一种BRAF基因突变检测方法的建立

目的 建立一种适用于临床样品检测的BRAF基因V600E突变的检测方法.方法 利用已知BRAF基因野生型、突变型样品,以BRAF基因15外显子V600E突变为靶位点设计特异性扩增引物和测序引物,建立BRAF基因V600E突变的SYRB Green PCR-Sanger测序检测方法,并对该方法进行方法学评价和21例结直肠癌临床样品检测.结果 成功建立了BRAF基因V600E突变SYRB GreenPCR-Sanger测序检测方法,该方法的灵敏度达5.0×101拷贝/ul,检测线性范围5×101～ 5×107拷贝/ul,且检测的重复性好.检测21例结直肠癌临床样品,突变率为9.5％(2/21).结论 成功建立了BRAF基因V600E突变SYRB Green PCR-Sanger测序检测方法,该方法可用于临床样品的检测.     

BRAF VE1抗体在结直肠癌中检测BRAF V600E突变的应用

目的使用BRAF VE1抗体免疫组化法检测结直肠癌样本中BRAF V600E位点突变,并分析其敏感性和特异性。方法采用ARMS法和免疫组化法检测36例结直肠癌组织中BRAF V600E突变状态,并使用测序验证。结果免疫组化法检测结直肠癌样本中BRAF VE1抗体的敏感性为100%,特异性为62.9%。与甲状腺样本BRAF V600E突变相比,结直肠癌标本为细胞质着色,染色呈棕黄色。结论免疫组化法可高效、快速、低成本初步筛选结直肠癌的BRAF V600E突变,但需分子检测进一步确认。     

比较实时荧光 PCR 法与 Sanger 测序法检测甲状腺乳头状癌BRAF基因突变

目的：分析实时荧光PCR(real-time PCR)法与Sanger测序法检测甲状腺乳头状癌患者BRAF V600E基因突变的阳性率及符合率。方法收集312例甲状腺乳头状癌手术切除标本,分别采用real-time PCR法和Sanger测序法检测甲状腺乳头状癌中BRAF V600E基因突变情况。结果312例甲状腺乳头状癌标本real-time PCR法和Sanger测序法检出BRAF基因突变的阳性率分别为65．4%(204/312)、63．8%(199/312)。 BRAF基因突变与患者性别无关,与患者年龄相关;两种方法检测结果总符合率为98．4%。结论 real-time PCR法适用于BRAF基因突变的检测。     

分化型甲状腺癌中BRAF V600E突变分析

目的探讨分化型甲状腺癌中BRAF V600E突变与临床病理特征的关系。方法收集甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)80例(其中经典型67例、滤泡亚型8例、嗜酸细胞亚型3例、高细胞亚型2例)、滤泡癌5例,其中30例PTC取相应癌旁组织,全部送基因检测室检测BRAF V600E突变情况。结果 80例PTC中BRAF V600E突变率为65.0%,5例滤泡癌及30例癌旁组织中未发现BRAF V600E突变;BRAF V600E突变与患者年龄、肿瘤包膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期有关。PTC亚型中,经典型和高细胞亚型的BRAF V600E突变率较高(70.1%、100.0%),滤泡亚型的突变率较低(33.3%)。结论PTC中BRAF V600E突变可能与患者年龄有一定相关性,还与包膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期有关,经典型和高细胞亚型的BRAF V600E突变率较高,明显高于滤泡亚型。     

BRAF基因突变在甲状腺乳头状癌中的临床意义

目的：探讨BRAF V600E基因突变与甲状腺乳头状癌的临床相关性。方法：采用PCR技术和直接测序法,对63例甲状腺乳头状癌患者和45例其他类型甲状腺疾病患者石蜡组织BRAF V600E基因突变进行检测。结果：甲状腺乳头状癌组中32例存在突变;而在其他类型甲状腺疾病组中未发现突变。BRAF V600E基因突变在甲状腺乳头状癌不同肿瘤直径组之间的比较差异以及在有无区域淋巴结转移组之间的比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：BRAF V600E基因突变与甲状腺乳头状癌的发生、肿瘤的大小和区域淋巴结的转移有关。     

组蛋白H3 K27M和BRAF V600E共突变的儿童中线Ⅰ级节细胞胶质瘤

<正>节细胞胶质瘤是一种Ⅰ级肿瘤,其特点为MAPK通路突变,包括BRAF V600E突变。最近,伴H3 K27M突变的弥漫中线胶质瘤作为一种Ⅳ级的新类型被WHO(2016)新分类收录。同时出现H3 K27M和BRAF V600E突变已在中线胶质瘤和间变性节细胞胶质瘤中报道,作者检测54例儿童中线     

FNAB联合BRAF基因突变检测在术前甲状腺结节诊断中的应用

目的探讨术前甲状腺结节诊断中细针穿刺活检(fine-needle aspiration biopsy,FNAB)联合丝/苏氨酸特异性激酶基因V600E(BRAF V600E)突变检测的应用价值。方法选取88例甲状腺结节患者,经超声检查TI-RADS分级Ⅳ~Ⅴ级,均行FNAB联合BRAF V600E突变检测,并分析其在术前诊断中的应用价值。结果随着TI-RADS分级的增高BRAF突变阳性率显著增高(P0.05),在恶性病变中BRAF V600E突变率较高(80.4%),FNAB检测与术后病理符合率为71.6%,联合BRAF V600E突变检测与术后病理符合率为86.4%,联合检测明显优于单独FNAB检测(χ~2=5.783,P=0.016)。结论术前行FNAB联合BRAF V600E突变检测能够精确FNAB的诊断,提高术前诊断率。     

非小细胞肺癌中BRAF V600、EGFR基因突变与临床病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中BRAF V600、EGFR基因突变及其与临床病理特征的关系。方法采用PCR-DNA测序法检测146例NSCLC标本中BRAF V600、EGFR基因突变情况,并分析基因突变与临床病理特征的关系。结果 BRAF V600基因突变率为7.5%(11/146),与患者吸烟史有关(P=0.045),而与患者性别、年龄、组织学类型及分化程度等无关(P0.05)。EGFR基因突变率为46.6%(68/146),多见于女性、不吸烟、腺癌患者(P0.05)。共检测出4例同时具有BRAF V600(3例V600E及1例V600D)及EGFR基因突变(19号外显子缺失2例,21号外显子L858R突变2例),两者未见相关性(P0.05)。结论 NSCLC患者BRAF V600基因突变与患者性别、年龄、组织学类型及分化程度等无关,多见于无吸烟史患者。     

甲状腺乳头状癌中CyclinD1表达和BRAF（V600E）突变的相关性及意义

目的：探讨甲状腺乳头状癌( papillary thyroid carcinoma, PTC)中Cyclin D1表达上调和BRAF( V600E)突变的相关性及临床意义,分析二者在PTC发生、发展中的作用。方法采用免疫组化EnVision两步法检测52例PTC和52例甲状腺良性病变(结节性甲状腺肿25例、桥本甲状腺炎15例、滤泡性腺瘤12例)中Cyclin D1的表达;采用PCR法及DNA测序法检测上述标本中BRAF(V600E)突变状况,分析Cyclin D1表达上调和BRAF(V600E)突变的相关性及与PTC临床病理特征的关系。结果52例PTC中Cyclin D1阳性率为84．6%,免疫反应评分(4．6±2．4)与甲状腺良性病变(1．3±1．6)比较差异有统计学意义(t=8．525,P<0．01);Cyclin D1表达上调与肿瘤淋巴结转移、包膜侵犯、肿瘤分期(Ⅲ+Ⅳ期)及BRAF(V600E)突变相关(P<0．05),与患者年龄、性别、肿瘤结节数目及直径无关。52例PTC中BRAF(V600E)突变率63．5%,甲状腺良性病变中突变率为0,差异有统计学意义(P<0．01),BRAF(V600E)突变与肿瘤淋巴结转移、包膜侵犯及肿瘤分期(Ⅲ+Ⅳ期)密切相关(P<0．05),与患者年龄、性别、肿瘤结节数目及直径无关。 BRAF(V600E)突变组中Cyclin D1表达强度更强,阳性率显著高于野生组(突变组100%,野生组57．9%),免疫表达评分均值高于野生组[突变组(5．7±1．6),野生组(4．0±2．5)],两组比较差异有统计学意义(t=2．652,P<0．05)。结论 Cyclin D1表达上调与BRAF(V600E)突变呈正相关,二者与PTC的发生、发展密切相关,可作为评估PTC侵袭转移能力的指标。     

甲状腺乳头状癌BRAF V600E突变与肿瘤相关成纤维细胞的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)中BRAF V600E突变与肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAF)的关系。方法收集PTC标本890例,采用ARMS-PCR法检测BRAF V600E基因突变,应用免疫组化EnVision两步法检测α-SMA的表达以标记CAF的增生,分析两者的相关性及与临床病理特征的关系。结果 PTC中CAF增生率为85.51%,CAF增生与PTC腺外侵犯、钙化有关。BRAF V600E突变率为70.67%,BRAF V600E突变与肿瘤直径、被膜侵犯、CAF增生相关,BRAF V600E突变与患者性别、年龄、病灶数量、腺外侵犯、钙化、TNM分期、淋巴结转移均无关。结论 CAF增生提示肿瘤侵袭能力增强,BRAF V600E突变的PTC细胞可能与CAF相互作用,改变肿瘤微环境,使PTC更易发生腺外侵犯。     

对MITF基因突变导致Waardenburg TypeⅡ综合征患者临床表型和遗传学分析

目的探讨1例虹膜色素沉着异常,感音神经性耳聋,皮肤白斑患者的遗传学病因。方法应用单核苷酸多态性芯片(single nucleotide polymorphism array,SNP array)检测患者染色体微小异常。用全外显子测序(whole exome sequencing,WES)分析及Sanger测序验证,对患者进行遗传学分析。结果 SNP array检测结果正常。全外显子测序结果及OMIM数据库分析结合患者临床表型得出MITF基因c.775CT突变,259位置氨基酸由精氨酸突变为终止密码子。Sanger测序结果全外显子检测一致,显示患者MITF基因c.775CT(p.Arg259)杂合突变。结论本例患者异常表型是由于MITF基因c.775CT(p.Arg259)杂合突变导致的,并表现为Waardenburg syndrome Ⅱ型,对其家系有遗传指导意义。     

甲状腺穿刺细胞学及其BRAF V600E突变检测的临床价值

甲状腺穿刺细胞学检查联合BRAF V600E检测有利于提高术前甲状腺乳头状癌的检出率,而细胞学结果判读的影响因素繁多,BRAF V600E突变的临床应用价值尚不明确。该文就甲状腺穿刺技术进展、甲状腺穿刺细胞学判读、BRAF V600E突变检测及其临床应用予以综述。     

甲状腺乳头状癌BRAF V600E、TERT和RET分子检测及与临床病理特征的关系

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)中三种驱动基因BRAF V600E、TERT和RET与临床病理特征的关系。方法 收集4 678例PTC,2 637例患者行BRAF V600E和TERT启动子检测(C250T和C228T位点),另2 041例患者行BRAF V600E和RET检测，并分析以上3种基因与临床病理特征的关系。结果 PTC中BRAF V600E、TERT及RET基因阳性检出率分别为88.9%(4 161/4 678)、0.5%(12/2 637)、3.7%(75/2 041)。BRAF V600E突变仅与被膜侵犯及桥本甲状腺炎伴随相关(P<0.05);TERT启动子突变与患者年龄、肿瘤最大径、肿瘤数量、淋巴结转移、TNM分期均有关(P<0.05);RET基因融合与患者性别、肿瘤最大径、淋巴结转移、桥本甲状腺炎伴随有关(P<0.05)。双基因改变患者合计12例，包括1例BRAF V600E突变伴CCDC6-RET(Exon1-Exon12)基因重排变异，1例BRAF V600E突变伴NCOA4-RET(...     

一个遗传性痉挛性截瘫家系的全外显子测序分析及产前诊断

目的对一个常染色体显性遗传性痉挛性截瘫(hereditaryspasticparaplegia,HSP)家系进行全基因组外显子测序分析,找出致病的基因突变位点。方法收集一个遗传性痉挛性截瘫家系,提取先证者、先证者父母的DNA进行全外显子组捕获和测序,锁定候选基因致病位点,针对变异位点在该家系6名患者和9名正常人中进行Sanger测序验证,然后通过羊水穿刺和Sanger测序进一步对1例胎儿羊水进行产前诊断。结果该家系中6例病人均在ATL1基因的同一位点处发生突变(c.715CT,p. R239C),家系中9例正常人和1例胎儿羊水中均未发现该突变。结论应用全外显子测序技术对遗传性痉挛性截瘫家系进行诊断,明确致病位点,有助于该家系的遗传咨询和产前诊断。     

新疆地区甲状腺乳头状癌中BRAF V600E基因的表达及意义

目的探讨新疆地区BRAF V600E基因点突变在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达,及其与临床病理特征的关系。方法收集原发性PTC 178例,石蜡包埋组织经QIAGEN试剂盒提取DNA,经Taq Man探针荧光定量PCR技术检测PTC中BRAF基因点突变。结果 178例原发性PTC中BRAF V600E基因点突变142例,突变率为79.8%(142/178)。患者年龄(≥45岁)、肿瘤直径(≤1 cm)、被膜外侵犯BRAF V600E基因点突变率高(P均0.05),而BRAF V600E基因点突变与患者性别、多灶性及淋巴结转移灶和肿瘤部位均无相关性(P均0.05)。结论新疆地区PTC中BRAF V600E基因点突变与临床病理特征密切相关,且具有一定特异性,可作为PTC诊断提供依据。     

一个先天性糖基化病家系的临床特征和致病变异分析

目的:探讨一个先天性糖基化病家系的临床特点及遗传学特征。方法:对该家系两例患者的临床资料进行分析,对家系成员进行全外显子组测序,并用Sanger测序对疑似致病变异进行验证。结果:先证者及其弟弟均携带 PMM2基因复合杂合突变,其中第5外显子的c.395T>C(p.I132T)为已知致病突变,第5内含子的c....     

BRAF V600E和TERT启动子突变与甲状腺乳头状癌临床病理特征的关系

目的探讨鼠类肉瘤滤过性酶菌致癌同源体B1(BRAF)V600E基因突变和端粒酶逆转录酶(TERT)启动子突变在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的发生率及其与临床病理特征的关系。方法收集62例PTC患者新鲜冷冻组织进行显微切割,收集癌细胞并提取DNA,PCR扩增后利用测序法对PTC患者BRAF V600E和TERT启动子突变进行检测,并收集62例患者的临床病理资料进行统计学分析。结果 62例PTC中58例(94%)在BRAF T1799A处发生突变。有13例(21%)在TERT启动子C228T处发生突变。PTC患者中,BRAF V600E基因突变仅与肿瘤大小有关(P0.05),TERT启动子突变与PTC患者年龄、肿瘤大小有关(P0.05)。结论 BRAF和TERT启动子突变对PTC患者的临床病理表现产生一定影响,对患者的预后评估具有指导意义。     

252例结直肠癌组织中KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA的基因突变分析

目的分析结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA基因的常见突变类型及其与临床病理指标的关系。方法对252例CRC石蜡包埋组织进行DNA提取,采用Sanger测序法对KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA基因进行检测,分析各个基因的突变率与临床病理特征的关系,并统计各个基因的突变类型。结果 252例CRC中,KRAS、BRAF、NRAS和PIK3CA突变发生率在性别、年龄、肿瘤部位、病理分期和有无淋巴结转移上差异均无统计学意义(P0.05);检测阳性突变共140例(55.5%),其中KRAS 113例(44.8%),NRAS 1例(0.4%),BRAF 19例(7.5%),PIK3CA 28例(11.1%),包括PIK3CA与KRAS、NRAS、BRAF基因发生双突变21例(8.3%);KRAS的主要突变类型包括G12A、G12C、G12D、G12R、G12S、G12V、G13D、T20M、A59T、Q61H、Q61L、Q61P;NRAS仅有1例突变为G12D;BRAF的主要突变类型为V600E、D594G、K601E;PIK3CA的主要突变类型包括E542K、E545K、Q546K、Q546P、Q546R、M1043I、H1047R。PIK3CA与KRAS、NRAS、BRAF之间会发生交叉突变,但KRAS、NRAS、BRAF三者之间基本不存在交叉突变。结论 CRC中KRAS阳性突变率居高,PIK3CA次之,BRAF、NRAS突变率最低,且PIK3CA常与KRAS、NRAS、BRAF发生交叉突变。对CRC患者行KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA等多基因检测,可正确指导并选择抗EGFR单抗药,从而实现真正意义上的个体化靶向治疗。     

一个遗传性平滑肌瘤病及肾细胞癌综合征家系的表型和 FH基因变异分析

目的:对一个中国遗传性平滑肌瘤病及肾细胞癌(hereditary leiomyomatosis and renal cell carcinoma,HLRCC)综合征家系进行临床和遗传学分析,为临床诊断提供依据。方法:应用全外显子组测序进行变异筛选,发现 FH基因可疑变异后应用Sanger测序技术对变异位点验...     

一个非综合征型唇腭裂家系的致病基因鉴定

目的对一个非综合征型唇腭裂家系进行分子遗传学研究,探寻其致病原因。方法对该家系成员进行详细的体格检查和既往史调查,排除综合征型唇腭裂。对该家系1例患儿的基因组DNA进行全外显子组测序及生物信息学分析。筛查到候选致病基因突变位点后,采用Sanger测序对该家系成员及100名健康对照个体进行共分离分析和人群验证分析。结果全外显子组测序及疾病共分离分析显示,该家系患者IRF6基因第4外显子存在c.253A>G(p.Cys85Arg)变异,且该突变未在健康对照个体中检出,文献尚未见报道。结论IRF6基因第4外显子c.253A>G错义变异是导致该家系发病的原因。