高产纤维素酶菌株选育及其产酶工艺的研究

为获取高产纤维素酶的菌株,本研究以潮湿纤维单胞菌（Cellulomonasuda）为研究对象,采用紫外诱变方式进行菌株突变,通过刚果红选择培养基筛选,以及测定纤维素酶活性后得到菌株W3,酶活高达37.6 U/mL,较初始菌株提升了49.4%。经传代十次后仍有较高酶活,结果说明该突变菌株遗传性状稳定且产纤维素酶能力强。对突变菌株进行单因素优化实验确定最优培养条件,后对关键因子通过正交实验确定最佳参数。最佳培养条件为：12.5 g/L蔗糖,2 g/L硝酸铵,2 g/L磷酸二氢钾,菌悬液接种量体积比3%,pH=6.0,发酵培养温度35℃。优化后酶活性达43.06 U/mL,极显著高于原始菌株（P=0.008 9<0.01）,较最初菌株酶活性提高了78.7%。研究结果可为高效降解纤维素提供一定理论依据和应用价值。     

化学诱变选育高产纤维素酶菌株

[目的]研究化学诱变剂对高产纤维素酶生产菌的选育。[方法]以1株绿色木霉(Trichoderma virideF1)为出发菌株,经过亚硝基胍、硫酸二乙酯和氯化锂诱变处理,选育纤维素酶高产菌株生产菌。[结果]经LiCl诱变后,得到1株产酶活力较高的菌株L6,相对酶活较出发菌株提高了35.7%。[结论]化学诱变是诱变微生物、筛选优良菌株的有效手段。     

康氏木霉产纤维素酶固态发酵条件的研究

以稻草和麸皮为主要原料,通过单因素试验优化康氏木霉固态发酵产纤维素酶的条件,对氮源、接种量、麸皮含量、含水量、发酵时间、发酵温度和初始pH值进行了研究.结果表明,最佳发酵条件:培养基氮源为(NH<,4>)<,2>SO<,4>、麸皮添加量为40%、含水量为200%;接种量为7%;初始pH值为5.0;发酵时间为96 h;发酵温度为30℃.     

液体发酵纤维素酶菌种的选育及产酶条件研究

采用核诱变方法选育了一株适合液体深层发酵的纤维素酶高产菌株A10-01。最佳诱变剂量为2.0k,16min;该菌株为绿色木霉,在PDA葡萄糖培养基上生长迅速,白色菌丝,绿色孢子,菌苔较厚;该菌株的产酶条件为:采用1.0%微晶纤维素与1.0%麸皮复合碳源,pH值控制在6.0,29℃摇床200rpm培养6d,FPA酶活最高可达到32.8u/ml。     

高产纤维素酶里氏木霉菌株诱变选育及其发酵条件优化

试验旨在研究高产纤维素酶里氏木霉诱变选育与发酵条件优化。采用常压室温等离子体(ARTP)诱变法处理里氏木霉,获得产纤维素酶高的突变菌,并对其产酶发酵条件进行优化。通过单因素实验研究发酵时间、硫酸铵浓度、微晶纤维素浓度、接种量及搅拌速度等对里氏木霉产酶的影响。在单因素的基础上,通过正交实验对里氏木霉产酶的工艺参数进行优化。结果表明,在诱变时间240 s条件下筛选到1株突变里氏木霉ATR-4,其滤纸酶活(FPU)最高可达2.01 U·mL~(-1)。对突变里氏木霉菌株ATR-4的发酵条件优化,筛选得到最佳产酶培养条件为:发酵时间78 h,硫酸铵浓度1 g·L~(-1),接种量10%,搅拌速度400 r·min~(-1)。在此条件下进行验证实验,最高酶活可达4.57 U·mL~(-1)。本研究结果表明,常压室温等离子体(ARTP)诱变可有效对里氏木霉进行诱变育种,改善其产酶能力。     

复合诱变选育高产纤维素酶绿色木霉菌株

[目的]选育高纤维素酶活的绿色木霉菌株。[方法]以一株绿色木霉F1为出发菌株,以每一轮诱变处理筛选到的酶活最高的突变株作为下一轮诱变的出发菌株。经过紫外线、亚硝基胍（NTG）、硫酸二乙酯（DES）诱变处理。计录菌落数,计算致死率并测定CMCase的酶活。[结果]紫外线处理200 s时,孢子的致死率接近100%。U1突变株的相对酶活最高,为出发菌株F1的110.4%。NTG处理50 min时,孢子的致死率接近100%,N4诱变菌株的相对酶活最高,为出发菌株F1的128.9%。DES处理50 min时的诱变致死率接近100%,D8菌株的配对酶活最高,相对酶活为出发菌株F1的140.6%。[结论]得到了一株产酶量高且性状稳定的高产绿色木霉菌株D8,其CMCase相对酶活较出发菌株F1提高了40.6%。     

碱性纤维素酶高产菌株的选育及产酶条件研究

以产碱性纤维素酶菌株H-1为出发菌株进行紫外线诱变,选育出一株产酶能力是出发菌株2.46倍且产酶性能稳定的高产菌株M-H-l。通过液体振荡培养法,对M-H-l的发酵培养基进行初步研究。结果表明:菌株M-H-l的最适碳源为麸皮,氮源为豆饼粉,无机盐为MgSO4,最适碳氮比为4∶1。     

纤维素酶高产菌株的筛选及最适产酶条件

从本实验室保存的57株菌株中筛选出一株可高效降解纤维素的纤维素酶高产菌株哈茨木霉APS62,其滤纸酶活力(FPA)为4.981 IU.g-1,是对照里氏木霉模式菌株APS63的3.02倍.产酶条件优化研究的结果表明,以稻草粉为底物,APS62菌株产滤纸酶的最适条件为:培养温度28℃,培养时间3 d,稻草粉与麸皮比5∶0,接种量6%,氮源为NH4NO3(总氮量0.4%),培养基起始pH为5.0,吐温80含量0.1%.此条件下的FPA为6.125 IU.g-1,比优化前提高8.10%.     

一株产纤维素酶细菌的发酵产酶条件优化

以1株产纤维素酶的细菌DM-4为试验菌株,以滤纸酶(FPA酶)活和CMC酶活为指标,通过单因素试验和响应面试验,优化菌株发酵产酶条件。结果显示,在发酵时间为36 h、接种量4%、培养基初始pH值5.5～6.0、麸皮浓度2.54%、蛋白胨浓度0.92%、磷酸盐浓度0.5%的培养条件下,菌株产纤维素酶活力最高。验证试验表明,优化模型是有效和可靠的。     

纤维素酶高产菌株的筛选及鉴定

[目的]从热带雨林土壤中分离纤维素酶高产菌,并对其进行鉴定。[方法]形态观察和18SrDNA序列分析。[结果]筛选到一株纤维素酶高产菌,其形态与里氏木霉很相似,18SrDNA序列与红褐内座茵同源性为99．9％。[结论]筛选到的纤维素酶产生茵为里氏木霉。     

里氏木霉产纤维素酶条件的优化

研究采用里氏木霉菌株30911、40358和40359,设计了9个影响里氏木霉产纤维素酶活性因素,对里氏木霉的纤维素酶活性进行了液体摇瓶发酵试验。结果表明,培养基中微晶纤维素和小麦麸皮的最适添加量分别为:微晶纤维素20 g·L-1,小麦麸皮80 g.L-1,微晶纤维素与小麦麸皮最适配比为1:4;接种孢子悬液浓度1×107个·mL-1,培养温度28～30℃,pH 5.5,培养时间72 h,摇瓶转速180 r·min-1,250 mL三角瓶中装液量为50～75 mL。     

康宁木霉固态发酵生产纤维素酶条件研究

以稻草粉与麦麸为主料,对影响康宁木霉(Trichoderma koningii)固态发酵生产纤维素酶的因素,如秸秆粉和麦麸的用量比、料水比、初始pH值、氮源及其浓度、发酵温度和时间等进行了研究.结果显示,秸秆∶麦麸比为3∶2、料水比为1∶2、初始pH值为6.0、以0.5%尿素液为氮源、36℃培养72 h的产酶活力最高,CMC酶和β-葡萄糖苷酶分别比基础发酵条件下增加了44.8%和301.6%.     

绿色木霉固态发酵生产纤维素酶条件优化与酶的固定化

以麸皮与秸秆粉为主要原料,对影响绿色木霉固态发酵的因素如麸皮与秸秆粉的比例、发酵温度、时间、含水率、初始pH值、氮源浓度等进行研究。在单因素实验的基础上,采取正交实验设计,结果表明最佳固体发酵条件为：麸皮与秸秆比例4∶1,含氮量2%,培养温度28℃,培养时间72 h,起始pH 5,接种量10%,含水率175%（相对于固体发酵底物）。在此条件下,CMC 酶活达到1 1325 U·g-1,比未优化条件下酶活6124 U·g-1,提高了849%。利用包埋、交联和交联包埋三种方法对纤维素酶进行固定化,其中交联包埋法效果较好。     

黄绿木霉菌等菌株混合发酵生产纤维素酶的研究

以黄绿木霉菌株、黑曲霉及绿色木霉菌株为实验材料,研究三种不同菌株之间相互混合产纤维素酶能力的变化。在150mL三角瓶的装液量为40mL、165—170r／min、28℃条件下,不同混合菌株发酵培养的产酶情况有较大差异,黄绿木霉菌与曲霉菌混合培养4d产CMC—Na酶的能力最强,三种菌株混合后发酵6d产滤纸纤维素酶能力最强,而黄绿木霉菌单独发酵6d产β-葡萄糖苷酶能最强。     

康宁木霉和白腐真菌原生质体融合子生物学特性的研究

为考察康宁木霉3.2774(Trichoderma.koningii 3.2774)和白腐真菌5.776(Phanerochaete chrysosporium 5.776)原生质体融合子生物学特性,采用同工酶聚丙烯凝胶电泳、插片培养、拮抗试验和生长曲线的测定,对康宁木霉和白腐真菌的融合子进行鉴定,结果表明:融合子酯酶同工酶电泳有不同于亲本的新酶带出现,融合子菌落与亲本之间存在拮抗,菌丝颜色不同,菌株生长速度慢于亲本菌株,这些生理生化性状上与亲本存在明显的差异,是一株融合双亲性状的新菌株。     

木霉菌和白腐菌对水稻秸秆降解的影响

通过差重法进行定量测定,研究了康宁木霉和白腐菌株黄孢原毛平革菌对水稻秸秆降解的影响及其降解规律。结果表明:秸秆发酵过程中纤维素、半纤维素、本质素在前28 d降解的很快,之后降解减缓。木霉菌和白腐菌配合使用降解效果最好,在70 d内纤维素被降解38.18%,半纤维素被降解53.99%,木质素被降解33.91%。     

利用食用菌废料培养康宁木霉的配方研究

[目的]通过对固态发酵康宁木霉配方的试验研究,确定以食用菌废料为主要原料培养康宁木霉的最佳配方。[方法]通过配方中加入食用菌废料后对康宁木霉的长势、有效活菌数及纤维素酶活性等指标进行测定,并对结果进行分析。[结果]以食用菌废料为主要原料培养康宁木霉的最佳配方为食用菌废料50%,麸皮30%,玉米面10%,豆粕1.5%,稻壳及其他8.5%。[结论]该研究为杏鲍菇食用菌废料作为替代原料提供了理论依据。     

Selection of Trichoderma mutants with enhanced cellulase production and resistant to catabolite repression

Due to high cost and relatively low efficiency of cellulase enzymes used for the saccharification of pretreated lignocelluloses, the improvement of cellulase secreting microorganisms is of vital importance. Trichoderma reesei QM 6a, an excellent source of cellulase was selected in the late 1960's. at Natick Laboratories by its performance on pure cellulose (Solka Floc, Avicel) . QM 6a is the wild parent strain of best existing hypercellulolytic mutants such as Rut C30, VTT-D-80133, L…     

纤维素酶高产菌株的诱变育种

采用黑曲霉LH24为出发菌株,经紫外线和硫酸二乙酯诱变处理,选育出一株生产菌LH2466.在适宜条件下,LH2466产纤维素酶平均为18910 U.g-1.