内皮素A型受体（ET＿A－R）基因在大鼠心血管系统细胞中的表达

应用改良的Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定了大鼠ＥＴＡ型受体（（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－Ａｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＴＡ－Ｒ）ｍＲＮＡ在心血管系统细胞中的分布。结果证明，ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ广泛地分布在心血管系统细胞中．其中以平滑肌细胞中含量最高。内皮素及其受体的配基可以促进血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅｃｅｌｌ，ＶＳＭＣ）中ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ的表达。此外，还发现在自发性高血压动物的血管平滑肌细胞中ＥＴＡ－Ｒ基因的高表达可能是高血压血管高反应性的一个重要机制。     

内毒素血症时内皮素及受体mRNA在肝组织中的分布及意义

观察内毒素血症时内皮素１（ＥＴ－１）和内皮素Ａ型受体（ＥＴＡＲ）在肝组织中的分布及对肝组织的生理病理意义。方法选用ｗｉｓｔａｒ大鼠３０只，均分为对照组和内毒素组（１０ｍｇ／ｋｇ）。采用原位分子杂交技术观察了伤后３、６、１２和２４小时肝组织中ＥＴ－１和ＥＴＡＲ在肝细胞中的分布和表达变化。肝组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ原位杂交显示，肝血窦内皮细胞、肝小叶中央静脉内皮细胞和ｋｕｐｆｅｒ＇ｓ细胞呈阳性反应，颗粒堆积，视野内阳性细胞数较对照组增多。肝组织ＥＴＡＲｍＲＮＡ原位杂交显示，肝血窦周围、肝小叶间动脉壁平滑肌细胞呈阳性反应，颗粒堆积。结论肝脏合成ＥＴ－１的细胞为肝血管、肝血窦内皮细胞和ｋｕｐｆｅｒ＇ｓ细胞。肝血管平滑肌细胞、贮脂细胞含有ＥＴＡＲ。内毒素在转录和翻译水平调节ＥＴ－１、ＥＴＡＲ合成，并使其表达增强     

自发性高血压大鼠血管紧张素Ⅱ－1型受体基因的表达

应用反转录一聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ－１型受体（ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡＴｙｐｅ－１Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＡＴＲ１）ｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠不同组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ的分布，证明ＡＴＲ１ｍＲＮＡ广泛存在于不同组织中，其中以肾脏含量为最高，其次为心脏和小脑；自发性高血压大鼠（ＳｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙＨｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅＲａｔ，ＳＨＲ）肾、心组织中ＡＴＲ１ｍＲＮＡ较正常对照大鼠（Ｗｉｓｔａｒ－ＫｙｏｔｏＲａｔ，ＷＫＹ）明显下隆。     

培哚普利对糖尿病大鼠肾内肾素血管紧张素系统的影响

观察培哚普利（ｐｅｒｉｎｄｏｐｒｉｌ）对糖尿病大鼠肾内肾素血管紧张素系统（ＲＡＳ）的影响。方法大鼠尾静脉一次注射链脲霉素制成糖尿病模型后，将大鼠分成对照组（仅给予胰岛素），治疗组（同时应用培哚普利（ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）和正常对照组。分别在１、３、６个月取血及肾组织，用放射免疫法测定血浆及组织肾素活性（ＰＲＡ、ＴＲＡ）、血管紧张素Ⅱ（ＰＡＴⅡ、ＴＡＴⅡ）含量。用狭缝印迹杂交方法检测肾内血管紧张素原、信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）、血管紧张素Ⅱ受体１型（ＴＡＴⅡＲ）ｍＲＮＡ表达。结果６个月时，对照组ＴＡＴⅡ水平明显低于正常组（Ｐ＜０．０５）。治疗组低于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＴＲＡ于３、６个月时３组无明显差别。狭缝印迹杂交结果表明，对照组ＡＴⅡＲｍＲＮＡ表达高于其它两组（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。ＴＡＴＯｍＲＮＡ表达３组差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论链脲霉素诱导的糖尿病大鼠存在肾组织血管紧张素系统的异常，培哚普利可以进一步减少肾内ＡＴⅡ含量，抑制ＴＡＴⅡＲｍＲＮＡ表达。     

一氧化氮合成酶（NOS）基因表达的半定量检测及其应用

参照Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，建立一种灵敏、简捷、特异的半定量ＮＯＳｍＲＮＡ测定方法；证明了ＮＯＳｍＲＮＡ不仅存在于脑组织，亦广泛分布于心、肾、肺和肝组织中，其中以脑组织含量最高，肾、心次之，除内皮细胞以外平滑肌细胞中亦有ＮＯＳ基因的表达；此外，本工作还观察到自发性高血压大鼠的脑、肾、肝和平滑肌细胞中ＮＯＳｍＲＮＡ水平下降，表示ＮＯＳ基因表达受抑，可能与高血压的病因密切相关。     

洛汀新对阿霉素肾病大鼠肾血管紧张素Ⅱ-Ⅰ型受体基因表达的影响

目的观察血管紧张素转化酶抑制剂洛汀新对阿霉素肾病（ＡＮ）大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ（ＡＴⅡ）浓度及受体表达的影响。方法采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ－Ⅰ型受体（ＡＴ１Ｒ）ｍＲＮＡ表达情况，以放射免疫分析法测定血浆及肾组织ＡＴⅡ含量。结果洛汀新可降低ＡＮ大鼠血浆及肾组织ＡＴⅡ含量，使肾脏ＡＴ１ＲｍＲＮＡ表达增强。结论洛汀新对ＡＮ大鼠肾脏ＡＴ１ＲｍＲＮＡ表达的影响与降低血浆及肾组织ＡＴⅡ含量有关。     

受体相关蛋白在大鼠各组织中的分布

用ＳＤ大鼠肾皮质总ＲＮＡ克隆的ＲＡＰ－ｃＤＮＡ，经原核融合蛋白表达系统获得纯化的受体相关蛋白（ＲＡＰ）由此制备特异的免疫抗血清，分别提取大鼠各组织蛋白，经蛋白质聚丙酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分离后，转移至硝酸纤维素膜，用抗ＲＡＰ抗血清进行蛋白质印迹分析（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔＡｎａｌｙｓｉｓ）结果显示，ＲＡＰ在大鼠肝，胰，肾皮质，肾上腺，大网膜，大脑，小脑，骨骼肌等组织内匀在不同程度的表达，     

抗运动神经元抗体对脊髓块生长的抑制及与人、鼠运动神经元的交叉反应

以１：１０兔抗猪脊髓前角运动神经元血清（ｒａｂｂｉｔａｎｔｉ－ｓｗｉｎｅｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓｅｒｕｍ，ＲＡＳ）、正常兔血清（ｎｏｒｍａｌｒａｂｂｉｔｓｅｒｕｍ，ＮＲＳ）、肌肉提出物（ｍｕｓｃｌｅｅｘｔｒａｃｔｓ，ＭＥＴ，５０和１００μｇ／ｍｌ）、脑提出物（ｂｒａｉｎｅｘｔｒａｃｔｓ，ＢＥＴ，５０和１００μｇ／ｍｌ）分别作用于体外培养的新生大鼠脊髓组织块，５ｄ后观察神经突起的生长情况。结果表明，ＲＡＳ可明显抑制大鼠脊髓组织块生长（ＮＲＳ组有突起生长的脊髓块占３６．７％，ＲＡＳ组仅为１３．３％），而ＭＥＴ、ＢＥＴ均可明显促进大鼠脊髓组织块生长（ＭＥＴ及ＢＥＴ组有突起生长的脊髓块均占９６．７％）。同时比较ＲＡＳ对猪、人和大鼠脊髓的免疫组织化学交叉反应，证明ＲＡＳ对运动神经元（Ｍｎｓ）的免疫反应与动物的种属关系不大。     

卡托普利对自发性高血压大鼠降压作用的研究

本实验用自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）观察了卡托普利治疗对大鼠血压，心、脑、肾组织脂质过氧化损伤，心肌和主动脉组织局部ＲＡＳ功能及促细胞增殖因子（ＡｎｇⅡ，ＥＴ，ＮＥ）的影响。结果表明，ＳＨＲ心、脑、肾组织存在严重的脂质过氧化损伤，心肌主动脉组织局部ＲＡＳ功能亢进，促细胞增殖因子（ＮＥ，ＥＴ，ＡｎｇⅡ）代谢异常。卡托普利治疗能显著减轻心、脑、肾脂质过氧化损伤，抑制心血管组织局部ＲＡＳ功能，逆转心血管组织促细胞增殖因子的代谢异常，并显著降低大鼠血压。提示：卡托普利的降压作用机理可能与抑制心血管组织局部ＲＡＳ功能，抑制心血管组织促细胞增殖因子的合成与释放有关。另外，卡托普利对高血压造成的靶器官脂质过氧化损伤也有一定的保护作用     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的     

AMI患者血清瘦素及外周血单个核细胞内皮素受体mRNA的检测

目的:探讨急性心肌梗死(AMI)患者血清瘦素(Leptin,LP)水平的变化及外周血单个核细胞内皮素受体(ETA-R)mRNA的表达和临床意义。方法:采用酶联免疫法测定65例AMI患者和70例健康对照组血清LP水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ETA-RmRNA的表达。结果:AMI患者在<6h、>6h、24h采血,LP水平随时间的延长而增高,24h达到高峰,48h后反而下降。6h内与48h组LP水平与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);>6h、24h组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);6h内与48h组相比差异无统计学意义(P>0.05)。AMI患者ETA-RmRNA的表达明显增高,随时间的延长变化不明显,维持在一个较高的水平。与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);AMI组内相比差异无统计学意义(P>0.05)。经直线相关分析:LP水平与ETA-RmRNA的表达无相关性(P>0.05)。结论:AMI患者血清LP水平及ETA-RmRNA的表达明显升高,分别是AMI发生的重要的独立危险因素及预测因子,早期监测LP水平及ETA-RmRNA的表达,有利于AMI的预防。     

The role of hypertension-related gene in aortic vascular smooth muscle cells from mice and rats

目的　研究高血压相关基因 (HRG 1)在心血管病发病中的作用。方法　用RT PCR和Northernblot分析HRG 1的表达。用3 H TdR掺入和组织学方法检测血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。结果　Northernblot分析显示 ,HRG 1mRNA不仅可在VSMC中表达 ,亦可在大鼠多种组织中表达 (心、脑、肺、肾和肝 )。此外 ,在SHR大鼠的心、脑、肾和肝组织的HRG 1基因表达均明显低于正常WKY大鼠。半定量RT PCR和组织学分析表明 ,ApoE敲除小鼠和再狭窄动物模型的HRG 1mRNA表达减少 ,并且均可见到新生内膜形成。刺激VSMC增殖的ET ,AII和IL 1可减少VSMCHRG 1mRNA的表达。ANF ,CGRP和Adm可抑制VSMC增殖 ,增加HRG 1mRNA表达。这些作用能被相应的阻断剂或抗体所阻断或抑制。结论　HRG 1是一种与VSMC增殖相关的基因 ,它在动脉粥样硬化 ,再狭窄和高血压等心血管疾病中可能具有重要作用。     

TauT转基因大鼠的构建及鉴定

目的:为研究牛磺酸转运体（TauT）在神经系统疾病中的作用，构建并繁育脑特异性表达TauT转基因模型大鼠（TauT+/-大鼠）。方法:将TAUT cDNA插入脑特异性PDGF启动子下游，构建转基因表达载体，显微注射法建立TAUT转基因大鼠。Genotype鉴定转基因大鼠的基因型。经过配种繁殖和鉴定后，绘制2～8月龄生长曲线、测定各脏器质量、脏体系数和脏脑系数；RT-PCR技术检测TauT+/-大鼠大脑组织中Slc6a6 mRNA基因表达水平；Western blot 检测TauT+/-大鼠在大脑、心、肝组织的TauT蛋白表达，并对TauT+/-大鼠大脑组织进行免疫组化染色和HE染色，IPP软件对免疫组化图像进行处理。结果:成功构建PDGF-Slc6a6表达质粒，得到3只TauT+/-大鼠F0代。经过繁殖和鉴定，与同窝阴性大鼠（TauT-/-大鼠）比较，TauT+/-大鼠大脑组织Slc6a6 mRNA基因表达水平显著升高，大脑、心、肝组织TauT蛋白表达水平没有显著性差异，HE染色和免疫组化结果显示TauT+/-大鼠脑组织海马区和皮层区未见异常，TauT蛋白表达没有显著性差异。结论:成功构建TauT转基因大鼠品系，为后续研究TauT在大脑中的作用提供一种较好的动物模型。     

BMP-2在成年大鼠脑内SVZa-RMS-OB通路中的表达

目的 明确BMP-2在成年大鼠脑内,SVZa、RMS、OB 3个不同区域内的表达模式.方法 用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域BMP-2的表达情况.结果 RT-PCR检测在成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域BMP-2的mRNA均有不同程度的表达,其中OB区表达最高;免疫组化显示BMP-2蛋白在OB区表达也最高,但在SVZa区表达次之,RMS区表达最低.结论 确立BMP-2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域的表达模式,提示BMP-2可能对成年SVZa神经干细胞的增殖和定向分化起到一定的调节作用.     

地塞米松对内毒素休克新生大鼠脑一氧化氮合成酶基因表达的调节

目的：探讨新生大鼠内毒素休克脑损伤时脑一氧化氮合成酶(NO6)三种亚型基因表达的变化及地塞米松(DEX)对其的调控作用。方法：在新生大鼠内毒素休克动物模型基础上，采用逆转录PCR及PCR技术，对脑组织中三型NOS mRNA及caspase—3 mRNA的表达进行半定量分析。结果：正常新生大鼠脑iNOS及eNOS mRNA无明显表达，nNOS mRNA、caspase—3 mRNA有一定程度表达。内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射后2h，三种亚型NOS mRNA开始表达，于LPS6h达高峰，并持续至24h。caspase—3 mRNA于LPS腹腔注射后2h后表达逐渐增加，24h达高峰。DEX可抑制nNOS、iNOS及caspase—3 mRNA的表达，且以用药后2h最为明显，并持续至用药后24h。结论：内毒素休克脑损伤时，各型NOS均有表达，NO的产生是内毒素休克脑损伤时重要的病理生理机制之一。DEX通过抑制NOS、caspase—3 mRNA的表达部分实现其神经保护作用．     

Rice from mercury contaminated areas in Guizhou Province induces c-jun expression in rat brain

INTRODUCTION Mercury is one of the most highly bioconcentrated toxic trace metals in human food chain,and many national and international agencies and organizations have listed mercury as a target of possible emission control[1-2].The accumulation,toxicity and effects of mercury have been documented in scientific literature and extensively reviewed.The most relevant results of mercury poisoning in most animal groups are its adverse effects on reproduction,immune response,neurological impai…     

CSX/Nkx2.5基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的表达

目的:检测CSX/Nkx2.5基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的mRNA表达变化及其蛋白定位.方法:取大鼠胚胎d12、d15、d17、d19心脏,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心脏组织中CSX/Nkx2.5基因mRNA的表达丰度,并应用免疫组化的方法对其进行定位分析.结果:在大鼠胚胎d12、d15、d17、d19心脏中,CSX/Nkx2.5 基因mRNA均有表达,且呈逐渐上调趋势;其蛋白主要表达于心房、心室、肌小梁等处心肌组织,而在心内膜、心外膜、瓣膜、流出道、大血管等处未见表达.结论:CSX/Nkx2.5 基因的表达随大鼠胚胎心脏的生长发育逐渐上调,且特异表达于胚胎心脏心肌细胞的细胞核,与心脏发育密切相关.     

正常人及大鼠心脏内皮素转换酶的分布

目的:了解正常人和大鼠心脏各部分内皮素转换酶(Endothelin-conveerting en-zyme,ECE)的分布。方法:采用半定量RT-PCR法检测ECE mRNA表达,同时根据外源性的巨内皮素-1转变为内皮素-1的量判定ECE活性。结果:正常人心脏各部位心肌均存在ECE,ECEmRNA表达和活性的分布特点一致:心房显著高于心室,左、右心房间及左、右心室和室间隔间无显著性差异。大鼠的ECE mRNA表达和活性分布规律与人相似。结论:正常人和大鼠心脏各组分均存在ECE,且两者的分布规律相似。