红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤的影响北大核心CSCD

目的探究红景天苷通过沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,Sirt1)抑制过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y氧化应激损伤的机制。方法将对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SHSY-5Y随机分为空白组、模型组和低、中、高剂量实验组。空白组给予生理盐水处理,模型组给予100μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)处理,低、中、高剂量实验组先分别用1,10,100μmol·L^(-1)红景天苷处理后,再用100μmol·L^(-1)过氧化氢处理。用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光技术及蛋白质印迹(Western blot)法检测Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平。结果空白组、模型组和低、中、高剂量实验组的细胞活力分别为(100.00±5.99)%,(22.89±4.17)%,(30.75±6.01)%,(60.69±9.37)%,(80.81±4.38)%;凋亡率分别为(6.77±0.72)%,(68.53±11.07)%,(57.01±6.33)%,(46.41±8.54)%,(20.12±3.60)%;NOS水平分别为(0.41±0.08),(4.99±0.32),(4.24±0.24),(2.95±0.19),(2.33±0.25)ng·mL^(-1);SOD水平分别为(24.15±1.92),(10.65±0.78),(13.62±1.52),(17.01±1.63),(21.38±0.54)U·mg^(-1);MDA水平分别为(6.31±0.89),(15.40±1.03),(11.77±0.90),(9.95±1.01),(7.51±1.13)ng·mL^(-1);8-OHdG水平分别为(3.67±0.30),(10.99±1.04),(9.72±1.35),(6.89±0.33),(4.62±0.66)μmol·mg^(-1);模型组和空白组的上述指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、中、高剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红景天苷对过氧化氢诱导SHSY-5Y细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与Sirt1蛋白激活相关。     

白芍多糖对小鼠急性肝损伤的保护与机制研究北大核心CSCD

目的 研究白芍多糖对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 将小鼠随机分5组,低、高剂量实验组(283.5,1 134 mg·kg^(-1)·d^(-1)白芍多糖溶液),阳性对照组(2 mg·kg^(-1)·d^(-1)联苯双酯),空白组和模型组(等量蒸馏水)。灌胃7 d后,除空白组外,其余各组均腹腔注射10 mg·kg^(-1)四氯化碳(CCl_(4))溶液,诱导急性肝损伤。试剂盒法检测血清谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)含量;Lowry法测量肝组织氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附试验法测定抗炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6);蛋白质印迹法检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、NF-κBp65、髓样分化蛋白88(MyD88)和p-NF-κBp65蛋白的表达;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肝组织病理变化。结果 空白组、模型组、阳性对照组、低剂量实验组、高剂量实验组血清GPT含量分别为(46.89±5.10),(194.07±21.46),(113.69±10.88),(144.51±21.36)和(126.96±7.85)U·L^(-1);GOT含量分别为(75.75±14.42),(231.63±24.30),(143.09±16.76),(187.04±18.82)和(163.89±17.96)U·L^(-1);各组肝组织匀浆SOD含量分别为(33.88±5.35),(15.15±4.20),(26.71±3.68),(20.03±1.92)和(23.10±3.35)U·mg^(-1);各组肝组织匀浆GSH含量分别为(12.72±2.09),(2.78±0.46),(8.68±2.15),(6.59±2.49)和(8.16±2.27)μmol·mg^(-1);各组肝组织匀浆MDA含量分别为(5.98±1.00),(14.56±2.57),(8.60±1.24),(11.36±1.07)和(9.04±1.75)nmol·mg^(-1)。与模型组比较,阳性对照组、低剂量实验组、高剂量实验组血清的GOT、GPT活性明显降低,肝组织SOD、GSH明显升高,MDA明显降低,肝组织坏死程度明显改善。结论 白芍多糖通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路,对CCl_(4)所诱导的小鼠肝损伤具有保护作用。     

microRNA-129-5p对脂多糖致小鼠肺上皮细胞损伤的影响北大核心CSCD

目的研究microRNA-129-5p(miR-129-5p)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法取小鼠肺上皮细胞MLE-12,分别转染miR-129-5p模拟物(设为miR-129-5p mi组)和阴性对照寡核苷酸(设为miR-NC组),随后用500 ng·mL^(-1)LPS处理MLE-12细胞。用细胞计数法-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖能力;用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;用蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中自噬相关蛋白P62和Bec-lin-1的表达水平。结果miR-NC组和miR-129-5p mi组细胞在24 h的细胞存活率分别为(52.73±1.41)%,(68.70±3.55)%,在48 h的细胞存活率分别为(48.75±7.22)%,(69.24±3.05)%,在72 h的细胞存活率分别为(48.22±4.28)%,(65.61±2.53)%;细胞凋亡率分别为(28.46±2.51)%,(17.24±2.06)%;P62蛋白的表达水平分别为1.01±0.03和1.54±0.07,Beclin-1蛋白的表达水平分别为0.98±0.09和0.52±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-129-5p可显著促进LPS诱导小鼠肺上皮细胞MLE-12增殖,并抑制细胞凋亡和自噬,从而改善LPS诱导的急性肺损伤。     

MiR-192-5p在支气管哮喘气道炎症中的作用北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-192-50(miR-192-5p)在支气管哮喘(简称哮喘)患者血浆中的表达,及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖、炎性因子的表达以及细胞周期相关蛋白的影响。方法将本院收治的65例急性哮喘患者作为哮喘组,并选取同时期年龄相仿的65例健康人员作为健康对照组。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测哮喘患者血浆中miR-192-5p的表达水平。将ASMCs随机分为空白组(常规培养,不做任何处理)、模型组(20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)、转染对照组(转染模拟物阴性对照mimic-NC后,用20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)和转染组(转染miR-192-5p mimic后用20 ng·mL^(-1)TNF-α处理24 h)。用噻唑蓝(MTT)法检测ASMCs的增殖活力;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测ASMCs细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平;用蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1和CDK6蛋白的水平。结果miR-192-5p在健康对照组和哮喘组血浆中的相对表达分别为1.01±0.09,0.44±0.05,与健康对照组相比,哮喘组血浆中miR-192-5p显著低表达(P<0.05)。空白组、模型组、转染对照组、转染组ASMCs上清液中IL-1β的水平分别为(132.58±17.41),(519.48±38.94),(509.41±20.34)和(204.14±28.71)pg·mL^(-1),IL-6的水平分别为(86.99±6.83),(639.21±56.25),(656.72±69.35)和(301.86±34.98)pg·mL^(-1),Cyclin D1蛋白的表达水平分别为0.36±0.02,0.95±0.08,0.97±0.09和0.48±0.03;CDK6蛋白的表达水平分别为0.11±0.01,1.04±0.09,1.01±0.08和0.16±0.02。模型组与空白组,转染对照组与转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-192-5p在支气管哮喘患者血浆中表达下调,过表达miR-192-5p抑制TNF-α诱导的ASMCs增殖、炎症和细胞周期相关蛋白。     

丁苯酞对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞损伤的保护作用北大核心CSCD

目的探究丁苯酞对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞损伤的保护作用和机制。方法将PC12细胞随机分为对照组(常规培养)、模型组[缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)]和实验组(10μmol·L^(-1)丁苯酞)。然后,将NC inhibitor和miR-146b-5p inhibitor分别转染至实验组细胞中,分别命名为转染组-1和转染组-2。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-β)含量;试剂盒检测活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;用蛋白免疫印迹法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白表达。结果对照组、模型组和实验组的TNF-α含量分别为(53.31±4.71),(115.10±10.33)和(82.13±4.83)pg·m L^(-1);IL^(-1)β含量分别为(62.17±4.88)(97.33±7.96)和(74.42±5.33)pg·m L^(-1);ROS活性分别为(21.12±2.11),(47.62±2.98)和(32.01±3.15)U·m L^(-1);SOD活性分别为(60.42±3.33),(44.78±2.69)和(68.01±5.12)U·m L^(-1);TRAF6蛋白相对表达量分别为1.03±0.11,2.92±0.32和1.93±0.20。上述指标,模型组与对照组相比,实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染组-1和转染组-2中TRAF6相对表达量分别为1.01±0.10和3.12±0.29,两组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论丁苯酞通过miR-146b-5p/TRAF6轴抑制炎症反应和氧化应激反应减轻缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤。     

MiR-26a-5p对人主动脉内皮细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)中的表达和作用。方法将HAECs随机分为对照组(正常培养);模型组(用50μg·mL^(-1)ox-LDL处理24 h);转染组-1(转染mimic NC后用50μg·mL^(-1)ox-LDL处理24 h);转染组-2(转染miR-26a-5p mimic后用50μg·mL^(-1)ox-LDL处理24 h)。以实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miR-26a-5p的表达水平;以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;以流式细胞术检测HAECs的凋亡情况。结果对照组、模型组、转染组-1、转染组-2细胞中miR-26a-5p的相对表达量分别为1.03±0.14,0.56±0.03,0.51±0.07,2.31±0.17;24 h的细胞增殖率分别为(47.71±4.35)%,(31.64±2.83)%,(30.23±1.47)%,(41.62±2.85)%;凋亡率分别为(8.24±0.59)%,(14.56±1.63)%,(15.48±1.24)%,(8.54±0.68)%。模型组与对照组比较,转染组-2与转染组-1比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-26a-5p在ox-LDL诱导的HAECs中低表达,上调miR-26a-5p可以促进HAECs增殖并抑制细胞凋亡。     

温阳振衰颗粒对慢性心力衰竭大鼠的作用机制研究北大核心CSCD

目的观察温阳振衰颗粒对阿霉素诱导所致慢性心力衰竭(CHF)模型大鼠心肌的作用机制。方法SD大鼠腹腔注射阿霉素建立慢性心力衰竭模型。造模6周后根据心功能结果将大鼠随机分为3组:模型组、温阳振衰组(1.44 g·kg^(-1)·d^(-1))和依那普利组(1.8 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。另取10只大鼠为正常组。2次/天,连续给药4周。用心脏彩超检测大鼠左心室射血分数(LVEF);用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中N端脑钠肽前体(NT-proBNP)含量;用蛋白质印迹法检测大鼠细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的蛋白表达(灰度值);用实时荧光定量检测大鼠长链非编码RNA(lncRNA)肺癌转移相关转录本1(malat-1)和微小RNA-133(miR-133)基因的表达量。结果正常组、模型组、温阳振衰组和依那普利组的LVEF分别为(76.90±4.28)%,(42.24±5.93)%,(59.04±4.30)%和(50.44±4.26)%;这4组NT-proBNP含量分别为(75.08±9.86),(760.89±60.84),(160.46±10.98)和(216.62±36.44)pg·mL^(-1);这4组的ERK1/2蛋白表达量分别为0.48±0.08,0.49±0.05,0.47±0.06和0.45±0.05;这4组的lncRNA malat-1基因表达量分别为0.98±0.05,1.80±0.02,1.36±0.11和1.58±0.08;这4组的miR-133基因表达量分别为0.97±0.04,0.46±0.02,0.68±0.02和0.58±0.01。上述指标,模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);温阳振衰组和依那普利组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论温阳振衰颗粒可治疗小鼠慢性心力衰竭,可能是通过对心肌组织中的lncRNA malat1和miR-133进行调控进而抑制ERK1/2蛋白过度磷酸化实现的。     

吗啡对急性心肌缺血大鼠的作用及机制研究北大核心CSCD

目的研究吗啡对急性心肌缺血大鼠心肌损伤的影响及其机制。方法按照体重将SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、实验组,每组20只。以诱导局部心肌缺血再灌注法建立大鼠急性心肌损伤模型。在大鼠心肌缺血模型再灌注后,实验组大鼠静脉注射吗啡3 mg·kg^(-1),每天1次,连续5 d;假手术组和模型组静脉注射等量生理盐水。通过超声心动图确定射血分数和左心室缩短分数,氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中乳酸盐脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,末端标记(TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38(p-p38)的蛋白表达。结果假手术组、模型组、实验组大鼠心肌射血分数分别为(81.21±2.14)%,(42.56±3.84)%和(61.43±4.89)%;这3组大鼠左心室缩短分数分别为(67.51±5.14)%,(40.11±3.55)%和(50.18±4.78)%;这3组大鼠心肌梗死面积分别为(5.01±0.18)%,(57.34±3.64)%和(23.78±1.98)%;这3组大鼠血清中LDH的含量分别为(5.34±0.26),(28.79±1.67)和(15.64±1.24)nmol·mL^(-1);这3组大鼠血清中MDA的含量分别为(0.78±0.04),(1.89±0.14)和(1.13±0.10)nmol·mL^(-1);这3组大鼠血清中SOD的含量分别为(10.59±0.98),(3.85±0.27)和(6.52±0.43)U·mL^(-1);这3组细胞凋亡率分别为(10.21±0.98)%,(34.65±2.89)%和(26.46±2.34)%;这3组p-JNK蛋白水平分别为0.26±0.02,0.68±0.06和0.35±0.03;这3组p-p38蛋白水平分别为0.31±0.03,0.79±0.07和0.42±0.04。上述指标:模型组与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吗啡可减轻急性缺血大鼠的心肌损伤,其机制与抑制JNK/p38信号通路相关。     

厄贝沙坦片在中国健康人体内的生物等效性研究北大核心CSCD

目的研究厄贝沙坦片在中国健康人体内的生物等效性。方法采用单中心、随机、开放、单剂量、两周期、2×2交叉试验设计,空腹试验和餐后试验中分别有32例受试者口服厄贝沙坦片受试制剂或参比制剂0.15 g。LC-MS/MS法测定给药后不同时间厄贝沙坦的血药浓度,并用Phoenix WinNonlin 7.0软件计算主要药代动力学参数,判定两制剂是否等效。结果空腹试验受试制剂和参比制剂厄贝沙坦的主要药代动力学参数:C_(max)分别为(2242.4±631.5),(2327.3±821.0)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(9953.2±3339.6),(10218.5±2985.3)h·ng·mL^(-1),AUC_(0-∞)分别为(10201.7±3377.9),(10516.5±2995.6)h·ng·mL^(-1),T_(max)均为1.50 h;t_(1/2)分别为(12.3±5.8),(15.1±10.3)h。餐后试验受试制剂和参比制剂厄贝沙坦的主要药代动力学参数:C_(max)分别为(2691.8±663.7),(2598.8±877.1)ng·mL^(-1),AUC_(0-t)分别为(10129.8±3783.9),(9538.6±3151.8)h·ng·mL^(-1),AUC_(0-∞)分别为(10353.1±3792.3),(9720.1±3162.0)h·ng·mL^(-1),T_(max)均为1.50 h;t_(1/2)分别为(12.5±7.6),(10.3±5.2)h。受试制剂与参比制剂C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)几何均值比的90%置信区间均完全落在80.00%~125.00%。结论2种厄贝沙坦片在中国健康志愿者体内具有生物等效性。     

α-硫辛酸对高盐诱发的高血压大鼠头端延髓腹外侧区内氧化应激的抑制作用北大核心CSCD

目的研究α硫辛酸可否在高盐诱导的高血压的发生发展中通过降低延髓头端腹外侧(RVLM)线粒体中活性氧(ROS)的过量产生来缓解高血压反应。方法按照体重将雄性大鼠随机分到2组:正常盐饮食(0.3%NaCl)8周和高盐饮食8周(以8%NaCl诱导高血压模型)(均n=14)。分别再分2个亚组:实验组(高血压模型+α硫辛酸)、模型组(高血压模型+0.9%NaCl)、对照组(正常盐饮食+α硫辛酸)和空白对照组(正常盐饮食+0.9%NaCl,均n=7)。在实验结束时,监测各组大鼠动脉压的变化;用ELISA测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽(GSH)等含量或活性。用高效液相色谱法检测血清去甲肾上腺素(NE)水平。结果给与α硫辛酸9周后,模型组与实验组的平均动脉压(MAP)分别为(160.2±10.9),(128.2±9.6)mm Hg,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组与实验组的MDA分别为(6.1±3.0),(9.8±3.2)μmol·g^(-1),实验组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);这2组的SOD水平分别为(16.2±1.3),(31.9±2.8)U·mg^(-1);这2组的GSH分别为(2.0±0.4),(4.9±0.8)μmol·g^(-1),实验组均明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组与实验组的血清去甲肾上腺素分别为(458.9±6.1),(322.8±7.2)pg·mL^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期补充α硫辛酸可通过提高抗氧化能力来缓解高血压反应。     

鸢尾素对局灶性脑缺血再灌注大鼠磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路及Th1/Th2失衡的影响北大核心CSCD

目的探究鸢尾素对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织的保护作用。方法用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠,并随机分为模型组、对照组和低、中、高剂量实验组,每组15只;另取15只正常大鼠仅分离右颈总动脉不进行其他操作作为假手术组。于造模结束第2天,低、中、高剂量实验组分别按50,100和200 mg·kg^(-1)的剂量灌胃给予50 mg·mL^(-1)鸢尾素溶液;对照组按200 mg·kg^(-1)的剂量灌胃给予50 mg·mL^(-1)葛根素;假手术组和模型组均灌胃给予等体积0.9%NaCl。6组每天给药1次,连续给药4周。用流式细胞术检测Th1和Th2细胞数量,用蛋白质印迹法检测脑组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路蛋白表达。结果低、高剂量实验组和对照组、模型组、假手术组的PI3K蛋白磷酸化分别为0.21±0.04,0.46±0.05,0.49±0.07,0.12±0.03和0.64±0.05,AKT蛋白磷酸化分别为0.89±0.06,1.37±0.08,1.41±0.12,0.68±0.04和1.74±0.26,Th1细胞比例分别为(30.46±3.37)%,(23.43±3.37)%,(22.73±1.28)%,(36.85±3.45)%和(20.28±3.93)%,Th2细胞比例分别为(3.60±0.38)%,(4.16±0.45)%,(4.23±0.37)%,(2.91±0.43)%和(5.15±0.39)%。低、高剂量实验组和对照组、假手术组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论鸢尾素可能通过激活PI3K/AKT通路从而降低Th1细胞比例、升高Th2细胞比例,进而实现对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织的缓解。     

微小RNA-222-3p在儿童肺炎中的表达及其对LPS诱导的肺成纤维细胞凋亡和炎症因子表达的影响北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-222-3p(miR-222-3p)在肺炎患儿血清中的表达水平,以及对脂多糖(LPS)诱导的肺成纤维细胞中凋亡和炎症因子水平的影响。方法选取87例儿童血清样本(50例肺炎患儿为肺炎组,37例健康儿童为健康对照组)作为实验标本,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测血清中miR-222-3p表达水平。将人胚肺成纤维细胞WI-38细胞株分为4组:对照组(无任何处理)、模型组(5μg·m L^(-1)LPS诱导12 h)、转染组-1(转染inhibitor NC后,5μg·m L^(-1)LPS诱导12 h后,)、转染组-1(转染miR-222-3p inhibitor后用5μg·m L^(-1)LPS诱导12 h)。用ELISA试剂盒检测各组WI-38细胞培养上清液白介素-1β(IL^(-1)β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;用流式细胞术比较各组细胞的凋亡率。结果健康对照组与肺炎组血清中miR-222-3p的相对表达分别为1.10±0.36,1.51±0.52;对照组、模型组、转染组-1、和转染组-2细胞上清IL^(-1)β的水平为(10.08±1.33),(317.85±37.67),(304.87±37.07),(152.12±24.38)pg·m L^(-1);IL-6的水平为(19.78±2.17),(423.75±54.16),(429.05±48.03),(208.18±34.85)pg·m L^(-1);TNF-α的含量为(17.54±3.85),(602.13±42.13)(606.44±53.32),(349.30±25.73)pg·m L^(-1);凋亡率分别为(4.73±0.64)%,(9.75±1.27)%,(10.68±1.87)%,(7.18±0.79)%;模型组与对照组比较,转染组-1与对照组比较,转染组-2与转染组-1比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-222-3p在肺炎患儿血清中高表达,敲低miR-222-3p可降低LPS诱导的WI-38炎症因子水平,并抑制细胞凋亡。     

红车轴草总黄酮通过调控miR-99a-3p/CD36表达对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞的保护作用北大核心CSCD

目的研究红车轴草总黄酮对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞损伤的影响,及其潜在的分子机制。方法本实验分为对照组,模型组,低、中、高剂量实验组,miR-NC组,miR-99a-3p组,anti-miR-NC,anti-miR-99a-3p组,模型+miR-NC组,模型+miR-99a-3p组,模型+si-NC组,模型+si-CD36组,高剂量实验+anti-miR-NC组和高剂量实验+anti-miR-99a-3p组。对照组给予5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;模型组给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;低、中、高剂量实验组分别给予12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮和25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;miR-NC组、miR-99a-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-99a-3p组分别转染miR-NC、miR-99a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-99a-3p;模型+miR-NC组、模型+miR-99a-3p组、模型+si-NC组、模型+si-CD36组均给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处理,并分别转染miR-NC、miR-99a-3p、si-NC、si-CD36;高剂量实验+anti-miR-NC组、高剂量实验+anti-miR-99a-3p组均给予50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮+25 mmol·L^(-1)葡萄糖,并分别转染anti-miR-NC或anti-miR-99a-3p。用流式细胞术测定细胞凋亡率,用定量实时聚合酶链反应检测细胞中miR-99a-3p和CD36 mRNA的表达水平。结果模型组INS-1细胞中CD36 mRNA(2.74±0.27 vs 1.01±0.08)和细胞凋亡率[(27.63±2.71)%vs(5.69±0.58)%]均较对照组显著升高,miR-99a-3p(0.38±0.03 vs 1.00±0.09)较对照组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量实验组的上述结果相反。模型+miR-99a-3p组的细胞凋亡率[(12.48±1.19)%vs(26.84±2.41)%]较模型+miR-NC组显著降低,miR-99a-3p表达量(0.79±0.07 vs 0.34±0.03)较模型+miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型+si-CD36组INS-1细胞中CD36 mRNA(1.35±0.12 vs 2.81±0.26)及细胞凋亡率[(13.54±1.32)%vs(25.87±2.52)%]均较模型+si-NC组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高剂量实验+anti-miR-99a-3p组INS-1细胞中miR-99a-3p(0.43±0.14 vs 0.88±0.06)较高剂量实验+anti-miR-NC组显著降低,CD36 mRNA(2.51±0.22 vs 1.41±0.13)及细胞凋亡率[(20.45±2.03)%vs(10.56±1.02)%]均较高剂量实验+anti-miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红车轴草总黄酮可能通过调控miR-99a-3p/CD36以减轻高糖对大鼠胰岛β细胞INS-1的损伤,进而抑制细胞的凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞的损伤机制与干预研究北大核心CSCD

目的观察过氧化物酶体增生物激活受体α激活物(K877)对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)及前蛋白转化酶枯草溶菌9(PCSK9)表达的影响。方法制备氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),将细胞分为5组:正常对照组、模型组、多聚肌苷酸组、K877组和联合组(K877+多聚肌苷酸组)。正常组,以DMEM培养基培养;模型组,在培养基中加入ox-LDL 50μg·mL^(-1)培养24 h。多聚肌苷酸组,多聚肌苷酸250μg·mL^(-1)预先作用内皮细胞2 h,再加入ox-LDL 50μg·mL^(-1)培养24 h。K877组,K877 0.2μmol·L^(-1)预先作用内皮细胞2 h,再加入ox-LDL 50μg·mL^(-1)培养24 h。联合组,加入多聚肌苷酸250μg·mL^(-1)和K877 0.2μmol·L^(-1)预先作用内皮细胞2 h,最后加入ox-LDL 50μg·mL^(-1)培养24 h。以逆转录聚合酶链反应检测PCSK9与LOX-1 mRNA的表达。结果正常对照组、模型组、多聚肌苷酸组、K877组和联合组的PCSK9 mRNA分别是0.35±0.02,1.05±0.03,0.79±0.02,0.58±0.02,0.46±0.01;这5组的LOX-1 mRNA相对值分别是0.12±0.01,0.88±0.02,0.46±0.01,0.25±0.01,0.11±0.01,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);多聚肌苷酸组和K877组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);联合组与单一药物组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 K-877可抑制ox-LDL诱导HUVEC的PCSK9 mRNA表达,LOX-1参与了该过程。     

微小RNA-124对肾癌细胞的自噬和增强顺铂敏感性的影响北大核心CSCD

目的探讨微小RNA-124(miR-124)在肾癌细胞自噬和顺铂耐药中可能的作用靶点。方法以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测34例肾癌组织和癌旁组织,人肾小管上皮细胞HK-2以及4种人肾癌细胞A498、SN12C、RXF393、769P中miR-124表达。以蛋白质印迹法检测用30μg·mL^(-1)顺铂处理对肾癌细胞A498自噬相关蛋白LC3表达的影响。将A498肾癌细胞分为4组:对照组、顺铂组、第1转染组(DMSO+miR-124)、第2转染组(顺铂+miR-124组),在转染组细胞中添加miR-124 mimics。以细胞计数试剂盒8(CCK8)检测过表达miR-124对顺铂半数致死量(IC50)的影响。以荧光素酶报告实验和蛋白质印迹法验证miR-124对组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)的靶向调控作用。结果肾癌组织和癌旁组织miR-124表达分别为0.48±0.21和1.56±0.46,差异有统计学意义(P<0.05);人肾小管上皮细胞HK-2和人肾癌细胞A498、SN12C、RXF393、769P中miR-124表达分别为1.09±0.23,0.38±0.08,0.46±0.10,0.58±0.09,0.44±0.12,差异有统计学意义(P<0.05)。A498细胞用顺铂分别处理0,6,12,24 h,LC3表达分别为1.01±0.03,1.35±0.35,1.68±0.46,2.21±0.53,随着时间的延长,LC3蛋白表达显著增加(P<0.05)。第1转染组和第2转染组IC50分别为(7.81±1.14),(22.26±1.14)μg·mL^(-1),差异有统计学意义(P<0.05)。生物信息学网站预测发现HDAC4是miR-124的靶基因,荧光素酶报告实验显示,miR-124过表达可以降低野生型HDAC43'UTR荧光强度(P<0.05),而对突变型无明显影响(P>0.05)。对照组、顺铂组、第1转染组、第2转染组HDAC4蛋白表达分别为0.48±0.08,0.96±0.11,0.22±0.07,0.21±0.08,第1转染组、第2转染组分别与顺铂组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肾癌中miR-124表达降低,顺铂化疗可以诱导肾癌细胞自噬,而过表达miR-124可以降低肾癌细胞自噬,增强顺铂敏感性,其作用的靶标可能为HDAC4。     

三七皂苷Rb1对急性呼吸窘迫综合征大鼠的影响及作用机制北大核心CSCD

目的研究三七皂苷Rb1对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠的治疗作用及机制。方法将50只Wistar大鼠分为对照组、模型组和低、中、高剂量实验组,每组10只。模型组和实验组均腹腔注射5 mg·kg^(-1)大肠埃希菌脂多糖构建ARDS模型,建模成功后,低、中、高剂量实验组分别腹腔注射2.5,5.0,10.0mg·kg^(-1)的三七皂苷Rb1,模型组和对照组腹腔注射等量生理盐水,连续干预5d。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠肺组织细胞色素氧化酶Ⅱ(COXⅡ)mRNA表达情况,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎性因子水平,并检测肺组织线粒体膜流动性及膜电位。结果模型组和对照组的COXⅡmRNA表达量分别为2.32±0.05,1.23±0.02,差异有统计学意义(P<0.01),实验组COXⅡmRNA表达量随三七皂苷Rb1浓度的增大逐渐降低,且中、高剂量实验组COXⅡmRNA相对表达量(1.62±0.05,1.39±0.04)均显著低于模型组(均P<0.01)。低、中、高剂量实验组血清IL-6含量分别为(279.15±22.58),(251.23±22.13),(221.36±20.34)pg·mL^(-1),INF-γ含量分别为(39.21±6.47),(38.21±5.69),(35.12±5.33)pg·mL^(-1),实验组随三七皂苷Rb1浓度的增大血清IL-6和INF-γ含量逐渐降低,且低于模型组的(448.12±34.36),(57.15±7.65)pg·mL^(-1)(均P<0.01)。实验组随三七皂苷Rb1干预浓度的增大膜荧光偏振度和微黏度逐渐降低,膜电位逐渐升高,且与模型组相比差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论三七皂苷Rb1可降低ARDS模型大鼠机体炎症程度,通过改善肺组织线粒体结构与功能起到肺保护作用。     

藤黄酸上调miR-497-5p影响子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为北大核心CSCD

目的研究藤黄酸对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响和机制。方法子宫内膜癌Ishikawa细胞分成4组:对照组、实验组(用0.8μg·mL^(-1)藤黄酸处理)、Anti-miR-NC组(转染inhibitor control,0.8μg·mL^(-1)藤黄酸处理)、Anti-miR-497-5p组(转染miR-497-5p inhibitor,0.8μg·mL^(-1)藤黄酸处理)。用qRT-PCR方法检测miR-497-5p表达,用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测凋亡率,Transwell小室检测迁移能力,用蛋白印迹法(Western blot)检测剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3、上皮性钙黏附素、神经性钙黏附素、基质金属蛋白酶-9蛋白表达。结果对照组、实验组、Anti-miR-NC组、Anti-miR-497-5p组子宫内膜癌Ishikawa细胞中miR-497-5p表达量分别为1.00±0.10,1.98±0.17,1.96±0.19和0.99±0.12;上述4组的细胞增殖率分别为(100.00±11.70)%,(55.10±8.10)%,(56.20±7.15)%和(87.51±7.64)%;上述4组的细胞凋亡率分别为(4.66±0.88)%,(12.45±1.85)%,(13.05±1.56)%和(8.72±1.10)%;上述4组的迁移细胞数目分别为215.36±18.42,103.69±9.15,108.42±11.50和164.79±13.57。上述指标,实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);Anti-miR-497-5p组与Anti-miR-NC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论藤黄酸通过上调miR-497-5p影响子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为。     

葛根素通过抗氧化应激对亚慢性乙醇脑损伤大鼠的神经保护作用北大核心CSCD

目的研究葛根素对亚慢性乙醇脑损伤大鼠的神经保护作用及其抗氧化应激作用机制。方法按照体重将大鼠分为5组:正常组、模型组和低、中、高3个剂量实验组。通过连续大量灌胃给予乙醇4 d建立亚慢性脑损伤大鼠模型。从灌胃给予乙醇第1天起,正常组与模型组大鼠腹腔注射0.9%Na Cl 5.0mL·kg^(-1)·d^(-1);低、中、高3个剂量实验组腹腔注射葛根素50,100,150mg·kg^(-1)·d^(-1),连续7 d。以血液乙醇浓度检测试剂盒检测大鼠血液乙醇浓度,Y迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,FJB染色评价大鼠前额叶皮层神经元数量,试剂盒法检测各组大鼠前额叶皮层内超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果大量灌胃给予乙醇1~4 d,大鼠血液乙醇浓度显著增加并持续高于人类的醉酒状态(>320 mg·d L^(-1))。给药后,正常组、模型组与低、中、高3个剂量实验组大鼠自发反应交替率分别为(76.18±5.70)%,(38.61±5.70)%,(45.70±4.39)%,(74.46±2.77)%和(75.62±6.89)%;这5组的SOD活性分别为(15.18±1.81),(7.88±0.97),(9.20±0.88),(14.53±0.89)和(14.36±0.70)U·mg^(-1);这5组的MDA活性分别为(1.04±0.04),(1.31±0.06),(1.24±0.03),(1.10±0.07)和(1.08±0.09)μmol·mg^(-1)。模型组的上述指标与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);中、高2个剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论葛根素可通过增加SOD活性、减少MDA水平,发挥对抗亚慢性乙醇脑损伤的神经保护作用。     

三七皂苷(血塞通)对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用北大核心CSCD

目的研究血塞通对脂多糖(LPS)诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法将H9c2细胞分为对照组、模型组和低、高剂量实验组。对照组细胞正常培养不做任何处理;模型组用10μg·mL^(-1)LPS处理12 h;低、高剂量实验组分别用0.20,0.40 mg·mL^(-1)血塞通预处理细胞12 h,再用10μg·mL^(-1)LPS处理12 h。以细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞存活率;以流式细胞术测定细胞凋亡水平;以荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)水平;以酶联免疫吸附法检测细胞炎症因子水平;以蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞凋亡核因子抑制蛋白(IκBα)、磷酸化p65(p-p65)、p65蛋白表达水平。结果对照组、模型组和低、高剂量实验组的细胞存活率分别为(100.00±2.15)%,(33.93±5.17)%,(47.02±6.41)%和(52.49±7.17)%,凋亡率分别为(2.76±0.40)%,(74.40±6.54)%,(54.22±6.74)%和(47.39±6.55)%;模型组与对照组和低、高剂量实验组比较,高、低剂量实验组组间,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、模型组和低、高剂量实验组的细胞炎性因子NF-кB分别为(0.72±0.07),(1.27±0.15),(1.05±0.12),(0.88±0.09)μmol·L-1,IL-6分别为(0.17±0.03),(0.38±0.05),(0.29±0.05),(0.24±0.04)μmol·L-1,与模型组比较,低、高剂量实验组NF-кB和IL-6水平显著降低(P<0.05)。经过血塞通处理后,ROS浓度降低。蛋白质印迹表明,LPS刺激显著抑制了IκBα表达,上调p-p65表达水平,而血塞通可以显著上调被LPS刺激细胞的IκBα表达,降低p-p65的表达水平(均P<0.05)。结论血塞通能够阻止由LPS引起的心肌细胞炎症反应的发生,降低心肌细胞损伤。     

白花丹素通过下调微小RNA-21的表达诱导自噬促进子宫肌瘤细胞凋亡的研究北大核心CSCD

目的观察白花丹素对子宫肌瘤细胞自噬和细胞凋亡的影响,并探讨其调控机制。方法子宫肌瘤细胞分为4组:空白对照组(常规培养)、PB组(5μmol·L^(-1)白花丹素处理)、PB+miR-NC mimic组(5μmol·L^(-1)白花丹素处理+miR-NC mimic处理)、PB+miR-21 mimic(5μmol·L^(-1)白花丹素处理+miR-21 mimic处理);四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞活力变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测LC3-磷脂酰乙醇胺缀合物(LC3Ⅱ)、自噬体吞噬蛋白Beclin-1、p62以及裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平的变化情况;流式细胞术检测子宫肌瘤细胞凋亡率的变化情况;实时荧光定量聚合酶链反应法检测微小RNA-21(miR-21)的表达情况。结果空白对照组、PB组、PB+miR-NC mimic组、PB+miR-21 mimic组的miR-21表达水平分别为1.00±0.14、0.43±0.06、0.39±0.05、0.68±0.09;细胞活力分别为(100.00±8.76)%、(49.67±5.98)%,(50.39±7.06)%、(72.39±9.01)%;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平分别为0.33±0.05、0.88±0.12、0.83±0.09、0.51±0.08;Beclin-1蛋白表达水平分别为0.25±0.04、0.75±0.09、0.71±0.10、0.42±0.06;p62蛋白水平分别为0.91±0.14、0.46±0.06、0.41±0.08、0.79±0.09;凋亡率分别为(6.21±0.69)%、(20.71±3.11)%、(23.06±3.04)%、(10.42±2.11)%;Cleaved-caspase-3蛋白表达水平分别为0.31±0.04、0.76±0.09、0.80±0.12、0.52±0.07;Bax蛋白表达水平分别为0.35±0.05、0.83±0.13、0.79±0.09、0.42±0.07;空白对照组的上述指标与PB组比较,PB+miR-NC mimic组的上述指标与PB+miR-21 mimic组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论白花丹素可通过下调miR-21的表达促进子宫肌瘤细胞自噬并诱导凋亡。