乙醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响

研究了乙醇溶液对木瓜蛋白酶水解酪蛋白的催化活性及构象的影响。结果表明,木瓜蛋白酶在一定浓度乙醇溶液中水解酪蛋白的活性有显著上升。动力学测定表明木瓜蛋白酶在乙醇溶液中米氏常数（Km）下降。差示光谱显示,在乙醇溶液中木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化。荧光发射光谱表明,木瓜蛋白酶在乙醇溶液中发射峰位几乎没移动,但发射强度明显增高。     

乙二醇对木瓜蛋白酶催化活性的影响

对不同浓度乙二醇水溶液影响木瓜蛋白酶水解酪蛋白的催化活性及构象的改变进行研究。结果表明,木瓜蛋白酶在乙二醇水溶液中水解酪蛋白的活性显著下降。动力学测定表明,木瓜蛋白酶在乙二醇水溶液中最大反应速度明显下降;差示光谱显示,在乙二醇水溶液中木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化;荧光发射光谱显示,木瓜蛋白酶在乙二醇水溶液中发射峰位几乎没移动,但发射强度明显增高。     

几种蛋白酶对文蛤肉的酶解工艺条件研究

以文蛤为原料,水解度为指标,从胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,胃蛋白酶和风味蛋白酶中选出水解效果较好的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶.并通过实验确定了胰蛋白酶,木瓜蛋白酶单酶水解及两者组合复合酶解文蛤肉的最佳工艺.结果表明:复合水解效果最佳.最佳工艺:先添加胰酶6000 u/g(原料),水解温度50℃,固液比1:3(V/W),pH 8.0,在此条件下水解6 h;然后改变条件,温度55℃,pH 5.5,底物浓度1:3(V/W),添加木瓜蛋白酶2000 u/g(原料),在此条件下水解2 h.通过实验验证,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组合在该条件下对文蛤肉蛋白具有较好的水解效果,其水解度为28.15%.     

甲醇溶液对木瓜蛋白酶催化活性的影响

试验结果表明,木瓜蛋白酶在一定浓度甲醇溶液中水解酪蛋白的活性显著上升;动力学测定表明,该酶在甲醇溶液中Km下降;在甲醇溶液中木瓜蛋白酶催化酪蛋白水解反应的最适pH为8.5,最适温度为70℃;紫外差示光谱研究表明,在甲醇溶液作用下木瓜蛋白酶的二级结构发生了变化;荧光发射光谱研究表明,木瓜蛋白酶在甲醇溶液中发射峰位向低波长移动,荧光峰值明显增高。     

木瓜蛋白酶的研究 Ⅳ.活性中心组氨酸残基的羧甲基化

(1)在过量半胱氨酸存在下微量溴代乙酸或碘代乙酸在pH5对木瓜蛋白酶有強烈的抑制作用,当抑制剂与酶的克分子比为0.5时,抑制即达完全。抑制前后木瓜蛋白酶巯基含量不变。溴代乙酸作用后所得到的羧甲基木瓜蛋白酶汞盐結晶,与木瓜蛋白酶汞盐結晶相同。(2)在6M尿素溶液中溴代乙酸与木瓜蛋白酶的作用速度显著降低,底物L-白氨酰胺及抑制剂对氯汞苯甲酸都具有保护作用。这些事实表明溴代乙酸的抑制与木瓜蛋白酶的催化活性有密切关系,其作用点很可能是活性中心所在。(3)以双相电泳层析进行氨基酸組成分析結果指出,溴代乙酸作用点很可能是組氨酸殘基。     

木瓜凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶和木瓜蛋白酶Ⅲ的蛋白水解活性

番木瓜(Carica papaya)浆汁中含有三种蛋白酶——木瓜蛋白酶,木瓜疑乳蛋白酶和木瓜蛋白酶Ⅲ(以前称为肽酶)。本研究旨在确定木瓜凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶Ⅲ的蛋白水解活性在量和专一性方面是否与木瓜蛋白酶相同。在测试中用偶氮酪蛋白、血清清蛋白和软骨蛋白多糖作底物,精确比较标准酶制剂的水解蛋白活性;以清蛋白和磷酸化酶α作底物,比较它们的相对专一性;把蛋白质中的肽键与合成底物的水解动力学参数加以比较。     

木瓜蛋白酶酶解鱼鳞提取胶原蛋白的工艺研究

用木瓜蛋白酶水解鱼鳞提取胶原蛋白,对影响酶解过程的的主要因素(酶量、温度、底物浓度)分别作为单因素进行了实验。并通过正交实验得到鱼鳞胶原蛋白提取条件的优化组合,同时对提取物进行了分析检测。结果表明,木瓜蛋白酶对鱼鳞有较好的水解效果,酶用量宜采用4g/L,最佳温度为60℃,底物浓度宜选择20%。     

用木瓜蛋白酶及固定化木瓜蛋白酶拆分DL-苯丙氨酸

为了将手性化合物D-苯丙氨酸和L-苯丙氨酸进行分离,利用木瓜蛋白酶及固定化木瓜蛋白酶催化的方法对其拆分．试验结果表明,用DL-苯丙氨酸合成N-乙酰-DL-苯丙氨酸,得率为88.7％．木瓜蛋白酶、海藻酸钠 壳聚糖固定化木瓜蛋白酶(IPSAC)、尼龙布固定化木瓜蛋白酶(IPN)催化合成N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺时,对催化合成过程影响最大的因素分别是溶液中的离子强度、溶液中的离子强度、反应温度;溶液中的离子强度与pH对合成的影响较大．本试验得出分别用木瓜蛋白酶、IPSAC、IPN催化合成N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺的3个最佳方案;用此3个方案合成时,产率分别为61.2%、54.7%、36.3%．N-乙酰-L-苯丙氨酰苯胺水解生成L-苯丙氨酸,产率59.2%,光学纯度为96.6％．N-乙酰-D-苯丙氨酸水解生成D-苯丙氨酸,产率61.7%,光学纯度为95.7％．     

木瓜蛋白酶水解壳聚糖的工艺研究

本文通过正交试验对木瓜蛋白酶水解壳聚糖的工艺进行优化,并对降解过程中粘度、还原糖等一些指标的动态变化进行研究。结果显示,木瓜蛋白酶在反应温度45℃下降解壳聚糖的最佳工艺条件为壳聚糖的脱乙酰度70%,pH4.0,底物浓度1%,壳聚糖与酶的比例为25∶1(w/w)。其中底物脱乙酰度对酶解效果影响呈极显著水平,pH值影响呈显著水平。木瓜蛋白酶可较为有效地降解脱乙酰度为70%的壳聚糖,在其最适条件下对壳聚糖水解约60min,可控制产物平均分子量在1万以内。木瓜蛋白酶起始降解速率很快,20min后VDP变化趋于平稳,60min后基本维持在93～94%上下。反应进行60min后产物的平均分子量约为9000。还原糖含量在反应进行150min之后,还原糖的生成速度基本趋于平稳。     

木瓜蛋白酶的研究——Ⅲ.组氨酸及色氨酸残基为木瓜蛋白酶表现催化活性的必需基团

(一)木瓜蛋白酶在甲烯蓝存在时照光数分钟活力即显著下降,光氧化过程中組氨酸及色氨酸的破坏和活力的下降均按一級反应进行。組氨酸和色氨酸破坏的一級反应常数之和恰等于活力下降的一級反应常数。过程中酪氨酸及二硫鍵含量无显著变化。(二)NBS作用于木瓜蛋白酶引起的色氨酸殘基的破坏与活力的下降完全一致。(三)根据光氧化及NBS的作用过程中木瓜蛋白酶活力下降与組氨酸及色氨酸破坏的定量关系,可以认为木瓜蛋白酶的必需基团中包含一个組氨酸及一个色氨酸殘基。     

木瓜蛋白酶的研究 Ⅰ.对不同底物水解作用的比较

(一)氢离子浓度对木瓜蛋白酶水解不同合成底物的影响均属于非竞争性类型,即对不同底物的米氏常数皆与pH无关,pH仅影响最大反应速度。因此很可能木瓜蛋白酶的米氏常数即等于其与底物结合的解离常数。(二)甲醇对木瓜蛋白酶水解Bz-精-NH_2及Cbz-谷NH_2-NH_2有抑制作用,但对Cbz-白-NH_2及Cbz-甘-NH_2的水解却有显著的促进作用。(三)甘氨酸乙酯对Bz-精-NH_2及Cbz-甘-NH_2的水解亦有促进作用,但活力提高的程度各不相同。(四)根据以上结果对木瓜蛋白酶的作用机制作了简短的讨论。     

胃蛋白酶和木瓜蛋白酶水解核桃蛋白工艺研究

以核桃粕为原料,以水解度为考察指标,研究胃蛋白酶和木瓜蛋白酶对核桃蛋白的水解作用.结果表明：木瓜蛋白酶为酶解核桃蛋白最佳酶,其最佳酶解条件为底物浓度4％、酶质量分数5％、酶解 pH 值为7．0、酶解温度50℃、酶解时间4 h;在该条件下,木瓜蛋白酶酶解核桃蛋白水解度可高于25．76％.     

汞离子对木瓜蛋白酶结构的影响及抑制机理的研究

通过荧光光谱、紫外光谱、傅里叶红外光谱(FTIR)和远紫外圆二色光谱(Far-UV CD)对重金属Hg²⁺作用下木瓜蛋白酶的结构变化进行了定性定量的表征,探索Hg²⁺对木瓜蛋白酶变性的抑制机理。结果表明:Hg²⁺是木瓜蛋白酶的强抑制剂,10^－4mol/L的HgCl₂可使木瓜蛋白酶丧失90%的活性;随着金属Hg²⁺浓度的增加,蛋白质所处的微环境和二级结构发生了明显的改变,(α螺旋＋β折叠)结构总量减少,无规则卷曲含量增多,酶的二级结构由规则有序转向无序。     

双酶法制备螺旋藻多肽的工艺研究

选用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶结合的双酶法对螺旋藻蛋白进行水解。其中,对木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白的工艺进行优化。以水解度为指标,研究了酶解时间、酶与底物比、pH和酶解温度4种因素对酶解反应的影响。在此基础上设计了3因素(加酶量、酶解温度和pH)3水平的响应面试验。结果表明碱性蛋白酶水解螺旋藻蛋白的最佳酶解条件为:加酶量4300 U/g,pH 7.0,酶解温度55℃,酶解时间160 min;木瓜蛋白酶的最佳酶解条件为:酶底比为4.5%,酶解温度60℃,pH 6.5,酶解时间210 min。利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶结合的双酶法制得的多肽水解度可达32.90%,与单酶法相比,水解度明显提高。     

设施栽培下3个品种番木瓜的营养成分分析

测定了引进的3个番木瓜品种在设施栽培条件下,果实的水分、灰分、p H值、可溶性固形物、粗多糖和木瓜蛋白酶活力等6大营养成分的含量,并与海南产番木瓜进行了比较分析。研究结果表明:引进的3个番木瓜品种间灰分、可溶性固形物、木瓜蛋白酶活性具有显著差异,同一品种在不同时期其果实的各项营养指标也具有显著性差别。引进的番木瓜在设施栽培条件下果实的品质均不如海南产的果实。本研究结果为水果之王番木瓜的南果北种提供理论依据。     

木瓜蛋白酶法提取荸荠皮多糖

本文以低温烘干的荸荠皮为原料,利用木瓜蛋白酶提取荸荠皮中的多糖。通过单因素实验和正交实验研究了p H、木瓜蛋白酶用量、液料比、酶解温度、酶解时间对多糖提取效果的影响。结果表明,最佳提取工艺条件为:p H 4,木瓜蛋白酶用量0.3%,液料比25∶1 m L/g,酶解温度50℃,酶解时间2 h。验证实验表明,多糖平均得率可达30.03%,远高于相同条件下水提法的得率21.23%,且重现性好。本实验为提高荸荠的综合价值提供了理论基础和实验方法。     

百合巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质研究

百合的鳞茎中含有一种对木瓜蛋白酶有强抑制作用的巯基蛋白酶抑制剂．百合的鳞茎经浸取加热处理,木瓜蛋白酶偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析,可获得在ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均为单一蛋白带的百合巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ）．此ＣＰＩ为单链蛋白,含有０．３０７％的中性糖;Ｎ端氨基酸为Ｉｌｅ;ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量为１２０００;ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００测得分子量为１２５００．百合ＣＰＩ在１００℃内和ｐＨ２～１２范围内非常稳定;对木瓜蛋白酶的抑制属竞争性抑制类型,其Ｋｉ值为１．１５×１０~（－９）ｍｏｌ／Ｌ,对木瓜蛋白酶的抑制摩尔比为８．５：１．     

木瓜蛋白酶的研究 Ⅵ.白氨酰胺的聚合作用

木瓜蛋白酶于pH7在半胱氨酸存在下能催化白氨酰胺生成聚白氨酸,聚合物分子量約为1,200,过程中只有聚合作用并无白氨酰胺的水解。当反应系統中同时有苯丙氨酸甲酯存在时則生成白氨酸与苯丙氨酸之比为1∶1的,分子量約为1,400的共聚物。虽然从酶制剂的均一性,离子交換柱层析时活力的平行分布以及溴代乙酸的抑制看来,轉酰基反应和水解反应一样都是由木瓜蛋白酶所催化的,但根据白氨酰胺与苯甲酰精氨酰胺同时存在时的总反应速度为二者在相同条件下分別作用速度之和,催化白氨酰胺聚合的pK_b为5.3与苯甲酰精氨酰胺水解的pK_b值(3.3)显著不同,以及N-溴代琥珀酰亚胺对水解和聚合作用的影响也不相同等看来,木瓜蛋白酶催化水解与聚合作用的活性中心很可能不完全相同。     

木瓜蛋白酶的固定化及其性质研究

在海藻酸钠-壳聚糖固定化木瓜蛋白酶(immobilized papin on sodium alginate-chitosan,IPSAC)的实验中,当给酶量为1 mg g1载体时,酶活性为39.2 U,酶活力回收为21.1%.在尼龙布固定化木瓜蛋白酶(knmobilized papain onnylon,IPN)的实验中,当每块尼龙布(3 cm×3 cm)给酶量为1 mg时,酶活性为35.6 U,酶活力回收为19.2%.木瓜蛋白酶(papain,PA)、IPSAC、IPN的最适pH分别为7.2、7.2和6.8.PA及IPSAC在70℃以下活性稳定;IPN在50℃以下活性稳定.IPSAC与IPN半衰期分别为59 d和66 d.     

响应面分析法优化鸡骨泥酶解工艺条件的研究

以鸡骨为原料,经风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备鸡骨泥酶解液。采用响应面分析法,通过考察酶解温度、pH和组合酶的配比对可溶性氮含量的影响来优化酶解工艺。结果表明,优化工艺条件为:酶解温度56℃,pH 6.2,风味酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶配比为3.2:1:1。脂肪酸分析表明,酶解产物中不饱和脂肪酸质量分数约35%。