做手术),和血管性痴呆组(n=44).采用血管阻断的方法,复制大鼠血管性痴呆模型,每组随机取10只大鼠,采用水迷宫实验进行行为学检测,定量测定其学习记忆成绩.每组剩余大鼠在缺血后24,48,72,96,120 h及7 d处死,用免疫组化方法检测海马区半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达水平的变化.结果100只大鼠死亡4只,进入结果分析96只.①水迷宫学习成绩血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(3.78±1.65)min,(5.21±1.56)次,(1.90±1.38)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0.68±0.12)min,(1.13±0.21)次,(0.21±0.08)min;(0.76±0.13)min,(0.98±0.32)次,(0.31±0.09)min].②水迷宫记忆成绩血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(2.98±1.05)min,(5.62±2.11)次,(1.78±0.84)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0.24±0.16)min,(0.48±0.73)次,(0.04±0.02)min;(0.35±0.20)min,(0.52±0.80)次,(0.10±0.02)min].③血管性痴呆组脑缺血后24 h半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达,为(82±12)个/视野,第3天时达高峰[(198±20)个/视野],明显多于正常对照组和假手术组[(17±3),(20±3)个/视野].结论血管性痴呆大鼠发生了明显的学习记忆功能障碍,在血管性痴呆大鼠海马脑区有大量半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达.作为一种抑制细胞凋亡的基因,半胱氨酸蛋白酶1蛋白可能对血管性痴呆大鼠脑内与学习记忆密切相关的海马神经元有保护作用.     

行为学训练对海马梗死大鼠齿状回区神经干细胞分化能力的影响

目的研究行为学训练对海马梗死大鼠齿状回区神经干细胞分化能力的影响。 方法将78只SD大鼠随机分为梗死训练组、单纯梗死组及正常对照组。采用光化学法将梗死训练组及单纯梗死组大鼠制成单侧海马梗死模型,梗死训练组大鼠于造模结束后次日给予水迷宫训练,单纯梗死组大鼠于造模结束后正常饲养,未给予水迷宫训练。采用免疫荧光双标法观察各组大鼠不同时间点海马齿状回区溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、神经元核心抗原（NeuN）及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的标记情况。 结果正常对照组海马齿状回区可见少量BrdU/NeuN、BrdU/GFAP阳性双标染色;在术后14~35 d期间,梗死训练组及单纯梗死组大鼠海马齿状回区BrdU/NeuN、BrdU/GFAP阳性双标染色均较正常对照组显著增强（均P<0.05）;并且以梗死训练组BrdU/NeuN、BrdU/GFAP的增强幅度较显著,与单纯梗死组比较,组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论行为学训练能促进脑缺血大鼠海马神经干细胞向神经元及星形胶质细胞分化,对改善其学习、记忆功能具有重要作用。     

足底电击应激对大鼠空间参考记忆维持及海马神经元性一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察足底电击应激对大鼠空间参考记忆维持及海马神经元性一氧化氮合酶表达变化的影响。方法:实验于2004-03/2005-03在兰州大学基础医学院解剖教研室完成。健康雄性Wistar大鼠20只,所有大鼠均进行4天Morris水迷宫训练,建立空间记忆模型后随机分为足底电击应激组和鼠笼对照组,每组10只。足底电击应激组每天在8:00～14:00给以足底电击,30V,每30min一次,每次2s,共14d。鼠笼对照组用硬尼龙丝触摸足底,12h内每30min一次,每次2s,共14d。第15天两组大鼠重新进行Morris水迷宫检测,每天训练1次,共训练4d,观察并记录各组大鼠潜伏期、游泳距离、游泳速度、记忆得分。水迷宫实验结束后立即取脑、固定、行冰冻切片(片厚25μm),采用SABC法神经元性一氧化氮合酶免疫组化染色,光镜下进行观察分析、摄像,并记录各组神经元性一氧化氮合酶阳性细胞数。结果:各组大鼠均进入结果分析。①第1次Morris水迷宫实验各指标测试结果:训练至第4天所有大鼠的空间记忆已经形成,4天中游泳速度没有明显的变化。随着训练次数的增加,大鼠空间学习记忆能力逐渐增强。②电击应激后各组大鼠Morris水迷宫实验各指标测试结果:与鼠笼对照组相比,足底电击应激组大鼠游泳距离长、记忆得分低、而游泳速度快,两组比较差异有显著性(P<0.05)。③各组大鼠海马神经元性一氧化氮合酶免疫组化染色结果:足底电击应激组大鼠海马中神经元性一氧化氮合酶免疫反应阳性细胞在CA1、CA2、CA3、CA4及齿状回稀疏,数目较相应鼠笼对照组明显减少(P<0.05)。结论:电击应激可造成大鼠空间参考记忆获得和维持能力的损伤,减少大鼠海马各亚区及齿状回神经元性一氧化氮合酶阳性细胞数。     

阿尔茨海默病与糖原合酶激酶3

目的:阿尔茨海默病具有神经原纤维缠结和tau蛋白的异常过度磷酸化两大病理特征,可导致神经细胞骨架异常并与神经元死亡有关。近来的一些理论提出了糖原合酶激酶3参与上述两大病理特征的形成,从而在阿尔茨海默病发病中具有重要作用的相关假设。资料来源:应用网络Medline检索1986/2002关于阿尔茨海默病的相关文献,检索词:阿尔茨海默病(Alzheimerdisease),糖原合酶激酶3(glycogensynthasekinase-3),tau蛋白。资料选择:选择关于糖原合酶激酶3与阿尔茨海默病发病关系的相关文献,以非随机研究原著和没有对照组的研究为纳入标准,未排除非盲法研究,排除重复性文献和综述性文献。资料提炼:在66篇文献中,内容呈不同程度重复的有13篇,给予删除;对53篇文献进行分类整理分析,其中33篇选用为参考文献。资料综合:糖原合酶激酶3β能在大多数阿尔茨海默病相关位点磷酸化tau蛋白,本身的活性又同时受到蛋白激酶与蛋白磷酸酯酶的双重调节;糖原合酶激酶3β在引起tau蛋白异常过度磷酸化的同时,在细胞水平还引起神经元的凋亡;整体实验也显示糖原合酶激酶3β可能导致轴突转运障碍。结论:糖原合酶激酶3β不但直接导致tau蛋白的异常过度磷酸化,使组织内出现类似于阿尔茨海默病患者脑内神经原纤维缠结样细胞,同时又在细胞凋亡中发挥     

中枢运动性疲劳应激大鼠下丘脑腹内侧核和背内侧核神经元中一氧化氮合酶的表达

背景运动性疲劳作为一种应激源,必然会引起脑内某些神经核团物质和功能的变化,哪些核团与运动性疲劳关系密切,哪些物质介导了疲劳的中枢神经功能和/或结构的改变,目前尚不清楚.目的研究下丘脑腹内侧核和背内侧核神经元中一氧化氮合酶与运动性疲劳的关系.设计随机对照实验.材料实验于2003-10/2004-01在中北大学和山西医科大学人体解剖学教研室完成.选择雄性Wister大鼠20只,清洁级.干预动物随机分为实验组10只,对照组10只.实验组每天经大运动量游泳达到力竭状态,并连续4周,制成运动性疲劳动物模型.造模完成后用ABC免疫组织化学方法观测下丘脑腹内侧核和背内侧核神经元中神经元型一氧化氮合酶表达状况,并进行图像分析和统计学处理.主要观察指标单位视野中神经元型一氧化氮合酶阳性细胞个数、阳性物面积和灰度.结果疲劳组下丘脑腹腔内侧核中神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数量为(25.25±7.35)个/视野,显著大于对照组(9.70±3.20)个/视野(P＜0.001);神经元型一氧化氮合酶阳性物面积为(3 867.75±1 940.41)μm2/视野,显著大于对照组(750.13±579.88)μm2/视野(P＜0.001);疲劳组背内侧核中神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数量为(30.25±7.87)个/视野,显著大于对照组(14.00±4.99)个/视野(P＜0.001);神经元型一氧化氮合酶阳性物面积为(4 512.06±1 243.93)μm2/视野,显著大于对照组(782.46±711.46)μm2/视野(P＜0.001).结论下丘脑腹内侧核和背内侧核神经元中的神经元型一氧化氮合酶阳性神经元与中枢运动性疲劳的形成密切相关,一氧化氮可能在下丘脑腹内侧核和背内侧核对疲劳应激反应的调节中发挥重要作用.     

足底电击应激对大鼠空间参考记忆维持及海马神经元性一氧化氮合酶表达的影响

目的：观察足底电击应激对大鼠空间参考记忆维持及海马神经元性一氧化氮合酶表达变化的影响。方法：实验于2004-03／2005-03在兰州大学基础医学院解剖教研室完成。健康雄性Wistar大鼠20只，所有大鼠均进行4天Morris水迷宫训练，建立空间记忆模型后随机分为足底电击应激组和鼠笼对照组，每组10只。足底电击应激组每天在8．00-14．00给以足底电击，30V，每30min一次，每次2s，共14d。鼠笼对照组用硬尼龙丝触摸足底，12h内每30min一次，每次2s。共14d。第15天两组大鼠重新进行Morris水迷宫检测，每天训练1次。共训练4d，观察并记录各组大鼠潜伏期、游泳距离、游泳速度、记忆得分。水迷宫实验结束后立即取脑、固定、行冰冻切片（片厚250μm），采用SABC法神经元性一氧化氮合酶免疫组化染色，光镜下进行观察分析、摄像，并记录各组神经元性一氧化氮合酶阳性细胞数。结果：各组大鼠均进入结果分析。①第1次Morris水迷宫实验各指标测试结果：训练至第4天所有大鼠的空间记忆已经形成，4天中游泳速度没有明显的变化。随着训练次数的增加，大鼠空间学习记忆能力逐渐增强。②电击应激后各组大鼠Morris水迷宫实验各指标测试结果：与鼠笼对照组相比，足底电击应激组大鼠游泳距离长、记忆得分低、而游泳速度快，两组比较差异有显著性妒〈0．05）。③各组大鼠海马神经元性一氧化氮合酶免疫组化染色结果：足底电击应激组大鼠海马中神经元性一氧化氮合酶免疫反应阳性细胞在CA1、CA2、CA3、CA4及齿状回稀疏，数目较相应鼠笼对照组明显减少（P〈0．05）。结论：电击应激可造成大鼠空间参考记忆获得和维持能力的损伤，减少大鼠海马各亚区及齿状回神经元性一氧化氮合酶阳性细胞数。     

阿尔茨海默病与糖原合酶激酶3

目的：阿尔茨海默病具有神经原纤维缠结和tau蛋白的异常过度磷酸化两大病理特征，可导致神经细胞骨架异常并与神经元死亡有关。近来的一些理论提出了糖原合酶激酶3参与上述两大病理特征的形成，从而在阿尔茨海默病发病中具有重要作用的相关假设：资料来源：应用网络Medline检索1986／2002关于阿尔茨海默病的相关献，检索词：阿尔茨海默病(Alzheimer disease)，糖原合酶激酶3(glycogen synthase kinase-3)，tau蛋白。资料选择：选择关于糖原合酶激酶3与阿尔茨海默病发病关系的相关献，以非随机研究原和没有对照组的研究为纳入标准，未排除非盲法研究，排除重复性献和综述性献。资料提炼：在66篇献中，内容呈不同程度重复的有13篇，给予删除；对53篇献进行分类整理分析，其中33篇选用为参考献。资料综合：糖原合酶激酶3B能在大多数阿尔茨海默病相关位点磷酸化tau蛋白，本身的活性又同时受到蛋白激酶与蛋白磷酸酯酶的双重调节；糖原合酶激酶3β在引起tau蛋白异常过度磷酸化的同时，在细胞水平还引起神经元的调亡；整体实验也显示糖原合酶激酶3β可能导致轴突转运障碍。结论：糖原合酶激酶3β不但直接导致tau蛋白的异常过度磷酸化，使组织内出现类似于阿尔茨海默病患脑内神经原纤维缠结样细胞，同时又在细胞凋亡中发挥重要作用；加之其作用底物众多，调节途径复杂，不但是阿尔茨海默病发病的关键分子，而且尚可能是各种因素导致神经元损伤的交汇点。     

Tiotidine and cimetidine--kinetics and dynamics

Tiotidine and cimetidine kinetics and dynamics were compared to assess mechanisms of the longer duration of effect of tiotidine in man. Both drugs has similar lag times for absorption. Tiotidine with a meal was more slowly absorbed than when fasting and was also more slowly absorbed than cimetidine with a meal. The elimination rates for both drugs did not differ; they were both approximately 2 to 3 hr. Oral doses of cimetidine achieved areas under the plasma concentration curve approximately three times that of tiotidine but these concentrations were only 1/10 as potent. The cimetidine concentration inducing 50% inhibition of food-stimulated gastric acid secretion was 0.41 +/- 0.04 whereas it was 0.04 +/- 0.003 microgram/ml for tiotidine. The effect of tiotidine lasted longer than that of cimetidine because the doses recommended for use in man resulted in higher concentrations in plasma relative to effective concentration than clinical doses of cimetidine.