胚脑组织的冷冻保存,培养和移植

本实验对胚脑组织进行了冷冻保存、培养和移植，以观察冻存后的胚脑组织在体外及宿主脑内继续生长，分化的情况。结果显示：培养４－５小时后细胞贴壁，１天后开始有轴突长出，在所有贴壁细胞中，有５０％－５８％能继续经培养后存活。把经冻存的胚脑细胞移植到幼鼠脑内，４０－４５天后尼氏染色切片观察，细胞形态正常，与周围宿主脑区有明显的界限。本实验证实冻存的胚脑组织复苏后仍保持继续生长，分化和建立突触联系的特性。     

胚胎脑组织移植治疗脑外伤后遗症

胚胎脑组织移植治疗脑外伤后遗症深圳市宝安区人民医院（５１８１０１）郑俊宁，王刚，吴贵良，黄居科脑细胞因外伤等原因造成不可逆性损害，将不能再生，致使脑功能缺损．近年来脑细胞移植的实验研究表明，未成熟的胚脑细胞移植到成熟的宿主脑内，不仅可存活，而且可保持...     

胎脑黑质脑内移植后宿主重建神经环路的电镜观察

目的：为了观察胎脑黑质多巴胺能神经脑内移植后,是否与宿主神经细胞重建神经环路,发生神经整合。方法：应用光镜和电镜技术研究了脑内移植术后３个月多巴胺能移植物与宿主脑组织衔区的超微结果。结果：证明突触终末之间突触形成增多。结论：事宿主神经功能有改善,结合电镜观察含小颗粒囊泡沫未支形成突触增多,可能部分移植细胞与宿主产生了整合,重建了神经环路。     

骨髓基质细胞成年大鼠脑内移植

【目的】研究骨髓基质细胞脑内移植后的分布和移行 ,为细胞移植治疗疾病奠定基础。【方法】常规培养大鼠骨髓基质细胞 ,应用免疫组织化学方法对细胞进行鉴定 ,Hoechst332 5 8标记细胞 ,立体定向移植到大鼠的纹状体 ,经过一段时间后处死大鼠 ,脑组织切片 ,直接在荧光显微镜下检查存活的细胞。【结果】细胞移植到大鼠脑内能够长时间存活 ,移植细胞与宿主细胞有很好的相容性 ,宿主脑组织的结构无破坏 ,移植细胞能够移行一段距离 ,说明脑内存在的信号诱导细胞向一定的方向迁徒。【结论】骨髓基质细胞脑内移植后 ,能够与宿主脑组织整合在一起 ,无细胞过度增生和胶质瘢痕形成 ,这种细胞可能成为中枢神经系统自体移植的细胞来源。     

同种异体猴胚脑移植的实验研究

采用猴10只,其中妊娠猴2只孕期为10—12周。同种异体胚脑组织移植9只自体移植1只,术后健康生存8只,术后分别于1、2、3、4、6个月处死行组织学检查结果:同种异体移植物1—3个月内,在宿主脑内有少数神经元存活,3个月后神经元消失大量胶质细胞增生,6个月时全是胶质瘢痕。自体移植1只4个月时可见神经元存活,有新生的毛细血管,周围胶质增生不明显,本实验表明:同种异体脑移植后神经元在宿主脑内不能长期存活,而自体移植可以存活,这个与异体移植排异有密切关系。     

胚脑低温保存后脑内移植的实验研究

大鼠孕19～21天的胚胎小脑,分别放在4℃、培养液1640及-15℃加有10%DMSO抗冻剂的培养液1640中。两组材料保存1、3、7天后。分别移植于成年同种大鼠创伤小脑内。均在移植后12天取受体小脑行常规组织学切片观察。结果是移植的脑组织大部分成活,其组织层次及细胞结构正常、清晰、且有细胞分裂。在-15℃、保存7天的胚脑组织移植后脑细胞均变性死亡。表明4℃是短期保存移植用胚脑组织的最适温度;移植用的胚脑组织低温保存是一可行和适用的方法。     

脑组织移植的现状

自1982年Backland用自体肾上腺髓质移植治疗震颤麻痹以来,我国也分别采用自体或胎儿肾上腺髓质脑内移植治疗本病。我国利用胎脑组织做供体有相对有利条件,自1986年开始,北京、上海等十二个省市用脑组织移植治疗,震颤麻痹、扭转痉挛、大脑萎缩、小脑萎缩、脑血管病后遗症、尿崩症、脊髓损伤等300多例。有的单位经动物实验研究证实移植胎鼠的脑组织在宿主鼠脑内不仅成活,而且有神经介     

胚胎脊髓组织植入成年鼠损伤脊髓的形态学研究

利用胚胎脑组织移植术,观察胚胎大鼠脊髓组织在同种成年鼠损伤脊髓内存活、生长情况。结果表明,将孕 １３～１６ｄ 的胚胎大鼠脊髓组织移植入成年鼠脊髓 Ｔ１１ Ｌ１ 背外侧组织创伤后 ３～５ｄ 的腔隙内,胚胎脊髓组织能在宿主鼠脊髓内存活,并生长发育成为成熟鼠脊髓组织构筑。移植组织存活率为 ５０％ 。胚胎鼠脊髓移植组织的存活受宿主脊髓损伤程度、供体胚龄、移植时间和部位、移植组织营养及供血等因素的影响。     

胚胎脊髓组织植入成年鼠损伤脊髓的形态学研究

利用胚胎脑组织移植术,观察胚胎大鼠脊髓组织在同种成年鼠损伤脊髓内存活,生长情况,结果表明,将孕１３～１６ｄ的胚胎大鼠脊髓组织移植入成年鼠脊髓Ｔ１１－Ｌ１背外侧组织创伤后３～５ｄ的腔隙内,胚胎脊髓组织在能在宿主鼠脊髓内存活,并生长发育成为成熟鼠脊髓组织构筑,移植组织存活率５０％,胚胎鼠脊髓移植组织的存活受宿主脊髓损伤程度,供体胚龄,移植时间和部位,移植组织营养及供血等因素的影响。     

神经干细胞移植对脑挫伤大鼠神经功能恢复神经元存活和轴突再生的影响

目的 观察神经干细胞(NSCs)移植对脑挫伤大鼠神经功能恢复影响,并探讨其机制.方法 24只SD大鼠以投币法分为3组:假手术组、手术组和NSCs移植组.采用自由落体致大鼠皮质运动区脑损伤模型,将培养纯化并鉴定的NSCs于术后当天移植入损伤位点周围;术后0d、3d、7d、14d行神经功能缺失(NSS)评分,观察动物运动和平衡功能缺损与恢复情况;14d时取脑组织用免疫荧光技术检测hochest标记的移植NSCs在体内存活、迁移;用神经元核蛋白(NeuN)、生长相关蛋白(GAP-43)抗体检测并计数宿主神经元存活和局部轴突再生.结果 与假手术组比较,脑外伤组大鼠脑挫伤后即出现不同程度抽搐,瘫痪,平衡功能缺失.神经功能缺损评分较假手术组明显升高,并随时间推移有所降低.而NSC移植组的NSS评分至第7天后与单纯手术组比较有明显减少[(4.38±0.74)分,(5.50±1.07)分,P＜0.01].Ho-chest标记的移植NSCs能在宿主脑组织存活,并向四周迁移.免疫组化染色显示宿主NeuN阳性神经元[(51.46±3.303)个,(42.83±5.401)个,P＜0.01]和GAP-43阳性纤维数量[(13.3±1.7)个,(8.7±1.1)个,P＜0.01]在NSC移植组明显增多.结论 NSCs移植能在挫伤脑组织存活、迁移,并促进宿主神经元存活、局部轴突再生和改善脑挫伤大鼠神经功能.     

绿色荧光蛋白作为骨髓间充质干细胞示踪标记物在脑出血脑内的表达

目的 探讨利用绿色荧光蛋白(GFP)作为骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗脑出血示踪标记物的可行性.方法 利用GFP空载体重组腺病毒感染BMSCs,应用脑立体定位仪将感染的BMSCs移植入脑出血大鼠纹状体内,移植后5、14 d,脑组织行冰冻切片,荧光显微镜下观察BMSCs在脑组织内分布的表达.结果 感染细胞与未感染细胞体外培养形态无差异,感染细胞及其传代细胞发强绿色荧光.荧光显微镜下观察脑出血模型冰冻切片,移植后各时间点在移植部位周围病灶区内有大量发绿色荧光的细胞.结论 GFP感染BMSCs能在脑出血大鼠脑内稳定持久表达,表明GFP是脑出血干细胞移植治疗的有效示踪标记物,为进一步研究移植细胞在宿主脑内的可塑性研究奠定基础.     

宿主自身卵巢与移植胚鼠卵巢的生长发育相互影响的实验研究

目的 探讨宿主自身卵巢与移植胚鼠卵巢的生长发育是否存在相互影响的关系.方法 将胚鼠卵巢分别移植至单侧卵巢摘除及去势雌鼠皮下,观察同时存在的自身卵巢对移植物生长发育有无影响,以及是否受移植物影响.结果 单摘移植的宿主卵巢黄体总体均数较高,与单侧卵巢摘除组比较差异有统计学意义(P<0.05).去势宿主体内移植的胚胎卵巢中的原始卵泡会继续生长发育出各阶段卵泡,而单摘受者体内的移植物停止发育,抑或纤维化吸收.结论 宿主体内卵巢与移植胚鼠卵巢卵泡存在相互竞争关系,自身卵巢较移植物卵泡更具优势.     

恒河猴异种脑移植的免疫反应

目的 探讨脑内神经细胞移植免疫排斥反应的特点和程度。方法 以未发育成熟的人胚脑皮质神经细胞悬液为供体，以恒河猴为宿主，进行脑内异种移植。结果 移植后１￣２周，恒河外周血中ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋Ｔ－淋巴细胞数量和可溶性白介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）增高，移植后３￣４周血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ增高，补体Ｃ３降低，Ｃ４正常。病理检查移植组织局部以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，其中部分淋巴细胞     

成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研究

目的研究成人神经干细胞（NSCs）脑内移植后新生神经元突触形成和电生理功能。方法从开放性脑损伤患者外露的脑组织中分离培养出成人NSCs,利用病毒基因转移的方法对成人NSCs进行标记。将rAAV-LacZ标记的成人NSCs进行裸鼠脑内移植后行免疫电镜检查,观察新生神经元突触形成情况;重组GFP逆转录病毒标记成人NSCs裸鼠脑内移植后进行脑片的细胞电生理检测。结果免疫电镜检查表明成人NSCs移植后分化的神经元与宿主细胞之间形成突触联系,膜片钳检测显示由成人NSCs分化而来的GFP阳性神经元具有自发的动作电位,全细胞膜片钳模式下可记录到Na^＋、K^＋电流。结论成人NSCs移植后可以与宿主细胞形成突触联系,其分化的神经元细胞具有电生理功能。     

恒河猴异种脑移植的免疫反应

目的探讨脑内神经细胞移植免疫排斥反应的特点和程度。方法以未发育成熟的人胚脑皮质神经细胞悬液为供体，以恒河猴为宿主，进行脑内异种移植。结果移植后１～２周，恒河猴外周血中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ－淋巴细胞数量和可溶性白介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）增高，移植后３～４周血清中ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ增高，补体Ｃ３降低，Ｃ４正常。病理检查移植组织局部以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润，其中部分淋巴细胞呈ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８和ＨＤＬ－ＤＲ阳性，移植物内血管内皮细胞下Ｉｇｓ／Ｃ３呈阳性反应，４周以后炎症细胞消退，细胞免疫和体液免疫各指标均恢复正常，部分神经细胞仍然存活。结论移植早期（４周内）宿主产生一定程度的急性免疫反应，以细胞免疫为主，体液免疫参与作用，但宿主能够产生免疫耐受。     

成人神经干细胞脑内移植后突触形成和电生理功能的实验研揪

目的 研究成人神经干细胞(NSCs)脑内移植后新生神经元突触形成和电生理功能.方法 从开放性脑损伤患者外露的脑组织中分离培养出成人NSCs,利用病毒基因转移的方法对成人NSCs进行标记.将rAAV-LacZ标记的成人NSCs进行裸鼠脑内移植后行免疫电镜检查,观察新生神经元突触形成情况;重组GFP逆转录病毒标记成人NSCs裸鼠脑内移植后进行脑片的细胞电生理检测.结果 免疫电镜检查表明成人NSCs移植后分化的神经元与宿主细胞之间形成突触联系,膜片钳检测显示由成人NSCs分化而来的GFP阳性神经元具有自发的动作电位,全细胞膜片钳模式下可记录到Na+、K+电流.结论 成人NSCs移植后可以与宿主细胞形成突触联系,其分化的神经元细胞具有电生理功能.     

大鼠额叶皮质损害后不同时期胚脑移植效果的比较

目的：旨在探索及脑外伤后进行脑组织移植的适宜时机。方法：用机械抽吸法制作大鼠右侧额叶皮质损害模型。在大鼠额叶皮质损害后立即、９￣１４天及２个月采用铺片法将Ｅ１６￣１７天胚脑额叶皮质移植入皮质损害腔内，动物存活２个月再进行脑功能测试和形态学研究。     

大鼠胚胎小脑组织移植的研究 Ⅰ.大鼠胚胎小脑组织移植的形态学观察

取孕17～20天的Wistar大鼠胚胎小脑组织植入同种大鼠小脑内。移植后10天,移植块与宿主脑组织融为一体,两者之间无隔膜,也无疤痕组织;移植物明显变大,充满预制脑腔,其外颗粒层细胞分裂相多,普肯野细胞结构特征出现,分子层、普肯野细胞层及内颗粒层依次排列,小脑皮质形成。移植后20天,普肯野细胞明显排成一层,尼氏体出现。移植后30天,外颗粒层消失,小脑皮质成熟。实验证明,同种胚胎脑组织移植,移植块可成活并按其固有模式生长成熟。     

脂肪组织的干细胞作为神经系统基因治疗载体的研究

目的观察大鼠脂肪组织源性基质细胞表达外源基因的能力和脑内移植后的分布,以获取基因治疗自体移植的载体细胞。方法腺病毒载体Ad5βgal介导法将LacZ转入培养的大鼠脂肪组织源性基质细胞。Hoechst33258标记细胞,立体定向移植到大鼠的纹状体,脑组织切片,在荧光显微镜下检查存活的细胞。结果脂肪组织源性基质细胞能够在体内和体外稳定表达LacZ基因,细胞移植到脑内可以移行,移植细胞没有过渡增生和肿瘤形成,对宿主脑组织无破坏。结论脂肪组织源性基质细胞可以稳定表达夕J源基因,与脑组织有很好的相容性,是中枢神经系统基因治疗的良好载体。     

人胚神经干细胞移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的实验研究

目的:研究侧脑室注射人胚神经干细胞(hNSCs)移植治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的有效性及hNSCs在EAE大鼠脑内的状况。方法:从自然流产的孕9～15周的人胚脑组织中分离、培养神经干细胞。用豚鼠全脊髓匀浆免疫Wistar大鼠制备EAE大鼠模型,分别在免疫后10、15、21天经侧脑室注射移植未分化的hNSCs入大鼠体内,观察hNSCs对EAE动物模型神经功能评分、脑内脱髓鞘病灶数目的影响,免疫组化方法观察移植后的hNSCs在EAE大鼠脑内存活、迁徙、分化的状况。结果:从人胎脑中成功培养出hNSCs,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球。绝大多数细胞表达神经干细胞的标记物神经巢蛋白(nestin)。hNSCs移植组各时间点大鼠脑组织切片中均可见Brdu、nestin、NSE、GFAP、CNPase染色阳性细胞,CNPase阳性的少突胶质细胞比例随时间的延长而逐渐增多;hNSCs移植组大鼠自免疫后30天起其神经功能评分显著低于对照组(P<0.05);移植后20、30天脑内脱髓鞘病灶数目明显少于对照组(P<0.05)。结论:hNSCs体内体外均具有多向分化潜能,受炎症部位微环境信号的影响分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞。hNSCs移植能有效改善EAE动物的神经功能评分,减少病灶数目。