细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏髓质发育过程中的意义

观察小鼠出生后肾脏髓质发育过程中增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达及细胞凋亡的特征,探讨出生后小鼠肾脏髓质发育过程中细胞增殖与凋亡的规律及其关系。应用免疫组织化学技术和原位末端标记法(TUNEL法)分别检测小鼠出生后1、3、7、14、21、28和70天肾脏髓质中的增殖细胞及凋亡细胞。结果显示,(1)小鼠出生后肾脏髓质发育中PCNA阳性细胞的表达具有一定的规律,早期PCNA阳性表达丰富,随着肾脏发育逐渐成熟而表达减弱;(2)在细胞增殖的同时也存在着细胞凋亡现象,细胞凋亡指数于生后第7天达到高峰,以后表达逐渐减弱。细胞增殖与凋亡在小鼠生后肾脏髓质发育的整个过程中普遍存在,早期细胞增殖旺盛,增殖高峰之后出现凋亡高峰,晚期两者活动均减弱。     

生后小鼠肾脏皮质发育过程中的细胞增殖

目的 :观察小鼠出生后肾脏皮质发育过程中增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)的表达特征 ,探讨出生后小鼠肾脏皮质发育过程中细胞增殖的规律。 方法 :应用免疫组织化学技术检测小鼠出生后 1、 3、 7、 14、 2 1、 2 8和 70天肾脏皮质PCNA的表达。结果 :小鼠出生后 1～ 70天 ,皮质中的生肾区、肾小体、肾小管及髓放线中PCNA阳性细胞的表达具有一定的规律 ,早期PCNA阳性表达丰富 ,随着肾脏发育逐渐成熟而表达减弱直至消失 ,在成年鼠肾脏皮质中 ,没有检测到PCNA阳性细胞。结论 :出生后小鼠肾脏皮质中的生肾区、肾小体、肾小管及髓放线的细胞增殖规律是由高逐渐降低的 ,直至成年完全停止。     

胚胎小鼠肾脏发育过程中eNOS表达与细胞凋亡的关系

目的观察胚胎小鼠不同发育阶段肾组织中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达和细胞凋亡的特征,探讨eNOS与细胞凋亡的关系。方法应用原位末端标记（TUNEL）法检测胚胎小鼠肾组织中的细胞凋亡,免疫组织化学方法和体视学方法检测eNOS的表达。结果不同发育阶段的肾组织中均可见到TUNEL染色阳性的细胞,凋亡指数从E14d开始增高,E18d达到高峰。eNOS表达于皮质生肾区、近端小管和远端小管,表达量随着发育逐渐增加。结论细胞凋亡和eNOS的表达在小鼠肾脏胚胎发育过程中具有重要的作用,细胞凋亡与eNOS的表达有一定的相关性。     

细胞凋亡与增殖失衡在小鼠大肠癌诱发过程中的作用

目的:观察小鼠大肠癌不同阶段中细胞增殖与凋亡的变化规律,探讨细胞增殖-凋亡失衡在大肠不同阶段中的作用.方法:利用二甲肼(DMH)皮下注射诱发昆明种小鼠实验性大肠癌动物模型,分别于诱癌12、18、24、32周分批处死动物,以DNA末端标记(TUNEL)和免疫组化PCNA染色分别标记凋亡细胞和增殖细胞,多阶段动态观察增殖细胞和凋亡细胞的分布和密度变化.结果:小鼠正常粘膜中凋亡细胞全部位于表层,增殖细胞位于基底,数量均很少.诱癌早期增殖细胞和凋亡细胞轻度增多,二者比值变化不大;诱癌中期二者密度均显著升高,比值变化不显;诱癌晚期非癌粘膜增殖和凋亡细胞密度高于其它时段,不典型增生粘膜中增殖细胞增多,且随其程度递增,而凋亡细胞虽有升高,但不随其程度变化,二者比值则随其程度呈下降趋势.结论:1)在动物模型上证实了小鼠大肠癌发生过程中存在细胞增殖-凋亡失衡;2)诱癌早期低增殖、低凋亡,中期高增殖、高凋亡,晚期(癌)极高增殖、低凋亡;3)增殖细胞随不典型增生程度递增,凋亡细胞变化不显,二者比值呈递增趋势;4)癌变阶段最本质的变化为凋亡/增殖比值极度降低.以上结果支持我们以前在人类大肠癌研究中提出的"细胞选择性增殖"假说.     

细胞凋亡和细胞增殖在胃癌形成中的作用

目的 :探讨细胞凋亡和细胞增殖在胃癌发生发展中的作用。方法 :用原位末端标记法和免疫组织化学染色 ,检测 30例胃癌和 2 0例胃粘膜上皮异型增生中的细胞凋亡和调控基因 (Bcl 2 ,Fas)及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达情况。结果 :随正常胃粘膜胃粘膜异型增生胃癌的梯度 ,细胞凋亡指数(AI)逐渐降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5) ;Bcl- 2的阳性表达率逐渐升高 ,Fas的阳性表达率逐渐降低 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1) ,且二者有相关性 (P <0 0 5)。PCNA阳性表达率 (即增殖指数 ,PI)逐渐升高 (P <0 .0 1)。结论 :胃粘膜异型增生中已存在细胞凋亡和细胞增殖的异常 ,使增殖 /凋亡比值加大 ,是胃粘膜异型增生向胃癌发展的重要机制之一     

人乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化Rb蛋白和PCNA的关系

目的:研究乳腺癌细胞凋亡与去磷酸化Rb蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的关系。方法:应用MTT比色法检测多柔比星(又名阿霉素,ADR)对体外培养的MCF-7/S细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,采用免疫组织化学法检测ADR作用前后去磷酸化Rb蛋白和PCNA的表达。结果:ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性;ADR作用组MCF-7/S细胞的凋亡率及去磷酸化Rb蛋白的表达量与对照组相比明显增高(P<0.01);PCNA阳性表达率与对照组相比明显降低(P<0.01)。结论:ADR作用组,MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)与去磷酸化Rb蛋白的表达量呈正相关,与增殖细胞核抗原的阳性表达率呈负相关。     

阿霉素对人乳腺癌细胞凋亡和增殖的影响

[目的]检测阿霉素(ADR)对体外人乳腺癌化疗敏感细胞(MCF-7/S)凋亡和增殖的影响,并探讨其可能的作用机理.[方法]应用MTT比色法检测ADR对体外培养的MCF-7/S细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,采用免疫细胞化学法检测ADR作用前后去磷酸化Rb蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.[结果]ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性;ADR组MCF-7/S细胞的凋亡率、磷酸化Rb蛋白的表达量与对照组相比明显增高(P＜0.01);PCNA阳性表达率与对照组的相比明显降低(P＜0.01).在ADR组,MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)与去磷酸化Rb蛋白的表达量呈正相关,与增殖细胞核抗原的阳性表达率呈负相关.[结论]ADR诱导MCF-7/S细胞凋亡并抑制MCF-7/S细胞增殖可能与其上调去磷酸化Rb蛋白和下调细胞内增殖细胞核抗原表达水平有关.     

血管紧张素Ⅱ受体1和受体2在小鼠肾小管发育中的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体1（AngiotensinⅡ receptortype 1，AT1R）和受体2（（Angioten．sinⅡreceptor type2，AT2R）在小鼠肾小管发育中的表达及其与肾脏发育的关系。方法采用免疫组织化学方法和体视学方法检测胚龄14、15、16、18天胎鼠及生后1、3天仔鼠肾小管AT1R和AT2R的表达。结果AT1R于胚龄15天开始出现在肾小管，胚龄16天达到高峰，随后表达逐渐减弱，生后3天微量表达；AT2R于胚龄16天开始出现在肾小管，胚龄18天达到高峰，以后表达逐渐减弱，至生后3天基本消失。结论小鼠肾脏发育早期AT1R和AT2R与肾小管的增殖和分化密切相关。     

Hp-CagA与细胞增殖及胃癌关系的研究

目的:观察幽门螺杆菌(Hp)感染时细胞毒素相关蛋白A(CagA)及炎症与细胞增殖的关系,胃粘膜上皮细胞PCNA(增殖细胞核抗原)的表达情况,探讨细胞增殖在Hp相关疾病中的作用及胃癌发生的可能机制。方法:采用快速尿素酶试验及血清学试验诊断Hp感染,血清学试验检测血清抗HpCagA-IgG。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)免疫组织化学法检测Hp阳性胃部病变的Fas和PCNA表达。结果:CagA及炎症程度与PCNA阳性表达率均无明显关系(P>0.05)。PCNA阳性表达率及分级表达在Hp感染时均随着组织病变从CSG→CAG→IM→DYS→GC而增加。PCNA的阳性过表达与肿瘤细胞的分化程度有关,低分化腺癌的PCNA阳性过表达率显著高于中、高分化腺癌(P<0.05)。结论:CagA及胃炎程度不是引起细胞增殖的主要因素。在Hp阳性胃癌演化过程中,PCNA阳性表达率逐渐增高,在胃癌达高峰。PCNA的阳性过表达与肿瘤细胞的分化程度有关,分化程度越低的肿瘤增殖活性越高。     

TgN(p53mt_LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖与凋亡相关基因表达的关系

背景与目的： 探讨TgN(p53mt_LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮癌前病变发生与细胞周期分布,凋亡相关基因bax、bcl_2和增殖相关基因PCNA的表达水平及它们与p53mt基因表达的相关关系。 材料与方法： HE染色法观察G4代12月龄TgN(p53mt_LMP1)/HT转基因阳性和阴性小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮病理组织学变化,流式细胞术测定细胞周期分布特点,免疫组织化学法检测组织中p53mt、bax、bcl_2和PCNA表达水平,综合分析其相关性。 结果： 转基因阴性小鼠和阳性小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变发生率分别为0和63.64％(P<0.01)。与转基因阴性小鼠比较,转基因阳性小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织G0/G1期细胞数量减少,S期、G2/M期细胞数量增多,细胞增殖指数增高(P均<0.01),p53mt、bcl_2和PCNA表达水平显著增高(P<0.01),bax表达水平显著降低,bcl_2/bax比值升高(P<0.01)。 结论： TgN(p53mt_LMP1)/HT转基因阳性小鼠p53mt的表达可引起bax表达抑制,bcl_2表达水平增高,bcl_2/bax比值升高,PCNA表达增强,由此导致细胞凋亡活性降低,细胞增殖活性升高,细胞转化机率增加,可能与鼻腔或鼻咽黏膜上皮癌前病变有密切关系。     

食管癌细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达及其意义

目的 探讨食管癌细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达及其临床意义。方法 采用原位ＤＮＡ末端标记法和免疫组化法分别检测７０例食管鳞癌的细胞凋亡和增殖细胞核抗原的表达情况,计算出凋亡指数和增殖指数。结果 凋亡指数及其与增殖指数的比值与肿瘤的病理分级和淋巴垄转移密切相关（Ｐ〈０．０５）。结论 食管癌的发生发展与细胞凋亡的增殖失控有关。     

PCNA的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系

目的：研究增殖细胞核抗原（PCNA）的表达与人乳腺癌细胞凋亡的关系。方法：以乳腺癌细胞株MCF-7／S（化疗敏感细胞株）为研究对象,应用MTT比色法检测阿霉素（ADR）对体外培养的MCF-7／S细胞增殖抑制作用,末端标记（TUNEL）法检测ADR诱导乳腺癌细胞凋亡,免疫细胞化学法检测ADR作用前后PCNA的表达。结果：ADR抑制MCF-7／S细胞增殖,旱剂量依赖性,IC50为0．128mg／L;ADR作用组MCF-7／S细胞的凋亡率（Apoptoticrate,AR）为0．261,与对照组细胞的凋亡率0．0449相比明显增高（P〈0．01）;PCNA阳性表达率为0．3371,与对照组PCNA阳性表达率0．5152相比明显降低（P〈0．01）。结论：乳腺癌肿瘤细胞的凋亡率（AR）和PCNA的阳性表达呈负相关;ADR能诱导MCF-7／S细胞凋亡,并能抑制其增殖。     

细胞凋亡与子宫颈癌的发生

目的 探讨细胞凋亡与子宫颈癌发生、发展的关系。方法 １９０例手术切除标本中,正常宫颈鳞状上皮（ＮＥ）４１例;上皮内瘤样病变７８例,其中重度非典型增生（ＳＤ）４１例,原位癌（ＣＩＳ）３７例;早期侵袭癌（ＭＩＣ）３１例;大细胞非角化型浸润癌（ＩＣ）４０例。凋亡细胞检出用ＴＤＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰｂｉｏｔｉｎ ｎｉｃｋ ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ（ＴＵＮＥＬ）方法,增生细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、ｐ５３、ｂｃｌ－２基因蛋白表达采用免疫组化ＡＢＣ染色方法。结果 （１）在ＮＦ组,凋亡细胞分布在表层细胞,增生细胞却局限于深层细胞;在宫颈肿瘤性病变组织中,二者均毫无规律地散在于病灶中。（２）ＴＵＮＥＬ标识率伴随病变进展而降低,尤其从ＮＥ到ＣＩＳ组显著地减少（Ｐ〈０．０１）,而ＰＣＮＡ标识率却伴随病变进展呈进行性增加（Ｐ〈０     

小鼠后肾集合管水通道蛋白表达及其上皮细胞超微结构研究

目的观察小鼠后肾集合管水通道蛋白(AQP)-4的表达及其上皮细胞超微结构变化。方法应用透射电镜、免疫组织化学及图像分析技术观察并检测小鼠后肾不同发育阶段集合管的超微结构及AQP-4表达。结果小鼠胚龄18 d见发育早期集合管主细胞,生后7 d～21 d,其形态结构发育基本完善。A型闰细胞于胚胎18 d出现,B型闰细胞生后21天出现。AQP-4于胚龄14 d始见表达,分布于集合管管壁上皮细胞侧基底细胞膜,随胚龄增加表达逐渐增强,生后1 d达高峰。结论集合管管壁上皮细胞于胚胎时出现,但其形态结构在生后才逐渐完善。AQP-4对小鼠胚胎时期肾水平衡调节可能起重要的作用。     

Effects of Imbalance of Apoptosis and Proliferation on Large Bowel Carcinogenesis in Mice

OBJECTIVE To observe the pattern of changes in the proliferation and apoptosis at different stages of large bowel carcinoma in mice, and to explore the effects of the imbalance of apoptosis and proliferation at different stages of large-intestine carcinogenesis.METHODS An experimental animal model for large intestine carcinogenesis of KUNMING-strain mice was used. The carcinomas were induced by subcuteneous injection of dimethylhydrazine (DMH) and the distribution and density changes of proliferating and apoptotic cells observed through multistages toward cancer formation. The animals were killed in groups at the 12th, 18th, 24th,and 32nd weeks of carcinoma induction. The apoptotic and proliferating cells were labeled separately using TUNEL and PCNA immunohistochemical staining methodsRF, RESULTS In the normal mouse mucosa, all the apoptotic cells were situated in the superficial layers, however, the proliferating cells were situated in the basement layers, and the amount of both were small. In the early stage of carcinoma induction, the proliferation and the apoptotic cells slightly increased in amount, but there were no obvious changes in their ratio. In the medium stage, the densities of both distinctly increased, but there were no obvious changes in the ratio. In the late stage, the densities of the proliferating and the apoptotic cells in the non-carcinoma mucosa were higher than those at other stages. The proliferating cells in the dysplastic mucosa increased progressively with the increasing degree of the lesions. Although the apoptotic cells increased, their changes did not occur with the degree of the lesions. Their ratio showed a decreasing tendency with the degree of the lesions.CONCLUSIONS (①The presence of an imbalance between cell proliferation and apoptosis was confirmed in the course of large intestine carcinogenesis in a mouse model. ②In the early stage of carcinoma induction both proliferation and apoptosis were at a low level; in the medium stage, they were both at a high level; and in the late stage (that is in carcinoma), proliferation was at a very high level, while apoptosis was at a low level. ③The proliferating cells increased progressively with the degree of dysplasia. There were no obvious changes in the apoptotic cells and their ratio to the proliferating cell sshowed a progressively increasing tendency. ④In the stage of cancer formation, the most essential change was the excessive decrease in the ratio of apoptosis to proliferation. These results support the hypothesis of “Cell Selective Proliferation“, which was raised by authors previously in a study on human large bowel carcinoma.     

培美曲塞联合舒尼替尼对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨培美曲塞联合舒尼替尼对肝癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:以培美曲塞和舒尼替尼单药或联合处理肝癌SK-Hep1细胞后,MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM检测细胞的周期变化和凋亡率,Western blot检测蛋白激酶B（AKT）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和切割型半胱天冬酶3（Cleaved caspase-3）蛋白的表达。结果:培美曲塞和舒尼替尼均能够呈时间-浓度依赖性抑制SK-Hep1细胞增殖,72 h IC50分别为（2.89±0.20）μmol/L和（2.12±0.12）μmol/L（P＜0.05）;培美曲塞和舒尼替尼均能够诱导SK-Hep1细胞凋亡（P＜0.05）;培美曲塞使SK-Hep1细胞周期阻滞于S期,舒尼替尼使细胞周期阻滞于G0/G1期（P＜0.05）;培美曲塞和舒尼替尼均可使p-AKT、PCNA、Bcl-2的表达下降,Cleaved caspase-3表达升高。两药联用使SK-Hep1细胞阻滞在G2/M期,细胞增殖抑制率和细胞凋亡率较单药更加明显,且p-AKT、PCNA、Bcl-2表达下降及Cleaved caspase-3表达升高更为显著（P＜0.05）。结论:培美曲塞联合舒尼替尼可抑制SK-Hep1细胞增殖,并诱导SK-Hep1细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调p-AKT、PCNA、Bcl-2表达和上调Cleaved caspase-3表达有关。     

Early Alterations of Apoptosis and Cell Proliferation in Azoxymethane-initiated Rat Colonic Epithelium

Alterations of apoptosis and cell proliferation in the colonic epithelium of rats after exposure to azoxymethane (AOM) were estimated by means of the terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) method, measurement of 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) incorporation, immunohistochemical staining for proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and counting of raitotic cells. F344 male rats were given a single s.c. injection of AOM (15 mg/kg body weight) at 6 week of age, and killed 4 h, 8 h, 3 days, and 7 days after the AOM treatment. At 4 h after the treatment, many damaged cells were already observed in the colonic epithelium, and they were positive by TUNEL staining. At 8 h, the number of TUNEL-positive cells was largest. The reduction of DNA synthesis in the colonic epithelium, confirmed by BrdU incorporation, was not distinct in comparison with the mitotic inhibition. There was no remarkable change in PCNA labeling index, except that strong expression of PCNA was detected in many damaged cells. On the 3rd day, the appearance of cell death became infrequent and an increase of cell proliferation occurred. On the 7th day, the expression of TUNEL and the cell proliferation biomarkers were at almost normal levels. These findings suggest that AOM induces apoptosis, which is associated with synchronous inhibition of mitosis. The data also indicate that PCNA immunostaining does not reflect the true proliferation state in the early phase after AOM exposure, probably due to the occurrence of cell cycle arrest or DNA repair.