卵巢上皮癌中ING4基因启动子的甲基化状态及其临床意义

目的：探讨卵巢上皮癌中ING4基因启动子的甲基化状态及其临床意义。方法：收集2005年7月至2012年6月哈尔滨医科大学附属第一医院行全面分期手术并经病理检查确诊的150例卵巢上皮癌组织标本,并以同期因子宫肌瘤或子宫腺肌症行子宫全切除术或次全切除术并经病理检查确诊为正常卵巢组织的150例标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测卵巢上皮癌组织与正常卵巢组织中ING4基因启动子的甲基化状态,蛋白印迹法检测1NG4蛋白的表达,并分析ING4基因启动子的甲基化状态与卵巢上皮癌临床病例特征的关系。结果：卵巢上皮癌组织中ING4基因启动子的甲基化阳性率为42．7％（64／150）,明显高于正常卵巢组织（4％,6／150）,差异有统计学意义（P〈0．05）。ING4基因启动子甲基化阳性的卵巢上皮癌组织中ING4蛋白表达阴性或弱阳性;1NG4基因启动子甲基化阴性的卵巢上皮癌和正常卵巢组织中ING4蛋白表达阳性;在64例1NG4基因启动子甲基化的卵巢上皮癌组织中,ING4蛋白表达强度与ING4基因启动子的甲基化程度呈负相关（r=-0．435,P〈0．05）。卵巢上皮癌组织中,1NG4基因甲基化的阳性率随着手术病理分期和组织学分级的增加而增加（P〈0．05）;卵巢透明细胞癌（55．6％,10／18）和卵巢子宫内膜样癌（59-3％,16／27）中ING4基因甲基化的阳性率显著高于浆液性囊腺癌（33．9％,20／59）和粘液性囊腺癌（39．1％,18／46）（P〈0．05）;ING4基因启动子的甲基化状态与患者的年龄、有无腹水及淋巴结转移均无显著相关性（P〉0．05）。结论：ING4基因启动子的甲基化可能促进了其在卵巢上皮癌组织中的表达失活,进而促进了卵巢上皮癌的生长和分化。     

MGMT 甲基化影响替莫唑胺对胶质母细胞瘤疗效的研究

目的:探讨MGMT甲基化如何影响替莫唑胺对胶质母细胞瘤的治疗效果。方法:选取41个胶质母细胞瘤患者(根据相同替莫唑胺化疗方案治疗下临床结局的不同分为两组)的肿瘤组织,采用甲基化特异性聚合酶链反应分析胶质瘤组织中MGMT基因启动子区过甲基化状态,同时采用免疫组织化学法分析胶质瘤组织中MGMT蛋白表达情况。结果:临床结局不佳组中,以MGMT蛋白表达阳性的肿瘤为主(72.2%),而在结局相对良好组中,MGMT蛋白表达的阳性率仅为39.1%;在MGMT蛋白表达阳性的22例胶质母细胞瘤组织中,7例MGMT启动子甲基化,阳性率为31.8%,在MGMGT蛋白表达阴性的19例中,14例MGMT启动子甲基化,阳性率为73.7%(P<0.05)。结论:MGMT基因启动子区的甲基化状态与MGMT蛋白的表达相关。MGMT基因启动子过甲基化,MGMT蛋白表达较低;MGMT基因启动子去甲基化,MGMT蛋白表达较高。MGMT启动子过甲基化通过抑制MGMT基因的表达而增加替莫唑胺的疗效。     

卵巢上皮癌中ING4 基因启动子的甲基化状态及其临床意义

目的：探讨卵巢上皮癌中ING4 基因启动子的甲基化状态及其临床意义。方法：收集2005 年7 月至2012 年6 月哈尔滨医科 大学附属第一医院行全面分期手术并经病理检查确诊的150 例卵巢上皮癌组织标本,并以同期因子宫肌瘤或子宫腺肌症行子宫 全切除术或次全切除术并经病理检查确诊为正常卵巢组织的150 例标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测卵 巢上皮癌组织与正常卵巢组织中ING4 基因启动子的甲基化状态,蛋白印迹法检测ING4 蛋白的表达,并分析ING4 基因启动子 的甲基化状态与卵巢上皮癌临床病例特征的关系。结果：卵巢上皮癌组织中ING4 基因启动子的甲基化阳性率为42.7%（64/150）, 明显高于正常卵巢组织（4%,6/150）,差异有统计学意义（P<0.05）。ING4 基因启动子甲基化阳性的卵巢上皮癌组织中ING4蛋白 表达阴性或弱阳性;ING4 基因启动子甲基化阴性的卵巢上皮癌和正常卵巢组织中ING4 蛋白表达阳性;在64 例ING4 基因启动 子甲基化的卵巢上皮癌组织中,ING4 蛋白表达强度与ING4 基因启动子的甲基化程度呈负相关（r=-0.435,P<0.05）。卵巢上皮癌 组织中,ING4 基因甲基化的阳性率随着手术病理分期和组织学分级的增加而增加（P<0.05）;卵巢透明细胞癌（55.6%,10/18）和卵 巢子宫内膜样癌（59.3%,16/27）中ING4 基因甲基化的阳性率显著高于浆液性囊腺癌（33.9%,20/59）和粘液性囊腺癌（39.1%, 18/46）（P<0.05）;ING4基因启动子的甲基化状态与患者的年龄、有无腹水及淋巴结转移均无显著相关性（P>0.05）。结论：ING4 基 因启动子的甲基化可能促进了其在卵巢上皮癌组织中的表达失活,进而促进了卵巢上皮癌的生长和分化。     

脑胶质瘤MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态研究

目的：探讨脑胶质瘤患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因MGMT和错配修复基因hMLH1、hMSH2启动子CpG岛甲基化状态,及其在烷化剂化疗中的意义。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测39例脑胶质瘤和6例正常脑组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态,免疫组化方法测定蛋白表达。结果：脑胶质瘤患者组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46.2%、10.3%和20.5%,3种基因启动子未甲基化模式与其对应蛋白表达模式相似,并与患者性别、年龄、病理类型和病理分级无明显相关性。回顾性分析患者资料,显示39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存期显著高于MGMT基因未甲基化患者（P〈0.05,Log-rank检验）。结论：MGMT及错配修复基因甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,可能与肿瘤的发生有关;检测MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态,在判断脑胶质瘤患者预后和预测烷化剂化疗耐药性中可能具有重要意义。     

细胞信号分子Tiaml和Racl在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的 探讨细胞信号分子Tiaml和Racl在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义.方法 收集武汉大学人民医院病理科2006-2010年有完整临床和病理资料的膀胱尿路上皮癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱尿路上皮癌和5例癌旁组织中Tiaml和Racl的表达水平.应用彩色病理图文报告管理系统,对Tiaml和Racl的表达进行定量分析,并用SPSS13.0 软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK（q）检验.结果 （1）Tiaml的表达 Tiaml在膀胱尿路上皮癌中呈高表达,而在癌旁组织中呈低表达.膀胱尿路上皮癌与癌旁组织相比,差异有显著性 （P〈0.05 ）;（2）Racl的表达 Racl在膀胱尿路上皮癌中呈高表达,而在癌旁组织中呈低表达.膀胱尿路上皮癌与癌旁组织相比,差异有显著性 （P〈0.05 ）;（3）膀胱尿路上皮癌中Tiaml与Racl的表达呈正相关,它们相互作用、相互调控.结论 Tiaml和Racl在膀胱尿路上皮癌中的表达异常可能是膀胱尿路上皮癌的早期分子事件,在膀胱尿路上皮癌的发生和发展中发挥了重要作用,并Tiaml与Racl的表达呈正相关,它们相互作用、相互调控,在膀胱尿路上皮癌的发生、发展过程中,两者起协同作用.     

DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的探讨DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中的表达及其临床意义。方法收集福建医科大学附属第一医院2008-2010年有完整临床病理资料的膀胱尿路上皮癌存档蜡块85例和27例癌旁组织,采用组织芯片免疫组织化学法检测膀胱尿路上皮癌和癌旁组织DLL4和Notch4的表达水平。对DLL4和Notch4的表达进行半定量分析,并用SPSSl3．0软件对各组免疫组织化学反应阳性率采用x。检验或Fisher精确概率法分析。结果（1）DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达,差异有显著性（P〈O．05）。（2）Notch4和DLL4在膀胱尿路上皮癌中的表达与患者性别、年龄、临床分期、病理分级及初复发均无显著相关性（P〉0．05）。结论DLL4和Notch4在膀胱尿路上皮癌中的高表达与膀胱尿路上皮癌血管生成密切相关,阻断DLL4-Noteh4信号通路有望抑制膀胱尿路上皮癌的发生发展。     

RBM6通过GSK-3β/β-catenin调节途径对膀胱尿路上皮癌细胞发挥抗增殖和促进凋亡作用

RNA结合模体蛋白(RBM)家族几乎在所有细胞中均有表达,而且在进化上高度保守。以前的研究表明,RBM5在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)组织中表达下调,由此引起的细胞凋亡减少,进而促进肿瘤的进展。然而,RBM5氨基酸序列与其同源的RBM6在膀胱尿路上皮癌中的作用及相关机制尚不清楚。本研究检测RBM6在膀胱尿路上皮癌中的表达,探索其在膀胱癌细胞系中过表达对细胞增殖和凋亡的影响。利用qRT-PCR和Western印迹等技术,研究发现,RBM6在人膀胱尿路上皮癌组织和所检测的2个膀胱癌细胞系中表达均显著下调,并且其下调程度与患者的预后不良呈正相关。MTS检测细胞增殖的结果显示,RBM6过表达导致细胞增殖活性下降。细胞克隆形成实验结果也表明,RBM6过表达抑制细胞克隆形成能力(P0.01)。原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay, TUNEL染色)检测细胞凋亡表明,在RBM6过表达的细胞中,TUNEL阳性细胞数由对照组的17.17±3.27增加到44.00±8.04(P0.05)。RBM6抗增殖及促凋亡的作用机制研究发现,在T24细胞中过表达RBM6后,β-联蛋白(β-catenin)和G_1/S-特异性细胞周期蛋白-D1(G_1/S-specific cyclin-D1,cyclin D1)mRNA表达水平分别降低65%和79%,对应的蛋白质水平分别降低60%和73%;反之,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A/p21)mRNA表达水平升高约1.9倍,对应蛋白质水平升高约1.8倍。重要的是,糖原合酶激酶3 beta(glycogen synthase kinase-3 beta,GSK-3β)磷酸化水平升高约2.4倍。细胞过表达β-联蛋白促进细胞增殖(P0.05),而利用小分子化合物LY294002促进GSK-3β磷酸化后,抑制细胞增殖(P0.05)。综上所述,RBM6通过GSK-3β/β-catenin调节途径对膀胱尿路上皮癌细胞发挥抗增殖和促进凋亡作用。干预该调节途径可能是治疗膀胱尿路上皮癌的潜在靶点。     

CD82／KA11在膀胱尿路上皮癌中的表达

目的探讨膀胱尿路上皮癌中CD82／KA11的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院痫理科20062010年有完整临床和病理资料的膀胱尿路上皮癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱尿路上皮癌和5例癌旁组织中CD82／KA11的表达水平。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对（D82／KA11的表达进行定量分析,并帽SPSS13．0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单㈨素方差分析和SNK（q）检验。结果CD82／KA11在膀胱尿路上皮癌中呈低表达,癌旁组织中呈高表达。膀胱尿路上皮癌与癌旁组织相比,差异有显著性（P〈0．05）。结论CD82／KA11在膀胱尿路上皮癌中的表达异常可能在膀胱尿路上皮癌的发生和发展中发挥了重要作用。     

结肠癌组织RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化研究

目的:研究Ras相关区域家族1A基因(ras association domain family 1A,RASSF1A)启动子区甲基化对结肠癌组织中该基因转录和表达的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(Methylation-special PCR,MSP)、RT-PCR和Western blot方法检测30例结肠癌组织和癌旁组织中的RASSF1A基因启动子区甲基化状态、mRNA和蛋白表达水平.结果:①RASSF1A基因启动子区在结肠癌纽织和正常组织中的甲基化频率分别为57%(17/30)和20%(6/30),甲基化频率在两组具有统计学差异(p＜0.01),,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化频率显著高于癌旁正常组织(x2=8.531,p＜0.01);②结肠癌组织中RASSF1A基因mRNA和蛋白袁达均显著低于癌旁组织(癌组织和癌旁正常组织中mRNA相对表达量分别为0.2836±0.0493和0.5092±0.0433,P＜0.001;以上组织中蛋白相对表达量分别为0.3124±0.0472和0.5320±0.0440,P＜0.01);③在结肠癌组织中,甲基化组RASSF1A基因mRNA和蛋白表达明显低于非甲基化组(甲基化组和非甲基化组mRNA相对表达量分别为0.0686±0.0174和0.5511±0.0486,P＜0.0001;以上组中蛋白相对表达量分别为0.1219±0.0326和0.5614±0.0380,P＜0.0001).结论:结肠癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化明显增高,与该基因蛋白表达减少显著相关,这可能是导致结肠癌中RASSF1A抑癌基因失活的主要因为.     

p27和p53基因在大肠癌中的表达及临床意义

目的 研究大肠癌患者癌组织中p27、p53基因的表达及其相互之间的关系,以探讨p27、p53基因在大肠癌发生中的作用及临床意义。方法 运用原位杂交方法及免疫组化SP法检测58例大肠癌组织及正常黏膜中p27mRNA和P27蛋白的表达,同时运用免疫组化法分析相同组织中P53蛋白表达状况。结果 p27mRNA在大肠癌组织及正常黏膜中的表达阳性率均为100%。P27蛋白在大肠癌组织中的表达阳性率为55.17%,在正常黏膜中的表达阳性率为96.55%（P〈0.01）;癌组织中P53蛋白表达阳性率为53.45%,正常黏膜未见P53蛋白表达（P〈0.01）;大肠癌组织中P27与P53蛋白表达无明显相关性。P27蛋白的表达与肿瘤分化程度呈负相关（P〈0.01）,与临床其它病理因素均无相关性（P〉0.05）。大肠癌组织中P53蛋白表达与临床病理因素亦无相关性（P〉0.05）。结论 P27蛋白表达的调控主要在转录后水平,P27蛋白检测可作为评价大肠癌恶性程度和预后判断的重要指标。P27及P53蛋白在大肠癌的发生发展过程中具有重要作用。     

脑胶质瘤组织中p16基因启动子区CpG岛甲基化检测及其临床意义研究

目的：研究脑胶质瘤中p16基因启动子区甲基化情况及其临床意义。方法：用甲基化特异性PCR技术检测42例脑胶质瘤组织和癌旁正常脑组织中p16基因启动子甲基化,并分析该基因启动子甲基化与临床病理特征之间的关系。结果：脑胶质瘤组织中p16基因异常甲基化率（38.27%）显著高于癌旁正常脑组织中p16基因的异常甲基化率（8.8%,P=0.000）。发生甲基化的肿瘤组织或者正常脑组织中p16基因mRNA和蛋白表达显著降低。此外,p16基因异常甲基化和肿瘤病理分级有相关性（P=0.007）,而与患者性别、年龄及肿瘤类型等临床特征无关（P=0.669,0.869和0.944）。结论：p16基因启动子区CpG岛高甲基化与p16表达下调相关,推测p16启动子区CpG岛高甲基化是导致p16基因在脑胶质瘤中表达下调的重要因素,有望成为脑胶质瘤早期辅助诊断的分子标志物之一。     

成人急性髓性白血病SOCS-1基因及其甲基化的研究

目的：通过检测成人急性髓性白血病中SOCS．1基因表达水平及其甲基化水平,研究其在白血病发病中的作用。方法：运用甲基化特异性PCR（Methylation specificPCR,MSP）方法,对24例急性髓性白血病患者和4株白血病细胞株（Jurkat、Raji、U937、NALM17）,进行SOCS-1基因甲基化水平的研究;同时运用Real—timePCR法定量分析SOCS—1基因表达水平。以10例健康人为正常对照组。结果：24例成人急性髓性白血病患者中,15例有SOCS-1基因甲基化（62．5％）,而正常对照组无SOCS-1基因甲基化（0％）,二者有显著差异（P〈0．05）;SOCS-1基因甲基化组与无SOCS-1基因甲基化组相比较,其SOCS—1基因相对表达量明显减少（P口0．05）;与患者临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因的甲基化与患者年龄、性别和病程阶段无相关。4株白血病细胞株中,Jurkat和U937表现有SOCS—1甲基化（50％）,Raji和NALM17无SOCS—1甲基化,前者SOCS-1基因表达量较后者也明显降低（P〈0．05）。结论：SOCS—1基因在成人急性髓性白血病中甲基化水平明显增高,且SOCS-1基因甲基化后表达水平受到抑制,提示SOCS-1基因及其甲基化在急性髓性白血病的发生发展中可能具有一定作用。     

脑胶质瘤患者组织和血清MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态检测

目的探讨脑胶质瘤患者组织和血清中MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子CpG岛甲基化发生率及相关性。方法甲基化特异性PCR（MSP）检测39例脑胶质瘤组织样本及32例预处理的脑胶质瘤血清样本中MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果脑胶质瘤组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46．2％、10．3％和20．5％,肿瘤组织中至少有一种基因甲基化的发生率为64．1％（25／39）;在脑胶质瘤患者外周循环血液中检测到了相关基因甲基化系列,并且与组织中基因甲基化发生率明显相关。结论MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,血清中相关基因DNA甲基化检测有可能为脑胶质瘤诊断和个体化化疗提供一种稳定的无创性检测指标。     

子宫内膜异位症中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化研究

目的：探讨错配修复基因1（hMLH1）、错配修复基因2（hMSH2）启动子区甲基化与子宫内膜异位症的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法检测23例子宫内膜异位症组织和20例正常子宫内膜中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态。结果：hMLH1基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为39％（9/23）,在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5％（1／20）,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;hMSH2基因在子宫内膜异位症中的甲基化率为8％（2／23）,在正常子宫内膜组织中的甲基化率为5％（1／20）,两者比较,无明显差异（P〉0．05）。结论：hMLH1基因启动子区甲基化可能与子宫内膜异位症发病有关;hMSH2基因启动子区甲基化与子宫内膜异位症之间不存在显著联系。     

AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌中的表达及其临床意义

目的：探讨AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：用免疫组化SP法分别检测AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在60例大肠癌组织中的表达。结果：（1）AnnexinⅡ和AnnexinⅣ在大肠癌组织中的阳性表达率分别为65％（39／60）和60％（36／60）;（2）AnnexinⅡ和AnnexinⅣ阳性和阴性病例的平均生存期、五年生存率和中位生存期比较,差异具有显著性（P〈0．05）：（3）大肠癌组织中AnnexinⅡ和AnnexinⅣ的表达一致率为68．33％（41／60）,存在显著相关性（P〈0．01）;（4）大肠癌不同临床时期（Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ）AnnexinⅡ和AnnexinⅣ阳性表达比较,差异具有显著性（P〈0．01）。结论：AnrlexinⅡ和AnnexinⅣ与大肠癌的临床分期和预后有关。     

GS、E—cadherin和β-catenin在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetaseGS）、E-钙粘蛋白（E—cadherin）和β-连环蛋白（β-catenin）在肝细胞癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学Envision法检测182例肝细胞癌和92例癌旁肝组织中GS、E-cadherin和β-catenin的表达情况,并分析其与临床病理特征和预后的关系。结果GS在肝细胞癌阳性表达率为77．5％,明显高于癌旁肝组织（4．3％）,差异显著（P〈0．05）;肝细胞癌E—cadherin和β-catenin异常表达率分别为59．3％和58．8％,亦高于癌旁肝组织（30．4％和26．1％）,差异显著（P〈0．05）。肝细胞癌中GS的表达与TNM分期、转移和术后复发显著相关（P〈0．05）;E—cadherin和β-catenin异常表达与脉管内瘤栓、TNM分期、转移和术后复发显著相关（P〈0．05）。肝细胞癌中GS表达与E-cadherin、β-catenin异常表达正相关。结论肝细胞癌中GS的高表达,与E-cadherin和β-catenin表达的下调,可能是肝细胞癌侵袭和转移的重要机制之一,联合检测GS、E-cadherin和β-catenin可能有助于判断肝细胞癌的恶性程度、转移潜能及预后分析。