氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活

目的研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用,为癫痫的治疗提供实验依据。方法分离新生SD大鼠海马,体外培养星形胶质细胞,经纯化鉴定后分为:对照组、戊四氮(PTZ)组、氯喹干预组(25、50和75 mg/L),经相应处理后,分别用MTT法、免疫荧光、Western blot测定星形胶质细胞数量及活性、星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及CyclinD1的表达量。结果与对照组比较,PTZ可激活星形胶质细胞的增殖,使GFAP、CyclinD1的表达量增加(P<0.05);与PTZ组比较,氯喹阻滞了PTZ激活的星形胶质细胞的增殖(P<0.05);氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞异常增加的GFAP的表达;氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞的CyclinD1的表达量(P<0.05);与对照组相比,3种结果均显示75 mg/L氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强,并可维持其在正常范围。结论氯喹具有抑制PTZ激活体外培养星形胶质细胞的作用,其可能通过抑制星形胶质细胞的增殖来发挥抗癫痫作用。     

氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用

  目的 研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用,为癫痫的治疗提供实验依据。方法 分离新生SD大鼠海马,体外培养星形胶质细胞,经纯化鉴定后分组：a 对照组;b 戊四氮（PTZ）组;c 氯喹干预组（25mg、50mg、75mg/L）,经相应处理后,分别运用MTT法、免疫荧光、western-blot测定星形胶质细胞数量及活性、星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及CyclinD1的表达量,并分析比较各组星形胶质细胞激活情况。结果 与b组比较,MTT法显示氯喹阻滞了PTZ激活的星形胶质细胞的增殖（P<0.05）;免疫荧光结果显示,氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞异常增加的GFAP的表达;western-blot结果显示氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞的CyclinD1的表达量（P<0.05）;与a组比较,3种结果均显示75mg/L氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强,并可维持其在正常范围。结论 氯喹具有抑制PTZ激活体外培养星形胶质细胞的作用,其可能通过抑制星形胶质细胞的增殖来发挥抗癫痫作用。     

三七总皂苷抑制星形胶质细胞活化改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为

目的 :观察三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为以及海马星形胶质细胞(AST)活化的影响。方法 :将小鼠随机分为生理盐水(NS)组、LPS组、PNS+LPS组。利用喷糖实验、糖水偏好实验及强迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为,免疫组织化学显色观察胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化,免疫印迹检测海马GFAP、乙醛脱氢酶1蛋白家族L1(ALDH1L1)的表达变化,荧光定量PCR检测海马GFAP和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达。结果 :与NS组相比,LPS组舔糖潜伏期延长、糖水偏好百分比下降、强迫游泳不动时间增加,PNS预处理可逆转上述抑郁样行为;与NS组相比,LPS组海马GFAP阳性细胞数目增加,GFAP及ALDH1L1蛋白表达上调,GFAP及TNF-αmRNA表达上调,PNS预处理均可减少GFAP、ALDH1L1及TNF-α的表达;结论 :三七总皂苷可能通过抑制星形胶质细胞活化,改善脂多糖导致的小鼠抑郁样行为。     

miR-301a-3p对大鼠星形胶质细胞Cx43转录后的靶向调控作用

目的:研究大鼠星形胶质细胞中微小RNA-301a-3p(miR-301a-3p)对缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的靶向调控作用及其作用位点。方法:合成miR-301a-3p agomir和miR-301a-3p antagomir,转染至星形胶质细胞,Western blot检测各组细胞中Cx43蛋白的表达情况;构建重组载体wt-pEZX-MT05-Cx43和mut-pEZX-MT05-Cx43,采用双萤光素酶报告基因实验验证miR-301a-3p的靶基因;构建表达载体pcDNA3.1-Cx43,通过回复实验分析miR-301a-3p对细胞凋亡的影响。结果:将miR-301a-3p agomir转染到星形胶质细胞后,Western blot检测显示,与对照组相比,Cx43蛋白表达显著降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果表明,miR-301a-3p能够与Cx43的3′-UTR结合,对其表达产生负调控;将不含Cx43 3′-UTR的重组载体pcDNA3.1-Cx43转染星形胶质细胞后,能够回复miR-301a-3p对Cx43蛋白表达的负调控作用,引起细胞凋亡。结论:Cx43是miR-301a-3p的一个靶基因,miR-301a-3p通过作用于Cx43 mRNA的3′-UTR而抑制其在大鼠星形胶质细胞中的表达。     

雷公藤多甙对大鼠海马内注射β-淀粉样蛋白后星形胶质细胞增生的影响

目的：探讨大鼠海马内注射v淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)后海马星形胶质细胞表达GFAP的变化及雷公藤多甙(TWP)对其的影响。方法：在大鼠左侧海马定向注射Aβ1-40作为Aβ组，注射生理盐水作为对照组，雷公藤多甙腹腔注射治疗海马内注入了Aβ1-40的大鼠为TWP组。用免疫组织化学方法观察各组大鼠海马星形胶质细胞GFAP的表达。结果：Aβ组海马星形胶质细胞增生、肥大，GFAP阳性细胞数增多，细胞截面积明显增大。TWP组星形胶质细胞数较Aβ组减少，并且细胞截面积明显缩小。结论：雷公藤多甙能抑制Aβ诱导的海马星形胶质细胞的反应性增生。     

布洛芬对戊四氮点燃癫痫大鼠星形胶质细胞的影响

目的:探讨不同剂量布洛芬对戊四氮(PTZ)点燃癫痫大鼠的影响及其作用机制。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、PTZ组和PTZ+布洛芬组(按布洛芬剂量分为4组),分别对其进行干预,观察记录各组大鼠行为学及脑电图变化,同时观测布洛芬的不良反应,采用免疫荧光染色及Western Blot检测GFAP的表达情况。结果:PTZ组与对照组相比,痫样发作和星形胶质细胞增生明显(P 0. 05); PTZ+布洛芬各组痫样发作和星形胶质细胞增生情况较PTZ组降低,且剂量越高抑制作用越明显(P 0. 05),但不良反应的发生也越多。结论:布洛芬可通过抑制星形胶质细胞增生影响癫痫发作,且剂量越高抑制作用越强,但其不良反应也随剂量的增加而增加。     

低渗刺激后大鼠视上核星形胶质细胞释放牛磺酸调节神经元的活动

目的:观察低渗刺激大鼠后,视上核(SON)内星形胶质细胞调节神经元活动的机制。方法:大鼠分为4组:(1)等渗对照组,经尾静脉注入生理盐水;(2)低渗刺激组,经尾静脉注入低渗盐水(0.83%葡萄糖+0.3%NaCl);(3)氟代柠檬酸(胶质细胞代谢抑制剂,fluorocitrate,FCA)+低渗刺激组,经侧脑室注射FCA(1 nmol/μl/只)2 h后,再经尾静脉注入低渗盐水;(4)甘珀酸(缝隙连接通道阻断剂,carbennoxolon,CBX)+低渗刺激组,经侧脑室注射CBX(50μg/只,10μg/lμl)2 h后,再经尾静脉注入低渗盐水。各组动物刺激后90 min,常规固定、取材、下丘脑连续冠状切片。应用抗牛磺酸(taurine,Tau)、抗加压素(vasopressin,VP)、抗甘氨酸受体(glycine recep-tor,GlyR)、抗缝隙连接蛋白(connexin43,Cx43)的抗体进行标记,以及Fos/胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)双标记的免疫荧光染色方法,观察其在SON神经元和星形胶质细胞内的表达。结果:与对照组相比,低渗刺激组大鼠,SON内星形胶质细胞的胞体增大、突起变粗;Tau,Cx43和GFAP的平均荧光强度(MFI)增强,神经元上的GlyR表达增强,但VP和Fos的表达减弱。FCA,而不是CBX,明显减少星形胶质细胞的Tau,GFAP,Cx43的表达。FCA和CBX均可抑制神经元上的VP、GlyR、Fos阳性反应。结论:低渗刺激激活SON内星形胶质细胞,被激活的星形胶质细胞经Cx43半通道释放牛磺酸而抑制神经元的活性,减少VP的释放。     

慢性束缚应激对小鼠海马星形胶质细胞表型转换及抑郁样行为的影响

目的 探讨慢性束缚应激(CRS)对小鼠海马星形胶质细胞表型转换及抑郁样行为的影响。方法 48只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组(control)、模型组(CRS)、氟西汀(FLX)药物干预组(CRS+FLX),每组各16只。慢性束缚应激3周建立抑郁小鼠模型，应激的第8天至第21天，CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射FLX(10 mg/kg),control组及CRS组注射等体积生理盐水。采用旷场实验以及糖水偏好实验检测各组小鼠行为变化；采用免疫组织化学法和Western blotting检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达；Real-time PCR检测海马A1和A2型星形胶质细胞标记物的表达。结果 与control组相比，CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为，包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.0001),体重明显较低(P<0.05),旷场实验在中央区域活动的距离明显降低(P<0.0001),FLX干预可逆转CRS所诱导的抑郁样行为表现(P<0.05);与control组相比，CRS组小鼠海马星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(...     

鞘内注射甘珀酸降低CX43的表达对大鼠镜像痛的影响

目的:研究大鼠脊髓星形胶质细胞CX43的表达变化及对镜像痛的影响。方法:96只SD大鼠随机分为四组:Sham组,SNI组,SNI+NS组,SNI+CBX组,每组24只。各组分别于术前l d、术后3、7、10、l4和21 d观察大鼠疼痛行为学变化,其中Sham组,SNI组于术后14 d采用免疫组化法分析缝隙连接蛋白43(Cx43)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;SNI+CBX组于术后第5~9 d鞘内注射甘珀酸10μl(20μg),SNI+NS组注射等量生理盐水,并于术后10、14和21 d三个时间点采用Western Blot的方法检测脊髓内CX43蛋白表达情况,采用免疫组化法分析GFAP的表达变化情况。结果:SNI组与Sham组相比,行为学上大鼠双侧机械缩足阈值降低,脊髓星形胶质细胞CX43及GFAP表达增加(P0.05);SNI+CBX组与SNI+NS组相比,Western Blot显示CX43表达降低,免疫组化显示脊髓背角双侧GFAP表达降低(P0.05),术后14 d,21 d大鼠双侧机械缩足阈值升高。结论:鞘内注射甘珀酸降低CX43的表达可抑制星形胶质细胞的活化,并缓解大鼠双侧的机械痛。     

姜黄素对缺氧下大鼠星型胶质细胞的影响及机制研究

目的：探讨姜黄素对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及JAK2/STAT3信号通路的影响。方法：从大鼠大脑皮层分离培养星形胶质细胞,姜黄素干预缺氧条件星形胶质细胞,AG490作为JAK2/STAT3信号通路抑制剂,细胞缺氧处理24 h后,通过MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、JAK2/STAT3信号通路磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2（p-JAK2）及磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果：与对照组比较,缺氧组细胞活力显著升高,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著升高（P<0.05）;与缺氧组比较,缺氧+姜黄素组胞活力显著降低,凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）;与缺氧+姜黄素组比较,缺氧+姜黄素组+AG490组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论：姜黄素可降低缺氧下大鼠星型胶质细胞活力,抑制细胞凋亡,其机制与JAK2/STAT3信号通路有关。     

低渗刺激下大鼠视上核星形胶质细胞对神经元反应的调控机制

目的观察低渗刺激后大鼠视上核(SON)星形胶质细胞对神经元反应的调节机制,以及牛磺酸拮抗剂(TAG)和缝隙连接阻断剂-甘珀酸(CBX)对反应的影响。方法成年SD大鼠20只,对照组经尾静脉注射0.9%盐水;低渗组经尾静脉注射低渗盐水(0.83%葡萄糖 0.3%NaCl);TAG 低渗组和CBX 低渗组分别经侧脑室注射TAG或CBX,2h后经尾静脉注射低渗盐水。常规固定取材制片。切片进行抗Fos、抗加压素(VP)、抗甘氨酸受体(GlyR)、抗胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、抗缝隙连接蛋白43(Cx43)免疫荧光染色,镜下观察在视上核神经元和星形胶质细胞的表达。结果低渗组视上核星形胶质细胞的GFAP和Cx43表达高于对照组,GlyR阳性神经元较对照组多,Fos和VP阳性神经元较对照组少;TAG 低渗组和CBX 低渗组,星形胶质细胞的反应同低渗组,而GlyR阳性神经元较低渗组少,VP-、Fos-阳性神经元较低渗组均有所增加。结论低渗刺激激活视上核星形胶质细胞,被激活的星形胶质细胞可能经缝隙连接释放牛磺酸而抑制神经元,减少VP的释放,此过程可被TAG和CBX所阻断。     

Cx43沉默对机械应力作用下调控的软骨细胞自噬介导软骨基质合成的影响

目的:探究机械应力作用下通过沉默缝隙连接蛋白43(Cx43)调控软骨细胞自噬对软骨细胞的基质代谢的影响。方法:对小鼠成软骨细胞系ATDC5加载机械应力,采用q PCR和Western blot法检测ATDC5细胞中Cx43的mRNA和蛋白表达。将细胞分为空白对照组、机械应力组、Cx43 siRNA转染组、scramble siRNA转染组、机械应力+scramble siRNA转染组、机械应力+Cx43 siRNA转染组和机械应力+Cx43 siRNA转染+3-MA组,CCK-8法检测细胞活力,q PCR检测软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达,1,9-二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测细胞糖胺多糖(GAG)含量,Western blot法检测自噬相关蛋白beclin 1和LC3的表达。结果:机械应力刺激下,ATDC5细胞Cx43表达上调,细胞活性显著降低,II型胶原mRNA表达降低,GAG含量减少,beclin 1和LC3-II/LC3-I蛋白表达降低(P 0. 05)。转染Cx43 siRNA可下调Cx43的mRNA和蛋白的表达。机械应力作用下,Cx43沉默显著增强软骨细胞活力,提高II型胶原的mRNA表达和GAG含量,上调beclin 1和LC3-II/LC3-I的蛋白表达(P 0. 05)。此外,自噬抑制剂3-MA处理后,Cx43沉默对机械应力下软骨细胞的保护作用受到抑制。结论:Cx43沉默通过促进机械应力作用下小鼠软骨细胞自噬,从而促进软骨细胞的合成代谢,减轻软骨细胞在机械应力下的损伤。     

TRPC6在IL-1β诱导类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖中的作用

目的:应用RNA干扰技术研究瞬时受体电位通道6(TRPC6)对IL-1β诱导的类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的影响。方法:RT-qPCR法检测RA和骨关节炎(OA)患者滑膜组织中TRPC6 mRNA的表达水平。组织块联合酶消化法培养RA-FLS。流式细胞术鉴定RA-FLS。将不同浓度(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16μg/L)的重组人IL-1β与RA-FLS共培养36 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;16μg/L的IL-1β作用RA-FLS不同时间(12、24、36、48、60、72 h),CCK-8法检测细胞活力的改变。特异性TRPC6-siRNA转染RA-FLS后,采用RT-qPCR和Western blotting检测沉默效率。在IL-1β存在和不存在的条件下,CCK-8法、Ed U标记法和流式细胞术检测TRPC6干扰组与对照组的细胞活力、Ed U阳性细胞比率和(G_2/M+S)期比率的差异。结果:RA患者滑膜组织中TRPC6的mRNA表达水平相对于OA患者明显增加(P0.05)。TRPC6-siRNA能显著降低RA-FLS中TRPC6 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。IL-1β能诱导RA-FLS增殖(P0.05)。沉默TRPC6后,在IL-1β的诱导环境下,特异性干扰组RA-FLS的活力、Ed U阳性细胞比率和(G_2/M+S)期比率与空白组和对照组相比均明显降低(P0.05),而在不含IL-1β的条件下,干扰组与空白组和对照组相比差异均无统计学显著性。结论:TRPC6参与IL-1β诱导的RA-FLS增殖过程,沉默TRPC6能降低IL-1β诱导的RA-FLS增殖水平。     

白藜芦醇预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺/再复氧损伤后活化及炎症反应的影响

目的 探讨白藜芦醇预处理对体外氧糖剥夺/再复氧(OGD/R) 损伤后星形胶质细胞活化及炎症反应的影响。方法 征集20只新生SD大鼠（生后24 h内）,将其原代分离培养的大脑皮层星形胶质细胞行氧糖剥夺150 min,再复氧培养24 h。实验分为正常组(Nor)、对照组(Ctrl) 和白藜芦醇预处理组(Res)。 CCK-8法检测细胞活力,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖,免疫荧光染色法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、S100β蛋白表达,Western blotting 检测GFAP、S100β、波形蛋白(vimentin)、白细胞介素（IL）-10、β干扰素（IFN-β）、肿瘤坏死因子α(TNF-α）和 IL-1β蛋白表达,ELISA法检测IL-10、IFN-β、TNF-α和IL-1β蛋白含量。结果 CCK-8法检测结果显示,随着白藜芦醇浓度（5、20、40 μmol/L）的增高,细胞活力逐渐增高,且与对照组差异有显著性（P<0.01）,以40 μmol/L组细胞活力最强。之后随白藜芦醇浓度(80、100 μmol/L) 的增高,细胞活力显著降低,以100 μmol/L组细胞活力最弱 (P<0.05)。EdU检测显示,在OGD/R损伤后,对照组和白藜芦醇组显著高于正常组EdU阳性细胞比例(P<0.01),而白藜芦醇组显著低于对照组 (P<0.01)。免疫荧光染色、Western blotting和ELISA法显示,对照组和白藜芦醇组GFAP、S100β、vimentin、IL-10、IFN-β、TNF-α和IL-1β 蛋白表达或含量显著高于正常组(P<0.05),但白藜芦醇组除 IL-10 和IFN-β蛋白表达或含量较对照组增高外,其余均低于对照组(P<0.05)。结论 白藜芦醇预处理可抑制 OGD/R 后体外星形胶质细胞的活化,并减轻炎症反应。     

缝隙连接在TGF-β1 诱导的自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨缝隙连接是否参与转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养SHR胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组:对照组、TGF-β₁组、缝隙连接阻断剂18α-甘草次酸(18α-GA)组和TGF-β₁+18α-GA组。MTT法及流式细胞术检测细胞的增殖活性,免疫荧光技术观察细胞中缝隙连接蛋白(Cx)43和Cx40蛋白表达及定位,Western blotting法检测细胞中Cx43和Cx40蛋白表达, 染料示踪分子传递法(划痕标记染料传输法)检测细胞的缝隙连接功能。结果: (1)与对照组相比,TGF-β₁组MTT法测得A值及细胞周期S期比例增高 (P<0.05),细胞增殖活性增强。18α-GA组降低(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+ 18α-GA组A值及S值比例均降低(P<0.05),细胞增殖活性减弱。(2)免疫荧光技术检测细胞中Cx43与Cx40蛋白表达呈阳性,两者共定位于胞浆。(3)与对照组相比,TGF-β₁组Cx43蛋白表达增强(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05),18α-GA组Cx43和Cx40表达均减弱(P<0.05),与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组Cx43表达减弱(P<0.05),Cx40表达无显著差异(P>0.05)。(4)与对照组相比,TGF-β₁组缝隙连接功能明显增强(P<0.05);18α-GA组缝隙连接功能明显减弱(P<0.05);与TGF-β₁组比,TGF-β₁+18α-GA组缝隙连接功能显著降低(P<0.05)。结论: TGF-β₁主要通过上调SHR血管平滑肌细胞Cx43蛋白表达,引起缝隙连接通讯功能增强,从而促进了SHR血管平滑肌细胞的增殖,而Cx40蛋白表达可能不起主要作用。     

桉叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法 SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA)。正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7~14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。桉叶油3个剂量组于孕第7~14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达。Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达。阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙。结果维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最低值分别为55%(桉叶油高剂量+RA组)和45.8%(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P0.05)。在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最高值分别为62.5%(桉叶油低剂量+RA组)和55.0%(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7%,73.7%)和溶剂对照组低(68.2%,63.6%,P0.05)。与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用。其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关     

莪术醇通过上调miR-214抑制TGF-β诱导的RL-95细胞生长及纤维化相关蛋白表达

目的:探讨莪术醇对转化生长因子β(TGF-β)诱导的子宫内膜癌RL-95细胞生长及纤维化相关蛋白表达的影响,并探讨其机制是否与调控微小RNA-214(miR-214)表达有关。方法:以TGF-β诱导RL-95细胞纤维化作为子宫内膜异位症细胞模型。设置对照(control)组、TGF-β组、TGF-β+低剂量莪术醇组、TGF-β+中剂量莪术醇组、TGF-β+高剂量莪术醇组、TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-NC组和TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-214组。运用CCK-8法、流式细胞术、RT-qPCR和Western blot检测细胞活力、细胞周期分布、miR-214表达以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(Col I)蛋白表达。结果:与control组比较,TGF-β组RL-95细胞活力、S期细胞比例及α-SMA和Col I蛋白表达显著升高,G₀-G₁期细胞比例和miR-214表达显著降低(P<0.05)。与TGF-β组比较,TGF-β+中剂量莪术醇组和TGF-β+高剂量莪术醇组RL-95细胞活力、S期细胞比例及α-SMA和Col I蛋白表达显著降低,G₀-G₁期细胞比例和miR-214表达显著升高(P<0.05)。与TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-NC组比较,TGF-β+高剂量莪术醇+anti-miR-214组RL-95细胞活力、S期细胞比例及α-SMA和Col I蛋白表达显著升高,G₀-G₁期细胞比例显著降低(P<0.05)。结论:莪术醇通过上调miR-214表达抑制TGF-β诱导的RL-95细胞生长和纤维化相关蛋白表达,进而对子宫内膜异位症纤维化具有潜在治疗作用。     

高渗刺激诱导大鼠视上核与孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体反应

目的 探讨大鼠接受高渗刺激后,视上核和孤束核内神经元-星形胶质细胞复合体(N-ASC)反应.方法 成年雄性SD大鼠50只,随机分为光镜组(n=40)和电镜组(n=10).采用多重免疫荧光标记法,在光镜下观察高渗刺激(9%氯化钠,5.5ml/kg尾静脉注射)后15、45、90和180 min,视上核内胶质纤维酸性蛋白(GFAP,标记星形胶质细胞)、催产素(OXT,标记视上核神经元)、Fos(标记神经元胞核)和孤束核内GFAP、酪胺酸羟化酶(TH,标记神经元)、Fos表达的时程变化.采用双重免疫电镜法,观察高渗刺激后视上核N-ASC内星形胶质细胞(用Cx43标记)与神经元(用Cx32标记)之间接触处的超微结构.结果光镜下在视上核和孤束核可分别观察到3种N-ASC,即:由 GFAP阳性星形胶质细胞与 OXT(或TH)阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos阳性神经元形成的N-ASC;由GFAP阳性星形胶质细胞与Fos和OXT(或TH)双阳性神经元形成的N-ASC.高渗刺激后 N-ASC的数量明显增加.抗Cx43和抗Cx32的双重免疫电镜显示,高渗刺激后Cx43阳性星形胶质细胞突起(即Cx43半通道)以及Cx32和Cx43形成的异型缝隙连接(HGJ)的数量明显增加.结论视上核和孤束核内的N-ASC参与渗透压调节反应.