共聚焦激光扫描显微镜活体观测川芎嗪和去甲基肾上腺素对生理状态下家兔大脑皮质内微循环的影响

目的 :用共聚焦激光断层扫描显微镜活体观测川芎嗪和去甲基肾上腺素对正常家兔大脑皮质内微循环的影响。方法 :在开放颅窗的家兔动物模型上 ,荧光素标记血浆 ,罗丹明 6G标记WBC ,用共聚焦激光扫描显微镜活体观测正常状态下家兔大脑皮质内 3 0 0 μm深处微循环 ,并经图像分析系统测量数据 ,用SAS软件包进行统计学分析。结果 :川芎嗪对大脑皮质内动脉的作用与去甲基肾上腺素相似 ,认为川芎嗪既可兴奋β受体 ,也可兴奋α受体。去甲基肾上腺素和川芎嗪使平均口径为 12 1.5 6μm ,60 .0 0 μm的动脉血管运动 ,而缘流在血管运动时是保持不变的 ;在毛细血管处可引起不同程度的血管舒缩运动。结论 :在共聚焦激光扫描显微镜活体观测正常状态下家兔大脑皮质内3 0 0 μm深处微循环 ,用去甲基肾上腺素和川芎嗪使平均口径为 12 1.5 6μm ,60 .0 0 μm的动脉血管运动时 ,血液缘流是保持不变的 ;在毛细血管处可引起不同程度的血管舒缩运动     

共聚焦激光扫描显微镜(MRC600)活体观测川芎嗪和去甲基肾上腺素对休克状态下家兔大脑皮质内微循环的影响

目的 :共聚焦激光扫描显微镜活体观测川芎嗪和去甲基肾上腺素对休克状态下家兔大脑皮质内微循环的影响。方法 :在开放颅窗的家兔模型上 ,荧光素标记血浆 ,罗丹明 6G标记WBC ,用共聚焦激光扫描显微镜活体观测川芎嗪和去甲基肾上腺素对休克状态下家兔大脑皮质内微循环的影响 ,并经图像分析系统测量数据 ,用SAS软件包进行统计学分析。结果 :①川芎嗪抗休克效果优于去甲基肾上腺素 ;②去甲基肾上腺素在休克状态下对口径为 60 .15 μm的动脉血管处未引起明显的血管运动 ,而川芎嗪能引起血管运动 ,尤以大剂量川芎嗪引起强烈的血管运动 ;③川芎嗪和去甲基肾上腺素增加或保持血液缘流厚度不变 ,可能是两者抗休克机制发挥作用的途径之一 ;④川芎嗪和去甲基肾上腺素引起血管运动 ,尤以中小血管处明显。结论 :川芎嗪抗休克效果优于去甲基肾上腺素。川芎嗪和去甲基肾上腺素增加或保持血液缘流厚度不变 ,可能是两者抗休克机制发挥作用的途径之一     

共聚焦激光扫描显微镜活体观测正常状态下家兔大脑皮质内微循环

目的 :活体状态下观察家兔大脑皮质内微循环。方法 :在开放颅窗的家兔动物模型上 ,荧光素标记血浆 ,罗丹明 6G标记WBC ,用共聚焦激光扫描显微镜活体观测正常状态下家兔大脑皮质内 3 0 0 μm处的微循环。结果 :动脉影像上有明显的充盈立体感 ,边缘清晰明确 ,可辩清两根动脉之间的互相走行关系 ,见“藤样”、“环样”结构 ,“喷泉”样分支 ,也见有动脉吻合成“环状” ,还见到“树枝”样动脉 ,“灌木丛”样且互相间吻合成网。静脉影像在外观上似较空虚的“囊样” ,与动脉形成鲜明对比 ,在静脉影像边缘处可见有一些压迹 ,还见有动静脉吻合及不同动脉分支间吻合。毛细血管迂曲盘绕形成血管袢 ,相互间也存在有吻合 ,以及与大脑皮质垂直方向的相互缠绕的柱形血管结构。白细胞在动静脉内都有贴壁现象 ,且静脉内贴壁现象较动脉内多。结论 :家兔大脑皮质内可见多种形态的血管结构 ,与人类的脑血管形态相似 ;并见有与大脑皮质垂直方向的相互缠绕的柱形血管结构     

共聚焦激光扫描显微镜活体观测大脑皮质血管构筑及大脑皮质内微循环的研究

共聚焦激光扫描显微镜活体观测大脑皮质血管构筑及大脑皮质内微循环的研究庄明华，常立功，李进（中国医科大学解剖教研室沈阳１１０００１）黄集前，宋今丹（中国医科大学细胞生物教研室沈阳１１０００１）既往研究资料表明，大脑皮质血管构筑的研究多采用各种灌注手段，...     

脑血管内皮形态与血液缘流保护性屏障

用共聚焦激光扫描显微镜,在开放颅窗的大耳白家兔模型上活体观测激光断层扫描光学切片,切片厚2μm或5μm,家兔血浆用荧光素标记、图像分析系统测量分析不同口径血管的轴流、缘流的荧光辉度,并描绘出辉度曲线。结果表明:在大脑皮质内动脉的口径在50μm以上者,辉度曲线呈"平台"形,在20μm以下者,辉度曲线呈"抛物线"形,这与在研究血管内皮形态时提出的"咀液缘流保护性屏障假说"相符合,证明了"血液缘流保护性屏障"的存在,随文附有血管内皮形态学扫描电镜研究资料。     

共聚焦激光扫描显微镜活体观察针刺家兔双侧风池穴对大脑皮质内微循环的影响

目的 :探讨针刺穴位对微循环的影响。方法 :用共聚焦激光扫描显微镜在开放颅窗的动物模型上活体观察了针刺家兔双侧风池穴 ,对大脑皮质内微循环的影响。测量不同口径血管的轴流、缘流的荧光辉度 ,并描绘出荧光辉度曲线。测量同一血管在生理状态下针刺双侧风池穴引起的血液缘流厚度变化、血管口径变化 ,用SAS软件包做统计学分析 ,并用四分位法描图以间接观察血管运动。结果 :电针刺激能引起动脉的舒缩运动 ,但缘流厚度却无明显的变化或有所增加 ,又一次证明了血液缘流保护性屏障假说的真实性 ;电针刺激可引起血管口径为 31.36± 4.89μm的动脉明显的血管舒缩运动 ,对血管口径为 17.31± 2 .5 3μm和血管口径为71.0 0± 5 .30 μm的动脉则未引起血管口径的明显血管舒缩运动 ,在电针刺激各期中 ,以A5后遗效应期最明显 ,说明针刺除在针刺当时有效果 ,而在针刺结束后的后遗效应则可能发挥更大作用。结论 :针刺能通过引起大脑皮质内微循环状态的改变来实现其抗休克及治疗脑血管疾病的作用。     

荧光显微镜观察封闭式脊髓窗内的大鼠脊髓微循环

目的 探讨应用荧光显微镜通过改进的封闭式脊髓窗,观察大鼠脊髓背侧软脊膜微循环状态的可行性及效果.方法 用8周龄雄性SD大鼠,暴露T9至T11棘突,咬除T10棘突和椎板,暴露硬脊膜；在T9和T11棘突上安装固定器辅助物.用牙科丙烯酸树脂和玻璃片为原料在T10节段安装改进的封闭脊髓窗.采血并离心(2 000 ×g)收集红细胞,将100 μL压积的红细胞用Dil荧光染料(5 mg/L)体外孵育,静脉注射人体内；用罗丹明6G(0.3 g/L)静脉注射,体内标记白细胞.大鼠脊柱用微循环观测椎体固定器进行固定.用动物活体荧光成像显微系统进行观测和记录.结果 通过该系统可以观测大鼠软脊膜上微血管的形态和分布特点、血管密度；可以观测到Dil标记的红细胞在血管内的黏附和流速,观察和记录罗丹明6G标记的白细胞在血管壁的黏附滚动.结论 改进式的封闭脊髓窗和微循环观测椎体固定器,可用于对大鼠软脊膜上微血管进行观察和检测.     

“血液缘流保护性屏障假说”的证明

在提出“血液缘流保护性屏障假说”的基础上，采用共聚焦激光扫描显微镜（MRC6OO）详细观察了不同口径的家兔大脑皮质内血管内的血液轴流、缘流的荧光辉度，描绘出荧光辉度曲线，测量了在生理、休克状态下，去甲肾上腺素、川芎嗪作用于大脑皮质内微血管时血管口径变化、血管运动及血液缘流厚度的变化，用SAS软件包做统计学分析处理，认为“血液缘流保护性屏障”存在。并已在血管内皮凸凹不平处，缘流层厚，保护作用大，并与脑血管疾病的发牛发展可能有直接关系；血液层流状态人20um以上血管内表现明显，这种状态与血管内皮的光滑程度有关。     

小鼠脑微循环研究的方法——封闭式颅窗法

目的 :介绍一种新的观察脑微循环的技术。方法 :在猫、鼠脑封闭式颅窗的技术基础上 ,试用小鼠安装脑颅窗 ,在显微镜下观察微循环的变化。根据观察目的不同 ,可利用其生理特点选择不同型的小鼠。实验中严格控制动脉血PaO2 和PaCO2 ,同时利用荧光标记的方法 ,将血管管径及红细胞流速做图像定量分析。结果 :利用此方法可以得到清晰的血管及血流图像。操作步骤简单 ,减少生理上的损伤。结论 :选择小鼠安装脑颅窗 ,并以此达到观察微循环的目的 ,是可选择的方法。操作上的难易程度对有经验的研究人员是完全可以胜任的     

运用图像处理软件将同视野两种单标记免疫荧光图像合成为双标记图像的方法研究

探讨以计算机图像处理技术将普通荧光显微镜采集的同视野单标记免疫荧光图像合成为双标记图像的方法。应用AdobePhotoshop7.0和ImageJ两个图像处理软件,将普通荧光显微镜采集的同视野单标记荧光图像叠加处理成双标记荧光图像,并同激光扫描共聚焦显微镜获得的同一双标记免疫荧光图像进行比较。普通荧光显微镜采集的单标记荧光图像在分辨率及清晰度上逊于激光扫描共聚焦显微镜采集的单标记图像,但显示的脊髓室管膜细胞形态更为完整,细胞突起较长且更连续。因此,在没有激光扫描共聚焦显微镜时,可用AdobePhotoshop7.0或ImageJ图像处理软件将普通荧光显微镜采集的同视野两种单标记免疫荧光图像合成为保持原有特点、简便而清晰的双标记荧光图像。     

颅脑损伤与微循环障碍的实验研究

目的:研究颅脑损伤后的微循环障碍,借以讨论临床某些病人的脑功能紊乱。方法:用两种方法进行研究,一是压迫静脉造成颅内高压模型;另一种是应用荧光素钠作脑血管造影,观察脑外伤后荧光素自脑微血管内向外渗漏的范围。用家兔作实验,通过颅骨窗观察脑软膜的微循环变化。结果:高颅内压时脑微循环停流,当颅内压降低时脑微循环流态正常,无论微血流停流或复流过程均无粒摆流。脑外伤后荧光素自脑微血管中向外渗漏,标识出脑损伤的范围。结论:脑微循环障碍是颅高压的合并症,荧光素自脑微血管向脑组织通道渗漏可显示脑外伤的范围,对脑外伤后某些综合病征和后遗症有诊断价值。     

开放式颅窗法研究软脑膜微循环方法的建立及应用

本文参照国内外同类颅骨开窗法,用多种实验动物制成了开放式颅窗,可保持实验动物全身及颅窗局部较长时间处于生理状态。首次提出了判定开放式颅窗法是否成功的局部标准,此方法应用的注意事项及使用范围。     

烟碱对大鼠脑微循环中白细胞运动的影响

目的 :观察烟碱对大鼠脑微循环中白细胞运动状态的影响。方法 :采用围堤式颅窗直视大鼠大脑软脑膜微循环 ,若丹明 6G标记循环血白细胞 ,微循环仪观察软脑膜微血管 (直径 2 5～ 40 μm ,长度 10 0μm)内白细胞的运动状态。结果 :烟碱能浓度依赖性的运动大鼠脑微血管内白细胞在内皮表面的滚动和粘附 ,预先皮下注射烟碱受体拮抗剂美加明可使滚动和粘附的白细胞分别降至 14 .2± 1.1个和 1.3± 0 .7个 (对照组为 10 .2± 1.2个 )。抗E 选择素单抗能明显阻断烟碱依赖所至的白细胞滚动 ,使滚动白细胞数目从 14 .2± 1.7个减为 2 .8± 0 .8个 ,而抗αvβ3整合素抗体能使粘附的白细胞数目从 10 .6± 1.0个降至 3 .8± 1.3个。结论 :烟碱可改变大鼠脑膜微循环中白细胞的运动状态 ,使白细胞在血管内皮表面滚动或粘附于其表面 ;烟碱的作用与激活脑烟碱受体有关 ;E 选择素介导烟碱引起的白细胞滚动 ,而αvβ3整合素则与烟碱引起的白细胞与血管内皮的粘附有关。     

Arginine vasopressin receptors in pig cerebral microvessels, cerebral cortex and hippocampus

We tested for the presence of arginine vasopressin (AVP) receptors in pig cerebral microvessels, cerebral cortex and hippocampus by specific binding methods with [3H]AVP as the ligand. The specific binding of [3H]AVP to all preparations was saturable and Scatchard analysis indicated a single class of high affinity binding sites (dissociation constant of 1-2 nM). Maximal binding capacity in cerebral microvessels was about 60% that of the cerebral cortex; and there were no apparent differences in the maximal binding capacity between cerebral cortex and hippocampus. These findings suggest the existence of AVP receptor sites in cerebral microvessels and support the hypothesis that AVP has a role in the control of the brain microcirculation.