Long Evans大鼠视网膜神经节细胞电生理学发育特性研究

目的 研究Lnng Evans大鼠不同发育阶段视网膜神经节细胞(Retinal Ganglion Cells，RGCs)电生理学特性，认识视觉发育过程中视网膜神经元成熟的细胞内机制。方法 取出生后3～31d Lnng Evans大鼠，制备视网膜片，寻找RGCs行膜片钳全细胞记录，给予不同强度去极化脉冲，诱发动作电位。结果 33只Long Evans大鼠共获得94个RGCs，按动作电位类型RGCs分为单锋型、瞬变型和持续型，在视觉发育不同阶段，3种类型的RCCs所占比例不同，在电生理特性上有显著差异。结论 在视觉发育过程中，RGCs的电学特性逐渐成熟，动作电位的幅度、频率存在差异，提示不同类型的RGCs在编码及传递时间、空间视觉信息中具有不同作用。     

Long Evans和Wistar大鼠视网膜神经节细胞电生理学及形态学特性比较研究

目的比较Long Evans大鼠和Wistar大鼠睁眼前后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)电生理学特性及形态学特征上的差异.方法取出生后0～31 d Long Evans和Wistar大鼠,各按睁眼时间分为两组,制备视网膜片,行膜片钳全细胞记录,同时行组织切片和细胞内染色,观察形态特征.结果比较22只Long Evans大鼠和24只Wistar大鼠被动膜学特性和动作电位(action potential, AP)幅度及阈值无显著差异,形态学上除两者视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium, RPE)含或不含色素颗粒外未见明显区别.结论 Long Evans大鼠因其RPE含色素颗粒,以及在视觉和神经系统等方面的优点,可取代Wistar等白化鼠而作为一种良好的视觉和神经科学研究的实验动物模型.     

一种适合膜片钳记录的成年大鼠背根神经节细胞培养方法

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠背根神经节（D0rsal root ganglion,DRG）细胞培养方法。方法分离并培养成年大鼠DRG神经元,显微镜下观察培养神经元的形态,膜片钳技术记录培养神经元的基本膜电生理特性及ATP激活电流。结果培养的DRG神经元形态结构完整;其静息膜电位在正常范围内,可记录到诱发动作电位及钠电流;在膜片钳全细胞记录模式下,能稳定地记录到ATP诱发电流。结论培养的成年大鼠DRG神经元适合膜片钳试验。     

家兔视神经压迫性损伤后视网膜及视神经动态病理改变的实验研究

①目的 探讨视神经持续钳夹伤后视神经和视网膜的病理改变及其与时间的关系。②方法 实验用家兔，暴露家兔视神经球后段，用夹力为5mmH2O的无创血管夹持续钳夹视神经，与术后不同时间点取材进行病理学观察。③结果 ①钳夹4小时，神经软膜及实质水肿，束间膜血管周围间隙增宽；钳夹16小时，鞘膜下血肿，神经实质内灶性出血，视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)形态改变不明显；钳夹24小时，神经脱髓鞘改变，神经轴束间空泡样改变，局灶性坏死，RGCs核固缩和细胞数量减少；钳夹48小时，轴心部出现梗死灶，开始有胶质细胞增生，RGCs数量明显减少，核固缩细胞增多；钳夹72小时，轴心部梗死灶扩大，RGCs数量继续减少，稀疏排列。②RGCs数量于钳夹4、16、24、48、72小时分别比正常对照组低1．61％、2．74％、6．32％、10．28％、13.30％。③视网膜神经节细胞在24小时内出现凋亡。④结论 本实验模型可造成明确的视神经和视网膜损伤，较贴近于临床视神经管内持续高压状态。视网膜和视神经损伤的严重程度与时间呈相关性。推荐临床视神经损伤确诊后，如需手术减压应在24小时内实施效果较佳。     

视网膜神经节细胞的损伤机制

视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)的进行性死亡是许多视网膜和视神经疾病发展到最后的必经之路。RGCs的死亡存在两种方式：细胞坏死和细胞凋亡。两者是相互重叠的死亡过程。RGCs损伤既可引起细胞坏死，又可引起细胞凋亡。近年来，随着对细胞凋亡研究的深入，人们对RGCs损伤机制的认识也有一定程度的提高。目前认为     

银杏叶提取物对豚鼠肠系膜下神经节细胞生物电的影响

目的：通过观察银杏叶提取物(EGb)对交感神经节细胞生物电的影响，为进一步探讨EGb调节肠系膜下神经节(IMG)支配的包括远端结肠在内的内脏功能活动的作用机制提供依据。方法：采用细胞内生物电记录技术记录体外IMG电位。结果：在敏感细胞，EGb761(35～350mg／L)可使71．0％的肠系膜下神经节细胞产生膜去极化反应，且在一定范围内呈现剂量效应关系；19．4％的细胞超极化；9．7％的细胞出现先超极化后去极化的双相反应。去极化反应的细胞其膜电阻有降低、增大和不变等多种表现。此去极化反应可被低钙．高镁克氏液部分阻断，但不为胆碱和肾上腺素受体阻断剂所阻断。还发现EGb761可抑制外源性5-HT引起的去极化电位。结论：EGb761对IMG细胞可能通过非胆碱能、非肾上腺素能通路产生易化作用；其机制可能与影响其他递质的释放有关。     

豚鼠腹腔神经节细胞γ－氨基丁酸双相反应的药理学特性

豚鼠腹腔神经节细胞γ－氨基丁酸双相反应的药理学特性［陆芳民等。生理学报，１９９４；４６（３）：２３８］对ＧＡＢＡ诱发豚鼠腹腔神经节细胞，“去极化－超枉化”的双相反应的药理学特性作了探讨。结果，蝇章醇可模拟ＧＡＢＡ双相反应，但诱发相同强度的去极化反应时...     

外伤性视神经损伤手术时机选择的实验研究

【目的】通过视神经外伤后视网膜形态的变化，了解外伤性视神经损伤的手术时机与疗效间的相关关系。【方法】建立外伤性视神经损伤和不同时间减压动物模型，对视网膜神经节细胞(RGCs)、视网膜等进行了定量分析。【结果】正常对照组RGCs相对体积数密度(体密度，Vv)为0．072，小细胞所占比例为49．5％，视网膜厚度为108．9μm，节细胞以内层的厚度为19．5μm；48h减压组RGCs体密度为0．052，小细胞占比例为66．8％，视网膜总厚度为101．9μm，节细胞以内层厚度为16．9μm；14d减压组RGCs体密度为0．042，小细胞占比例为76．4％，视网膜总厚度为96．5μm，节细胞以内层为15．5μm。【结论】48h减压较14d减压可以较好的保存RGCs和视网膜的形态，外伤性视神经损伤后应该尽早解除周围因素对视神经的压迫。     

L-型钙通道激动剂对心肌细胞局部诱发钙释放的影响

目的：研究L-型钙通道激动剂（FPL64176）对心肌细胞局部诱发钙信号的影响特点。方法：采用非紧密封接膜片钳技术与激光扫描共聚焦显微镜钙成像技术相结合的方法,局部触发细胞内钙释放。此技术可自由控制膜去极化水平,使FPL64176只在局部发挥作用。结果：正常情况下,局部兴奋-收缩耦联概率（δSC）和平均诱发钙瞬变与膜去极化水平的关系均呈“钟形”电压-依赖特性。FPL64176作用下,δSC和局部平均诱发钙瞬变均有不同程度的增强（P〈0.05）;低膜电位水平下的孤立钙火花幅度也明显增大（P〈0.05）。结论：“钟形”电压-依赖特性说明,本质上此兴奋-收缩耦联的机制是钙诱导钙释放,而不是由于去极化本身所致。FPL64176不影响局部细胞内钙释放的“钟形”电压-依赖特性。     

RCS大鼠病变发育过程中视网膜神经节细胞形态学变化的研究

目的研究皇家外科学院大鼠(royal college of surgeon rat,RCS)病变发育过程中视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)形态学变化.方法取RCS大鼠、RCS-rdy 大鼠3、5、7、9、11周龄视网膜,固定后行视网膜平铺片,甲酚紫染色,使用LEICA DM TRET显微镜及自带的LEICA Q WIN系统软件,观察视网膜神经节细胞层细胞数量总数及RGCs亚群数量上的变化.结果RCS大鼠病变发育过程中,其节细胞层中细胞横径≥12μm的细胞在数量上,7、9、11周龄段相较与3周龄段出现显著减少(P＜0.01).相同周龄段上的视网膜节细胞层中,RCS大鼠与RCS-rdy 大鼠在横径≥12μm的细胞数量上相互比较,可见RCS大鼠从5周龄段开始相较于RCS-rdy 大鼠出现显著减少(P＜0.05),7、9、11周龄段相较与RCS-rdy 大鼠减少更为显著(P＜0.01).但是节细胞层细胞总数及横径≥9 μm的细胞数量上,RCS大鼠自身发育前后对照以及与RCS-rdy 大鼠相比较没有显著差异.结论RCS大鼠视网膜色素变性过程中,随着光感受器细胞的变性和缺失,虽然视网膜节细胞层细胞在整体数量上没有明显变化,但是RCS大鼠视网膜病变发育早期,其节细胞层中胞体横径≥12μm的RGCs在数量上开始出现明显缺失.     

发育过程中视神经节细胞的膜特性和突触稳定性

目的视神经节细胞(RGC)的膜特性和突触稳定性在发育过程中的变化。方法运用全细胞膜片钳技术,分别记录出生后 7、15和40d3个年龄段的SD大鼠视神经节细胞的动作电位及微小兴奋性突触后电流（mEPSC）,通过Patchmaster软件数据采集 分析神经节细胞的膜特性和突触稳定性。膜特性从主动和被动两方面来分析,突触稳定性从mEPSC的幅度、频率、上升时间和 下降时间等方面来分析。结果通过比较不同年龄段新生SD大鼠RGC的电生理反应特性,发现在发育过程中存在显著改变： 主动膜特性中P15组SD大鼠动作电位发放频率相较于P7组明显变大,动作电位半峰宽变小（P<0.01）,但比较P15组和P40组 的大鼠动作电位发放频率、半峰宽（P=0.086）并无统计学差异;被动膜特性中膜时间常数在发育过程中随着年龄的增加逐渐降 低（P<0.01）。突触稳定性中SD大鼠mEPSCs的频率随着年龄的增加逐渐增大（P<0.01）,但比较P15组和P40组时频率并无明 显统计学差异（P=0.302）。结论发育过程中,RGC的膜特性和突触稳定性发生了规律性改变,并出现了一个关键期,关键期前 RGC的电生理特性变化显著,之后逐渐趋于稳定,这种发育电生理变化是RGC对视觉信号处理的基础特性,有助于了解RGC 在视觉信息中发挥的内在机制。     

骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞分化过程中的电生理特性

目的：利用乳鼠视网膜细胞条件分化液将骨髓间充质干细胞( BMSCs)分化为视网膜神经节样细胞,比较BMSCs、诱导后的视网膜神经节样细胞以及原代培养的视网膜神经节细胞(RGCs)的电生理特性。方法：取传至第3代的大鼠BMSCs,利用乳鼠视网膜细胞条件分化液作为诱导剂,进行增殖培养、分化诱导;免疫组织化学法观察NF、MA...     

大鼠皮质-纹状体-黑质脑片中等多棘神经元的电生理特性

目的 通过制备大鼠皮质-纹状体-黑质脑片,在可视条件下观察纹状体中等多棘神经元(MSN)的电活动,探讨其电生理特性.方法 选用出牛7～10 d的健康SD大鼠,制备皮质-纹状体-黑质旁矢状位脑片,通过红外微分干涉相差(IR-DIC)显微镜直视下定位纹状体MSN,并采用膜片钳放大器全细胞记录,电流钳模式下记录MSN的自发性电活动,采用步阶电流注入,观察膜电位变化.结果 成功记录的92个MSN表现为三种状态:14个细胞为持续的极化状态,无动作电位发放;61个细胞表现为持续的极化状态间隔短阵的去极化至阈电位水平伴发动作电位;17个细胞为持续的极化状态间隔突然出现的去极化状态.三种表现形式细胞的静息电位、阈电位均数差异无统计学意义(P>0.05).注入电流时,膜电位变化表现为一定程度的延迟,电位变化随注入电流增强有减少趋势.结论 旁矢状位脑片中的纹状体MSN保留了在体的电生理特性,为深入研究黑质-纹状体通路电信号的发生和传递在帕金森病发病机制中的作用奠定了基础.

Abstract：

Objective To establish the neocortex-striatum-substantia nigra brain slices of rats and observe the medium spiny neurons of striatum under a visible condition so as to explore their electrophysiological characteristics. Methods The brain slices containing the neocortex-striatum-substantia nigra were prepared from SD rats of postnatal 7 - 10 days. With infrared differential interference contrast (IR-DIC) microscope and patch clamp amplifier whole-cell recording technique, the medium spiny neurons were located in striatum and their spontaneous electrical activity was recorded in the current clamp mode. By infusing the step current, we observed the variation of membrane potentials. Results There were three types of conditions in the 92 medium spiny neurons successfully recorded. Among them, 14 were in persistent down state without action potential firing; 61 displayed persistnet down state accompanied with interval temporal depolarizing to the threshold potential with action potential firing; and the remaining 17 showed persistent down state with the interval emergent up state. There was no statistical significance in the difference of mean resting and threshold potentials in three neuronal types ( P > 0. 05 ). When the neurons     

Long Evans大鼠视网膜神经节细胞培养与鉴定

目的建立Long Evans大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)体外培养的方法,为RGCs的体外实验研究奠定基础.方法出生后1～3 d的Long Evans大鼠视网膜神经上皮层,胰蛋白酶 透明质酸酶消化制成单细胞悬液,用DMEM培养液进行培养,观察细胞生长规律,图像分析系统分析有突起的RGCs数目、胞体面积和最长的突起长度,Thy1.1单克隆抗体和微管相差蛋白2多克隆抗体荧光双标法鉴定RGCs.结果 Long Evans大鼠RGCs体外培养存活4 d;荧光双标显示RGCs纯度为80%～90%.结论在普通培养基中Long Evans大鼠RGCs体外培养能获成功.胰蛋白酶 透明质酸酶联合消化较单独用胰蛋白酶消化效果好.     

Electrophysiological properties of neurons of guinea pig celiac ganglia

Summary The present study was carried out to investigate electrophysiological properties of neurons of guinea pig celiac ganglia in vitro. The mean value of resting membrane potential was-59.3 ±5.6 mV (n = 29). The mean values of membrane resistance, time constant and membrane capacity were 53.7±19.8mΩ, 18.4±8.5 ms, and 375.9±175.0 pF (n = 24) respectively. When depolarizing electrotonic potentials induced by application of depolarizing current pulses reached the threshold level, all of the neurons could be made to discharge action potentials. The mean values of amplitude, overshoot, duration of the spikes were 68.0±15.3 mV, 11.7 ±4.6mV, and 2.7±0.6ms (n = 29) respectively. 75% of the neurons tested (n = 29) produced tonic (slow adapting) firing in response to depolarizing current lasting 5 s. The remaining neurons (25%) produced phasic (fast adapting) firing. In addition, fast excitatory postsynaptic potentials or orihodromic action potentials were recorded from 80% of the neurons, antidromic action potentials were recorded from ihe remaining neurons during stimulation of the splanchnic nerves.     

RCS大鼠视网膜变性过程中α亚型神经节细胞树突形态学变化

目的研究皇家外科学院大鼠(royal college of surgeon rat,RCS)视网膜变性过程中α亚型视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)树突形态学变化规律。方法按照视网膜色素变性发展的不同阶段,选取出生后21、30、60、90d的RCS-P+大鼠(RCS组)与RCS-rdy+大鼠(对照组)各3只,采用DiI示踪标记方法观察RCS组α亚型视网膜神经节细胞的树突在视网膜变性过程中形态学变化的规律。结果RCS组各天龄间、对照组大鼠发育过程中各天龄间、RCS组与对照组相对应天龄段间一、二级分支数目之间比较无显著差异(P0.05)。RCS组大鼠视网膜变性过程中,α亚型RGCs树突一级分支直径60d组较21d组变细[(2.02±0.17)μmvs(2.66±0.11)μm,P0.01],RCS组与对照组大鼠α亚型RGCs树突一级分支直径比较,21d增粗[(2.66±0.11)μmvs(2.23±0.10)μm,P0.01]。RCS组90d(15.44±1.50)较21d(26.91±3.01)、30d(27.20±1.99)α亚型RGCs细胞树突分支频率显著减少(P0.01,P0.05)。对照组大鼠发育过程中α亚型RGCs树突分支频率比较,60d(28.67±2.78)较21d(16.09±1.71)、30d(17.75±1.79),90d(26.18±2.48)较21d组有显著增加(P0.01,P0.05),其余各组间没有明显差异(P0.05)。RCS组与对照组大鼠α亚型RGCs树突分支频率相对应21、30、60、90d组间比较均有显著差异(P0.05)。结论RCS大鼠视网膜色素变性过程中,视网膜α亚型RGCs树突分支频率在早期增多,但随着病变的发展到中、晚期树突终末分支显著减少,提示在视网膜变性过程中α亚型RGCs树突的信息传递功能可能发生了变化。     

下丘脑冠状切片视上核神经元的电生理特性

目的了解下丘脑冠状切片视上核神经元的电生理特性。方法在下丘脑冠状切片（厚５００μｍ）对视上核神经元进行细胞内生物电记录。结果测得静息电位（－５８±７） ｍＶ（ｘ± ｓ, ｎ＝４４）,膜斜率电阻（１９５±８３）ＭΩ,时间常数（１０．８± ５．０）ｍｓ,膜电容（６０±２０）ｐＦ,动作电位幅度（６７± ９）ｍＶ,阈电位（－４２ ±８）ｍＶ,半幅时程（２．１±１．１）ｍｓ,超射（１１±５）ｍＶ。在记录的１１３个细胞中,３１．９％的细胞有自发锋电位发放,其中５．５％为持续型（紧张型）放电,７０．６％为时相型放电,其余为不规则放电。在时相型放电的细胞可观察到自发的慢去极化电位。长时程去极化时锋电位发放呈明显的适应现象。顺行电刺激可诱发兴奋性突触后电位,并具有刺激强度依赖性。结论提示视上核神经元作为神经内分泌细胞具有与其他神经元不同的电生理特性。     

猪视网膜神经节细胞的培养及超微结构

目的：建立视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGCs)的体外培养方法,并研究视网膜不同类型神经细胞之间的相互作用,为RGCs的体外实验研究奠定基础。方法：进行猪视网膜细胞混合体外培养和神经节细胞的纯化培养,观察神经节细胞生长状态及轴突生长情况,研究视网膜不同类型神经细胞之间的相互作用。结果：视网膜细胞混合培养时,神经节细胞生长良好,纯化后的神经节细胞间连接减弱,细胞存活时间缩短。结论：视网膜细胞混合培养有利于神经节细胞的贴壁和生长。