姜黄素对前列腺癌PC-3M细胞抗侵袭作用的研究

目的 探讨姜黄素对前列腺癌PC-3M细胞抗侵袭作用。方法 0—40μmol／L姜黄素分别处理PC-3M细胞24h后，Western blot法检测MMP-2和TIMP-2蛋白表达，免疫组化sp法检测细胞内NF-kB蛋白的表达水平。结果 姜黄素可下调MMP-2和上调TIMP-2的表达，抑制NF-kB的表达。结论 姜黄素通过下调MMP-2和上调TIMP-2的蛋白表达发挥抗侵袭作用，抑制NF-kB的表达可能是抗侵袭作用的机制之一。     

吉非替尼和NS398对前列腺癌PC-3M细胞增殖和侵袭力影响的研究

目的应用表皮生长因子受体(EGFR)特异性阻断剂吉非替尼(Gefitinib)和环氧化酶2(COX-2)特异性阻断剂NS398单独或联合作用于前列腺癌PC-3M细胞,观察对细胞增殖和侵袭能力的影响及可能机制研究。方法采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)和Transwell检测Gefitinib和NS398应用对细胞增殖和侵袭能力的影响,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测药物应用前后基质金属蛋白酶9(MMP-9)、表皮生长因子(VEGF)基因和蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示Gefitinib或NS398都可抑制PC-3M细胞增殖(P<0.05),两者联合应用作用更明显(P<0.01),Transwell结果表明两种阻断剂都能在一定程度上抑制细胞侵袭能力(P<0.05),联合应用后抑制作用更显著(P<0.01),qRT-PCR和Western blot结果提示,联合应用Gefitinib和NS398对MMP-9、VEGF的抑制作用明显高于单独应用(P<0.01)。结论 Gefitinib和NS398联合应用可显著抑制PC-3M增殖和侵袭转移,可能与抑制VEGF和MMP-9表达有关。     

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控 前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P 0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

热化疗对膀胱癌BIU-87细胞侵袭能力的影响及机制

目的观察不同温度下吉西他滨(GEM)热化疗对膀胱癌BIU-87细胞株侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制。方法将处于对数生长期的BIU-87细胞分为4组,A组为对照组,B组为热化疗1组[(38±0.2)℃],C组为热化疗2组[(40±0.2)℃],D组为热化疗3组[(43±0.2)℃],GEM的工作浓度为1μg/ml。用Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力;用RT-PCR检测MMP-9m RNA的表达情况;用ELISA法检测各组细胞的MMP-9蛋白的表达情况;用EMSA检测各组细胞NF-κB的活性。结果 Transwell小室实验显示相对于A组,B、C、D组对BIU-87细胞的穿透能力均可产生抑制作用,热化疗组与对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制作用最为明显。ELISA检测结果显示与对照组相比,实验组各组均能抑制MMP-9蛋白的表达,热化疗组与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制最为明显。EMSA实验结果显示实验组NF-κB的活性明显降低,与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论热化疗能够抑制BIU-87细胞的侵袭,并且随着温度的升高抑制作用越明显,其机制可能是通过抑制NF-κB的活性,降低MMP-9蛋白的表达来发挥作用的。     

shRNA抑制CD147基因表达对HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响

目的用RNA干扰(RNAi)技术抑制CD147基因的表达,检测其对人结直肠癌细胞系HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响。方法设计合成CD147特异性的RNA干扰表达质粒pYr-mir30-shRNA,稳定转染HT29细胞,分别获得HT29/shRNA-control和HT29/shRNA细胞;RT-PCR和western blot分别检测CD147、MCT1、MCT4 mRNA和蛋白质的表达;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性;CCK8法分析细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;观察结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的致瘤能力。结果与空白组比较,RNA干扰后的细胞中CD147、MCT1 mRNA(F分别为99.645和84.985)及蛋白质(F分别为73.675和19.842)的表达水平均降低(P均0.01);MMP-2和MMP-9的活性均降低(P均0.01);细胞增殖(t分别为7.491、15.023、14.584、6.637和11.211,P均0.01)和侵袭(F=330.443,P0.01)能力均降低,使裸鼠荷瘤能力下降(F=365.679,P0.01)。结论 RNA干扰能有效抑制CD147基因的表达,抑制HT29细胞的增殖和侵袭能力。     

小飞蓬总黄酮对前列腺癌PC-3M细胞生长侵袭的抑制作用

目的研究小飞蓬（Erigeron canadensis L）总黄酮对前列腺癌PC-3M细胞生长和侵袭的影响。方法采用CCK-8法测定小飞蓬总黄酮对人前列腺癌PC-3M的生长抑制作用。绘制在不同药物浓度作用下的细胞生长曲线。观察不同药物浓度作用下细胞的形态学变化。免疫组织化学染色检测小飞蓬总黄酮对前列腺癌PC-3M细胞作用后MMP-9表达情况。结果 （1）CCK-8显示小飞蓬总黄酮抑制PC-3M细胞的生长,IC50值为0.097 mg.mL-1;（2）通过生长曲线观察发现,PC-3M细胞的细胞数随着培养天数的增加而增多,但随着小飞蓬总黄酮浓度的增加其细胞增殖幅度降低,明显低于未加药组（P〈0.05）;形态学观察显示,细胞变长,死亡增多,胞浆内颗粒增多,折光性差;（3）小飞蓬组PC-3M细胞MMP-9的表达弱于不加药物组（P〈0.001）。结论小飞蓬总黄酮可抑制PC-3M细胞生长、侵袭。     

冬凌草甲素通过抑制COX-2表达及PGE2合成降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力的研究

目的:观察天然植物冬凌草提取物冬凌草甲素对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的作用,并分析其可能的作用机制。方法:体外培养HGC-27细胞,分别加入0、20、40、80μmol/L浓度的冬凌草甲素作用24h,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;ELISA法检测细胞上清液中PGE2的含量;采用Western-blotting检测环氧合酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:冬凌草甲素处理后,HGC-27细胞侵袭能力降低,MMP-9表达下调;且COX-2的表达及PGE2合成降低。结论:冬凌草甲素可能通过抑制COX-2表达、PGE2合成、降低MMP-9表达降低HGC-27细胞侵袭能力。     

核小体结合蛋白调控CXCR4抑制前列腺癌PC-3细胞的侵袭作用

目的 探讨抑制人核小体结合蛋白1(NSBP1)基因后抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3侵袭能力的作用机制.方法 通过慢病毒lentivirus-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3后,MTT法观察细胞活性变化,Transwell实验观察细胞侵袭能力的变化,应用Western-blot技术检测NSBP1、CXCR4蛋白的变化情况.结果 抑制NSBP1表达水平后非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞活性降低,侵袭能力降低,同时伴有CXCR4蛋白的表达降低.结论 通过慢病毒转染抑制NSBP1的表达可以抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3的侵袭能力,NSBP1可能是通过调控CXCR4蛋白的变化影响细胞侵袭能力的.     

AKTl基因沉默抑制Hep-2细胞体外侵袭能力的研究

目的研究AKTl基因沉默对人喉癌细胞系Hep-2体外侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体将AKTlsiRNA转染Hep-2细胞,RT-PCR和Westernblot分析各组细胞AKTl,MMP-2mRNA和蛋白表达,划痕实验观察细胞迁移能力,Transwell小室细胞测定细胞侵袭能力。结果AKTlsiRNA可抑制AKTlmRNA转录和蛋白表达水平;AKTl基因沉默后细胞迁移运动能力明显减弱,穿模细胞数明显减少（P〈0．01）;MMP-2mRNA和蛋白表达下调。结论AKTlsiRNA可通过下调MMP-2表达抑制Hep-2细胞体外侵袭能力。     

和厚朴酚通过降低Wnt/β-catenin信号通路活性抑制前列腺癌细胞的上皮-间充质转化过程

目的:检测和厚朴酚对前列腺癌细胞PC3的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响并探讨其作用机制。方法:将不同浓度的和厚朴酚(0,10,20,40μmol/L)作用于PC3细胞24 h后,通过细胞划痕试验和Transwell小室试验检测和厚朴酚对细胞的迁移和侵袭能力的影响;将不同浓度的和厚朴酚(0,10,20,40μmol/L)作用于PC3细胞48 h后,采用蛋白质印迹法检测和厚朴酚对PC3细胞内E-cadherin,N-cadherin,vimentin及β-catenin蛋白质表达的影响,RT-RCR检测和厚朴酚对细胞β-catenin和MMP-9 mRNA相对表达量的影响。结果:经和厚朴酚作用后的PC3细胞与对照组(和厚朴酚0μmol/L)相比迁移与侵袭能力显著降低,细胞内N-cadherin,vimentin及β-catenin蛋白表达显著下降,E-cadherin蛋白表达显著升高,β-catenin和MMP-9 mRNA相对表达量显著降低,且上述结果呈剂量依赖性。结论:和厚朴酚能抑制PC3细胞的迁移和侵袭,该作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而降低EMT活性而产生的。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

Effect of 17beta-estradiol on apoptosis, IGF system components and gelatinases A and B in prostate cancer cells (PC-3)

BACKGROUND: Previous studies have indicated that estrogen administration in the advanced stage of prostate cancer provide some benefits to the patients. Estrogen action was thought to be mediated via the blockade of the pituitary-testicular axis that effectively lowered the circulating levels of androgen and, thus, results in tumor regression; however, the effect of estrogens on prostate epithelial cells is still unclear. We investigated the effects of estradiol on insulin-like growth factor type I receptor (IGF-IR), IGF-binding protein 3 (IGFBP-3), IGFBP-4, and matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) and MMP-9 in androgen-independent prostate cancer cells (PC-3). METHODS: The cells were treated with different concentrations of estradiol (1, 10 and 100 nmol/l) for different time periods (24, 48, 72 and 96 h). Cell proliferation was assessed using MTT assay, and IGFBP-3 and IGFBP-4 were assessed using immunoradiometric and enzyme immunoassays, respectively. MMP-2, MMP-9 and IGF-IR expression levels were analyzed using western-blot analysis, and MMP-2 and MMP-9 activities were analyzed using gelatin zymography. Apoptosis was confirmed by Annexin V-FITC and acridine orange and ethidium bromide staining methods. DNA fragmentation studies were also performed. RESULTS: Cell proliferation assay revealed that 10 and 100 nmol/l estradiol concentrations inhibit the proliferation of PC-3 cells when incubated for 48-96 h. The secretory levels of IGFBP-3 and IGFBP-4 were increased significantly. The western-blot results showed that estradiol is capable of decreasing the expression of MMP-2 and MMP-9 significantly. Gelatin zymography showed that activities of MMP-2 and MMP-9 are decreased in estradiol-treated cells. Estradiol-induced apoptosis was studied using annexin V-binding and propidium iodide influx. Estradiol also induced nuclear fragmentation in higher doses (100 nmol/l) in PC-3 cells. CONCLUSION: Inhibition of MMPs in cancer cells and increased levels of IGFBP-3 and IGFBP-4 associated with apoptosis may be one of the targets for anticancer function of estradiol. Estradiol inhibits the proliferation of prostate cancer cells by inducing apoptosis.     

抑癌基因IL-24在乳腺癌细胞中的表达及意义

目的研究hIL-24（人白细胞介素24）对MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制作用。方法将pDC316-hIL-24-EGFP转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Western blot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的表达。结晶紫染色法检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制。RT-PCR检测侵袭、转移相关基因的转录。ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平。结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用。能明显下调MMP-2、MMP-9的转录。VEGF、Ang-1表达下降。结论 IL-24对乳腺癌细胞有明显的抑制生长、侵袭转移、血管生成的作用。     

塞来昔布抑制人结肠癌细胞Caco-2细胞增殖及其分子机制

目的研究塞来昔布在体外抑制人结肠癌细胞Caco-2生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞Caco-2,分组为正常组(无任何干预)及塞来昔布组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)值;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检环氧化酶-2(COX-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为:99.519±10.355μmol/L、71.546±6.446μmol/L、59.622±15.999μmol/L;RT-PCR结果显示:人结肠癌细胞Caco-2正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为:0.808±0.021,0.101±0.002(t=19.037,P=0.000);MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.798±0.031,0.190±0.002(t=18.987,P=0.002)。结论塞来昔布可能通过抑制COX-2、MMP-9的mRNA的表达,从而抑制结肠癌细胞增殖。     

Biglycan及血管内皮生长因子对结肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响及机制

目的:观察biglycan及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对结肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响并探讨其可能的机制。方法:在稳定转染biglycan的结肠癌细胞系HCT116中转染VEGF siRNA,实验设置未转染对照组(mock组)、空载质粒和非特异性干扰片段转染对照组(vector+siRNA-NC组)、biglycan cDNA和非特异性干扰片段转染组(biglycan+siRNA-NC组)以及biglycan cDNA和VEGF siRNA共转染组(biglycan+siRNA-VEGF组)。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测biglycan和VEGF的mRNA表达;采用划痕实验检测细胞的迁移能力;采用Transwell法检测细胞的侵袭能力;采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测SNAIL、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;采用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性。结果:与mock组及vector+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-NC组细胞的迁移、侵袭能力均显著提高(P0.05),vimentin、MMP-2、MMP-9、SNAIL蛋白的表达水平显著提高,E-cadherin蛋白的表达水平则显著下降(P0.05),MMP-2和MMP-9的活性显著提高(P0.05)。与biglycan+siRNA-NC组比较,biglycan+siRNA-VEGF组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P0.05),SNAIL、vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白的表达水平均显著下降,E-cadherin蛋白的表达水平显著提高(P0.05),MMP-2、MMP-9的活性显著下降(P0.05)。结论:biglycan通过促进VEGF的表达来促进结肠癌细胞系HCT116的迁移和侵袭,下调结肠癌细胞中VEGF的表达可逆转biglycan对HCT116迁移和侵袭的促进作用。     

多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的体外作用

目的探讨多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的作用及其可能机制。方法将体外培养的PC-3细胞随机分为恩度组、多西他赛组、恩度与多西他赛联合组、无药物干预对照组,分别采用MTT法、流式细胞术、RT—PCR和Western—Blot方法,检测各组细胞的增殖、凋亡及MMP-9、MRP、Bcl-2、BaxmRNA和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果多西他赛与恩度对PC-3细胞增殖有呈时间依赖性的抑制作用,两药联合的抑制率高于单独用药（F=8．38～16．39,P〈O．05）,G2／M期细胞比例较对照组增加（F=210．60,q=4.08,P％0.05）。与恩度组、多西他赛组比较,恩度与多西他赛联合组的MMP～9、MRP、Bcl-2mRNA表达明显降低（F=48．32～201．27,q=8．47～16．87,P％0．05）,BaxmRNA表达明显升高（F=101．60,q=4．46～11．29,P〈0．05）,Bcl2蛋白表达明显降低（F=121．80,q=2．95～26．92,P〈0．05）,Bax蛋白表达明显升高（F=342．80,q=3．23～5．26,P〈0．05）。结论多西他赛与恩度对PC-3细胞的生长均有-定的抑制作用,两药联合应用的效果优于单独用药,其机制与降低MMP-9、MRP、Bcl2表达、增高Bax表达有关。     

没食子酸对人宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为的影响

目的探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达的影响。方法取人宫颈癌Hela细胞进行培养分别给予0μmol、10μmol、20μmol、30μmol、40μmol EGCG进行处理。采用CCK8法、流式细胞法、Transwell法分别检测不同剂量EGCG处理下细胞增殖、凋亡、侵袭力;采用RT-PCR、Western Blot法检测细胞VEGF、MMP-9基因表达情况。结果①EGCG处理后,Hela细胞增殖抑制率、凋亡率升高,侵袭细胞数减少(P <0.05);随着EGCG剂量的升高,Hela细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭细胞数升高或降低幅度升高(P <0.05)。②未经EGCG(处理浓度=0)组别Hela细胞VEGF、MMP-9基因mRNA、蛋白呈高表达,处理组别细胞VEGF、MMP-9基因mRNA、蛋白表达量降低,随着处理浓度的升高,其表达量降低幅度更大(P <0.05)。结论 EGCG可呈剂量依赖性抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖及侵袭,促使其凋亡,对于恶性生物学行为有较好的抑制效果,VEGF、MMP-9等基因表达的抑制可能是其机制之一。     

shRNA沉默GnT-V基因表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（GnT-V）的小片段发夹状RNA（shRNA）表达质粒,研究shRNA表达质粒沉默GnT-V基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对GnT-V基因的小于扰RNA（siRNA）靶序列,构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GnT-V基因的细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹检测GnT-VmRNA和蛋白的表达,并通过CCK-8增殖实验、流式细胞仪评价GnT-VshRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建了GnT-VshRNA表达质粒,且该质粒明显下调GnT-V的表达;PC-3细胞GnT-V／1079的tuRNA和蛋白质水平的抑制率分别为76．5％和67．0％,对PC3细胞呈明显抑制效应;CcK-8增殖实验显示,与对照组相比,PC-3GnT-V／1079的增殖受到明显抑制（P〈0．01）,以48h为著;流式细胞仪检测结果表明,PC-3GnT-V／1079的凋亡率明显增加（P〈0．05）。结论shRNAGnT-V能显著降低GnT-V基因的表达水平,从而有效抑制PC-3细胞增殖。并促进细胞凋亡,该GnT-V的siRNA序列可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。