烟草对赤星病菌的抗性与其防御酶系活性的关系

室内对抗病性不同的烟草品种CV 87和NC 89接种赤星病菌 ,分析测定接种后不同时间、不同叶位过氧化物酶 (POD)、过氧化氢酶 (CAT)以及苯丙氨酸解氨酶 (PAL)等同工酶酶活性变化情况。结果表明 ,抗病品种CV 87随接种叶位升高POD与CAT活性增加 ,感病品种NC 89表现先升高后降低的趋势。无论接种与否NC 89的POD活性都高于CV 87;抗病品种CV 87的CAT活性高于感病品种 ;接种赤星病菌后,抗病品种CV 87的PAL活性升高 ,感病品种NC 89的PAL活性降低 ,PAL活性与品种抗病性呈正相关     

采后硅酸钠处理对厚皮甜瓜防卫基因mRNA的诱导表达

本文研究了采后100 mmol/L硅酸钠浸泡处理对甜瓜果实苯丙烷代谢途径关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、查尔酮合成酶(CHS)、及抗病相关酶过氧化物酶(POD)、β-1,3-葡聚糖酶基因(β-1,3-Glu)mRNA表达的影响。结果表明:硅酸钠处理可提高PAL、CHS、POD、β-1,3葡聚糖酶基因mRNA的表达。其中经硅酸钠处理后PAL、CHS、POD基因分别于6、6、2 d达到最大表达量,其表达量分别为对照组的2.69、2.48、3.77倍。由此表明,采后硅酸钠处理厚皮甜瓜果实可通过诱导苯丙烷代谢途径关键酶PAL、CHS,及抗病相关酶POD、β-1,3葡聚糖酶基因的转录增强采后抗病性。     

硝普钠对青钱柳悬浮细胞三萜合成的影响

本文采用植物细胞工程技术建立青钱柳细胞悬浮培养体系,以硝普钠为外源诱导物对其三萜的合成进行诱导,从硝普钠的浓度、添加时间和持续作用时间三个方面系统地研究了硝普钠对青钱柳悬浮细胞生长、总三萜酸积累及代表性三萜酸合成的影响,以期为植物细胞培养生产三萜酸类化合物提供参考。10~50μmol/L的硝普钠对悬浮细胞的生长影响不大,但对三萜合成的诱导作用也不明显;150μmol/L的硝普钠有效地促进了三萜的合成且对细胞生长影响较小;200μmol/L以上的浓度则对细胞生长有较强的抑制作用;接种后的第8 d添加150μmol/L硝普钠、持续作用4 d后收获效果最佳,总三萜酸产量可达1228.74 mg/L,为对照组的2.14倍,五种代表性三萜酸中以熊果酸(UA)和齐墩果酸(OA)的变化最为明显,分别比对照组提高了2.28倍和2.48倍。研究结果表明,外源添加硝普钠能有效地促进青钱柳悬浮细胞三萜酸的合成。     

青钱柳鲨烯合成酶(CpSS)全长基因的克隆、分析与表达

为研究和调控青钱柳三萜代谢,克隆了青钱柳鲨烯合成酶(CpSS)全长基因,研究该基因的特征和蛋白结构,以及青钱柳悬浮培养细胞在黑曲霉诱导子作用下该基因的表达变化情况。本文以青钱柳悬浮细胞RNA为模板,采用RT-PCR和RACE技术克隆出全长为1 667 bp的CpSS基因cDNA序列,该序列包含一个1 245 bp的完整ORF,编码414个氨基酸;CpSS序列与胡桃鲨烯合成酶基因的相似度最高,相似度达到97%,与白桦、葡萄、大豆、甘草、可可5个物种的相似度都在85%以上。序列分析表明,CpSS蛋白属于不稳定亲水蛋白,具有典型的鲨烯合成酶保守区和结构域,存在于内质网膜中,由多个α螺旋组成空穴状结构,该结构与大多数植物鲨烯合成酶蛋白的空间结构相似。实时荧光半定量RT-PCR检测结果表明,在黑曲霉诱导子作用下,悬浮培养细胞CpSS基因表达量显著增加,在诱导后60 h时的表达量最高。本文可为深入研究青钱柳三萜代谢途径及真菌诱导子的诱导作用机制提供参考。     

黑曲霉诱导子促进青钱柳悬浮细胞合成三萜

目的:研究黑曲霉真菌诱导子对青钱柳悬浮培养细胞合成三萜的影响。方法:采用植物细胞培养技术,建立稳定的青钱柳细胞悬浮培养体系,以外源黑曲霉诱导子刺激细胞合成三萜,分析诱导子浓度、添加时间及持续作用时间对细胞生长和三萜合成的影响。结果:在稳定期初期(第6天)添加50~300μg/m L的黑曲霉诱导子对细胞生长基本没有影响,但都能刺激细胞合成三萜,200μg/m L的刺激效果最好;在细胞生长周期的不同时间点添加200μg/m L的诱导子,对细胞生长和三萜合成的促进效果不一样,第0天(即接种时)添加对细胞生长的抑制作用最大,对数期中期(第4天)添加时细胞生物量比对照组降低了7.83%,但三萜含量却提高到对照组的9.10倍,对数期中期添加促进三萜合成效果最好;添加诱导子作用3 d后收获细胞,三萜含量和产量均达到最高,分别是对照组的10.79倍和10.21倍。结论:黑曲霉诱导子能够有效地促进青钱柳悬浮细胞合成三萜。     

打顶对烟草叶片多酚代谢及其关键酶的影响

为明确打顶对烟叶多酚代谢的影响,本研究以红花大金元品种为材料,采用高效液相色谱法（HPLC）、紫外分光光度法和实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）,对移栽后30 d（苗期）和85 d（现蕾后10 d）烟株进行打顶处理,分别检测中部叶（苗期为第4叶位,现蕾后10 d为第8叶位）中多酚类物质含量及其关键酶活性与基因表达。结果表明,与同时期未打顶处理相比,移栽后30 d打顶处理的烟叶中绿原酸等多酚类物质含量显著降低,PAL、PPO和POD活性升高,4CL活性降低,C4H活性无显著差异,PAL1、PAL4和4CL2表达量上调;移栽后85 d打顶处理的烟叶中多酚类物质含量显著升高,PAL、C4H、4CL和POD活性升高,PPO活性降低,PAL1表达量下调,4CL2表达量无显著差异。两个时期打顶处理烟叶中PAL2、PAL3、C4H和4CL1表达量均上调。以上结果表明,打顶诱导烟叶多酚生物合成与生育期有关;打顶后多酚类物质含量与PPO活性负相关,与4CL活性正相关。苗期打顶后烟叶中多酚含量降低,主要与多酚类物质的降解速率强于合成速率有关,而现蕾后打顶烟叶中多酚含量升高,主要与多酚类物质的合成速率强于降解速率有关。      

褪黑素对雨生红球藻虾青素和油脂合成的影响

以雨生红球藻(Haematococcus pluvialis) LUGU为对象,研究了高光照联合缺氮条件下,外源添加褪黑素(melatonin,MLT)对H. pluvialis生物量、虾青素积累量、油脂含量以及与虾青素、油脂合成相关酶基因表达量的影响。结果显示:缺氮胁迫、联合高光诱导条件下,外源添加10μmol/L MLT,虾青素积累量显著提高,最大虾青素积累量可达32. 37 mg/g,是对照组的2. 25倍;藻细胞内油脂的含量达到42. 84%,为对照组的1. 21倍。虾青素合成关键酶基因bkt及油脂合成关键酶基因fad的表达量均出现不同程度的上调。此外,研究了外源MLT对细胞内活性氧(ROS)水平的影响以及相关抗氧化酶的活性变化规律。ROS水平受到抑制,虾青素合成相关的抗氧化酶SOD、CAT和POD活性增强。研究表明,在高光照联合缺氮胁迫条件下,外源添加MLT有利于雨生红球藻积累虾青素,为强化虾青素的生物合成提供了理论依据。     

拮抗细菌活性蛋白诱导烟草对CMV的抗性研究

从烟田耕作层土样中分离到对CMV有拮抗作用的细菌菌株B6,通过离子交换层析和凝胶过滤层析初步确定其活性物质是分子质量大小为40．6kD的蛋白质。活性蛋白诱导后,对烟草叶片的病毒含量、过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚氧化酶（PPO）的活性变化进行研究。结果表明,拮抗细菌活性蛋白诱导后烟草叶片内CMV含量明显降低,随着诱导天数的增加病毒的含量呈由多到少再增多的变化趋势,POD,PAL和PPO等细胞防御酶的活性增强。     

大豆苯丙氨酸解氨酶(PAL)在大肠杆菌中的重组表达及活性鉴定

利用基因重组技术,克隆了大豆(Glycinemax(L.)Merr.)的苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)全基因,构建pET-GMPAL工程表达质粒,在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达,并利用细胞裂解液得到的粗酶液转化L-苯丙氨酸生成肉桂酸。通过8%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,获得了分子量在77.9kD的一条蛋白质特异表达带,特异蛋白质表达量达到总蛋白质含量的8%左右。通过初步发酵,获到具有PAL活性的粗酶液裂解液,粗酶的比活力达到211.7μmol/gpro·min(3529μkat/kg),高于红酵母PAL和欧芹重组PAL表达的比活力。结果表明克隆重组的大豆PAL基因通过表达质粒pET-GMPAL在E.coli中能高效地表达为有催化功能的高活力酶。     

酶活性变化在萝卜抗TuMV分析鉴定中的应用

不同萝卜品种接种抗感芜菁花叶病毒 (TuMV )后 ,测定不同时期叶片中的过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶 (PPO)、苯丙氨酸裂解酶 (PAL)的活性 .结果表明 ,抗病品种POD活性的略低于感病品种 ,接种后POD活性升高 ;抗病品种PPO活性比感病品种高 ,接种后抗病品种PPO活性迅速升高 ,与抗性呈正相关 ,可以作为抗性大小的衡量指标 ;抗病品种PAL活性比感病品种高 ,接种后变化无规律 .     

响应面法优化酶菌协同制备高抗氧化活性青钱柳发酵粉工艺

以青钱柳干燥叶为原料,采用复合酶（纤维素酶和半纤维素酶）对其进行酶解,酶解液经混合菌（植物乳杆菌和酿酒酵母）发酵后冷冻干燥制备成高抗氧化活性的青钱柳发酵粉。单因素实验研究了料液比、复合酶添加量、复合酶质量比、酶解时间、蔗糖添加量、混合菌添加量、混合菌质量比、发酵时间对青钱柳发酵粉DPPH自由基清除效果的影响。再进一步运用Plackett-Burnman（PB）试验设计和响应面法优化了青钱柳酶菌协同发酵工艺。结果表明,最优的青钱柳酶菌协同发酵工艺参数为:料液比1:12 g/mL、复合酶添加量0.80%、复合酶质量比2.20:1 g/g、酶解时间2.5 h、蔗糖添加量8.0%、混合菌添加量5.80%、混合菌质量比2:1 g/g、发酵时间42 h。在此条件下,青钱柳发酵粉DPPH自由基清除率为82.17%。对最优条件下制备的青钱柳发酵粉与未处理的样品进行了比较:DPPH自由基清除率增加了159.9%,青钱柳多糖含量增加了194.0%,青钱柳总黄酮含量增加了72.0%,青钱柳总三萜含量增加了52.6%。本文为青钱柳叶的精深加工和青钱柳即溶茶粉的产业化奠定了研究基础。     

青钱柳调节糖脂代谢活性成分及作用机制的研究进展

青钱柳（Cyclocarya paliurus）是胡桃科青钱柳属植物,近年来因其对改善糖脂代谢紊乱的良好作用日益成为研究热点。目前已从青钱柳中分离得到多种化合物,主要的生物活性成分包括多糖、三萜、黄酮、酚酸等。主要通过保护胰岛细胞、调节胰岛素信号通路、促进葡萄糖利用等发挥改善糖代谢的作用,并通过调控脂质代谢通路、抑制脂质过氧化等发挥改善脂代谢的作用。本文对青钱柳调节糖脂代谢活性成分及作用机制进行综述,为青钱柳防治糖尿病、高血脂、肥胖等代谢疾病提供参考。     

超高压提取青钱柳多糖条件优化及抗氧化活性

试验以青钱柳叶为原料,研究青钱柳多糖的超高压提取工艺,对提取的青钱柳粗多糖进行抗氧化活性试验。采用单因素及正交试验对青钱柳多糖的超高压提取工艺进行优化,结果显示,青钱柳多糖最佳提取条件为:料液比1︰25(g/mL)、提取温度30℃、提取压力500 MPa。在此条件下,青钱柳多糖得率最高,为3.70%。将青钱柳粗多糖进行清除DPPH自由基、清除羟基自由基试验,以抗坏血酸(VC)为对照,测定青钱柳叶粗多糖的体外抗氧化能力。结果表明,青钱柳叶粗多糖清除DPPH自由基效果较好且较对照组浓度低,最高清除率为93.0%,而清除羟基自由基效果低于对照。     

青钱柳多糖的乙酰化修饰及抗氧化活性

以青钱柳多糖为原料,使用乙酸酐法制备得到乙酰化青钱柳多糖样品。以乙酰化多糖取代度为评价指标,采用正交试验考察乙酸酐-多糖比例、反应时间、反应温度对乙酰化修饰的影响。在此基础上,选择取代度为0.681的乙酰化多糖样品进行1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除实验。结果表明,青钱柳多糖乙酰化最优反应条件为：m（多糖）∶V（乙酸酐）＝1∶60、反应时间2 h、反应温度40 ℃,同时,乙酰化修饰可以显著提高青钱柳多糖的DPPH自由基清除活性,乙酰化修饰可作为青钱柳多糖改性的方法之一,为青钱柳资源的进一步开发利用提供新的方向。     

簕菜青钱柳复合多糖饮料研制及体外抗氧化降血糖作用

目的 优化簕菜青钱柳复合多糖饮料配方,并评价其体外抗氧化活性和降血糖作用.方法 以对 α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,确定簕菜多糖与青钱柳多糖的最佳配比;以感官评分和离心沉淀率为评价指标,通过单因素实验、响应面实验和正交实验,优化簕菜青钱柳复合多糖饮料的最佳配方;对复合多糖饮料进行体外抗氧化及降血糖功能相关指标的测定....     

桑椹果粉乙醇提取液对秀丽隐杆线虫衰老的影响及机制

目的:探究桑椹果粉乙醇提取液对秀丽隐杆线虫动物模型(Caenorhabditis elegans,C. elegans,线虫)抗衰老的作用机制。方法:研究桑椹果粉乙醇粗提取液(Mulberry ethanol extract,MEE)对线虫刺激后,其寿命、抗热应激、运动能力、吞咽能力、生殖能力的变化,同时进行了线虫体的SOD活力、CAT活力及抗衰老基因转录水平等研究。结果:与对照组相比,用5 mg/mL的MEE刺激线虫后使剂量组最长寿命极显著增加了22.24%(P<0.01)、显著提高了线虫运动能力和抗热应激能力(P<0.05),使吞咽能力提升了30.43%且不显著影响线虫的生殖能力(P>0.05),同时在该刺激下线虫体内的SOD、 CAT酶活力分别增加了21.44和13.84 U/mg prot,氧化应激反应阈值降低。经5 mg/mL的MEE处理后,抗氧化基因sir-2.1、skn-1表达水平分别上调了45.70%和51.73%,胰岛素基因daf-16表达水平上调161.63%、daf-2表达水平下调57.10%,寿命和抗压力、热冲击性能的关键调节基因hsp-16....     

不同产地青钱柳多糖的体外抗氧化及α-葡萄糖苷酶抑制活性

本研究以清除DPPH自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂-·)能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性能力为指标,初步评价不同产地青钱柳多糖的体外抗氧化及降血糖活性。结果表明:不同产地青钱柳的多糖含量存在显著差异(p<0.05),其中江西修水县青钱柳的多糖含量最高,为5.85%±0.02%,贵州榕江县平阳乡多糖含量最低,为3.50%±0.10%。不同产地青钱柳多糖的DPPH自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂-·)能力及α-葡萄糖苷酶抑制活性有所差异,且与多糖的浓度呈一定剂量关系,即随多糖浓度的增大,多糖的抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性能力增强。青钱柳多糖具有良好的体外抗氧化和降血糖活性,可对其进一步开发利用。     

青钱柳叶活性成分的抗氧化活性及UPLC-QTOF-MS/MS分析

利用96孔板法测定青钱柳叶不同溶剂(水、70%乙醇、乙酸乙酯和正己烷)提取物中总酚、总黄酮含量及抗氧化活性(DPPH自由基清除能力、还原能力、总抗氧化能力),考察酚类物质含量与抗氧化活性的相关性,并采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spetrometry,UPLC-QTOF-MS/MS)分析提取物中主要活性成分。结果表明:不同提取物中总酚、总黄酮含量及抗氧化活性存在显著性差异且70%乙醇溶液提取物表现出最高的总酚(219.01 mg GAE/g)、总黄酮含量(7.23 mg CE/g)及最强的DPPH自由基清除能力(35.46 mg TE/g)和还原能力(1.89 mmol Fe SO_4/g);总酚、总黄酮含量与DPPH自由基清除能力、还原能力之间呈正相关,与总抗氧化能力呈显著负相关,表明多酚类物质是青钱柳中主要的抗氧化剂。UPLC-QTOF-MS/MS分析70%乙醇溶液提取物并初步鉴定出22种化合物,包括2种有机酸、4种酚酸、5种黄酮、8种三萜皂苷类和3种酯类,其中酚酸和黄酮类化合物是主要的抗氧化活性成分,有机酸、三萜皂苷及酯类化合物可能是潜在的抗氧化活性成分。     

青钱柳冲剂对糖尿病小鼠的降血糖功效

研究青钱柳冲剂对链佐霉素所致糖尿病小鼠的降血糖功效。以链佐霉素诱导小鼠糖尿病模型,设置模型对照组、正常对照组、阳性对照组以及青钱柳冲剂低、中、高剂量组,给药21d后,测定小鼠的空腹血糖、体质量、总胆固醇、甘油三酯、肝糖原等指标,并对小鼠胰腺组织的病理切片进行显微镜观察病变情况。结果表明：与模型对照组相比,青钱柳冲剂各组均能显著降低链佐霉素致糖尿病小鼠空腹血糖水平和总胆固醇量,显著增加体质量和肝糖原含量,并能减轻胰岛细胞病变程度。提示青钱柳冲剂对糖尿病模型小鼠具有明显治疗作用,其作用机理与其能调节肝脏糖代谢、恢复病变胰岛细胞的结构和功能有关。