耐核糖核酸酶内含HCV RNA病毒样颗粒的表达

目的 构建可以表达耐核糖核酸酶(RNase)的内含HCV RNA病毒样颗粒的载体质粒。方法 将表达载体pI NCCL用Hind Ⅲ酶切后，与用相同内切酶酶切的HCV RNA非编码区(5′-UTR)扩增产物，在T4 DNA连接酶的存在下连接，构建一新的表达载体pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR，再转化BL21-DE3 E．coli进行原核表达。结果 成功构建得到了新的表达载体pI NCCL-HCV RNA5′-UTR，经原核表达为耐RNase的内含HCV RNA病毒样颗粒。结论 得到的pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR表达载体及原核表达系统，可作为一个耐RNase的HCV RNA标准品和质控品的构建和制备表达载体平台。     

Dicer酶及其在RNA干扰中的作用

RNA干扰(RNAInterference,RNAi)是双链RNA引起的同源mRNA特异性降解的现象。Dicer酶是核糖核酸酶Ⅲ(RibonucleaseⅢ,RNaseⅢ)家族的成员,在RNA干扰的起始阶段起着重要作用。Dicer酶最早在果蝇中发现,包括Dicer-1和Dicer-2,分别以Dicer-1/R3D1-L、Dicer-2/R2D2复合物的形式作用于微小RNA(microRNA,miRNA)和小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)的产生。Dicer酶除了在RNAi中发挥重要作用外,还在调节动物生殖发育中起作用。     

不同样本测序前处理方案对冠状病毒基因组高通量测序结果的影响

目的以基因组最大RNA病毒(冠状病毒)为代表,研究不同测序前样本处理模式对高通量测序获得病毒全基因组序列信息质量的影响。方法以细胞培养的人冠状病毒HCoV-OC43样本为代表,分为4种测序前样本处理模式,即:未处理组、核酸提取前DNase和RNase处理组、核酸提取后DNase处理组、核酸提取前DNase和RNase处理且核酸提取后DNase处理组。不同模式处理后的核酸分为两份,一份直接RNA测序(未扩增),另一份经序列非依赖的单引物扩增(SISPA)后DNA测序。结果尽管不同处理方式下获得的病毒基因组覆盖率差别不大,但是样本核酸提取后经DNase处理组直接测序获得了最高的基因覆盖度和测序准确性,而SISPA扩增可有效提高病毒测序读长(reads)比例与基因组各位点的测序深度。结论本研究为优化冠状病毒等RNA病毒全基因组测序策略提供了技术参考。     

RNase Ⅲ制备的小分子干扰RNA(esiRNA)文库构建及优势分析

目的 建立KIF4A核糖核酸内切酶Ⅲ酶切制备的小分子干扰RNA(esiRNA)文库,并探讨这种新型siRNA制备方法的优势.方法 制备502 bp的KIF4A基因组序列作为转录模板;体外转录获得双链RNA;用核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白(GST-RNaseⅢ)酶切双链RNA,制备KIF4A esiRNA文库;应用KIF4A esiRNA和化学合成的KIF4A siRNA转染胃癌细胞株SGC-7901,应用Q-RT PCR和WesternBlot分别检测KIF4A的mRNA和蛋白水平.结果 利用GST-RNaseⅢ成功制备了KIF4A esiRNA文库,该文库可有效抑制SGC-7901细胞内的KIF4A表达,且抑制效果明显优于化学合成的KIF4A siRNA.结论 用生物学方法制备的KIF4A esiRNA文库可有效抑制KIF4A在细胞内的表达,且抑制效果优于化学合成的siRNA.     

揭示嵌入基因组DNA中RNA移除机制

据Shen Y 2011年12月4日（Nat Struct Mol Biol,2011 Dec 4.doi：10.1038/nsmb.2176）报道,核糖核酸酶H（RNase H）和DNA错配修复系统,似乎相互作用将DNA中RNA组分清除掉。RNA组分单元嵌入到含有一个有机体全部遗传数据的基因组DNA时,它们能够导致细胞产生问题。     

核糖核酸酶家族几个重要成员研究进展

核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase)是生物体内重要的核酸水解酶。它们的种类繁多，功能各不相同。总的来说，它们的主要生理功能是控制细胞内RNA的种类与数量分布；参与核糖核酸转录后的加工过程；与某些植物的衰老、自交不亲和、雄性不育有密切关系；而在动物细胞中还具有抗病毒和抗癌作用。本文就核糖核酸酶家族中的几个重要成员研究进展做一综述。     

脊髓灰质炎病毒的多尿苷酸聚合酶和RNA复制酶具有同样的病毒多肽

脊髓灰质炎病毒的基因组是单链RNA,在感染的细胞质内借助于依赖RNA的RNA聚合酶(复制酶)进行复制。这种复制酶可能会有一种或多种病毒编码的蛋白质,但证据还不充分。作者曾分离到一种可溶性的脊髓灰质炎病毒特异的依赖RNA的RNA聚合酶,多尿苷酸聚合酶,     

应用ELISA方法检测抗呼吸道合胞病毒免疫核糖核酸免疫活性的研究

本文报导在小鼠模型系统中,应用ELISA方法对兔抗呼吸道合胞病毒(RSV)免疫核糖核酸(i-RNA)诱生血清特异性抗体及抗体生成的动态进行观察。实验结果表明:抗呼吸道台胞病毒免疫核糖核酸(RSV-i-RNA)在小鼠体内具有诱生血清特异性抗体能力。RSV-i-RNA常规致敏后24h抗体水平明显增高,72h达高峰,11天左右降至正常水平,RNase处理使RSV-i-RNA诱生血清特异性抗体能力明显减低,而DNase、Pronase对其则无明显影响。     

乙脑病毒基因Ⅰ、Ⅲ型特异性全基因组引物

目的 为构建高通量乙脑病毒全基因组序列测定平台,设计两套分别针对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组的型特异性引物.方法 根据GenBank公布的乙脑病毒全基因组序列为参考信息,设计了两套基因Ⅰ型和基因Ⅲ型乙脑病毒的基因型特异性扩增测序引物.并由其测定本研究室采集并分离得到的121株乙脑病毒全基因组序列,含63株基因Ⅲ型乙脑病毒,58株基因Ⅰ型乙脑病毒.结果 设计得到基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组扩增测序引物17对,基因Ⅰ型乙脑病毒型特异性扩增测序引物16对.使用两套引物完成121株乙脑病毒全基因组序列的测定.测定完成的基因Ⅰ型乙脑病毒全基因组序列平均值为40.037,基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组序列平均质量值为40.857.结论 本研究设计的两套型特异性引物能高效特异地完成基因Ⅰ型和基因Ⅲ型乙脑病毒全基因组序列的扩增,为构建高效稳定的乙脑病毒全基因组序列测定平台奠定了基础.     

用DNA分子克隆技术对RNA病毒的研究

由于产生重组体DNA的技术,有可能制得RNA病毒基因组的DNA复制品,已使对RNA病毒的研究有了革命性的变化,这样制得的DNA复制品就可用来进行限制性内切酶分析与序列分析。因而可以获得对RNA病毒基因组结构方面研究的详细资料。本文作者采用了重组体DNA方法对脊髓灰质炎病毒和逆转录病毒的基因组进行了研究。为了制备一种脊髓灰白质炎病毒RNA基因组的DNA复制品,作者利用寡聚脱氧胸苷酸作引物,逆转录RNA为一负链DNA,再让此单链DNA折回     

微小核糖核酸病素(Picornaviruses)与疾病

微小核糖核酸病毒包括一大类最微小的RNA病毒.引起人类疾病的的微小核糖核酸病毒主要有4属肠道病毒(enteroviruses)、鼻病毒(rhinoviruses)、嗜肝病毒(hepatovirus)和标准ECHO病毒(parechoviruses).肠道病毒寄居于人体消化道,能从咽喉或下部肠道分离到.鼻病毒主要从鼻腔和咽喉分离.微小核糖核酸病毒能引起人类的疾病病种很多,累及的器官脏器很多,包括麻痹症、无菌性脑膜炎、流行性胸痛、多发性肌炎、心肌炎、呼吸道感染、眼结膜炎和严重的全身性疾病等.     

微小核糖核酸病素（Picornaviruses）与疾病

微小核糖核酸病毒包括一大类最微小的RNA病毒。引起人类疾病的的微小核糖核酸病毒主要有4属：肠道病毒(enteroviruses)、鼻病毒(rhinoviruses)、嗜肝病毒(hepatovirus)和标准ECHO病毒(parechoviruses)。肠道病毒寄居于人体消化道，能从咽喉或下部肠道分离到。鼻病毒主要从鼻腔和咽喉分离。微小核糖核酸病毒能引起人类的疾病病种很多，累及的器官脏器很多，包括麻痹症、无菌性脑膜炎、流行性胸痛、多发性肌炎、心肌炎、呼吸道感染、眼结膜炎和严重的全身性疾病等。     

核糖核酸酶的抗肿瘤研究进展

核糖核酸酶〔ribonuclease ,RNase〕是一类能够特异性切割RNA的酶 ,既有催化活性 ,又有细胞毒性。它们的生物学活性由激动剂和抑制剂所控制。迄今为止 ,已分离纯化出多种不同种类的RNase ,并对其结构和功能进行了深入的研究。研究表明 ,其中BS RNase、Onconase和RC RNase等具有抗肿瘤作用 ,可作为细胞毒素进入肿瘤细胞 ,抑制肿瘤细胞的生长 ,因此RNase的研究为临床治疗肿瘤提供了新的前景 ,有望成为一类新型的抗肿瘤药物     

依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅲ与基因表达和基因治疗

依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅲ (polⅢ )能催化 5SrRNA、tRNA、U6SnRNA等一些小的、稳定的RNA的合成。文章综述了依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅲ的启动子和转录复合物 ,并介绍了RNA聚合酶Ⅲ的转录在基因表达和基因治疗 (核酶、反义核酸、RNA干扰技术等 )研究中的应用价值。     

芬兰携带HTLV-Ⅲ抗体同性恋者的免疫功能

获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是主要在同性恋中流行的一种免疫功能异常性疾病,由Ⅲ型人类T细胞白血病病毒(HT-LV-Ⅲ)特异性感染所致.为了研究HTLVⅢ感染病人的免疫抑制性质,作者检查了175例生活在芬兰的同性恋志愿者的HTLVⅢ抗体、外周血淋巴细胞对有丝分裂原(PHA、PWM)及特异抗原PPD的增殖反应.用荧光标记的单克隆抗体分析淋巴细胞亚群.用商用的EIA试剂检查乙型肝炎表面抗原、核心抗体和表面抗体、甲型肝炎总抗体.用免疫荧光及免疫酶法检查EB病毒(巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV-1.2)的IgG抗体.以70例年龄相似的男性供     

微生物感染组学揭示白蛉携带病毒, 细菌和真核微生物

新发微生物与感染杂志(Emerging Microbio and Infection)在国际上首次报道中国研究团队关于白蛉(Sandfly)微生物组(microbiome)的研究结果, 题目为"感染组学研究揭示被忽视的吸血媒介白蛉所携带对人类具有致病性的病毒、细菌和真核微生物"。研究结果显示, 我国山西省中部和南部地区自然界采集的白蛉标本中微生物组RNA占标本中总的非核糖体RNA的1.8%, 共含有87种病原体, 其中70种是新物种。RNA病毒在病原体中占比最多, 其次是细菌、DNA病毒和真核微生物。RNA病毒包括15个超群(viral super-groups), 共78种, 其中66种是RNA病毒中的新病毒种。在RNA病毒序列信息中包含大量已经在当地白蛉中分离到的白蛉病毒属(Genus Phlebovirus)的Wuxiang病毒(Wuxiang virus, WUXV)和Hedi病毒(Hedi virus, HEDV )两种新病毒的基因组信息。分析中发现2种DNA病毒(Adintovirida和细小病毒科病毒)。细菌基因组信息包括不动杆菌(Acinetobacter)、假单胞菌(...     

竞争性内源核糖核酸的研究进展

竞争性内源核糖核酸(ce RNA)假说是一种新的基因转录后调控模式,即编码蛋白质的信使RNA(m RNA)、长链非编码核糖核酸(lnc RNA)、假基因转录物、环状核糖核酸(circ RNA)等可通过结合微小核糖核酸(mi RNA)参与其靶基因的表达调控。ce RNA调节网络在维持正常生理状态及调控疾病发生、发展中发挥重要作用。本文围绕着该假说的提出、相关分子类型、当前研究现状、存在问题和发展方向等多个方面,对ce RNA的研究进展进行综述,有助于阐明包括肿瘤在内的多种疾病的致病机理,并为疾病的诊治提供新思路。     

血清RNase微量研究方法介绍

血清核糖核酸酶(RNase)应用于临床已日益引起人们重视。因此选择一个简便易行测定方法已成为进一步发挥其效益的先行任务。依我室条件确立了下列测试方法,在1小时内即可完成。此法的原理是:血清RNase能水解大分子多核苷酸而生成寡核苷酸和单核苷酸。离心沉淀弃去大分子核糖核酸,在260nM测上清液中寡核苷酸和单核苷酸量,即可知酶的活力。     

野生型和突变型GPⅢa真核表达载体的构建与鉴定

目的 构建人野生型和突变型血小板糖蛋白Ⅲa(GPⅢa)真核表达重组质粒PeDNA3.1(+)Ⅲa和PeDNA3.1(+)ⅢanT1565C.方法 选择人红白血病细胞提取人基因组总RNA,经过逆转录-聚合酶链反应后,采用定点诱变技术,通过三轮聚合酶链式反应将第2外显子1565位基因由T置换为C,把最终产物与质粒peDNA...     

嗜肝DNA病毒核衣壳装配的研究进展

嗜肝 DNA 病毒核衣壳装配是病毒复制周期的一个中心环节,需要3种病毒成分(前基因组 RNA、核心蛋白、多聚酶蛋白)特异和有次序地相互作用。研究表明:核心蛋白的氨基端具有自我组装核壳的能力,而羧基端具有结合核酸、稳定核壳的作用;多聚酶蛋白的4个区域均为介导前基因组 RNA 包装所需:前基因组 RNA 上存在的包装信号决定其选择性包装。本文最后讨论了嗜肝 DNA 病毒核衣壳装配研究的潜在应用价值。