传统细菌培养法与荧光PCR法分离公共场所嗜肺军团菌结果比较

目的:对公共场所环境样本(水、土壤、气溶胶)进行嗜肺军团菌监测,掌握南京市公共场所中军团菌的污染情况和菌型分布。方法:对12家商场、医院中央空调系统采集水样(冷却水、景观水、淋浴水、自来水),土壤类样品(背景土、花卉土、风管积尘、景观土),采用传统细菌培养法及荧光PCR法进行嗜肺军团菌的分离鉴定。结果:12家单位共采样234份(水样88份、土壤146份),传统细菌培养法检出嗜肺军团菌9份(主要类型为Lp1型),检出率为3.85%;而实时荧光PCR法检出47份阳性(主要类型为Lp1型),检出率为20.08%。两者检出阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:南京市公共场所存在嗜肺军团菌污染,荧光PCR法总检出率明显高于传统细菌培养法,荧光PCR方法较培养法灵敏性较好。     

2011—2014年苏南某市公共场所集中空调水系统嗜肺军团菌污染状况分析

目的了解苏南某市公共场所集中空调水系统嗜肺军团菌污染的状况。方法依照原卫生部2006年《公共场所集中空调通风系统卫生规范》(WS 394-2012)附录A和附录B中嗜肺军团菌检验方法进行检测。结果 2011—2014年共调查集中空调水系统公共场所单位98家,不同年份集中空调水系统清洗消毒情况差异有统计学意义(χ~2=8.659,P<0.05),共采集空调系统冷却水和冷凝水样179份,嗜肺军团菌阳性率22.9%,分别为2011年30.4%、2012年36.4%、2013年9.7%,2014年无嗜肺军团菌检出,不同年份水样中嗜肺军团菌阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。宾馆的101份水样中,冷却水、冷凝水嗜肺军团菌阳性率分别为19.2%、28.6%;商场/超市的78份水样中,冷却水、冷凝水嗜肺军团菌阳性率分别为21.9%、35.7%,不同类别场所的冷却水和冷凝水中嗜肺军团菌阳性率差异均无统计学意义(P>0.05)。冷却水137份,冷凝水42份,嗜肺军团菌阳性率分别为20.4%、31.0%,阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 2014年和2013年公共场所集中空调水系统嗜肺军团菌阳性率较2011年和2012年有显著降低,但仍存在一定的健康安全隐患,应继续加强集中空调卫生管理。     

基于便携式荧光定量PCR仪的兔病毒性出血症病毒现场检测方法的建立及应用

为建立兔病毒性出血症病毒免疫荧光PCR检测方法,参照GenBank中兔病毒性出血症病毒基因组序列,设计特异引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了能检测兔病毒性出血症病毒的荧光PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果表明,该方法检测兔病毒性出血症病毒灵敏度可达1.38LD_(50)·100μL~(-1),该法对兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌、兔沙门氏菌、兔水疱性口炎病毒(RVSTV)和兔轮状病毒(RRV)的检测结果均为阴性。试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法可对兔病毒性出血症进行现场快速鉴别诊断,为兔病毒性出血症的诊断及防控工作奠定了基础。     

公共场所空气中嗜肺军团菌污染与从业人员感染率相关性研究

目的探讨公共场所空气中嗜肺军团菌浓度与从业人员感染率的关系。方法 2013年—2014年,随机选取江苏常州市和无锡市7家公共场所,采集空气样本,荧光定量PCR法检测样品中的嗜肺军团菌。同时,采集280名公共场所从业人员尿和血清样本,酶联免疫吸附法检测尿中嗜肺军团菌抗原和血清嗜肺军团菌抗体。结果共采集70份空气样本,嗜肺军团菌阳性率为30.0%(21/70)。共调查280名从业人员,嗜肺军团菌感染率40.7%(114/280)。不同城市(χ~2=10.000,P=0.002)和不同场所间(χ~2=13.213,P=0.031)空气中嗜肺军团菌阳性率差异有统计学意义。不同城市(χ~2=85.371,P=0.000)和不同场所间(χ~2=91.471,P=0.000)从业人员嗜肺军团菌感染率差异有统计学意义。公共场所空气中嗜肺军团菌浓度和从业人员感染率之间相关性有统计学意义(r=0.857,P=0.014)。结论公共场所空气中嗜肺军团菌浓度与从业人员感染率间存在相关性。     

中山市公共场所集中空调系统冷却塔水嗜肺军团菌污染调查

目的对中山市公共场所集中空调系统冷却塔水嗜肺军团菌污染现状及冷却塔卫生状况开展调查,为有效控制军团菌污染提供依据。方法于2014年6—11月随机采集中山市43家公共场所集中空调系统冷却塔水82份,进行嗜肺军团菌检测,对冷却塔卫生状况进行问卷调查。结果 43家公共场所中有8家检出嗜肺军团菌,总检出率为18.6%。不同类型公共场所、集中空调系统使用年限、冷却塔清洗周期和冷却塔水是否消毒对嗜肺军团菌检出率影响均无统计学意义(P>0.05);冷却塔水水质有定期检测的嗜肺军团菌检出率为10.0%,未定期检测的嗜肺军团菌检出率为41.7%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论中山市公共场所集中空调系统冷却塔水存在嗜肺军团菌污染,应加强冷却塔设计安装的监督力度,规范冷却塔及水质清洗消毒的方法和程序,采取综合措施降低嗜肺军团菌污染的危险。     

实时荧光定量PCR检测2-MIB合成基因及与产嗅藻的相关性研究

采集了3个水库的水样,使用新型检测技术——定量PCR探针法对合成2-MIB的基因(mibC)进行检测,并对水样同步进行产嗅藻丰度检测,分析两者之间的相关性。研究表明,mibC基因拷贝数与产嗅藻丰度具有明显的线性关系,相关系数在0.736～0.819之间。可通过定量PCR探针法检测的mibC基因拷贝数来反映水体中产嗅藻的丰度水平,进而判断水体异味风险水平。     

斑点叉尾鮰肠败血症PCR诊断方法的建立

为了建立快速、敏感的聚合酶链式反应(PCR)诊断斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus的肠败血症技术,作者根据NCB I公布的鮰爱德华氏细菌序列,设计了一对特异性诊断引物CM3/CM4,对鮰爱德华氏细菌特异基因片段进行PCR扩增试验,PCR反应条件的优化以及不同检测材料的比较,同时测试了该方法的特异性和敏感性,并对广西4个市县临床样品进行了检测。结果表明:用该引物可以扩增到与预计大小相符的276 bp鮰爱德华氏菌特异性片段;PCR反应与Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河弧菌、迟缓爱德华氏菌及海豚链球菌无交叉反应;用该PCR法可以检测出病鱼脑、肝、肾及脾中的病原菌,检测的最低细菌数为12个,且病鱼内脏组织、菌落及菌液均可直接用于该PCR扩增;临床菌株检测结果与基于菌株16S rRNA基因序列系统进化分析和生化鉴定结果一致。因此,本试验中所建立的PCR检测方法在斑点叉尾鮰肠败血症的诊断和防治方面具有较好的应用前景。     

实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼IgM mRNA方法的建立

根据剑尾鱼Xiphophorus helleri IgM和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从注射免疫后的剑尾鱼头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR Green I染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明:构建的剑尾鱼IgM和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为7²1和821和8²5,扩增效率分别为2.025、1.970;融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.43℃、86.09℃,表明扩增产物特异性非常好。本实验中建立的剑尾鱼IgM基因实时荧光定量PCR方法可用于对剑尾鱼IgM基因的转录水平进行测定。     

FQ-PCR检查痰中结核杆菌对肺结核诊断的临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测痰中结核分枝杆菌对诊断肺结核的临床价值。方法选择2007年4月～2010年1月在我院感染科治疗的100例确诊肺结核患者和100例非结核性呼吸道疾病患者,所有患者均分别用FQ-PCR、痰涂片和Bactec MGIT 960结核杆菌快速培养法进行痰结核杆菌检测,比较分析检测结果。结果检测100例确诊肺结核患者的痰标本,FQ-PCR检出率最高(55%),高于快速培养法(43%)(P<0.05)和痰涂片法(29%)(P<0.01)。以痰培养为标准,FQ-PCR对痰菌检测的敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值分别为97.8%、93.5%、80.0%和99.3%;FQ-PCR与痰培养法的一致性为94.0%(188/200)。结论FQ-PCR是检查痰中结核杆菌快速、敏感、特异、可定量、简便的方法,值得临床推广用于肺结核诊断,可作为结核杆菌培养法的有效补充。     

集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况与防控措施

目的了解上海市金山区集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况,探讨其有效防控措施。方法选取金山区安装开放式冷却塔的集中空调使用单位16家,现场调查冷却水消毒情况,并于2012年5—10月,每月采集冷却水样1次,进行嗜肺军团菌的培养与检测。结果金山区集中空调冷却水中嗜肺军团菌检出率为26.2%,血清型以LP1型为主,占68.2%。7、8、9月,空调冷却水中嗜肺军团菌检出率较高,分别为43.8%、37.5%、50%。在不做消毒处理、人工定期消毒和机械持续加药消毒的情况下,空调冷却水中嗜肺军团菌的检出率分别为58.3%、26.7%和0%。结论金山区集中空调冷却水存在一定程度嗜肺军团菌污染,当前以人工定期投药为主的水处理措施并不能解决嗜肺军团菌污染问题,建议采取持续消毒措施防控嗜肺军团菌的孳生。