丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段　克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ　３．１（－）中的ＣＭＶ　ＩＥ启动子下游,构建成ＨＣＶ　Ｅ２重组真核表达质粒　ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律,结果显示免疫２０ｄ已有　抗体产生,３０ｄ后开始进入高峰,４０ｄ时达到最高值,至第９０ｄ抗体水平保持平稳,抗体滴度　达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变　化情况,与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比,ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升,ＣＤ８＋　细胞水平有较大升高,增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显　的阳性着色,而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２　在实验动物内表达出的ＨＣＶ　Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其　是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除　病毒是十分有利的,因此ＨＣＶ　Ｅ２　ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠心肌肌浆网Ca~(2+),Mg~(2+)-ATPase基因转录调节的影响

观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对心肌肌浆网Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ基因（ＳＥＲＣＡ２ａ）转录调节的影响,评价ＤＭＰ８１１对此效应的干预作用．６周龄雄性ＳＤ大鼠随机分为３组,每组６只．组１：生理盐水输注;组２：ＡｎｇⅡ输注＋ＤＭＰ８１１管饲（３ｍｇ·ｄ－１·ｋｇ－１）;组３：ＡｎｇⅡ输注（２００ｎｇ·ｍｉｎ－１·ｋｇ－１．１周后称其体重,取心脏并称重,提取心脏总ＲＮＡ后采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ的方法检测ＳＥＲ－ＣＡ２ａ的转录水平,采用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＡｎｇⅡ１型受体（ＡＴ１）ｍＲＮＡ水平．实验后,组３心重（ＣＷ）、心重／体重（Ｃ／Ｂ）、ＡＴ１受体转录水平均高于组１（分别增加４．７±０．４％,４．９±０．９％和２４．７±３．５％;Ｐ＜０．０１）,而ＳＥＲＣＡ２ａ基因转录水平显著低于组１（降低２０．１±３．０％,Ｐ＜０．０１）,并且ＳＥＲＣＡ２ａｍＲＮＡ水平与ＡＴ１受体ｍＲＮＡ水平呈负相关（ｒ＝－０．７４,Ｐ＜０．０１）．ＡｎｇⅡ导致的上述改变能被ＤＭＰ８１１完全阻断．ＡｎｇⅡ通过其Ⅰ型受体的介导,诱导了ＳＥＲＣＡ２ａ的转录下调     

肾上腺素受体拮抗剂对大鼠急性肝损害影响的研究

雄性ＳＤ大鼠３３只,体重１８０—２５０ｇ,随机分成四组。正常对照组６只;哌唑嗪组８只,于实验第１、２、３日上午用哌唑嗪灌胃（１ｍｇ／ｋｇ体重）共３次,第２日下午腹腔注射半乳糖胺（６００ｍｇ／ｋｇ体重）１次,第４日上午处死动物,取肝脏及血清作有关检查;普萘洛尔组及Ｎ．Ｓ对照组分别用普萘洛尔（２ｍｇ／ｋｇ体重）及Ｎ．Ｓ（１０ｍｌ／ｋｇ体重）代替哌唑嗪灌胃,处理程序同哌唑嗪组。结果表明：一、哌唑嗪能显著减轻肝脏病变及血清ＡＬＴ的升高。二、哌唑嗪对肝损害后肝组织ＳＤＨ、Ｍｇ２＋－ＡＴ－Ｐａｓｅ、ＣｈＥ、ＡＣＰ、ＣＣｏ等酶活性的恢复有显著效果。三、哌唑嗪组ＬＰＯ明显低于Ｎ．Ｓ对照组（Ｐ＜０．０１）而ＳＯＤ活性明显高于Ｎ．Ｓ对照组（Ｐ＜０．０１）。普萘洛尔组各项指标同对照组比较均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。提示：哌唑嗪对大鼠实验性肝损害有一定的保护作用。     

亚硒酸钠对四氯化碳损伤草鱼肝原代细胞与肝组织的保护作用

不同浓度四氯化碳（ＣＣｌ４）对草鱼肝原代细胞的损伤实验中,ＣＣｌ４浓度为１０μｌ／ｍｌ可引起细胞血清中丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）逸出量与细胞破损率显著增高,培养液中添加亚硒酸钠（Ｎａ２ＳｅＯ３）０．２μｇ／ｍｌ,则可降低ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ的逸出量,减轻细胞破损程度。Ｎａ２ＳｅＯ３保护实验中,Ｎａ２ＳｅＯ２＋ＣＣｌ４组预先腹腔注射（ｉｐ）０．１ｍｇ／ｋｇ．ｂｗ连续三日,末次ｉｐＣＣｌ４混合液１ｍｌ／ｋｇ．ｂｗ,２４ｈ内肝组织超氧物歧化酶（ＳＯＤ）相对活性比ＣＣｌ４组提高达９１．５％,第七日仍提高达５４．５％,与对照组的水平基本接近;血清中丙氨酸氨基转氨酶（ＡＬＴ）水平逐渐降低。本实验还观察到Ｎａ２ＳｅＯ３可引起肝脂质过氧化物显著降低,肝微粒体蛋白含量与细胞色素Ｐ—４５０活性升高;组织切片观察显示肝组织损伤程度减轻,７２ｈ后细胞核增多。表明Ｎａ２ＳｅＯ３可提高草鱼肝清除自由基能力,增强肝脏解毒功能。     

DIDS和ConA对带3蛋白转运活性及结构的影响

测定了伴刀豆球蛋白（ＣｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ）和ＤＩＤＳ对人红细胞带３蛋白活性及结构的影响。（１）ＣｏｎＡ使带３转运速度常数Ｋ显著增加。ＣｏｎＡ浓度达到０．０５ｍｇ／ｍｌ时,Ｋ值增加３４．４％。ＤＩＤＳ对带３活性有明显的抑制作用。（２）荧光探针ＤＰＨ,３ＡＳ,９ＡＳ,１６ＡＰ分别测定ＣｏｎＡ和ＤＩＤＳ与带３结合后膜流动性的变化。ＣｏｎＡ能明显增加膜脂的流动性,而ＤＩＤＳ则降低膜脂流动性。（３）差示扫描量热法（ＤＳＣ）测定带３蛋白变性性质,发现ＣｏｎＡ使红细胞膜上带３蛋白变性峰出现温度从６９．２５°Ｃ减小到６６．２５°Ｃ,而ＤＩＤＳ则使之增至７９．５°Ｃ。     

带3蛋白转运吡啶二羧酸根离子的动力学研究

利用ＤＰＡ使Ｔｂ３＋的荧先强度显著增强的原理进行带３蛋白活性的测定,方法简便、灵敏、重复性好,而且能够进行连续荧光扫描测量．应用连续荧光扫描法测定了带３蛋白介导的ＤＰＡ与Ｃｌ－交换的动力学特征参数．结果表明,带３蛋白介导的ＤＰＡ与Ｃｌ－的交换对ＤＩＤＳ非常敏感,受ＤＩＤＳ的强烈抑制,抑制程度大于９０％;ＤＰＡ由内向外转运的米氏常Ｋｍ＝２８．１—３１．２ｍｍｏｌ／Ｌ;带３蛋白的天然底物Ｃｌ－从内侧竞争性抑制ＤＰＡ向外转运,抑制常数ｋｉ＝６０．４±６．９ｍｍｏｌ／Ｌ;膜内侧ＤＰＡ与外侧Ｃｌ－交换的活化能,在４—２５℃范围内为５．８±０．５ｋＣａｌ／ｍｏｌ２５—３７℃范围内为１９．８±１．５ｋＣａｌ／ｍｏｌ;膜内侧ＤＰＡ与外侧Ｃｌ－交换受转运介质ｐＨ（膜内外对称改变）的显著影响,ｐＨ＜７．４时,交换速度显著升高．本实验证明ＤＰＡ确是经带３蛋白而转运的,但转运机制可能与无机离子转运有所不同。     

P物质对大鼠DRG神经元胞体膜的作用

本文在大鼠ＤＲＧ神经元标本上应用细胞内记录,以确定ＳＰ对ＤＲＧ细胞的膜反应及其可能的离子机制。实验所测ＤＲＧ细胞静息膜电位为－５８．９±８．２ｍＶ（Ｘ±ＳＥ,ｎ＝８１）。传导速度：Ａ_（α／β）细胞为２０．４±４．８ｍ／ｓ（Ｘ±ＳＥ）,范围１４．１－２８．７ｍ／ｓ（４７／６０）;Ａδ及Ｃ类细胞为９．８±５．２ｍ／ｓ,范围１．２－１３．７ｍ／ｓ（１３／６０）。浴槽滴加ＳＰ（１０￣（－７）－３×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）在大多数细胞可引起明显的膜去极化反应（５６／６０）。少数细胞对ＳＰ无反应（４／６０）。在ＳＰ去极化期间膜电导值有所增加,从平均值２．７２×１０￣（－８）ｍｈｏ增加２４．６％（ｎ＝３）。所测逆转电位值在＋４０－＋５０ｍＶ之间（ｎ＝３）。浊流平衡液（ＢＳＳ）中ＮａＣｌ以氯化胆碱置代,或用含ＴＴＸ（１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ）的ＢＳＳ灌流,可使ＳＰ－去极化幅值大大减小但不能完全消除。而高（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）和低（０ｍｍｏｌ／Ｌ）Ｃａ￣（２＋）的ＢＳＳ灌流时,使ＳＰ－去极化幅值相应的增加和降低。用含１０￣（－４）ｍｏｌ／ＬＣｄ￣（２＋）及１０￣（－２）ｍｏｌ／ＬＴＥＡ的ＢＳＳ灌流,均使ＳＰ－去极化明显减小。     

中国HIV-1 B亚型P55和嵌合的P55-V3病毒样颗粒候选疫苗免疫效果的研究

研究我国艾滋病病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）病毒样颗粒（ＶＬＰ）候选疫苗的免疫原性,为疫苗进行灵长类实验提供实验依据。将ｇａｇ和ｇａｇ－Ｖ３ ＶＬＰ不同剂量（５０μｇ、１０μｇ、１μｇ）在有佐剂（氢氧化铝）和无佐剂条件下皮下免疫小鼠,然后眼眶采血,用ＥＬＩＳＡ法观察免疫鼠血清中抗体与剂量关系,以及中和抗体滴度和抗体ＩｇＧ亚型ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ的水平。同时取鼠脾淋巴细胞,体外抗原刺激后收取淋巴细胞分泌上清     

EB病毒转化Hu—TLC—SCID小鼠脾细胞的实验研究

利用ＥＢ病毒转化可产生较高水平人ＩｇＧ和特异性抗２型登革病毒人抗体的Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠脾细胞,通过免疫组化、免疫荧光和ＰＣＲ法检测转化细胞的人Ｂ细胞表面标志、ＥＢ病毒抗原和ＥＢ病毒基因。结果表明,被团体的Ｈｕ－ＴＬＣ－ＳＣＩＤ小鼠脾细胞能继续产生抗２型登革病毒的特异性人抗体,并具有人Ｂ细胞的ＣＤ２０＾＋、ＳｍＩｇＧ标志及ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１（ＬＭＰ－１）基因,可表达ＬＭＰ－１和ＥＢ病毒核     

沙葱的组织培养和植株再生

１植物名称沙葱（Ａｌｌｉｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ），又名蒙古韭。种子来源于中国科学院沙漠研究所宁夏沙坡头沙漠试验站。２材料类别幼苗的叶片。３培养条件（１）愈伤组织诱导培养基：ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＫＴ０．２＋ＣＨ（水解酪蛋白）５００＋蔗糖３％；（２）分化培养基同（１），但２，４－Ｄ为０．５；（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋１ＢＡ１．０＋蔗糖３％。上述培养基均加０．７％琼脂粉固化，ｐＨ调至５．８～６．２。培养温度（２５±２）℃。愈伤组织诱导阶段为暗培养，分化阶段每日光照１２…