华广虻(Tabanusamaenus Walker)溶纤活性蛋白的纯化及生物活性分析

经过 ７５％ 饱和度硫酸铵沉淀、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ ７５ 凝胶过滤层析、 Ｌｙｓ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ 亲和层析和电泳制备洗脱,从华广虻（ Ｔａｂａｎｕｓ ａｍ ａｅｎｕｓ Ｗ ａｌｋｅｒ）腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 ６７ｋ Ｄ 的溶纤活性蛋白 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ经纤维蛋白平板测定表明, Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 只具有纤溶酶作用,不具有激活纤溶酶原的作用;但 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ 能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—— Ｃｈｒｏｍ ｏｚｙｍ Ｕ Ｋ 及 Ｓ ２２８８还能水解胰蛋白酶专一底物 Ｂｚ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｎ Ａ 及 Ｃ Ｂ Ｚ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｎ Ａ,表明 Ｔ Ａ Ｆ Ｐ具有类胰蛋白酶活性,专一水解精氨酸形成的酰胺键（或肽键） Ｔ Ａ Ｆ Ｐ无胰凝乳蛋白酶活性      

五带虻溶纤活性蛋白的纯化和性质

五带虻Tabanus qutnquectnctus Rlcardo腹部匀浆液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-75凝胶层析、Fibrin-Sepharose 4B亲和层析和电泳制备等方法纯化后,获得在SDS—PAGE图谱上呈现单一区带的溶纤活性蛋白。该蛋白质既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用,其分子量为40kD,等电点为4.5,最适作用pH为9.0,最适作用温度为28℃,37℃处理2h活性完全丧失,Ca²⁺、Mn²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Hg²⁺和PMSF能抑制其活性。     

地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究

通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-纤维素柱和SephadexG-75柱层析从雌地鳖(Eupolyphagesinensiswalker)体内分离纯化到一种相对分子质量约为41.3kD的纤溶活性蛋白,纤维蛋白平板测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带,含糖量为10.5%。其水解纤维蛋白的比活力为547.86u/mg。该成分受蛋白抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF的抑制,但EDTA对其影响不大,提示该成分属于丝氨酸蛋白酶类。该成分在40℃下基本稳定,最适温度40℃,最适pH为8.0,其激活纤维蛋白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。     

华广虻肠道溶纤活性蛋白的纯化和性质(英文)

经过 75 %饱和度硫酸铵沉淀、SephadexG 75凝胶过滤层析、Lys Sepharose 4B亲和层析和电泳制备洗脱 ,从华广虻 (TabanusamaenusWalker)腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 6 7KD的溶纤活性蛋白TAFP。经纤维蛋白平板测定表明 ,TAFP不仅具有纤溶酶作用 ,还具有激活纤溶酶原的作用 ;通过三肽生色底物测定发现 ,TAFP能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—ChromozymUK及S 2 2 88。还能水解胰蛋白酶专一底物Bz Phe Val Arg NA及CBZ Gly Pro Arg NA ,表明TAFP具有类胰蛋白酶活性 ,专一水解精氨酸形成的酰胺键 (或肽键 )。TAFP无胰凝乳蛋白酶活性     

杭州虻纤溶酶的纯化及其生物活性分析

经过７５％硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤层析、ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５离子交换层析、Ｂ ｅｎｚａｍｉｄｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,从杭州虻（Ｔａｂａｎｕｓ ｈｏｎｇｃｈｏｗｅｎｓｉｓ）腹部匀浆液中分离纯化出分子量约为３６．５ｋＤ的纤溶酶ＴＨＦＥ。经纤维蛋白平板测定表明,ＴＨＦＥ既具有纤溶酶作用,又具有激活纤溶酶原的作用。ＴＨＦＥ能分解纤溶酶原激活剂的生色底既具有纤     

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅰ的性质和溶栓活性

单环刺螠纤溶酶UFE-Ⅰ的最适反应温度为45 ℃;最适反应pH为7.0;Mg2+、Mn2+和Fe2+是该纤溶酶的强激活剂;Fe3+、Cu2+、Ag+、Hg+和Pb2+对该纤溶酶具有一定的抑制作用;SBTI和PMSF,完全抑制UFE-Ⅰ,说明该酶为丝氨酸蛋白酶;糜蛋白酶抑制剂部分抑制UFE-Ⅰ,亮抑酶肽、抑蛋白酶肽、苯甲脒较弱的抑制UFE-Ⅰ.与蚓激酶类似,UFE-Ⅰ不仅具有直接的纤溶活力更具有纤溶酶原激活活力(84.0%),另外分别将蚓激酶原料与该酶加入到家兔血栓块中,37 ℃孵育3 h,结果表明该酶具有比蚓激酶更为强大的溶栓能力.     

链霉菌C-3662产生的纤溶活性蛋白酶的纯化与理化性质

 从链霉菌 C- 3662发酵上清液中 ,通过硫酸铵沉淀 ,CM- Sepharose Fast Flow和 Phenyl-Sepharose Fast Flow等层析色谱 ,分离纯化得到了具有纤溶活性的蛋白酶 CGW- 3,反向 HPLC鉴定纯度为 90 % ;每立升发酵上清液可得到 8mg纯品 ,活性回收率 46% ,CGW- 3为一单肽链蛋白 ,分子量 2 2 72 1 ,对丝氨酸蛋白酶抑制剂 PMSF敏感 ,对 EDTA不敏感 ;其 N端 1 5个氨基酸的顺序为 VVGGTRAAQGEFPFM,与微生物来源的胰蛋白酶类丝氨酸蛋白酶有较高的同源性 . CGW- 3的等电点 p I9.0 ,纤溶活性的最适 p H为 7.5～ 8.0 ,对温度比较敏感 .CGW- 3不仅具有直接降解纤维蛋白作用 ,而且能够激活纤溶酶原     

蚯蚓体内一种纤溶酶原激活剂(e-PA)的部分性质研究

从赤子爱胜蚓（Ｅｉｓｅｎｉａｆａｅｔｉｄａ）中纯化出的一种纤溶酶原激活剂（ｅ－ＰＡ）在纤维蛋白平板上可表现出三种活性,分别记为：ＣＦＰｇ,ｕＣＦＰｇ和ｕＣＦ．为更好了解各种活性与ｅ－ＰＡ的纤溶能力的关系,考察了在ＳＤＳ和不同抑制剂存在下各种活性的变化．结果表明,ＳＤＳ可以增强ＣＦＰｇ活性且使得ｅ－ＰＡ变得对一些抑制剂更敏感;ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ,ｃｈｙｍｏｓｔａｔｉｎ,ｐｅｐｓｔａｔｉｎ,ａｐｒｏ－ｔｉｎｉｎ,ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌｆｌｕｏｒｉｄｅ（ＰＭＳＦ）和ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ（ＤＴＴ）对ｕＣＦ没有影响;ｐｅｐ－ｓｔａｔｉｎ能增强ＣＦＰｇ和ｕＣＦＰｇ活性,Ｅ－６４（一种巯基抑制剂）能增强ｕＣＦＰｇ和ｕＣＦ活性．这些现象说明不能简单将ｅ－ＰＡ归结为丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶．此外又以纤溶酶原为底物,分析了ｅ－ＰＡ在体外降解天然蛋白质的肽键特异性,结果表明：ｅ－ＰＡ可以切割碱性氨基酸,小的中性氨基酸及Ｍｅｔ的羧基端,同时ｅ－ＰＡ确能将纤溶酶原切割为纤溶酶;这一结论为ｅ－ＰＡ有可能成为新型溶栓药物提供了生化基础．     

地鳖虫纤溶活性蛋白组分抑制血管的生成

从地鳖虫(Eupolyphaga sinesisWalke)中分离纯化出纤溶活性蛋白组分———地鳖虫纤溶活性蛋白(Fibrinolyric protein ofEupolyphage sinesis,EFP),研究其对血管生成的抑制作用。以新鲜地鳖虫为原料,采用硫酸铵分段盐析,经DEAE-纤维素和SephadexG-75柱等方法分离纯化EFP,用不同浓度的EFP作用于人微血管内皮细胞(MVEC),用MTT法测定EFP对MVEC增殖的影响,用单细胞凝胶电泳和AnnexinV-FITC/PI双荧光染色观察细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测EFP对MVEC细胞周期的影响,并采用鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管模拟肿瘤的新生血管,检测EFP对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的作用。结果表明:1)MTT法测得EFP可抑制MVEC细胞增殖,增殖抑制率达46%;2)EFP可诱导MVEC细胞凋亡,且成剂量依赖关系,用单细胞凝胶电泳法检测细胞凋亡,随着EFP浓度的增大,拖尾细胞增多;用AnnexinV-FITC/PI进行双荧光染色发现,当EFP处理浓度达2μg/ml时,出现了大量凋亡晚期细胞;3)EFP可干扰MVEC的细胞周期,出现S期和G2/M期阻滞;4)用鸡胚尿囊膜实验观察到EFP剂量为0.06mg/egg即可抑制鸡胚尿囊膜血管生成,最高抑制率可达35.8%。提示地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用。     

纤溶活性蛋白检测方法研究进展

迄今为止,对纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein)的检测主要有4种方法:纤维平板法(fibrin plate method)、显色底物法(colorimetric assay using chromogenic substrates)、反相纤维蛋白自显影法(reverse fibrin autography)和纤维蛋白酶谱法(fibrin zymography)。纤维平板法可以用来快速判断样品是否具有纤溶活性,同时,纤维平板法和显色底物法也可以用来对纤溶活性蛋白进行半定量分析。反相自显影法和纤维蛋白酶谱法则是两种较新的技术,主要用来对纤溶活性蛋白进行定性分析。详细阐述了这几种技术的发展过程、原理、优缺点和应用范围。     

地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA序列克隆与毕赤酵母表达

依据已报道的地鳖虫成熟肽cDNA序列设计引物,通过RT-PCR法从地鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker)中克隆得到675 bp地鳖虫纤溶活性蛋白 (fibrinolytic protein,EFP)成熟肽编码序列.将此片段克隆到表达载体pPICZα-A中,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达得到重组表达蛋白,经SDS-PAGE电泳和活性鉴定,表明重组EFP在毕赤酵母中均获得表达,重组表达蛋白相对分子质量为28.2 kD,表达产物分子质量与理论分子质量相符.重组蛋白在毕赤酵母中以分泌形式表达,具有纤溶活性.     

Taxonomic Revision of Tabanus mandarinus Species Group (Diptera: Tabanidae) from Korea

ABSTRACT In a review of the horseflies of the Tabanus mandarinus species group in Korea, six species are recognized. Among them, Tabanus nipponicus is newly recorded from Korea. Keys, annotated check lists of domestic records, collection data, and photographs of T. nipponicus are provided.     

Taxonomy of Tabanus cordiger Species Group (Diptera: Tabanidae) in Korea

ABSTRACT Horseflies of the Tabanus cordiger species group from Korea is revised taxonomically. A total of four species are arranged herein: T. divulsus sp. nov., T. fulvimedioides, T. kinoshitai and T. loukashkini. A key to discriminate species, annotated check lists of domestic records, and collection data for each species are provided.     

AFP、血流变、超敏C反应蛋白检测在早期肝癌诊断价值分析

目的:探讨甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)、血流变、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)等指标检测对早期肝癌患者的诊断价值。方法:将我院自2016年5月至2019年5月间收治的经手术和病理学检查确诊肝癌患者115例作为A组,109例其他肝脏良性病变患者作为B组,同期体检健康者98例作为对照组C组,观察三组对象的AFP、血流变和超敏C反应蛋白等各项指标的水平。结果:A组患者的AFP水平和hs-CRP水平均明显高于B组肝脏良性病变组和C组健康对照组,B组患者AFP高于C组,组间差异具有统计学意义(P<0.05),B组和C组患者hs-CRP水平比较差异无统计学意义(P>0.05);A组患者全血高、中、低切粘度、全血粘度、红细胞压积、血细胞比容、血沉方程K值、纤维蛋白原、红细胞聚集指数和红细胞刚性指数等指标水平均明显高于B组和C组对象,B组患者血沉和血沉方程K值明显高于C组,组间差异具有统计学意义(P<0.05);A组肝癌患者TNM分期较高的患者血沉方程K值、血细胞比容、血浆粘度和全血低切粘度均明显高于TNM低分期的患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:患者的AFP、hs-CRP联合血流变血指标的异常改变可作为鉴别肝脏良性疾病和恶性肿瘤的依据,同时能提高诊断的准确性,可在临床范围内推广使用。     

马尾松毛虫幼虫的捕食天敌及其捕食作用的研究

根据林间调查和室内观察资料,分析了江西省万年县不同松林中马尾松毛虫不同发生代别低龄幼虫期的主要捕食天敌种类及数量。结果表明低龄幼虫期捕食无敌有13科31种,其中以蜘蛛类最多,其次为蚂蚁类。不同林型中捕食天敌的种类和数量在年份间代别间均存在一定差异,数量差异尤其显著。在室内研究了几种主要捕食无敌对马尾松毛虫低龄幼虫的捕食作用及其功能反应,结果表明功能反应为S型,由此建立了它们的功能反应模型。     

被害马尾松（Pinus massoniana）针叶挥发性物质的提取、鉴定及蚕饰腹寄蝇（Blepharipa zebina）的电生理活性

试验使用动态顶空吸附的方法,提取了被害马尾松(Pinus massoniana)针叶挥发物,并通过气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)及标准样品进行鉴定。结果表明,被害马尾松针叶挥发性物质主要包括绿叶挥发物、单萜、含氧单萜及倍半萜等四大类物质;挥发物中以单萜的含量最高,其它3类物质含量较低。通过触角电位图(EAG)技术,测定了23种挥发性物质标准样品的石蜡油溶液对蚕饰腹寄蝇(Blepharipa zebina)雌蝇的电生理活性。结果表明,蚕饰腹寄蝇雌蝇对α-蒎烯、β-蒎烯、长叶烯、莰烯、乙酸冰片酯等的相对触角电位反应值与湿润空气对照相比并无显著差异;雌蝇对其它刺激物的相对触角电位反应值与湿润空气对照相比均存在显著差异。同时测定了雌蝇对8种标样,在5个浓度系列下的剂量-反应,并分析了反应阈值。结果表明,蚕饰腹寄蝇雌蝇对顺-3-己烯-1-醇和里哪醇的反应阈值为0.1μg/μl,对壬醛的反应阈值为1μg/μl,对柠檬烯、α-水芹烯、2,6-二甲基-2,4,6-辛三烯、β-石竹烯4种物质的反应阈值为100μg/μl,而对α-蒎烯,在测试的剂量范围内不存在反应阈值。在确定对蚕饰腹寄蝇有生理活性的物质成分和分析反应阈值的基础上,对寄生蝇类定位寄主的机制进行了讨论。     

温度胁迫对二化螟滞育幼虫生理指标的影响

为从生理生化水平上探讨二化螟滞育幼虫应对温度胁迫的生理机制,分别对系列温度胁迫(STS)和梯度温度胁迫(GTS)处理后的幼虫水、脂质、总糖、小分子碳水化合物含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性进行了测定.结果表明:随着温度的降低,两种处理二化螟滞育幼虫虫体含水量趋于减少,且0℃以下时GTS处理下降幅度较STS处理显著;两种处理脂质含量均逐步下降且二者间无显著差异;两种处理总糖含量分别先减后增和持续下降,均检测出4种小分子碳水化合物,其中STS处理葡萄糖、甘油和果糖含量先增后减,海藻糖含量变化与此相反,而GTS处理海藻糖含量先减后增,葡萄糖和甘油含量呈相反变化,果糖含量无变化;14～-14℃范围内STS处理SOD和POD活性较GTS处理低,CAT活性相反.二化螟滞育幼虫生理指标的变化反映了其应对不同温度胁迫的生理响应.     

高压氧联合地塞米松治疗突发性耳聋的疗效及对血液流变学的影响

目的:研究高压氧联合地塞米松治疗突发性耳聋的疗效及对血液流变学的影响。方法:选择2012年6月至2015年1月在我院接受治疗的突发性耳聋患者90例(124耳)进行研究。根据数字法随机分成观察组(45例,60耳)及对照组(45例,64耳),两组均给予常规的改善内耳微循环及神经营养类制剂治疗,对照组另给予地塞米松治疗,观察组在对照组基础上另给予高压氧治疗,治疗1个疗程后对比两组疗效,听力改善程度以及血液流变学指标变化。结果:观察组的总有效率是98.33%,显著高于对照组的89.06%,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后观察组的听力损失程度显著优于对照组,纯音听阈显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后观察组的高切粘度、中切粘度、低切粘度、红细胞聚集指数均分别显著低于对照组,红细胞变形指数显著高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:高压氧联合地塞米松治疗突发性耳聋患者具有更为显著的疗效,且可有效改善患者的血液流变学指标,值得临床推荐。