骨髓间充质干细胞移植对木瓜蛋白酶和［60Co］照射所致大鼠肺气肿的作用

目的：研究骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对木瓜蛋白酶和［⁶⁰Co］照射所致肺气肿的影响及其机制。方法：雌性大鼠随机分为对照组、肺气肿组和肺气肿+MSCs移植组。将大鼠进行［⁶⁰Co］照射，在气管内滴入木瓜蛋白酶建立雌性大鼠肺气肿模型，然后将培养的雄性大鼠MSCs经尾静脉注射到雌性肺气肿大鼠。观察移植后大鼠肺组织的病理学变化；通过PCR和Y染色体荧光原位杂交（Y-FISH）示踪雄性大鼠MSCs在雌性肺气肿大鼠肺组织内的植入情况；用Y-FISH和肺泡表面活性物质蛋白C（SP-C）免疫荧光显色方法检测雄性大鼠MSCs在受体肺组织内是否分化为II型肺泡上皮细胞。结果：肺气肿组、肺气肿+MSCs移植组大鼠均出现肺气肿改变，但后者较前者的肺气肿明显减轻，2组之间的肺泡平均内衬间隔、平均肺泡面积和单位面积肺泡数均有显著差异；PCR结果显示肺气肿+MSCs移植组的大鼠肺脏基因组DNA中可以扩增出位于Y染色体的Sry基因片段；Y-FISH显示肺气肿+MSCs移植组的雌性大鼠肺组织中有Y染色体阳性的细胞，并且部分Y染色体阳性细胞同时表达SP-C。结论：MSCs移植能够减轻木瓜蛋白酶和［⁶⁰Co］照射所致的肺气肿，这可能与移植的MSCs在受体肺组织中的植入和分化为II型肺泡上皮细胞有关。     

骨髓间充质干细胞移植对木瓜蛋白酶和[60Co]照射所致大鼠肺气肿的作用

目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对木瓜蛋白酶和[60Co]照射所致肺气肿的影响及其机制.方法:雌性大鼠随机分为对照组、肺气肿组和肺气肿 MSCs移植组.将大鼠进行[60Co]照射,在气管内滴入木瓜蛋白酶建立雌性大鼠肺气肿模型,然后将培养的雄性大鼠MSCs经尾静脉注射到雌性肺气肿大鼠.观察移植后大鼠肺组织的病理学变化;通过PCR和Y染色体荧光原位杂交(Y-FISH)示踪雄性大鼠MSCs在雌性肺气肿大鼠肺组织内的植入情况;用Y-FISH和肺泡表面活性物质蛋白C(SP-C)免疫荧光显色方法检测雄性大鼠MSCs在受体肺组织内是否分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞.结果:肺气肿组、肺气肿 MSCs移植组大鼠均出现肺气肿改变,但后者较前者的肺气肿明显减轻,2组之间的肺泡平均内衬间隔、平均肺泡面积和单位面积肺泡数均有显著差异;PCR结果显示肺气肿 MSCs移植组的大鼠肺脏基因组DNA中可以扩增出位于Y染色体的Sry基因片段;Y-FISH显示肺气肿 MSCs移植组的雌性大鼠肺组织中有Y染色体阳性的细胞,并且部分Y染色体阳性细胞同时表达SP-C.结论:MSCs移植能够减轻木瓜蛋白酶和[60Co]照射所致的肺气肿,这可能与移植的MSCs在受体肺组织中的植入和分化为Ⅱ型肺泡上皮细胞有关.     

使用Y染色体特异性探针追踪检测大鼠脑内移植细胞

目的探讨准确高效追踪检测脑内移植来源细胞的方法。方法克隆雄性大鼠Y染色体SRY基因的一个片段,并且将该片段标记成DNA探针,对大鼠的脑切片进行原位杂交。结果使用大鼠Y染色体SRY基因片段标记的探针后,可以特异性检测雌性大鼠脑内来源于雄性大鼠的移植细胞。结论使用原位杂交方法可以有效、准确地追踪检测移植细胞。     

应用SRY原位杂交技术检测肝脏干细胞移植肝内种植情况

背景：以往干细胞种植后的定植示踪技术有磁探针标记、荧光示踪标记法、慢病毒感染荧光标记法及性别交叉Y染色体原位杂交检测法,各有优缺点。 目的：应用SRY原位杂交技术观察受体来源肝脏干细胞(肝卵圆细胞)在移植肝内的定植情况。 方法：二袖套法建立大鼠原位肝移植模型。供体为雌性DA大鼠,受体为雌性Lewis大鼠,设受体大鼠60只,肝卵圆细胞为Lewis大鼠来源的雄性细胞,移植中供肝种植肝卵圆细胞悬液。应用SRY原位杂交染色技术观察受体来源的雄性肝卵圆细胞在雌性移植肝内的定植情况。 结果与结论：经门静脉和肝动脉注射种植的肝卵圆细胞及其分化细胞主要定植在移植肝内中央静脉及汇管区周围,应用SRY原位杂交染色技术可以有效观察到受体来源肝脏干细胞在移植肝内的定植情况。     

血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞同种异体移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的探讨同种异体血管内皮生长因子(VEGF)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)在大鼠梗死心脏局部存活、分化及对心功能的影响;明确同种异体干细胞及VEGF基因转染干细胞移植治疗急性心肌梗死(AMI)的可行性及效果。方法雄性SD大鼠30只,随机分为单纯注射培养基对照组、MSCs治疗组及VEGF基因转染MSCs治疗组。分离纯化雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs),于左冠状动脉前降支结扎1h后植入到SD大鼠心组织,移植4周后检测心功能并取心脏行组织染色检查。结果异体大鼠MSCs可在梗死心组织定居、生存;免疫组化检测MSCs转化为心肌细胞及血管内皮细胞;与对照组比较VEGF基因转染异体细胞移植组左室射血分数升高(P<0.05),梗死边缘区心肌面毛细血管数目明显增加(P<0.05)。结论同种异体VEGF基因转染MSCs移植治疗AMI可行、有效。     

组织辐射损伤与胎肝Sca-1阳性细胞的移植后分布

目的：探讨在同种异体造血重建中组织辐射损伤与胎肝Sca-1+细胞及其子代细胞移植后在不同组织器官分布差异的联系。方法:用快速PCR和免疫磁珠分选技术鉴定并分离14.5 d雄性胚胎小鼠肝脏Sca-1+细胞；将分离的Sca-1+细胞(2×10⁴细胞/只)通过尾静脉输入到受［Co⁶⁰］致死剂量(8Gy/只)照射的同系成年雌性小鼠体内，重建受体小鼠的造血功能；在输入细胞6个月后，处死受体小鼠，取出肾、肝、肺、胃和小肠组织固定制片；用Y染色体探针进行荧光原位杂交、荧光显微图像系统观察、摄像和分析。结果:输入2×10⁴细胞/只的雄性胎肝Sca-1+细胞可完全重建经致死剂量照射雌性小鼠的造血功能；造血重建半年后，在受体小鼠的肾、肝、肺、胃和小肠等多个器官组织内可检出含Y染色体的细胞，显微图像计数各器官组织切片中含Y染色体细胞率分别为：肾脏(1.65±0.18)%、肝脏(0.90±0.10)%、肺(1.90±0.60)%、胃(6.10±0.50)%和小肠(7.61±2.30)%。各组织中含Y染色体细胞的检出率呈小肠>胃>肺>肾>肝的趋势，结合资料分析显示与各组织对辐射的敏感性强弱及组织细胞更新率大小基本一致。结论:胎肝Sca-1+细胞向各组织细胞的分化与组织器官受损程度可能存在一定的联系。     

骨髓源干细胞参与的血管内皮更新

背景：研究表明骨髓源干细胞可塑性强,但其参与组织更新及修复的机制在转分化及细胞融合间尚存在争议。 目的：通过性别交叉骨髓移植建立雌雄嵌合体小鼠模型,观察骨髓源性干细胞是否参与内皮细胞的更新并探讨其可能的机制。 方法：采用雌性C57BL/6-GFP小鼠为供体,雄性C57BL/6小鼠为受体进行骨髓移植建立嵌合体小鼠,并应用流式细胞术分析骨髓嵌合情况。骨髓移植后20周采用Y染色体荧光原位杂交法对脑、肾、肝、脾及心脏组织Y染色体进行标记,荧光显微镜观察各组织器官中血管内皮细胞Y染色体及绿荧光蛋白表达情况。 结果与结论：①嵌合体小鼠骨髓细胞流式细胞学检测显示移植骨髓后1周骨髓GFP⁺细胞为(7.48±1.38)%、4周时达(73.92±5.57)%,结果表明成功建立性别交叉骨髓移植模型。②骨髓移植后20周嵌合体小鼠脑、肾、肝和脾组织血管壁可见绿荧光蛋白表达,且部分细胞同时表达Y染色体,表明发生骨髓源细胞和血管内皮细胞融合。脑实质及心肌组织未见绿荧光蛋白表达。结果提示骨髓源干细胞可能通过细胞融合机制参与不同组织器官中血管内皮细胞的更新。     

小鼠腹腔细胞的来源及其造血功能的研究

通过对受致死剂量照射的雌性小鼠,移植同种雄性小鼠的骨髓细胞,并用本实验室建立的制备小鼠腹腔细胞染色体的方法,分析雌性受体小鼠腹腔和骨髓细胞的Y染色体,证明小鼠腹腔细胞来源于骨髓中的造血细胞。用对骨髓中CFU-C和CFU-S的测定方法,证明小鼠腹腔细胞中含有一定数量的造血干细胞。它们在体外半固体培养中,可分化为单核巨噬细胞;在脾集落中,可分化为红系统和粒系统的细胞。当给受致死剂量照射的小鼠,移植较大量的腹腔细胞时,能延长其存活期。     

雌性小鼠骨髓移植给雄性小鼠后内源性骨髓细胞残存状态的研究

 目的:以雌性小鼠骨髓移植给雄性小鼠的方法,通过检测雄性小鼠血细胞的Y染色体来明确内源性骨髓细胞的残存状态。方法:将雌性或雄性C57BL/6小鼠作为受体,实验组用［137Cs］照射,6 h后每只经尾静脉注射供体小鼠骨髓细胞1×107。统计骨髓移植后14 d动物的存活率,并通过眶静脉采血观察外周血白细胞数量的变化,检测受体雄性小鼠体内Y染色体基因水平的变化以明确骨髓移植的效果。结果:分别用1 000、950和900 rad的照射剂量对受体小鼠进行照射后将供体小鼠的骨髓移植到受体小鼠体内,1 000和950 rad剂量时雌性受体小鼠可迅速恢复造血功能,而雄性受体小鼠则仅有48%的存活率。900 rad照射剂量骨髓移植后,雄性受体小鼠迅速恢复了造血功能,13 d后外周血白细胞计数基本恢复正常。移植后的雄性受体小鼠在5周内已检测不到外周血细胞Y染色体基因,表明雄性受体小鼠的骨髓被完全破坏,雌性供体小鼠的骨髓可完全替代受体雄性小鼠的骨髓并且发挥造血功能。结论: 在照射剂量900 rad照射后,雄性小鼠可以作为骨髓移植受体,为将来应用雄性小鼠作为骨髓移植受体动物开展有关心血管疾病的研究奠定了实验基础。     

骨髓间充质干细胞移植后的肝功能重建

背景：细胞移植是治疗肝功能衰竭的一种有效方法,而理想的细胞源和最佳的移植途径一直是各实验室不断研究的目标。 目的：观察骨髓间充质干细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝功能重建的影响和最佳移植途径。 方法：以D-氨基半乳糖胺作为肝脏毒剂,构建雌性SD大鼠急性肝衰竭模型。以雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞为细胞源,通过腹股沟静脉和脾内移植两种途径植入肝衰竭大鼠,动态检测多项肝功能血生化指标。并以sry基因为分子标志,采用PCR技术检测骨髓间充质干细胞在肝脏内的存活状态。 结果与结论：骨髓间充质干细胞经腹股沟静脉和脾内移植均可降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平,提高白蛋白合成能力,改善肝功能,降低动物死亡率。经腹股沟静脉移植组死亡率低于经脾内移植组。移植后7~30 d在受体大鼠肝脏内均能检测到sry基因阳性细胞的存在,而相应对照组未能检测到sry基因阳性细胞。结果表明①骨髓间充质干细胞移植可改善急性肝衰竭大鼠的肝功能。②骨髓间充质干细胞可在受体肝脏内存活。③经腹股沟静脉移植操作简便易行,死亡率较低,是较好的细胞移植途径。     

Local irradiation not only induces homing of human mesenchymal stem cells at exposed sites but promotes their widespread engraftment to multiple organs: a study of their quantitative distribution after irradiation damage

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been shown to migrate to various tissues. There is little information on the fate and potential therapeutic efficacy of the reinfusion of MSCs following total body irradiation (TBI). We addressed this question using human MSC (hMSCs) infused to nonobese diabetic/ severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mice submitted to TBI. Further, we tested the impact of additional local irradiation (ALI) superimposed to TBI, as a model of accidental irradiation. NOD/SCID mice were transplanted with hM-SCs. Group 1 was not irradiated before receiving hMSC infusion. Group 2 received only TBI at a dose of 3.5 Gy, group 3 received local irradiation to the abdomen at a dose of 4.5 Gy in addition to TBI, and group 4 received local irradiation to the leg at 26.5 Gy in addition to TBI. Fifteen days after irradiation, quantitative and spatial distribution of the hMSCs were studied. Histological analysis of mouse tissues confirmed the presence of radio-induced lesions in the irradiated fields. Following their infusion into nonirradiated animals, hMSCs homed at a very low level to various tissues (lung, bone marrow, and muscles) and no significant engraftment was found in other organs. TBI induced an increase of engraftment levels of hMSCs in the brain, heart, bone marrow, and muscles. Abdominal irradiation (AI) as compared with leg irradiation (LI) increased hMSC engraftment in the exposed area (the gut, liver, and spleen). Hind LI as compared with AI increased hMSC engraftment in the exposed area (skin, quadriceps, and muscles). An increase of hMSC engraftment in organs outside the fields of the ALI was also observed. Conversely, following LI, hMSC engraftment was increased in the brain as compared with AI. This study shows that engraftment of hMSCs in NOD/ SCID mice with significantly increased in response to tissue injuries following TBI with or without ALI. ALI induced an increase of the level of engraftment at sites outside the local irradiation field, thus suggesting a distant (abscopal) effect of radiation damage. This work supports the use of MSCs to repair damaged normal tissues following accidental irradiation and possibly in patients submitted to radiotherapy.     

骨髓间充质干细胞移植后在mdx鼠体内的分布研究

目的： 研究骨髓间质干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)后体内各主要器官的分布状况。方法: 取第5代SD大鼠骨髓间质干细胞，应用［3H］－TdR标记后以2×107cells／只细胞尾静脉移植到经7Gy γ射线预处理后的7-9周龄mdx鼠体内，分别于移植后24 h、48 h、4周、8周和16周测定血液、肺、肝、骨髓、骨骼肌及心肌的放射性分布计数。结果: 经7Gy γ射线放疗预处理的mdx鼠，在尾静脉移植骨髓干细胞后，24 h肺的放射性分布计数最高，为36.70±3.04；48 h肝的放射性分布计数最高，为36.74±3.28；骨髓分布计数随移植时间延长增多，2周时达到高峰，计数为38.43±4.99，以后逐渐下降，但4月时仍明显高于其它组织器官，计数为13.45±1.37；骨骼肌、心肌的放射性分布计数随移植时间延长明显增高，16周时分别达到4.79±0.94和9.55±1.53。结论: 在MSCs移植后早期，MSCs主要分布于肺、肝等血流丰富的器官，随移植时间延长逐渐归巢到骨髓定居，2周时达到高峰，此后逐渐向损伤器官如骨骼肌、心肌等定向迁移，并且随时间延长分布增加，从而为MSCs定居于肌组织并且分化为肌细胞提供了证据。     

Co-transplantation of human mesenchymal stem cells promotes human CD34+ cells engraftment in a dose-dependent fashion in NOD/SCID mice

Mesenchymal stem cells (MSCs) have recently been identified and characterized in humans. Moreover, MSC secrete cytokines that can support hematopoietic progenitor growth. In the present study, we evaluated whether the efficacy of hematopoietic stem cell transplantation is improved by their co-transplantation with MSC, and whether this is positively correlated with the dose of infused MSCs. Accordingly, irradiated NOD/SCID mice were transplanted with 1 x 10(5) human CD34+ cells in the presence or absence of culture expanded MSCs (1 x 10(6) or 5 x 10(6)). We evaluated human hematopoietic cell engraftment by flow cytometry and assessed MSC tissue distributions by fluorescence in situ hybridization. We found that CD45+ and CD34+ cell levels were significantly elevated in a dose-dependent manner in co-transplanted mice 4 weeks after transplantation. The engraftments of CD33+ and CD19+ cells also increased dose-dependently. However, the engraftment of CD3+ cells did not increase after co-transplantation with MSCs. Human Y chromosome+ cells were observed in multiple tissues and were more frequently observed in mice co-transplanted with 5 x 10(6) rather than 1 x 10(6) MSCs. These results suggest that MSCs are capable of enhancing hematopoietic cell engraftment and distribution in multiple organs in a dose-dependent fashion.     

骨髓腔内途径脐血与间质干细胞共移植对造血重建的实验研究

目的：探讨骨髓腔内输注（IBM）脐血与间质干细胞（MSCs）对大鼠造血重建、骨髓MSCs恢复的影响，并研究供体MSCs植入状态以探讨MSCs的作用机制。方法：BrdU标记F344大鼠骨髓MSCs通过双侧胫骨IBM或尾静脉注射（IV）与胎鼠及新生大鼠外周血（FNPB）共移植Wistar雌鼠。监测受鼠存活状况、造血免疫重建、HSCs植入水平及骨髓MSCs恢复情况，并以免疫荧光法检测受鼠骨髓MSCs的来源。结果：(1)2个共移植组60 d存活率均为100%，单纯FNPB移植组仅为66.7%。(2)共移植组的外周血象、骨髓造血干祖细胞集落产率明显高于单纯FNPB移植组，尤以骨髓腔共移植组最佳。(3)2个共移植组的HSCs植入水平无统计学差异，而骨髓腔共移植组明显高于单纯FNPB移植组（P＜0.05）。(4)30 d时各移植组MSCs的增殖能力未达正常水平，但仍以骨髓腔共移植组的恢复情况最佳（P＜0.05）。(5)仅少部分受体可发现供、受体源性MSCs嵌合。 结论：脐血与MSCs共移植可促进受体骨髓MSCs恢复和造血重建，提高HSCs植入率；IBM途径应用安全，促进造血恢复的作用优于IV途径。     

Fate of bone marrow stromal cells in a syngenic model of bone formation

Bone marrow stromal cells (BMSCs) have been demonstrated to induce bone formation when associated to osteoconductive biomaterials and implanted in vivo. Nevertheless, their role in bone reconstruction is not fully understood and rare studies have been conducted to follow their destiny after implantation in syngenic models. The aim of the present work was to use sensitive and quantitative methods to track donor and recipient cells after implantation of BMSCs in a syngenic model of ectopic bone formation. Using polymerase chain reaction (PCR) amplification of the Sex determining Region Y (Sry) gene and in situ hybridization of the Y chromosome in parallel to histological analysis, we have quantified within the implants the survival of the donor cells and the colonization by the recipient cells. The putative migration of the BMSCs in peripheral organs was also analyzed. We show here that grafted cells do not survive more than 3 weeks after implantation and might migrate in peripheral lymphoid organs. These cells are responsible for the attraction of host cells within the implants, leading to the centripetal colonization of the biomaterial by new bone.     

CdSe/CdS/ZnS量子点在雌性小鼠体内的分布和蓄积

目的：荧光量子点作为一种新型的荧光纳米材料,被广泛应用于生物医学基础研究领域,但这种纳米材料在生物体内代谢情况尚不清楚,在临床应用之前,需对其在体内的动态分布蓄积进行观测,系统评价其在吸收、转运及代谢过程中会对生物个体、组织、细胞甚至生物分子行为带来的影响以及毒副作用。方法：本文选取六周龄的雌性昆明小鼠为实验动物,将100μL浓度为289 nmol/L的CdSe/CdS/ZnS荧光量子点经尾静脉注射进入小鼠体内血液循环,分别处理1天、7天、14天后,处死小鼠,统计主要脏器重量变化,并制作组织涂片和石蜡切片。结果：组织涂片结果表明,各脏器中的量子点呈现动态分布。作用1天后,脾脏、肝脏、肺、心脏、肾脏和卵巢中都有量子点的分布,其中脾脏中最多;作用量子点7天后,脾脏蓄积减少,而肺部蓄积增多,肝、肾、卵巢蓄积量变化不大;作用14天后,各脏器中量子点明显减少,心脏和肾脏已无量子点蓄积,提示量子点已经从这些脏器中清除了。作用14天后,小鼠卵巢中仍存在量子点,提示量子点可能会在对雌性动物的生殖系统中滞留并造成生殖毒性。结论：石蜡切片结果表明,量子点在各脏器的蓄积未产生明显的病理性损伤。     

葆春方对老年大鼠器官及脑组织中环核苷酸含量的影响

本文采用放射免疫分析，对老年大鼠、青年大鼠，灌以荷春方后的心、肝、肺、脾、肾和脑组织中ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ含量进行测定。结果如下：１）用药组老年大鼠的心、肝、肺组织中ｃＡＭＰ含量降低，而肾和脑中者则升高；２）用药组老年大鼠的肝、肺、脾组织中ｃＧＭＰ含量降低，而心、肾、脑中者含量则升高，使老年大鼠五脏及脑组织中的ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ含量及ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值都接近青年对照组。由此可见葆春方可通过改变老