P162对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75NTR表达的影响

 目的：研究靶向Ras-GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白(G3BP)的新药P162对人食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及其对p75神经营养因子受体(p75NTR)表达的影响。方法：CCK-8法检测P162对食管癌细胞株Eca109增殖抑制的影响;集落形成实验检测P162对Eca109细胞的放射增敏效应,单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比;倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞术检测p75NTR的表达。结果：P162对食管癌细胞株Eca109有增殖抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,2.5、5.0、10 μmol/L P162对Eca109细胞的放射增敏比分别为1.54、2.35和2.33。随着照射剂量的增加,食管癌细胞中p75NTR的表达增加,经5 μmol/L P162处理的实验组中p75NTR的表达明显低于未经处理的对照组。结论：P162对Eca109细胞有放射增敏作用,并且能抑制食管癌干细胞p75NTR的表达。P162的增敏作用可能与抑制食管癌干细胞有关。     

Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响

目的研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用。方法将食管癌细胞株Eca-109分为6组，A：对照组，B：化疗组，C：化疗＋高剂量光敏剂治疗组，D：化疗＋低剂量光敏剂治疗组，E：高剂量光敏剂治疗组，F：低剂量光敏剂治疗组。种板孵育24h后，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率；于化疗组加入化疗药（5-Fu＋DDP）作用12h，再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物（HPD）低剂量或高剂量，4h后行630nm激光照射，光能量密度30J／cm^2，照光后继续培育24h，开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率。结果除了低剂量光敏剂＋化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外．其余相互间差异均有统计学意义，高剂量光敏剂＋化疗组细胞抑制率较高，低剂量光敏剂组抑制率较低。结论在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间，光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素。两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异。相同光照能量密度及孵育时间下，孵育浓度越高，其杀伤效应越强。光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高，光动力与化疗有协同作用。     

Smac基因过表达增强顺铂对食管癌Eca109细胞化疗的敏感性

目的:探讨Smac基因过表达对食管癌细胞株Eca109顺铂化疗敏感性的影响。方法:脂质体介导将带有GFP的pcDNA3.1-Smac重组体及带有GFP的pcDNA3.1空白载体转染入食管癌细胞株Eca-109,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测转染前后细胞内Smac蛋白表达水平的变化。顺铂处理组(1、5、10 mg/L)和顺铂未处理组分别处理转染前后的食管癌细胞株Eca109,Annexin V/PI双染法经流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:分别建立稳定表达Smac基因+GFP基因,新霉素抗性基因(neo)+GFP基因的食管癌亚克隆细胞株Eca109/Smac,Eca109/neo。Eca109/Smac的Smac蛋白表达水平明显高于Eca109/neo和Eca109(P<0.05)。在顺铂未处理组,Eca109/Smac、Eca109/neo和Eca109的细胞凋亡率组间无明显统计学差异。在顺铂处理组,顺铂浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L,Eca109/Smac的细胞凋亡率明显高于Eca109/neo和Eca109,组间具有统计学差异(P<0.05),且随着顺铂浓度的升高,Eca109/Smac细胞凋亡率随之升高(P<0.05)。Eca109/neo和Eca109组间无明显统计学差异。结论:Smac基因转染未经顺铂处理的Eca109细胞株中不诱发凋亡,在顺铂处理组其过表达能增强Eca109对顺铂的化疗敏感性。     

多种肿瘤干细胞标志物在食管鳞癌Eca109细胞球细胞中的表达

目的 观察肿瘤干细胞标志物P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog在食管鳞癌Eca109细胞系富集的细胞球细胞中的表达。探讨食管鳞癌的肿瘤干细胞标记物。
方法 采用无血清成球培养法,富集培养细胞球细胞,观察其增殖过程。培养5d获得小细胞球继续培养至14d获得又大又圆的悬浮生长的细胞球,收集第14天的细胞球,一部分用于实验,一部分予以传代。应用免疫荧光技术检测细胞球细胞中P75NTR、Oct-4、Sox-2、Lin28、Nanog的表达和定位。结果 P75NTR、Oct-4荧光定位于细胞球细胞的细胞核上,贴壁的Eca109为细胞核和细胞质表达,但是Oct-4荧光强度比P75NTR弱;Lin28在细胞球细胞上为细胞核表达,贴壁的Eca109上为细胞核和细胞质表达;Nanog和Sox-2在食管鳞癌Eca109细胞球细胞和贴壁的Eca109上均为细胞质表达。结论 P75NTR、Oct-4、Lin28核表达阳性的细胞球可能为食管癌干细胞。     

慢病毒介导的mcl-1-shRNA对食管癌细胞生长和化疗敏感性影响

目的观察慢病毒介导的shRNA沉默mcl-1基因对食管癌细胞生长作用以及化疗敏感性影响。方法利用已构建的携带mcl-1-shRNA的慢病毒载体lenti-mcl-1-shRNA感染食管癌细胞EC9706细胞系,应用RT-PCR和Western blot技术检测其对食管癌细胞mcl-1表达水平的影响;应用MTT和流式细胞技术检测其对食管癌细胞的生长作用、增殖和凋亡及化疗敏感性影响。结果感染慢病毒lenti-mcl-1-shRNA后,mcl-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降;MTT结果显示,重组慢病毒lenti-mcl-1-shRNA可以有效抑制EC9706细胞的生长增殖,抑制率为50%,明显高于对照组(P<0.05)。流式细胞分析显示,mcl-1-shRNA可以诱导EC9706细胞凋亡,从而影响食管癌细胞的生长。另外与对照组相比,感染重组慢病毒lenti-mcl-1-shRNA后,可以明显增加顺铂对食管癌细胞的生长抑制率,提高药物敏感性(P<0.05)。结论慢病毒载体lenti-mcl-1-shRNA可有效抑制mcl-1在食管癌细胞中的表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞生长增殖,并增加食管癌细胞对顺铂的药物敏感性。     

硫化氢抑制顺铂致人骨髓间充质干细胞的损伤

背景：在使用顺铂进行化疗时,常因造血干细胞损伤造成严重的骨髓抑制,而目前临床上还没有一种有效的化疗细胞保护剂来减轻其不良反应。 目的：探讨硫化氢对顺铂致人骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。 方法：应用硫氢化钠作为硫化氢的供体,用不同浓度的硫氢化钠与顺铂同时作用于人骨髓间充质干细胞48 h后,甲氮甲唑蓝法(MTT)检测细胞存活率,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达。 结果与结论：MTT检测发现顺铂可降低骨髓间充质干细胞的存活率,硫氢化钠可呈浓度依赖性的对抗顺铂对人骨髓间充质干细胞生长的抑制作用,0.5,1 mmol/L 硫氢化钠与20 mg/L顺铂共同作用人骨髓间充质干细胞48 h后会引起NF-κB(p65)上调和IκB-α的下调,1 mmol/L 硫氢化钠与20 mg/L顺铂在作用6 h后磷酸化蛋白激酶1/2明显上调。结果提示,硫化氢可能通过蛋白激酶-NF-κB信号通路来抑制顺铂致人骨髓间充质干细胞的损伤作用。     

板蓝根多糖促进NKG2D 配体表达增强NK 细胞对食管癌细胞的杀伤作用及机制研究

目的:研究板蓝根多糖(RIP)影响NK细胞对食管癌细胞杀伤作用的分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖率,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27的表达,ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达,流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,钙黄绿素释放法(CARE-LASS)检测NK细胞对食管癌细胞的杀伤率。结果:RIP可促进NK-92细胞增殖,抑制食管癌Eca-109细胞增殖,且具有显著剂量依赖性。食管癌可促进NK细胞中TNF-α和IFN-γ的表达。RIP可促进食管癌细胞Eca-109中NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,促进与食管癌细胞联合作用后NK细胞中TNF-α和IFN-γ表达,提高NK-92细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤活性。结论:RIP通过提高食管癌Eca-109细胞中NKG2D配体表达,促进NK-92细胞中TNF-α和IFN-γ表达,增强NK-92细胞对食管癌细胞的杀伤作用。     

三甲氧基二苯乙烯增加胃癌细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的旨在探索三甲氧基二苯乙烯对人胃癌细胞的抑制作用及其对顺铂化疗敏感性的影响。方法体外培养顺铂耐药胃癌MKN-45/DDP和MGC-803/DDP细胞株,采用不同浓度的三甲氧基二苯乙烯和顺铂单药或联合用药处理。利用MTT法检测各组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测两药单用及合用对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果三甲氧基二苯乙烯可抑制顺铂耐药胃癌细胞的增殖,且其浓度越高,对MKN-45和MGC-803细胞株的抑制率越高,存在着明显的剂量-效应关系。与单独使用三甲氧基二苯乙烯或者顺铂相比,三甲氧基二苯乙烯联合顺铂的细胞凋亡率明显增高,S期细胞比例降低。结论三甲氧基二苯乙烯不仅能对胃癌细胞的增殖产生抑制作用,同时也可以增强顺铂对胃癌化疗的敏感性。     

顺铂在大鼠体内富集胃癌干细胞

背景：肿瘤干细胞具有自我更新、耐药和转移成瘤能力,对肿瘤的发生、发展以及肿瘤的转移等具有重要的功能。目前,确认肿瘤干细胞的方法主要有2种,即体外瘤球培养实验以及小鼠体内成瘤实验,但临床上通过化疗在大鼠体内富集胃癌细胞尚缺乏研究报道。 目的：观察顺铂在大鼠体内富集胃癌干细胞的情况,研究其表面标志蛋白的筛选方法。 方法：建立BGC-823胃癌模型大鼠,采用随机对照方法将大鼠分为2组,实验组大鼠分别尾静脉注射质量浓度0.1,0.2,0.25,0.3 g/L的顺铂,而对照组则尾静脉注射生理盐水。经过3期化疗,最后得到富集胃癌干细胞组织;采用高通量蛋白芯片对肿瘤表面蛋白进行提取,并采用Western blot对芯片进行验证,比较顺铂在大鼠体内富集胃癌干细胞及其表面标志蛋白的筛选方法。 结果与结论：顺铂剂量为0.3 g/L×200 μL时治疗效果最佳,且化疗药物浓度越高,耐受力越差,不良反应发生率越高。移植瘤经苏木精-伊红染色验证均为癌组织;Western blot检测结果与蛋白芯片结果显示,HLA-DQ,PMP22和Claudin7蛋白在胃癌组织中表达增强,HLA-DR,CD14,CD16和CD56蛋白表达减弱。结果证实,顺铂化疗能够在体内富集胃癌干细胞,能够成功筛选出相应的表面标志物蛋白。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

虫草素增强顺铂诱导的食管癌细胞系Eca109凋亡

目的研究虫草素与顺铂联合用药对食管癌细胞Eca109凋亡的影响及其作用机制。方法将食管癌细胞Eca109分为对照组、不同浓度虫草素处理组、不同浓度顺铂处理组和虫草素(70μg/m L)与顺铂(0.8μg/m L)联合处理组。MTS法检测Eca109细胞增殖;Hoechst 33258染色法及流式细胞术检测Eca109细胞凋亡;Western blot法检测细胞核内NF-κB P65及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平;ELISA法检测细胞核内NF-κB P65与DNA的结合活性。结果虫草素与顺铂联合应用使顺铂对Eca109细胞的抑制率由29.30%增加至70.41%(P0.05),增强了顺铂对Eca109的敏感性;与顺铂单独用药相比,联合用药能够显著增加顺铂诱导的细胞凋亡(P0.05);与对照组相比顺铂能够增加细胞核内NF-κB P65的活性,而虫草素却能抑制NF-κB P65的活性,联合用药后NF-κB P65的活性下调;与虫草素和顺铂单独用药相比,联合用药组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P0.05),而促凋亡蛋白Bax表达则显著增高(P0.05)。结论虫草素可能通过抑制NF-κB途径,调节下游信号分子Bcl-2和Bax的表达,增强顺铂对Eca109的凋亡诱导效应。     

Clear cell basal cell carcinoma

We describe a case of clear cell basal cell carcinoma of the superficial type, presenting as a crusted eruption on the abdomen. Histological examination showed a solid proliferation of clear cells attached to the under-surface of an atrophied epidermis. In addition, distinct pagetoid infiltration was seen within the overlying epidermis. A focal connection between the clear cell portion and a deeper lying nodular basal cell carcinoma was demonstrated, elucidating the true nature of the lesion. Immunohistochemical studies and electronmicroscopy confirmed the epithelial derivation of the tumour. The clear cell appearance was due to multiple cytoplasmic electronlucent vacuoles which were not surrounded by membranes.     

睾丸大细胞钙化性支持细胞瘤一例

患者男,12岁。左侧睾丸无痛性肿大1年余,于2005年月18日入院,右侧睾丸未见异常,亦无第二性征的异常。病理检查:送检组织为带一段精索和附睾组织的睾丸及其肿物。精索长5.0cm,直径1.2cm;附睾大小3.0cm×1.5cm×0.8cm,表面未见异常;睾丸及肿物大小3.0cm×2.5cm×2.5cm,表面光滑,包膜完整。切面实性,灰黄色,质硬,有钙化,无出血和坏死。肿物几乎占据整个睾丸实质,肿瘤周围边界尚清楚。镜下检查:肿瘤组织与周围边界清图1睾丸大细胞钙化性支持细胞瘤,肿瘤细胞圆形、卵圆形,含有丰富的润,间质黏液样变性HE中倍放大图2肿瘤组织间质中可见大量呈棕褐…     

Chondrocytic cell differentiation in clear cell chondrosarcoma

Clear cell chondrosarcoma is a rare mesenchymal neoplasm of unclear differentiation. Besides having a chondrogenic nature, an osteogenic differentiation was also proposed. In this study, expression analysis of extracellular matrix genes, which are specific for different mesenchymal cell differentiation pathways, were used to get a better understanding of origin and differentiation pattern of the clear cell chondrosarcoma tumor cells. Our in situ analysis of two cases shows that (1) chondrocytic cell differentiation as marked by the expression of cartilage collagen type II and proteoglycans is a characteristic feature within the development of the neoplasm, (2) multifocal chondrocyte hypertrophy as shown by the expression of type X collagen does occur, and (3) no significant expression cf collagen type I, the main gene product of osteoblastic cells, is found by the neoplastic cells. Thus, our study indicates that clear cell chondrosarcoma shows a chondrogenic, but not osteogenic, differentiation and represents a true chondrosarcoma. The unusual scarcity of its extracellular and the multifocal expression of type X collagen marks clear cell chondrosarcoma as a chondrosarcoma tumor entity of a particular cell differentiation pattern. The expression of cartilage type collagens represents a distinct marker from bone metastases of clear cell neoplasms of other origins.     

伴有浆细胞分化的套细胞淋巴瘤

B淋巴细胞分化成浆细胞是一个抗原介导的过程，主要依赖于B细胞和调控因子在它们的微环境中的相互作用。寿命长的浆细胞来自于生发中心活化的B细胞，而浆细胞分化自滤泡外区的幼稚B细胞，其寿命短。因此，来自于后生发中心的淋巴瘤常呈浆细胞分化，而来自于幼稚B细胞的淋巴瘤则很少发生浆细胞分化。在滤泡性淋巴瘤和边缘区淋巴瘤常可见到浆细胞分化，少数慢性淋巴细胞性白血病／小淋巴细胞性淋巴瘤中亦可见到肿瘤细胞发生浆细胞分化。然而，套细胞淋巴瘤发生克隆性浆细胞分化到目前为止还没有报道。作者报道了2例伴有克隆性浆细胞分化的套细胞淋巴瘤。     

Mutagensis and cell transformation in cell culture

The current lack of continuous prawn cell lines suitable for the isolation and growth of prawn viruses is a major setback for diagnosis of viral diseases of prawns; isolation and identification of the causative agents are severely hindered and the development of other diagnostic procedures is slowed. To date, there are few, if any, examples of continuous prawn cell lines suitable for virus isolation and growth. Recent studies indicate that clastogenic agents such as ionising radiation are more effective than powerful point mutagens as immortalising agents for mammalian cells. Such studies with mammalian cell cultures indicate that certain mutagenic agents and/or prolonged treatment with a combination of mutagens may prove more useful in the production of immortal prawn cell lines in vitro rather than other, more limited and specific procedures. This report provides a brief review of the use of mutagens to induce immortalisation -- the acquisition of unlimited growth potential -- in mammalian cells in culture, i.e. the production of continuous cell lines from primary cultures. Aspects of cell transformation vs. immortalisation, the control of cell growth in vitro, and the application of mutagenic agents to induce immortalisation in primary cultures of prawn tissues will be discussed.