MiRNA-142-5p在大鼠角膜新生血管中的作用及机制研究

目的 观察microRNA-142-5p(miRNA-142-5p)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CorNV)的作用及其与VEGF/PI3 K/AKT通路的关联情况.方法 角膜缝线法诱导SD大鼠右眼CorNV作为实验组,左眼作为对照组.取缝线后第7天的角膜进行实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测miRNA-142-5p以及VEGF mRNA的表达水平.将miRNA-142-5pmimic转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),RT-PCR检测miRNA-142-5p的表达量来验证转染是否成功.并通过RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HUVECs中VEGF及PI3 K/AKT mRNA和蛋白的表达量.分别用Transwell、CCK-8法及Matrigel胶管腔形成实验检测HUVECs的迁徙、增殖及管腔形成能力.结果 成功建立CorNV模型.RT-PCR结果显示7d组miRNA-142-5p(6.799±1.683)和VEGF(3.297±0.334)的表达量较正常角膜组(normal)显著升高(P＜0.01).转染miRNA-142-5p mimic后的miRNA-142-5p的表达量显著高于空白对照及阴性对照组(P＜0.01).Transwell、CCK-8及Matrigel胶管腔形成实验结果示miRNA-142-5p提高了HUVECs的迁徙、增殖及管腔形成能力(P＜0.01).转染miRNA-142-5p mimic后HUVECs中VEGF及PI3 K/AKT的mRNA及相应蛋白的表达均明显上升(P＜0.05).结论 CorNV中miRNA-142-5p及VEGF的表达明显上调,过表达miRNA-142-5p可以显著提高HUVECs中VEGF及PI3 K/AKT通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而促进HUVECs的迁徙、增殖及管腔形成能力.表明miRNA-142-5p可通过PI3K/AKT通路参与CorNV的调控.     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增殖及ERK蛋白表达的影响

目的 观察Tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞增殖及细胞外信号调节激酶(ERK) 蛋白表达的影响。方法　采用MTT比色法测定Tumstatin肽（T8肽）对血管内皮生长因子（VEGF）诱导下的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖的干预作用；采用Western-blot检测T8肽对VEGF刺激后15min、30min、45 min和60min的RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。 结果　T8肽浓度在5μg/ml 以上时对RF/6A细胞有抑制作用，且抑制作用随着浓度的增大而增高，各组OD值和抑制率比较差异均有显著性意义（P均<0.05）；T8肽可抑制VEGF对RF/6A细胞的促增殖作用；在1～40μg /ml相同浓度条件下，T8肽对VEGF条件下的RF/6A细胞增殖抑制率显著大于无VEGF条件下的抑制率（P均<0.01）。VEGF可刺激RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达增加，T8肽可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞ERK1/2蛋白的表达。 结论　Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖，机制可能与VEGF信号转导通路上的ERK1/2细胞信号转导通路有关。     

加减大黄虫丸干预RF/6A细胞参与血管生成的实验研究

目的探讨加减大黄虫丸干预猴脉络膜-视网膜内皮细胞（RF/6A）参与血管生成的作用。方法 MTS比色法观察加减大黄虫丸对RF/6A细胞增殖的影响;Transwell小室检测其对RF/6A细胞移行的影响;Matrigel实验检测其对RF/6A细胞管腔形成的影响;Western Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）,分别检测其对RF/6A细胞表达VEGF、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白和mRNA的影响。结果 0.2 g.mL-1浓度的加减大黄虫丸对VEGF诱导的RF/6A细胞增殖具有抑制作用;其浓度为01、2.52、5和50 mg.mL-1时RF/6A细胞移行数分别为73.333±4.51、61.333±4.042、8.667±6.66和17.667±4.16;其浓度为01、2.52、5和50 mg.mL-1时RF/6A细胞内皮管腔形成数分别为20.333±0.581、3.333±1.53、11.000±1.00和1.333±0.58;其100和200 mg.mL-1浓度能够抑制RF/6A细胞VEGF、MMP-2蛋白和mRNA表达,400 mg.mL-1浓度能够抑制RF/6A细胞MMP-2蛋白和VEGF mRNA表达。结论加减大黄虫丸通过抑制RF/6A细胞增殖、移行及管腔形成的途径抑制其参与新生血管生成,其机理可能与抑制RF/6A细胞VEGF、MMP-2的表达有关。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的机制研究

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1（IGFBP-rP1）抑制血管内皮细胞生长因子（VEGF）体外诱导视网膜新生血管形成的机制。方法 猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株（RF/6A）扩增培养、血清饥饿培养24 h后,分为对照组及50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组进行干预,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;分为对照组,10 ng/mL VEGF干预组,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1+10 ng/mL VEGF干预组进行干预,免疫细胞化学染色检测细胞中B-Raf蛋白表达,分光光度法检测细胞中Caspase 3活性的变化。结果 流式细胞仪检测显示,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组RF/6A细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫细胞化学染色检测与Caspase 3活性检测显示,与对照组比较,10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著升高、D405值显著降低（均P<0.05）;与10 ng/mL VEGF干预组比较,50、100、200 ng/mL IGFBP rP1+10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著降低、D405值显著升高（均P<0.05）,且各组间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 IGFBP-rP1通过干预B-Raf蛋白表达,上调细胞Caspase 3活性,对抗VEGF的促视网膜血管新生效应,发挥抑血管新生因子的负向调节作用。     

FoxM1通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌细胞5-8F增殖、迁移的影响

目的 探讨FoxM1对鼻咽癌细胞5-8F恶性生物学行为的影响及其可能机制.方法 将化学合成的靶向FoxM1的siRNA转染鼻咽癌细胞5-8F(FoxM1-siRNA组),并设立空白对照组、阴性对照组,采用RT-PCR及Western blot检测FoxM1表达变化.采用MTT法、FCM法、Transwell法分别检测下调FoxM1表达对细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响.Western blot检测下调FoxM1表达后β-catenin、C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 转染FoxM1-siRNA的5-8F细胞FoxM1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05).下调FoxM1表达可抑制5-8F细胞增殖(P＜0.05),FoxM1-siRNA组的凋亡率为(22.68±0.67)％,较阴性对照组[(1 1.74±1.36)％]和空白对照组[(10.94±1.52)％]显著增加(P＜0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.FoxM1-siRNA组细胞穿膜数(100.00±10.97)明显低于阴性对照组(246.00±6.66)和空白对照组(233.70±12.41),细胞迁移能力降低(P＜0.05).下调FoxM1的表达可抑制β-catenin细胞核表达,抑制C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9总蛋白表达(P＜0.001).结论 FoxM1表达下调抑制鼻咽癌细胞5-8F的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,使细胞周期阻滞于G0/G1期.其机制可能是通过抑制Wnt通路关键蛋白β-catenin细胞核表达从而抑制Wnt 通路活性实现的.     

Vascular Endothelial Growth Factorl65-regulated Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Invasion and Migration Involve Expression and Activation of Matrix Metalloproteinase-2

The effect of vascular endothelial growth factor (VEGF) overexpression on matrix met-alloproteinase-2 (MMP-2) in nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells in vitro and the possible mechanism involved were investigated, and the correlation between the expression of VEGF and MMP-2 in NPC evaluated. The NPC cells were transfected with PAd-trackVEGF165 plasmid. The expression levels of VEGF and MMP-2 mRNA and protein in NPC cells were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot respectively. It was found that the expression of VEGF and MMP-2 mRNA and protein was significantly increased in NPC cells after transfection of VEGF165. It was concluded that the expression of VEGF was correlated to the in vitro invasion of NPC cells, and the induction of MMP-2 by VEGF was a key process of NPC cell invasion.     

Vascular Endothelial Growth Factor165-regulated Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Invasion and Migration Involve Expression and Activation of Matrix Metalloproteinase-2

The effect of vascular endothelial growth factor （VEGF） overexpression on matrix metalloproteinase-2 （MMP-2） in nasopharyngeal carcinoma （NPC） cells in vitro and the possible mechanism involved were investigated, and the correlation between the expression of VEGF and MMP-2 in NPC evaluated. The NPC cells were transfected with PAd-trackVEGF165 plasmid. The expression levels of VEGF and MMP-2 mRNA and protein in NPC cells were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot respectively. It was found that the expression of VEGF and MMP-2 mRNA and protein was significantly increased in NPC cells after transfection of VEGF 165. It was concluded that the expression of VEGF was correlated to the in vitro invasion of NPC cells, and the induction of MMP-2 by VEGF was a key process of NPC cell invasion.     

EGCG在抗鼻咽癌中对MMP-2表达的抑制作用

目的 探讨表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞MMP-2基因表达的影响,揭示EGCG抗鼻咽癌的作用机制。方法 应用低分化鼻咽癌细胞株CNE2细胞,5%CO2、37℃培养48 h,按照不同浓度EGCG(0、40、80、160 mg/L)进行分组处理。①应用MTT法检测各组培养细胞的增殖抑制率;②Transwell侵袭实验检测EGCG作用后CNE2细胞侵袭力;③半定量逆转录PCR(RT-PCR)细胞中MMP-2 mRNA表达;④应用蛋白印迹检测培养细胞的蛋白表达。结果 MTT及Transwell侵袭实验结果显示,随着EGCG的浓度和作用时间的增加,CNE2细胞的增殖能力及侵袭能力明显减弱,不同浓度EGCG作用后在三个不同的时间点与相应的对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),且逐步抑制程度呈现出剂量-效应和时间-效应的依赖关系;半定量逆转录PCR(RT-PCR)和Western-Blot检测结果分别显示,随着EGCG作用浓度和时间的增加,MMP-2 mRNA表达和MMP-2的蛋白表达呈现出下降的趋势(P0.05)。结论 EGCG能够通过抑制CNE2细胞MMP-2的表达,从而降低了CNE2细胞的侵袭和转移,从而起到抗鼻咽癌作用。     

乳腺浸润性导管癌中JMJD3、 MMP-2和VEGF的表达及其与临床病理特征的关系

目的 观察乳腺浸润性导管癌中JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白水平的表达,研究过表达JMJD3对乳腺癌细胞增殖以及MMP-2 和 VEGF 表达的影响。方法 用免疫组织化法和 RT-PCR 检测乳腺浸润性导管癌及相对应的癌旁组织中 JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白和mRNA的表达情况,分析蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系及上述蛋白的相关性,采用Kaplan-Meier法来评估JMJD3、MMP-2和VEGF蛋白的异常表达与乳腺癌患者生存期之间的关系。通过重组质粒在乳腺癌MDA-MB-231细胞中过表达JMJD3,用CCK-8和免疫组化检测Ki67表达分析其对增殖的影响,用RT-PCR方法检测MMP-2和VEGFmRNA水平表达的变化。结果 免疫组化结果显示,乳腺癌组织中JMJD3阳性强度低于相应癌旁组织（P<0.05）,乳腺癌组织中MMP-2和VEGF阳性强度高于相应癌旁组织（P<0.05）;RT-PCR结果显示,乳腺癌JMJD3 mRNA水平低于癌旁组织,MMP-2和VEGF mRNA水平高于癌旁组织（P<0.05）。JMJD3的表达在乳腺癌直径较小、高分化、TNMⅠ+Ⅱ期、淋巴结无转移及分子分型Luminal A型和Luminal B型表达率较高（P<0.05）,MMP-2和VEGF的表达在乳腺癌肿瘤直径较大、低分化、TNM Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结有转移、Luminal B 型和 Her-2 过表达型表达率较高（P<0.05）。Kaplan-Meier 分析结果显示,JMJD3蛋白表达水平较高者的无病生存期高于低表达者（P<0.05）,MMP-2和VEGF蛋白表达水平较高者的无病生存期低于低表达表达者（P<0.05）。Cox 回归模型分析显示,JMJD3、MMP-2 和 VEGF、分化程度是乳腺癌预后的独立危险因素。Spearman 相关分析结果显示,JMJD3与MMP2和VEGF均呈负相关（r=-0.569,-0.533,P<0.05）,MMP2和VEGF呈正相关（r=0.923,P<0.05）。过表达JMJD3能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、MMP-2和VEGF的表达。结论 JMJD3、MMP-2和VEGF在乳腺浸润性导管癌中的异常表达与肿瘤的增殖、浸润、转移及预后密切相关,三者可作为判断乳腺癌预后不良的重要指标之一。     

LKB1基因与乳腺癌细胞侵袭性相关因子的研究

目的观察LKB1基因对乳腺癌细胞的侵袭性影响及机制。方法筛选LKB1基因转染的MDA-MB-435乳腺癌细胞,随机取样一株高表达细胞株和一株低表达细胞株,同时与未转染细胞株和空质粒转染细胞株比较。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和明胶．酶谱法观察基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和促进微血管生成的因子VEGF、bFGF的基因表达情况,并应用Western印迹对其蛋白定量分析。应用Tramswell试验对其进行膜穿透能力检测。结果LKB1基因转染的乳腺癌细胞的mRNA和蛋白水平上MMP-2、MMP-9和VEGF、bFGF基因表达的相对吸光度（A）值皆低于未转染细胞和空质粒细胞,且LKB1基因高表达细胞株较低表达细胞株更低。同时发现Tramswell试验中LKB1转染的细胞侵袭能力下降（18．1％±1．0％、22．4％±1．8％vs47．6％±1．3％、45．6％±1.2％,均P〈0．01）。结论LKB1基因作为一种抑癌基因对乳腺癌细胞的侵袭性可能起重要作用。     

血管内皮生长因子促进卵巢癌细胞AO体外侵袭的机制探讨

目的研究血管内皮生长因子(VEGF)对上皮性卵巢癌细胞株AO体外侵袭能力和对细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2),金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响,探讨VEGF在卵巢癌浸润转移中的作用及可能机制。方法以处理卵巢癌细胞株AO,采用Boyden小室侵袭实验检测AO细胞体外侵袭能力,采用RT-PCR和Western免疫印迹检测AO细胞MMP-2的mRNA及蛋白表达情况,采用DQ明胶荧光检测法分析MMP-2酶活性。结果VEGF能双相调节卵巢癌细胞AO的体外侵袭能力及细胞中MMP-2的分泌及活性,低浓度(20￣40ng/mL)时明显增强癌细胞体外侵袭能力,上调MMP-2的分泌及活性,并随着VEGF的浓度增加该作用增强;但高浓度时(80ng/mL),其体外侵袭能力减弱,MMP-2的活性下降。MMP抑制剂BB3103能降低VEGF刺激后卵巢癌细胞AO的体外侵袭能力。此外,VEGF不影响卵巢癌细胞AO中MMP-2,TIMP-2的基因表达。结论VEGF促进卵巢癌侵袭转移,其作用机制的关键环节是促进MMP-2的分泌与活化。     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG2细胞生物学特性的影响

目的：探讨血管内皮生长因子165b（VEGF165b）对人肝癌HepG₂细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法：HepG₂细胞分为空白组（仅加转染试剂）、对照组（转染阴性对照PcDNA3.0表达载体）和PcDNA-VEGF165b组（转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b）。MTT法检测各组HepG₂细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG₂细胞迁移能力。结果：与空白组比较,对照组HepG₂细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义（P>0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义（P>0.05）。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义（P<0.05）;与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG₂细胞迁移率明显降低（P<0.05）。结论：VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。     

Modulation of Matrix Metalloproteinase and TIMP-1 Expression by TGF-β1 in Cultured Human RPE Cells

In order to investigate the effects of TGF-β1 on the expression of MMP-2, -9 and TIMP1 in human retinal pigment epithelial (RPE) cells, the third-sixth passage cultured RPE cells were treated with TGF-β~ at different concentrations (0.01, 0. 1, 1.0, 10 ng/mL), the expression of MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA was detected by semi-quantitative RT-PCR assays. MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA were expressed in the cultured RPE cells. The values of MMP-2/β-actin in the cells treated with 0.1, 1.0, 10 ng/mL TGF-β1 were 1.04±0.04, 1.07±0.02 and 1.11±0.03, respectively, significantly higher than in the control group (0. 96±0.03, P＜0. 05-0. 01). The expression of MMP-2 mRNA could be up-regulated by TGF-β1, in a dose-dependent manner. The expression of MMP-9 mRNA in the cultured RPE cells was slightly up-regulated by various TGF-β1 concentrations treatment. The values of TIMP-1/β-actin in the cells treated with 0.01 and 0. 1 ng/mL TGF-β1 were 0. 85±0.01 and 0.97 ± 0.02 respectively, significantly lower than in the control group (1.07±0.04, P＜0.01), indicating that the expression of TIMP-1 mRNA was down-regulated by TGF-β1 at low concentrations. But along with the increase of TGF-β1 concentrations (1.0 and 10 ng/mL), the expression of TIMP-1 mRNA was slightly up-regulated, not significantly different from that in the control group (P＞0.05). It was concluded that TGF-β1 might play an important role in the up-regulation of the expression of MMP-2 in RPE cells and result in a directional shift in the balance between MMP and TIMP. This may be facilitated for RPE cells to migrate in the pathogenesis of vitreoretinopathy.     

外源性表达VEGF165b对人膀胱癌T24细胞侵袭力的影响

目的: 观察人膀胱癌T24细胞中外源性表达血管内皮生长因子(VEGF)变构体(VEGF165b)对T24细胞生存率、迁移率和侵袭力的作用,探讨VEGF165b对人膀胱癌细胞生物学特性的影响。方法: 构建VEGF165b表达载体pcDNA-VEGF165b;T24细胞根据处理因素不同分为T24细胞组(正常对照)、pcDNA3.0组(转染pcDNA3.0表达载体)和pcDNA-VEGF165b组(转染pcDNA-VEGF165b表达载体)。MTT法检测T24细胞生存率, Western blotting法检测T24细胞中VEGF165b、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,Transwell小室法检测T24细胞迁移率和穿膜细胞数。结果: 与T24细胞组比较,pcDNA3.0组T24细胞中VEGF165b、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与T24细胞组和pcDNA3.0组比较,pcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165b蛋白表过水平明显升高(P<0.05),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。T24细胞组、pcDNA3.0组和pcDNA-VEGF165b组细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与T24细胞组细胞迁移率(100%)比较,pcDNA3.0组细胞迁移率(97.2%±7.8%)无明显变化(P>0.05),pcDNA-VEGF165b组细胞迁移率(63.5%±10.4%)明显降低(P<0.05)。细胞侵袭力实验,与T24细胞组穿膜细胞数(70.8±8.5)比较,pcDNA3.0组穿膜细胞数(66.3±11.2)无明显变化(P>0.05),pcDNA-VEGF165b组穿膜细胞数(23.5±7.3)明显降低(P<0.05)。结论: 外源性表达VEGF165b对T24细胞增殖无明显影响,但可明显降低其迁移力和侵袭力。     

羟基红花黄色素A抑制异常增殖血管内皮细胞的机制研究

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)抑制异常增殖血管内皮细胞的作用机理。方法建立人结肠腺癌细胞LS180上清液和人脐静脉内皮细胞ECV304体外共培养模型,通过实时荧光定量PCR检测ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(KDR)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)及其受体(b FGFR)、HSPG2、p53、c-myc mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清VEGF、VEGFR(KDR)、b FGF、b FGFR蛋白的表达。结果在共培养细胞模型中,0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR和癌基因c-myc及与细胞增殖相关蛋白多糖HSPG2的mRNA表达具有抑制作用;对抑癌基因p53 mRNA的表达具有促进作用。0.66、0.33 mg/L浓度的HSYA对血管生成促进因子VEGF及其受体KDR、b FGF及其受体b FGFR的蛋白表达具有抑制作用。结论 HSYA抑制新生血管的生成、抑制共培养模型中血管内皮细胞的异常增殖,其可能的作用机理是通过调控VEGF及其受体、b FGF及其受体、HSPG2、c-myc和野生型p53的表达发挥抗肿瘤作用,揭示HSYA可能是潜在的肿瘤血管生成抑制剂。     

绿茶提取物对人乳头瘤病毒16癌蛋白诱导的人宫颈癌细胞缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究绿茶提取物(GTE)及其主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)干预对人乳头瘤病毒16(HPV-16)癌蛋白(E6和E7)诱导的人宫颈癌C-33A细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将宫颈癌细胞分为瞬时转染空质粒HA-pSG5(空质粒组)、HA-pSG5-HPV-16 E6质粒(16 E6组)、16 E7质粒(16 E7组)和模拟转染组,转染后18、24和48 h以蛋白质印迹法检测各组细胞HIF-1α蛋白的表达,酶联免疫吸附试验检测VEGF蛋白的表达.转染后24 h,分别用不同浓度GTE或EGCG处理16 E6、16 E7组细胞不同时间,并设未用GTE或EGCG处理组(未干预组),同法检测各组细胞HIF-1α和VEGF蛋白的表达,实时PCR检测HIF-1α和VEGF mRNA的表达.结果 转染后24 h,16 E6和16 E7组细胞HIF-1α蛋白表达明显增加;VEGF蛋白分别为(870±66)、(1487±51)pg/ml,均明显高于空质粒组[(366±65)pg/ml,均P<0.01].40μg/ml GTE或50μmol/L EGCG处理16 h即可明显抑制16E6、16E7组细胞HIF-1α蛋白表达;16E6组VEGF蛋白分别为(476±34)、(477±65)pg/ml,VEGF mRNA分别为1.208±0.196、1.174±0.208,均明显低于未干预组[分别为(870±66)pg/ml、1.805±0.081,均P<0.01);16E7组VEGF蛋白分别为(649±55)、(514±37)pg/ml,VEGF mRNA分别为1.442±0.136、1.399±0.064,均明显低于未干预组[分别为(1487±51)pg/ml、2.123±0.120,均P<0.01).80μg/ml GTE或100μmol/L EGCG对VEGF蛋白表达的抑制作用明显强于40μg/ml GTE或50 μmol/L EGCG(均P<0.01).结论 GTE和EGCG对HPV-16癌蛋白诱导的人宫颈癌细胞HIF-1α蛋白、VEGF蛋白及mRNA表达具有明显抑制作用,其中对VEGF蛋白表达的抑制作用呈明显的剂量依赖性.     

人参皂苷Rh2通过调控GSK-3β/Wnt双信号通路影响骨肉瘤细胞增殖和凋亡

目的：探讨人参皂苷Rh2（Rh2）对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并进一步研究Rh2在骨肉瘤中抗肿瘤作用的机制。方法：分别以不同浓度的Rh2 处理骨肉瘤细胞,用MTT法检测骨肉瘤细胞活性的变化;用基质凝胶（Matrigel）侵袭和孔膜法（Transwell）迁移实验检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力的变化;用Annexin V-FITC/PI调亡检测试剂盒及流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的调亡变化;用Western blot法检测细胞侵袭、凋亡相关蛋白的表达情况。结果：骨肉瘤细胞经过不同浓度的Rh2处理后,MTT实验结果表明Rh2在一定浓度范围内可以显著抑制骨肉瘤细胞的生长（P ＜0.05）。Matrigel侵袭和Transwell迁移实验结果表明Rh2可以有效抑制骨肉瘤细胞的侵袭与迁移（P ＜0.05）。Annexinv-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测结果表明,Rh2可以促进骨肉瘤细胞的凋亡反应（P ＜0.05）。Western blot实验结果则显示Rh2 可以上调Bax、E-cadherin蛋白的表达,并抑制Bcl-2、PARP、MMP2、MMP9 蛋白的表达。Rh2 还可以通过激活GSK-3β并抑制β-catenin、Cyclin D1和C-myc相关蛋白来达到调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭反应的作用。结论：Rh2可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能是通过激活GSK-3β并抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。