Mechanisms and clinical implications of thrombosis in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria

Summary. Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is a rare acquired disease characterized by a clone of blood cells lacking glycosyl phosphatidylinositol (GPI)‐anchored proteins at the cell membrane. Deficiency of the GPI‐anchored complement inhibitors CD55 and CD59 on erythrocytes leads to intravascular hemolysis upon complement activation. Apart from hemolysis, another prominent feature is a highly increased risk of thrombosis. Thrombosis in PNH results in high morbidity and mortality. Often, thrombosis occurs at unusual locations, with the Budd–Chiari syndrome being the most frequent manifestation. Primary prophylaxis with vitamin K antagonists reduces the risk but does not completely prevent thrombosis. Eculizumab, a mAb against complement factor C5, effectively reduces intravascular hemolysis and also thrombotic risk. Therefore, eculizumab treatment has dramatically improved the prognosis of PNH. The mechanism of thrombosis in PNH is still unknown, but the highly beneficial effect of eculizumab on thrombotic risk suggests a major role for complement activation. Additionally, a deficiency of GPI‐anchored proteins involved in hemostasis may be implicated.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症的生物学及治疗学研究进展

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得的克隆性疾病。PNH病人选择糖化磷脂酰肌醇(GPI)锚阴性细胞生长,一方面可能由于GPI~-细胞具有内在的生存优势,而更多的人倾向认为是由于附加的环境因素导致GPI~-细胞选择性扩增,可能存在与再生障碍性贫血相似的逃避细胞凋亡的机制。在治疗方面,免疫抑制剂(包括环孢菌素A)及细胞因子都已用于临床并已取得了一定疗效,基因治疗也正在进行当中,但真正应用还有待时日。     

改良简化的酸化血清溶血试验及其应用

目的　考察简化酸化血清溶血试验 (Ham试验 )用于筛查阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)的效果。方法　对 2 0例正常人、16例PNH患者及 4 2例其它贫血患者进行用自身血清或AB血清或同型血清或混合血清的Ham试验 ,及蔗糖溶血 (糖水试验 )尿含铁血黄素检查 (Rous试验 )。结果　对已知PNH患者进行自身血清、AB血清、同型血清、混合血清的Ham试验检验 ,前三种血清阳性率均为 94 % ;而混合血清为 4 4 %。糖水试验、Rous试验阳性率分别为94 %、81%。结论　在PNH患者筛选中 ,Ham试验可以用自身血清替代AB血清或与患者同型的他人血清 ,而不用混合血清 ;Ham试验、糖水试验和Rous结果一致更有利于PNH的诊断。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊治现状与展望

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种补体异常活化的溶血性疾病,嗜水气单胞菌毒素变异体(FLAER)检测法提高了诊断的敏感性和特异性,为PNH的早发现、早治疗打下了良好的基础。血栓形成、肺动脉高压、慢性肾功能不全等非典型症状日益受到关注。Eculizumab极大地改善了PNH的治疗现状。异基因造血干细胞移植仍为其惟一治愈的手段。本文就PNH的FLAER诊断,临床症状和治疗研究进展进行综述。     

DEFECTIVE LYMPHOCYTES SUPPORTING HEMATOPOIESIS IN PATIENTS WITH PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is an acquired hemo-lytic disease in which there is a stem cell disorder of clonal nature. Previous studies have demonstrated that the numbers of burst-forming units-erythroid (BFU-E) and colony-forming units-granulocyte / macrophage (CFU-GM) from bone marrow of PNH patients growing in the medium containing PHA-LCM from the normai donors were more reduced than those of normai bone marrow. The purpose of present study was to investigate if PNH lymphocytes are defective in supporting hematopoiesis in vitro. PHA-LCM from PNH blood was added to the culture medium for the growth of PNH and normai BFU-E and CFU-GM. The numbers of PNH bone marrow BFU-E and CFU-GM in the medium containing PHA-LCM from PNH blood were less than those from normai blood; the numbers of normai bone marrow BFU-E and CFU-GM grown in the medium containing PHA-LCM from PNH blood were more decreased than those from normai blood. The results suggest that diminished numbers of PNH bone marrovv BFU-     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者外周血淋巴细胞增殖、杀瘤活性及其对正常表型骨髓造血细胞的影响

阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)克隆可能由于缺乏GPI锚连蛋白而逃脱免疫攻击 ,形成生长优势。本研究测定PNH患者淋巴细胞增殖反应及对K5 6 2细胞的杀伤作用 ,并与正常对照比较 ,观察其淋巴细胞功能。采用体外液体培养体系 ,应用免疫磁珠技术分选PNH患者骨髓CD34+ 及CD34- 细胞 ,分别向 2组细胞及对照细胞加入自身CD5 9+ 或CD5 9- 淋巴细胞及其培养上清液、外源性IFN γ及IL 2。培养 10天后 ,测定骨髓细胞中PNH细胞 (CD5 9- )百分数 ,观察淋巴细胞对骨髓中CD34+ 及CD34- 细胞中PNH细胞含量的影响。研究结果表明 ,对PHA的增殖反应 ,PNH患者未分选的淋巴细胞与健康对照比较、PNH患者自身CD5 9+ 与CD5 9- 淋巴细胞之间比较均无统计学差异 ,但对K5 6 2细胞的杀伤作用PNH患者未分选的淋巴细胞明显低于健康对照组 ,分别为 (5 0 .0 0± 2 8.6 7) %及 (76 .13± 10 .15 ) % (P <0 .0 5 ) ,而PNH患者CD5 9- 淋巴细胞与CD5 9+ 淋巴细胞之间无显著性差异。PNH患者骨髓细胞中加入自身CD5 9- 淋巴细胞或其培养上清液、CD5 9+ 淋巴细胞或其培养上清液、外源性IFN γ和IL 2培养后 ,CD5 9+ 细胞均有不同程度下降 ,除CD5 9+ 淋巴细胞组外 ,其他各组CD5 9+ 细胞下降与培养前比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,IFN γ及IL 2组     

70例成人阵发性睡眠性血红蛋白尿症临床分析

目的:探讨我国PNH患者的临床特征.方法:对我院2000年1月至2009年12月期间诊治的70例PNH患者临床资料进行了回顾性分析,并总结其临床表现、实验室检查特点、并发症、生存率及预后影响因素.结果:70例PNH患者的中位发病年龄为37岁(18-73岁),其中男41例,女29例,临床表现包括乏力(87.1％),血红蛋白尿(44.3％),感染(22.9％),出血(37.1％)和腹痛(2.9％);56例患者(80％) FHb(游离血红蛋白)大于50mg/L,54例患者(77.1％)Hp(结合珠蛋白)小于0.5 g/L和49例患者(70.0％) LDH水平大于220 U/L.患者并发症包括:再发的腹痛(2.9％)、感染(30.0％)、血栓事件(8.6％)、进展为MDS/AML(5.7％)、结石(11.4％)及死亡(17.1％).经Kaplan-Meier法计算出的10年总体生存率为72.2％.单因素和多因素分析显示:血栓事件、进展为骨髓增生异常综合征和/或急性髓系白血病(MDS/AML)和再发的感染为影响生存的不良预后因素.结论:本研究详细描述了我国成人PNH患者临床特征及预后因素,有助于更深入的认识此疾病,尤其是对预后因素的研究有助于评估本病的治疗效果.     

体外转运红细胞囊泡的GPI锚定蛋白cD59保护阵发性睡眠性血红蛋白尿症红细胞

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)是一种后天获得性克隆溶血疾病,由于血细胞膜上缺乏具有调节蛋白补体的GPI-锚定蛋白如CD59和CD55等,所以对补体敏感,易产生溶血。红细胞存储或ATP耗空时有囊泡释放,经免疫印迹试验证明囊泡中富含CD59。应用免疫亲和层析柱分离PNH CD59~-红细胞,然后与红细胞囊泡保温,保温后分别测定PNH CD59~-细胞表面CD59含量和溶血度。用流式细胞仪测定CD59,结果发现保温后CD59含量增加;用蛇毒因子溶血试验测得溶血度有显著下降。体外实验证明囊泡上的CD59可以转运到PNH CD59~-红细胞上,并具有抑制补体溶血的功能,使PNH CD59~-红细胞在受补体攻击时不易溶血。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓中性粒细胞凋亡相关蛋白的表达

本研究比较阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者和正常人骨髓中性粒细胞GPI锚定蛋白CD16b、凋亡受体Fas和凋亡相关蛋白的表达水平,并分析其相关性,以了解PNH细胞是否存在凋亡异常。用流式细胞术检测PNH患者和正常对照骨髓中性粒细胞GPI锚定蛋白CD16b、凋亡受体Fas和凋亡增殖相关蛋白Bax、Bcl2的表达水平,比较它们在患者与正常人之间有无差别,以及CD16b与凋亡相关蛋白表达间有无相关性。结果表明:①骨髓中性粒细胞表面CD16b的表达率,PNH患者为(20.36±9.05)%,正常对照组为(71.34±26.80)%,PNH患者明显降低(P=0.01);②骨髓中性粒细胞表面CD95的表达率,PNH患者为(62.83±32.11)%,正常对照组为(48.00±38.52)%,二者的表达水平无显著差异;PNH患者骨髓中性粒细胞表面CD95表达与CD16b的表达无显著相关(P>0.05);③骨髓中性粒细胞胞浆内Bcl2的表达率,PNH为(8.64±5.40)%,正常对照组为(16.82±15.39)%,二者的Bcl2表达水平无显著差异;PNH患者骨髓中性粒细胞胞浆内Bcl2表达与CD16b的表达无显著相关(P>0.05);④骨髓中性粒细胞胞浆内Bax表达率,PNH患者为(30.47±22.15)%,正常对照组为(48.47±15.99)%,PNH患者与正常对照组二者的Bax表达水平无显著差异;PNH患者骨髓中性粒细胞胞浆Bax表达与CD16b的表达无显著相关。结论:PNH骨髓中性粒细胞凋亡相关蛋白Bax和与其功能密切相关的Bcl2以及凋亡受体Fas的表达与正常对照无差别,这提示PNH细胞在骨髓内的消长可能不涉及凋亡蛋白表达异常。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床进展

随着FLAER高灵敏度流式细胞仪诊断技术和补体c5单克隆抗体的应用,许多学者对阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）的认识发生了改变。这些新的研究成果表明,人源型抗c5单克隆抗体的治疗能改变PNH的自然痛史,能从根本上减少血栓栓塞、控制血管内溶血、减少或消除输血的需求,减少了疾病相关的死亡率。本文对PNH和骨髓衰竭症之间的关系、抗c5单克隆抗体治疗PNH的长期疗效、控制PNH血管内和血管外溶血的新治疗策略进行综述。     

GPI—Pr缺失与阵发性睡眠性血红蛋白尿症粒细胞凋亡的关系

采用无血清培养诱导细胞凋亡,用Annexin-V荧光试验盒标记、PI标记、流式细胞仪检测,以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂等方法,研究糖基磷酯酰肌醇锚蛋白（GPI-Pr)缺失与阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）粒细胞凋亡的关系。结果显示,PNH粒细胞的凋亡率比正常人粒细胞的凋亡率明显为低;分析凋亡率与粒细胞的CD59缺失率之间的关系,示发现二相关性。结果表明,PNH的粒细胞比正常人粒细胞相对不易凋亡,粒细胞上GPI-Pr CD59的缺失不是造成PNH和正常人粒细胞凋亡差异的原因。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症多学科诊疗专家共识(2024)

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)是一种由于磷脂酰肌醇聚糖A基因突变引起细胞膜上锚链蛋白糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol, GPI)表达异常所致的后天获得性克隆性造血干细胞疾病, 临床常表现为血管内溶血、反复血栓形成及骨髓衰竭, 也可出现肾功能异常、肺动脉高压、吞咽困难、胸痛、腹痛、勃起功能障碍等多系统受累的症状。由于PNH为罕见病, 且临床表现异质性强, 常需进行多学科协作诊疗。北京协和医院依托罕见病诊疗平台, 邀请多学科临床专家, 在PNH诊疗方面达成了统一意见, 并形成《阵发性睡眠性血红蛋白尿症多学科诊疗专家共识(2024)》, 以期促进PNH诊疗的标准化、规范化。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血细胞表面CD55和CD59的检测及临床意义

目的探讨红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原表达在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)诊断中的应用。方法采用流式细胞术结合直接免疫荧光法检测25例PNH、20例再生障碍性贫血(AA)、20例健康对照者外周血红细胞和粒细胞膜CD55和CD59抗原的表达,并同时做酸化血清溶血试验(Ham试验)、蔗糖溶血试验和尿含铁血黄素试验(尿Rous试验)。结果与AA组和健康对照组相比,PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜CD55、CD59表达缺失率均明显增高(P<0.05);而AA组和健康对照组缺失率均小于5%,且两者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。25例PNH患者中,9例Ham试验阴性,6例蔗糖溶血试验阴性,7例尿Rous试验阴性,这些患者的红细胞、粒细胞的CD55、CD59表达缺失率均大于5%。结论利用流式细胞术同时检测患者红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原对PNH的诊断与鉴别诊断具有重要价值。