银杏内酯B通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27 细胞的恶性生物学行为

目的：探讨银杏内酯B（GKB）是否通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭。方法：将HGC-27细胞分为对照、GKB低剂量（100 mg/L）、GKB高剂量（200 mg/L）、GKB高剂量（200 mg/L）+740Y-P（PI3K激活剂）、Ly294002（PI3K抑制剂）组。采用MTT、Edu、FCM、Transwell实验分别检测各组细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭能力,qPCR和WB法分别检测各组细胞中PI3K mRNA、Akt mRNA、mTOR mRNA和Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。构建胃癌HGC-27细胞裸鼠移植瘤模型,观察GKB对移植瘤生长的影响,WB法检测移植瘤组织中Ki-67、caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白的表达。结果：体外实验结果表明,与对照组相比,GKB低剂量组、GKB高剂量组、Ly294002组HGC-27细胞的增殖活力及细胞增殖率、迁移和侵袭细胞数,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达,以及Ki-67、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均显著降低（均P<0.05）;细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均显著升高（均P<0.05）;740Y-P可部分逆转GKB对HGC-27细胞的抑制作用（均P<0.05）。荷瘤裸鼠实验结果显示,GKB可显著抑制HGC-27细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）,且可下调PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结论：GKB可通过阻抑PI3K/Akt/mTOR信号通路而抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭并促进其凋亡。     

扶正抑瘤汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌增殖、凋亡及自噬

目的 探讨扶正抑瘤汤对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡、自噬以及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 采用不同浓度（12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL、100 mg/mL、200 mg/mL、400 mg/mL）扶正抑瘤汤体外培养非小细胞肺癌A549细胞, CCK-8法测定细胞增殖抑制率;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平;透射电镜下观察自噬溶酶体形成情况。结果 200 mg/mL和400 mg/mL扶正抑瘤汤作用后A549细胞增殖抑制率增加（均P<0.05）。200 mg/mL扶正抑瘤汤作用后A549细胞侵袭和迁移能力降低（均P<0.05）;细胞凋亡率增加（P<0.05）;Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平升高（均P<0.05）,P62蛋白的表达水平降低（P<0.05）;A549细胞自噬溶酶体数量增加;p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白的表达降低（均P<0.05）。结论 扶正抑瘤汤可以抑制A549细胞增殖,并促进细胞凋亡和自噬,可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路失活有关,是治疗非小细胞肺癌的潜在药物。     

苦瓜蛋白MAP30 通过AKT/mTOR通路促进多发性骨髓瘤细胞的自噬和凋亡

[摘要] 目的：探讨苦瓜蛋白MAP30 在多发性骨髓瘤中的作用及其机制。方法：将人骨髓瘤RPMI-8226、NCI-H929 和U266 细胞为靶细胞,以不同浓度（1～10 μmol/L）的MAP30 处理后,采用CCK-8 法检测多发骨髓瘤细胞株RPMI-8226、NCI-H929和U266 的增殖能力,Annexin V/PI 流式细胞术检测骨髓瘤细胞的凋亡情况,Wb实验检测骨髓瘤细胞凋亡相关蛋白（PARP）、自噬相关蛋白（LC3II、P62）及AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平,CCK-8 法、流式细胞术和Wb实验检测MAP30 联合自噬激动剂雷帕霉素（Rap）或自噬抑制剂巴弗洛霉素（Baf）作用后骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的变化。结果：MAP30（1～10 μmol/L）抑制骨髓瘤细胞的增殖,且其对增殖的抑制呈时间和剂量依赖关系（P<0.05 或P<0.01）。MAP30 单独作用骨髓瘤细胞后,细胞凋亡和细胞自噬增加,PARP裂解增多,LC3II 表达水平增加,P62 表达明显下降（均P<0.05 或P<0.01）;MAP30+Rap 作用骨髓瘤细胞后,较单用MAP30 细胞增殖率增加、细胞凋亡率减少、细胞自噬减少、PARP裂解降低、LC3II 表达降低及P62 表达增加（均P<0.05 或P<0.01）;相反,MAP30+Baf 作用骨髓瘤细胞较单用MAP30,细胞增殖率减少、细胞凋亡率增加、细胞自噬增加、PARP裂解增加、LC3II 表达增加、P62 表达降低（均P<0.05 或P<0.01）;MAP30 作用骨髓瘤细胞后,AKT/mTOR通路相关蛋白p-AKT和p-mTOR表达水平明显降低（均P<0.05）。结论：MAP30 可通过AKT/mTOR通路促进骨髓瘤细胞的凋亡和自噬,可能为骨髓瘤的治疗提供新的治疗策略。     

内质网激动剂调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡

目的 检测内质网应激能否通过PI3K/AKT/mTOR通路对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡产生作用.方法 采用MTT法检测不同浓度衣霉素对人小细胞肺癌NCI-H446的细胞毒性,Annexin V/PI检测药物作用下人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡情况,Western Blot检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达.结果 衣霉素可抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞的活性,且呈时间和浓度依赖性.衣霉素能够激活内质网应激,抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,使PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化下调,诱导细胞凋亡.结论 内质网激动剂能够调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡.     

维生素E琥珀酸酯通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞SGC-7901发生保护性自噬

目的： 观察维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)处理SGC-7901细胞后是否发生自噬,并探讨自噬在VES抑制细胞增殖中的作用。方法：用不同浓度 (0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理SGC-7901细胞24 h后,电子显微镜观察自噬体形态;VES处理转染GFP-LC3质粒后的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3,以及Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR活性变化;采用自噬抑制剂氯喹 (chloroquine,CQ)和3-甲基腺苷 (3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力。结果：电子显微镜观察显示经不同浓度VES处理后,细胞中出现了典型的自噬囊泡以及自噬溶酶体等自噬各阶段的形态变化;荧光显微镜观察显示GFP-LC3质粒转染后随VES处理剂量的增加,绿色点状荧光逐渐聚集增强;Western blot结果显示,VES可使LC3-Ⅱ蛋白表达增强;并下调Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR的活性;MTT结果显示VES+CQ组和VES+3-MA组的细胞增殖抑制率均明显高于VES单独处理组 (P均 <0.05),即自噬抑制剂CQ与3-MA预处理使细胞增殖率进一步下降,提示VES诱导的肿瘤细胞自噬对肿瘤细胞增殖具有保护作用。结论：VES可以通过抑制Akt/mTOR通路活性诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生自噬,且此种自噬为保护性自噬。     

鸦胆子油乳剂对食管鳞状细胞癌TE-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其可能的机制

目的：探讨鸦胆子油乳剂（BJOE）对食管鳞状细胞癌TE-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其可能的机制。方法：按干预措施的不同,将TE-1细胞分为对照组、RAPA（自噬激动剂）组、740Y-P（PI3K激活剂）组、BJOE 组、BJOE+RAPA组和BJOE+740Y-P 组。采用FCM、克隆形成、Transwell 实验检测细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭能力,qPCR 法检测细胞中PI3K、Akt、mTOR、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62、Beclin 1、caspase-3的mRNA表达,WB法检测PI3K、Akt、mTOR及其磷酸化、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin 1、caspase-3的蛋白表达。结果: 与对照组比较,RAPA组和BJOE 组细胞凋亡率均显著升高（均P<0.01）,细胞克隆形成率、迁移和侵袭能力均显著降低（均P<0.01）,细胞中PI3K、Akt、mTOR 的mRNA 和蛋白磷酸化水平均显著降低（均P<0.05）,p62的mRNA 和蛋白水平显著降低（均P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1和caspase-3的mRNA和蛋白水平显著升高（均P<0.05）,740Y-P 组的结果则相反（均P<0.05）;与RAPA组或740Y-P 组比较,BJOE+RAPA组或BJOE+740Y-P 组细胞凋亡率显著升高（均P<0.01）,克隆形成率、细胞侵袭和迁移能力显著降低（均P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR的mRNA和蛋白磷酸化水平均显著降低（均P<0.05）,p62 的mRNA和蛋白水平均显著降低（均P<0.05）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1 和caspase-3 mRNA和蛋白水平显著升高（均P<0.05）。结论: BJOE显著抑制TE-1细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡与自噬,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活有关。     

miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

目的：探讨miR-216b-5p 对食管癌Eca109 细胞顺铂（DDP）耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR 法检测miR-216b-5p 在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109 和耐药细胞Eca109/DDP 中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic 及mimic NC、自噬相关蛋白5（ATG5）过表达质粒转染到Eca109/DDP 细胞中,用CCK-8、EdU 法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡;mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况, WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62 表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系,WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型,观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果：miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109 和Eca109/DDP 细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP 细胞的增殖并诱导凋亡（均P<0.05）,减少细胞中自噬小体数量（P<0.05）,下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62 蛋白水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达（P<0.05）,过表达ATG5 可使miR-216b-5p mimic 对Eca109/DDP 细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱（均P<0.05）,自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1 表达升高（均P<0.05）。荷瘤实验结果表明,miR-216b-5p 过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）。结论：miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。     

细胞角蛋白13通过PTEN抑制PI3K/AKT/mTOR通路增强鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性

目的:探讨细胞角蛋白13(cytokeratin 13,CK13)对鼻咽癌HNE1细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:将HNE1细胞分为对照组、anti-CK13#a组及anti-CK13#b组(敲减CK13)、对照组+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h)、anti-CK13#a+西罗莫司处理组(100 nmol/L的西罗莫司处理1 h),经放疗处理(200 c Gy/min剂量照射5 min)后,用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,q PCR法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关基因PTEN的表达,WB法检测PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:经放疗处理后,与对照组相比,敲减CK13后HNE1细胞增殖能力明显增强(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);细胞中c-caspase-3和γH2AX的表达明显降低(均P<0.01)、p-AKT和p-S6K表达明显升高(P<0.01)、PTEN蛋白表达明显降低(P<0.01)。敲减CK13+西罗莫司(PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂)处理可以回复敲减CK13导致的细胞增殖能力增强(P<0.05)和细胞凋亡率降低(P<0.01)。结论:敲减CK13通过下调PTEN蛋白水平进而增强PI3K/AKT/mTOR信号通路活性,最终降低HNE1细胞的放疗敏感性。     

顺铂通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬

目的：探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法：透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II（microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II） 的荧光聚集情况。采用Westerblot检测mTOR通路中的PI3K、AKT及mTOR蛋白的表达。结果：顺铂（20μg/mL）能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组（P<0.05）;与对照组（20μg/mL-0h组）相比较,自噬相关蛋白-LC3的表达随着时间延长表达增加（P<0.05）。磷酸化AKT1、磷酸化mTOR及PI3Kp85蛋白表达水平随着时间延长表达下降。胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factors-1,IGF-1）与顺铂共培养组自噬小体及LC3蛋白表达少于顺铂组,但高于对照组。结论：顺铂可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而诱导子宫内膜癌细胞发生自噬。     

苍术素通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路诱导非小细胞肺癌A549细胞程序性坏死并抑制裸鼠移植瘤生长

目的：探讨苍术素（ATR）通过调节受体相互作用蛋白激酶（RIPK）1/RIPK3/混合谱系激酶结构域样（MLKL）信号通路对非小细胞肺癌（NSCLC）A549 细胞程序性死亡及裸鼠移植瘤生长的影响。方法：使用0~160 μmol/L 的ATR 处理A549 细胞, MTT 法检测细胞存活率以确定后续实验给药浓度。使用ATR 和/或RIPK1 抑制剂Nec-1（necrostatin-1）、caspase 抑制剂Z-VAD-FMK处理A549 细胞,验证ATR是否诱导A549 细胞发生程序性坏死。将A549 细胞分为对照组、ATR-L 组、ATR-M 组、ATR-H 组（分别用0、10、20、40 μmol/L ATR 处理）、ATR+Nec-1 组（40 μmol/L ATR+50 μmol/L Nec-1 处理）,处理24 h 后,采用PI 单染及Hoechst33342/PI 双染法检测细胞死亡情况、透射电镜观察细胞死亡形态、DCFH-DA 荧光探针法检测细胞内ROS水平、JC-1染色法检测线粒体膜电位、WB法检测细胞中RIPK1/RIPK3/MLKL 信号通路相关蛋白质的表达水平。构建A549 细胞裸鼠移植瘤模型,用10 mg/kg ATR（溶于玉米油中）对裸鼠灌胃给药5 周,观察ATR 对移植瘤生长的影响,WB 法检测移植瘤组织中RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路相关蛋白质的表达水平。结果：10~160 μmol/L的ATR可显著抑制A549细胞增殖,选择10、20、40 μmol/L的ATR进行后续实验。ATR组A549 细胞存活率显著低于对照组（P<0.01）和ATR+Nec-1组（P<0.01）,而ATR+z-VAD组细胞存活率显著低于z-VAD组（P<0.01）,说明ATR可诱导A549 细胞发生程序性坏死而非凋亡。与对照组比较,ATR处理组A549 细胞发生肿胀,线粒体内脊消失呈空泡化,细胞内容物向外泄漏,细胞核聚集,表现为坏死特征,ATR-L 组、ATR-M组、ATR-H 组A549 细胞死亡率、ROS水平及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL表达水平均显著升高,线粒体膜电位显著降低（均P<0.01）,且呈药物浓度依赖性;与ATR-H 组比较,ATR+Nec-1 组细胞死亡率、ROS 及p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL 表达水平降低,线粒体膜电位显著升高（均P<0.01）。裸鼠移植瘤实验结果显示,与对照组比较,ATR 组裸鼠移植瘤体积、移植瘤质量均降低（P<0.05,或P<0.01）,而与瘤组织中p-RIPK1、p-RIPK3、p-MLKL 蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）。结论：ATR可能通过激活RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路诱导A549细胞发生程序性坏死,抑制A549细胞及其裸鼠移植瘤的生长。     

miR-9通过靶向E盒结合锌指蛋白2调控小细胞肺癌的恶性生物学行为及其可能的机制

目的：探讨 miR-9 通过靶向 E 盒结合锌指蛋白 2（zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2）对小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）细胞生物学行为的调控作用,分析miR-9在SCLC中的作用及其工作机制。方法：采用qPCR、WB和免疫组化方法检测于2018年2月至2019年11月于河北医科大学第四医院肿瘤内科接受手术治疗的67例SCLC患者癌组织及癌旁组织中ZEB2的表达。采用TargetScan预测miR-9的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验、qPCR和WB法进行验证。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测miR-9和ZEB2 过表达对 NCI-H446 的生物学行为影响,WB法检测对细胞中E-cadherin,N-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响。利用miR-9过表达NCI-H446细胞构建SCLC裸鼠移植瘤模型,观察miR-9对裸鼠移植瘤生长的影响。结果：SCLC组织中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织（P<0.01）。miR-9在ZEB2的3'' UTR上具有潜在的结合位点,与对照组相比,miR-9过表达组NCI-H446细胞中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降（P<0.05或P<0.01）,促EMT蛋白表达减少,而同时过表达ZEB2能够逆转上述影响。体内实验中,miR-9过表达组移植瘤体积、重量均明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）。miR-9组裸鼠肿瘤组织中和ZEB2蛋白的表达均较对照组明显降低（P<0.01）。结论：miR-9通过靶向调控ZEB2从而抑制SCLC细胞的生物学行为以及NCI-H446裸鼠移植瘤的生长。     

EPHA2通过增强Akt/mTOR信号通路促进SGC-7901细胞的增殖

背景与目的：EPHA2能够促进胃癌细胞中Cyclin D1的表达及胃癌细胞的细胞周期进程,从而增强胃癌细胞的增殖能力,但EPHA2调控胃癌细胞中Cyclin D1的表达及胃癌细胞的细胞周期进程的分子机制依然不明确。Akt/mTOR信号通路能够通过促进胃癌细胞中Cyclin D1的表达及胃癌细胞的细胞周期进程增强胃癌细胞的增殖能力,且有研究表明EPHA2能够激活Akt/mTOR信号通路。基于此,该研究探讨了Akt/mTOR信号通路在EPHA2促胃癌细胞增殖中的作用。方法：采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测过表达EPHA2和敲低EPHA2表达对SGC-7901细胞中Akt、mTOR和4EBP1磷酸化的影响。使用Akt抑制剂MK2206和mTOR抑制剂RAD001分别处理转染空载体病毒的SGC-7901-NC细胞和过表达EPHA2的SGC-7901-EPHA2细胞,分别通过CCK8、流式细胞术和Western blot检测细胞增殖、细胞周期及周期相关蛋白Cyclin D1的表达。结果：过表达EPHA2增强SGC-7901细胞中Akt、mTOR和4EBP1的磷酸化,敲低EPHA2的表达抑制SGC-7901细胞中Akt、mTOR和4EBP1的磷酸化。MK2206和RAD001处理细胞时,EPHA2过表达对SGC-7901细胞增殖、细胞S期和Cyclin D1表达的促进作用被显著抑制。结论：EPHA2通过增强Akt/mTOR信号通路促进胃癌细胞SGC-7901的增殖能力,提示我们将来针对EPHA2高表达的胃癌患者或许可以采用Akt抑制剂和mTOR抑制剂予以个体化治疗。     

马鞭草总黄酮通过AKT/mTOR信号通路调控自噬抑制肝癌细胞增殖

目的:分析马鞭草总黄酮(total flavonoids of verbena officinalis L.,TFV)对肝癌细胞自噬和增殖的影响,并探讨其机制。方法:MDC染色法检测自噬泡水平,Western印迹检测自噬相关蛋白水平,运用3-甲基腺嘌呤(3-MA)、雷帕霉素(RAPA)研究TFV对自噬、细胞增殖的影响,MTT法检测细胞存活率。裸鼠成瘤实验验证TFV对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及自噬相关蛋白水平的影响。结果:TFV能增加HepG2、Huh-7细胞中MDC染色标记的荧光颗粒,并伴随浓度的上调明显增加,促进HepG2、Huh-7细胞中自噬蛋白Beclin-1、LC3 II/LC3 I水平表达,降低p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.05)。与TFV组比较,TFV+3-MA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显降低,p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05);与TFV组比较,TFV+RAPA组抑制率、LC3 II/LC3 I明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低(P<0.05);与TFV组比较,TFV+3-MA组裸鼠瘤体LC3 II/...     

miRNA-496通过mTOR影响宫颈癌HeLa细胞的恶性生物学行为及裸 鼠移植瘤的生长

目的：探讨miR-496是否通过靶向mTOR影响宫颈癌HeLa细胞的周期、增殖、迁移、侵袭以及裸鼠移植瘤的生长。方法：选取2020年12月至2021年12月期间于河北医科大学第四医院接受手术的74例宫颈癌患者的肿瘤标本和癌旁组织标本,qPCR、WB法和免疫荧光法检测宫颈癌组织中 miR-496 和 mTOR 在 mRNA 和蛋白水平的表达。利用TargetScan数据库预测miR-496的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。将HeLa细胞按转染物不同分为对照组、miR-496 mimic组和miR[1]496 mimic+pMIR-mTOR组,CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测miR-496和mTOR对HeLa细胞增殖、周期、迁移和侵袭的影响。将对照组、miR-496 mimic组HeLa细胞接种至BALB/c裸鼠皮下构建宫颈癌裸鼠移植瘤模型,21 d后处死小鼠,剥离小鼠肿瘤组织并称取瘤质量,免疫荧光法和WB法检测miR-496过表达对移植瘤组织中mTOR和Ki67表达的影响。结果：在宫颈癌组织中,miR-496呈低表达,而mTOR mRNA和蛋白呈高表达。miR-496能够靶向结合mTOR mRNA的3’-UTR。与对照组和miR-496 mimic+pMIR-mTOR组相比,miR-496 mimic组HeLa细胞的miR-496水平和S期细胞比例均显著升高,而增殖水平、迁移和侵袭细胞数均显著降低（均P<0.01）。成功构建宫颈癌裸鼠移植瘤模型,接种21 d后,miR-496 mimic组移植瘤质量、移植瘤组织中mTOR和Ki67的表达水平均显著低于对照组（均P<0.01）。结论：miR-496在宫颈癌组织中呈低表达,miR-496过表达可通过靶向调控mTOR抑制HeLa细胞的恶性生物学行为和裸鼠移植瘤的生长。     

下调Beclin1 抑制卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的：探究敲减Beclin1 表达对卵巢癌细胞A2780 对顺铂耐药的影响及其相关机制。方法：以Western blotting 及qPCR 检测卵巢癌细胞株A2780 及耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 的表达情况；A2780/DDP 细胞转染Beclin1 siRNA 后，用MTT法检测细胞对顺铂敏感性的变化，克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成情况，流式细胞术检测各组细胞的凋亡，MDC荧光染色检测细胞的自噬情况，Western blotting 检测自噬相关蛋白、溶酶体相关膜蛋白Lamp-2 以及组织蛋白酶Cathepsin B的表达情况。结果：顺铂耐药细胞株A2780/DDP 中Beclin1 mRNA及蛋白的表达水平均明显高于A2780 细胞株（均P<0.05），在A2780细胞中加入顺铂刺激后Beclin1 蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）。敲减Beclin1 表达可促进顺铂诱导的A2780/DDP 细胞的凋亡（P<0.05）、抑制细胞自噬的发生（P<0.05）、减少细胞克隆形成（P<0.05）和增加细胞对顺铂的敏感性（P<0.05）；Western blotting结果显示，敲减Beclin1 可上调A2780/DDP 细胞中cleaved-caspase 3 和Cathepsin B的蛋白水平，下调Atg3、Atg7、LC3Ⅱ/Ⅰ、Lamp-2的表达水平（均P<0.05）。结论：敲减Beclin1 表达可提高A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调节自噬相关蛋白表达抑制细胞保护性自噬和影响溶酶体功能，从而促进顺铂诱导耐药细胞凋亡有关。     

芹菜素诱导胃癌SGC-7901细胞自噬及其对凋亡 的影响

目的：探讨芹菜素（API）是否诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬及其对细胞凋亡的影响。方法：采用不同浓度（0、20、40、60、80 μmol/L）的API处理胃癌SGC-7901细胞24 h,MTT法检测API对细胞生长的抑制情况。分别采用不同浓度（0、20、40、60、80 μmol/L）API处理细胞24 h,及60 μmol/L的API处理不同时间（0、12、24、36、48 h）,Western blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3（LC3）、Beclin-1和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/Akt/mTOR信号通路中关键分子p-Akt、p-mTOR的表达;电子显微镜下观察细胞自噬情况。细胞经自噬抑制剂氯喹（CQ）或3-甲基腺苷（3-MA）预处理后再加入API,Western blot检测聚二磷酸腺苷-核糖体聚合酶（PARP）的表达;流式细胞术流检测细胞凋亡率。结果：API对胃癌SGC-7901细胞生长具有明显抑制作用并呈剂量-效应关系。随着API浓度和作用时间的增加,SGC-7901细胞LC3Ⅱ与Beclin-1蛋白表达均增加,各剂量组与对照组相比较差异均具有统计学意义（P < 0.05）;API处理后的细胞逐渐出现自噬囊泡和自噬溶酶体;p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低。采用自噬抑制剂抑制细胞自噬后,除API组LC3Ⅱ与Beclin-1蛋白表达明显高于对照组外（P < 0.05）,各组蛋白表达无显著差异。API+CQ组和API+3-MA组的PARP蛋白剪切片段表达及凋亡率均高于对照组和API组（P < 0.05）。结论：API可以诱导胃癌SGC-7901细胞发生自噬,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子p-Akt、p-mTOR活性有关;抑制API诱导的自噬能够增强API的凋亡诱导效应,从而增强对胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用。     

奥沙利铂联合山柰酚动脉介入治疗抑制肺癌移植瘤大鼠肿瘤生长

目的:考察奥沙利铂（oxaliplatin）联合山柰酚（kaempferol）动脉介入治疗对裸大鼠肺癌移植瘤的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:皮下接种A549肺癌细胞,将裸大鼠分为对照组、奥沙利铂静脉注射组、奥沙利铂联合山柰酚静脉注射组,和奥沙利铂联合山柰酚动脉介入治疗组。研究考察不同给药方式对实体瘤生长、对大鼠体重的影响。利用免疫荧光染色、Hoechst染色及免疫印迹法（western blot,WB）考察瘤组织细胞凋亡水平。结果:首先相比对照组,奥沙利铂静脉注射抑制实体瘤生长,相比奥沙利铂静脉注射组,奥沙利铂静脉注射联合山柰酚对实体瘤生长没有明显抑制作用,奥沙利铂动脉介入治疗联合山柰酚显著抑制实体瘤生长。其次山柰酚能逆转奥沙利铂对大鼠的体重抑制作用。最后,静脉注射治疗下,山柰酚能促进奥沙利铂对细胞凋亡的诱导作用,而动脉介入治疗更显著地促进药物联用引起的细胞凋亡作用。结论:奥沙利铂联合山柰酚动脉介入治疗可以显著抑制裸大鼠肺癌移植瘤生长并促进细胞凋亡。     

三七皂苷R1调控PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人下咽鳞状细胞癌FaDu细胞凋亡和自噬北大核心

目的:探讨三七皂苷R1(notoginsenoside R1,NGR1)对人下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)FaDu细胞凋亡以及自噬的影响,并对其涉及的信号通路进行研究。方法:75μmol/L、150μmol/L、300μmol/L NGR1作用于FaDu细胞24 h后,采用MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;自噬双标腺病毒检测自噬流;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ以及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果:NGR1能够抑制FaDu细胞的增殖并促进细胞凋亡;NGR1可诱导FaDu细胞自噬,并呈一定浓度依赖性;Western blot结果显示,NGR1作用于Fa Du细胞24 h后,LC3Ⅱ表达明显增加,而p-PI3K、p-AKT、p-m TOR表达相较于Control组明显下降。结论:NGR1可抑制Fa Du细胞增殖,诱导细胞凋亡与自噬,其机制可能与抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路有关。     

Tiam1蛋白表达介导PI3K/Akt/mTOR信号通路对老年胰腺癌细胞转移、侵袭的影响

目的 探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导基因(Tiam1)蛋白表达介导PI3K/Akt/mTOR信号通路对老年胰腺癌细胞转移、侵袭的影响。方法 选择行手术确诊的老年胰腺癌患者106例，收集其癌组织标本及配对癌旁正常组织，Western Blot法检测胰腺组织Tiam1蛋白表达；选择人胰腺癌细胞株SW1990,采用浓度为50 ng/mL的HGF溶液和生理盐水处理并作为HGF组和空白组，转染Tiam1 minic作为Tiam1组，CCK8法、Transwell小室侵袭实验、划痕实验检测转染后胰腺癌细胞增殖、侵袭和转移能力；Western Blot法检测胰腺组织PI3K/Akt/mTOR相关蛋白表达，明确Tiam1蛋白表达与PI3K/Akt/mTOR信号通路的关系。结果 胰腺癌组织中Tiam1表达量高于癌旁组织中Tiam1表达量(P<0.05)。各组在转染0 h、12 h时细胞增殖率比较无明显差异(P>0.05),转染24 h、48 h、60 h时，与空白组比较，Tiam1组和HGF组细胞增殖率升高，且Tiam1组高于HGF组(P<0.05);与空白组比较，Tiam1组和HGF组侵袭...     

贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

目的：探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法：利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果：贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力（P<0.01）,诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞（P<0.01）,降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平（均P<0.01）。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙（0.75 mg/kg）显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织...