食管鳞状细胞癌患者组织中RAB1A基因表达的相关研究及其临床意义

[目的]探讨RAB1A在食管鳞状细胞癌患者中的表达及其临床意义。[方法]采用实时荧光定量PCR检测课题组2013～2015年收集的126例确诊食管鳞状细胞癌患者的癌组织及对应癌旁正常组织中RAB1A的表达量,并根据其表达量高低分为高表达组和低表达组;分析RAB1A表达量与食管鳞状细胞癌患者临床特征、生存期之间的关系;通过过表达RAB1A的表达后检测其对食管鳞状细胞癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。[结果]RAB1A在食管鳞状细胞癌组织中表达量高于对应癌旁正常组织(0.0113±0.0194 vs.0.0071±0.0098,P=0.0123);RAB1A高表达与食管鳞状细胞癌患者家族肿瘤史(P=0.002)、饮酒(P=0.005)、体质指数(P=0.001)、分期(P=0.024)、淋巴结转移(P0.001)、远端转移(P0.001)及分化程度(P0.001)相关;RAB1A高表达与食管鳞状细胞癌患者生存期明显缩短(P0.001)。RAB1A过表达后促进食管鳞状细胞癌细胞增殖(F=151.9,P0.001)、transwell迁移(100.4±14.2 vs.51.2±10.6,P=0.009)、划痕实验迁移距离[(655.0±43.9)μmvs.(320.7±115.2)μm,P=0.0003]和transwell侵袭(79.2±13.4 vs.46.2±17.6,P=0.0014)。[结论]RAB1A在食管鳞状细胞癌中高表达,且高表达将缩短食管鳞状细胞癌患者生存期,过表达RAB1A能够促进食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-134通过介导CCND1表达下调抑制食管癌细胞增殖

目的探讨人食管鳞状细胞癌组织中miR-134的表达及对癌症细胞增殖、凋亡的影响。方法食管癌组织及体外培养细胞中的miR-134表达水平采用PCR法检测;在TE-1细胞内过表达miR-134,细胞活力检测采用噻唑蓝(MTT)实验,细胞增殖检测采用平板克隆实验;细胞凋亡检测采用流式细胞仪;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果 miR-134在食管癌组织中的表达水平较食管黏膜组织显著降低(P0.001);过表达miR-134能够抑制食管鳞状细胞癌TE-1的细胞活力(P=0.023)和增殖能力(P=0.029),并促进细胞凋亡(P=0.010);过表达miR-134后显著抑制TE-1细胞中CCND1 mRNA(P=0.011)及蛋白(P=0.042)的表达水平。结论食管鳞状细胞癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能够通过下调CCND1的表达发挥抗食管鳞状细胞癌生长作用。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶对肝癌细胞增殖的影响

目的 建立SHP-2野生过表达型(WT)及激活突变型(MT)稳定转染的肝癌HepG2细胞系,研究SHP-2激活突变及野生过表达对肝癌细胞增殖能力的影响.方法 将已经构建成功的WT SHP-2(WT组)和MT SHP-2(MT组)及空载体pcDNA3.1(空载组)分别转染到人肝癌HepG2细胞中,同时设未转染细胞作对照组;Westernblot法检测细胞中SHP-2蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;平板克隆和软琼脂集落形成实验检测细胞集落、克隆形成能力.结果 成功的将SHP-2突变型和野生型真核表达载体转染到人肝癌HepG2细胞中;MTT结果显示,对照组和空载组细胞增殖速度接近且增殖慢,而MT组和WT组细胞增殖速度明显加快,WT、MT组与空载组、对照组比较,P均＜0.01;细胞克隆形成的数量多于空载组和对照组,P均＜0.01.结论 成功构建了WT及MT稳定表达SHP-2的HepG2细胞株;SHP-2激活突变及野生过表达促进肝癌细胞增殖能力.     

转铁蛋白受体对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制

目的 探讨转铁蛋白受体（TFRC）对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭、上皮-间充质转化的影响及可能的作用机制。方法 慢病毒构建敲低和过表达TFRC的宫颈癌细胞系，并分为空白对照组、TFRC敲低阴性对照组、TFRC敲低组、TFRC过表达阴性对照组及TFRC过表达组。用蛋白印迹分析法检测TFRC、真核起始因子（EIF4A3）、E-钙黏蛋白（E-cadberin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和锌指转录因子（Snail）的表达情况，通过平板克隆、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 与空白对照组相比，TFRC敲低组EIF4A3、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达水平下降、E-cadberin蛋白表达水平升高，细胞克隆数减少、迁移率下降和侵袭细胞数量减少（P均<0.05）；相反，TFRC过表达组EIF4A3、N-cadherin、Vimentin和Snail表达量增加、E-cadberin表达量减少，细胞克隆数增加、迁移迁移率升高和侵袭细胞数量增加（P均<0.05）。结论 TFRC在宫...     

FOXC2对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨叉头框(FOX) C2对结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响及机制。方法结肠癌细胞SW620转染shRNA对照、FOXC2 shRNA,命名为shRNA-NC组和FOXC2 shRNA组,同时以不做转染的细胞为对照组,Real time-PCR和Western印迹检测FOXC2水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western印迹检测FOXC2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和钙黏蛋白E(E-cadherin)水平。结果shRNA-NC组细胞FOXC2 mRNA及蛋白表达、增殖活性、克隆形成能力、迁移和侵袭能力及MMP-2、MMP-9和E-cadherin蛋白水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0. 05)。FOXC2 shRNA组与对照组比较细胞中FOXC2 mRNA及蛋白表达水平、细胞增殖活性、克隆形成能力、细胞侵袭和迁移能力及MMP-2、MMP-9蛋白水平均显著下降,E-cadherin水平显著升高(均P<0. 05)。结论下调FOXC2抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,作用机制可能与调控MMP-2、MMP-9和E-cadherin水平有关。     

miR-126抑制非小细胞肺癌细胞系A549细胞的增殖、转移和侵袭

目的探讨miR-126在非小细胞肺癌(NSCLC)株A549细胞中的表达和生物学作用。方法通过qRT-PCR检测正常人肺上皮细胞16-HBE和A549细胞中miR-126的表达。将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126过表达组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126过表达组分别转染control-mimics和miR-126 mimic。并将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126抑制剂组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126抑制剂组分别转染control-inhibitors和miR-126 inhibitor。通过噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁徙能力,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 A549细胞株中miR-126水平明显低于16-HBE细胞(P0.01)。与空白组和对照组相比,miR-126 mimic可明显降低A549细胞的增殖率,而miR-126 inhibitor可明显增加A549细胞的增殖率(P0.01)。miR-126 mimic转染后24 h的A549细胞的迁移和侵袭能力下降,转染miR-126 inhibitor后,A549细胞的迁移和侵袭能力提高(均P0.01)。结论 miR-126在肺癌细胞中表达下调,体外过表达可明显抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭能力。     

过表达AnnexinA2抑制食管癌Eca109细胞增殖和迁移

目的探讨AnnexinA2的表达对人食管癌细胞Eca109增殖、迁移、细胞周期和凋亡的影响。方法采用基因过表达技术上调Eca109细胞中AnnexinA2的表达,qRT-PCR和Western blot技术检测AnnexinA2 mRNA和蛋白水平变化;赛唑蓝(MTT)比色法研究其对Eca109细胞的存活、增殖能力的影响;采用划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测其对Eca109细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR和Western blot检测提示Eca109细胞转染AnnexinA2过表达质粒后mRNA和蛋白质表达水平均显著增高;MTT实验表明AnnexinA2过表达组细胞的增殖能力明显低于对照组(P0.05),同时细胞迁移能力也显著下降(P0.05);AnnexinA2在Eca109细胞中高表达将细胞阻滞于G2/M期,对细胞凋亡没有影响。结论 AnnexinA2在食管癌细胞中呈低表达,上调AnnexinA2蛋白水平可以明显抑制食管癌细胞的增殖、迁移能力。     

微小RNA-424-5P靶向调控HMGA1基因对胃癌细胞生长、侵袭的影响

目的 研究微小RNA(miR)-424-5P对高迁移率族蛋白(HMG)A1的靶向调控及对胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法 将人胃癌BGC-823细胞复苏后，应用10%胎牛血清，在5%二氧化碳和37℃培养箱中进行培养，应用miR-424-5P抑制物(inhibitor)转染的BGC-823细胞列为anti-miR-424-5P组。应用阴性对照进行转染的BGC-823细胞列为anti-NC组，不进行转染的BGC-823细胞列为对照组，细胞转染后各组继续在培养箱中培养。应用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测各组miR-424-5P的相对表达水平；应用四甲基噻唑蓝(MTT)研究miR-424-5P对细胞增殖的影响；应用划痕实验检测miR-424-5P对细胞迁移的影响；应用transwell实验研究miR-424-5P对细胞侵袭的影响。应用免疫印迹实验对各组HMGA1蛋白相对表达水平进行检测。结果 转染48 h后qRT-PCR结果表明，anti-miR-424-5P组miR-424-5P相对表达量明显低于对照组和anti-NC组(P<0.05)。对BGC-823细胞进行转染48 h后，miR...     

MicroRNA-184调控Ras/MAPK/ERK途径与老年肾细胞癌肿瘤细胞增殖、迁移及凋亡的关系

目的探讨MicroRNA-184(miR-184)对老年肾细胞癌ACHN细胞增殖、迁移和凋亡的影响及相关的分子机制。方法ACHN细胞转染miR-184 mimics(miR-184 mimics组)、miR-NC(miR-NC组),对照组未做任何处理,q-RT-PCR检测miR-184的转染效率,MTT法、细胞划痕实验、流式细胞术检测ACHN细胞的增殖、迁移距离和凋亡率,Western印迹检测Ras/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白ERK、磷酸化(p)-ERK的表达情况。结果q-RT-PCR结果显示,与对照组和miR-NC组相比,miR-184表达水平显著升高(P<0.05);MTT结果显示,过表达miR-184降低了ACHN细胞的存活率、迁移距离,增加了细胞的凋亡率(P均<0.05);过表达miR-184降低了ACHN细胞中p-ERK蛋白表达水平(P<0.05),抑制了Ras/MAPK/ERK信号通路。结论miR-184可能通过调控Ras/MAPK/ERK途径抑制老年肾癌ACHN细胞增殖能力和迁移能力,促进ACHN细胞的凋亡作用。     

敲减SATB1抑制结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的研究慢病毒介导敲减核基质结合区结合蛋白质(SATB)1对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法结肠癌SW480细胞感染阴性对照慢病毒和SATB1 shRNA重组慢病毒设置为SW480-sh-NC、SW480-sh-SATB1组,将不进行慢病毒感染的SW480细胞设置为SW480-WT组。Realtime PCR和Western印迹检测敲减效果,噻唑蓝(MTT)方法检测增殖和黏附变化,平板克隆实验检测克隆能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕愈合实验检测迁徙运动能力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,Western印迹检测钙黏附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和侵袭迁移蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及凋亡蛋白SW480-sh-SATB1组剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9表达变化。结果与SW480-sh-NC组比较,SW480-sh-SATB组细胞中SATB1 mRNA和蛋白水平均降低,细胞增殖和克隆能力均下降,细胞凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高,细胞黏附和迁徙运动能力下降,细胞侵袭迁移和细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,细胞中上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平升高,间质标志物Vimentin表达水平降低。结论慢病毒介导SATB1敲减抑制结肠癌细胞增殖迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

miR-107靶向FGFRL1/AKT通路抑制胃癌耐药细胞迁移

目的 检测胃癌敏感和耐药细胞迁移能力的强弱，探究miR-107靶向成纤维细胞生长因子受体样蛋白(FGFRL)1/蛋白激酶B(AKT)通路调节胃癌耐药细胞迁移。方法 利用划痕和transwell小室实验验证胃癌敏感和耐药细胞的迁移；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR),Western印迹检测敏感和耐药胃癌细胞中miR-107、FGFRL1/AKT通路活性及迁移相关蛋白[E-钙黏附蛋白(Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶(MMP)9]的表达；利用荧光素酶报告实验鉴定miR-107与FGFRL1之间的靶向关系；将胃癌细胞耐药株分为mimic NC组、miR-107 mimic组、NC组和siFGFRL1组，荧光定量PCR、Western印迹检测胃癌耐药细胞中FGFRL1 mRNA表达水平、FGFRL1/AKT通路活性及迁移相关蛋白表达水平；划痕和transwell小室实验测定胃癌耐药细胞迁移能力的变化。结果 与胃癌敏感细胞相比，胃癌耐药细胞迁移能力更强，且miR-107呈明显低表达，FGFRL1 mRNA和蛋白水平显著高表达，AKT活性(p-AKT水平)与Vime...     

沉默促癌基因Yap1联合丹参酮ⅡA对肝癌细胞Huh-7的影响

目的研究基因Yap1与丹参酮ⅡA对肝癌细胞Huh-7增殖、迁移侵袭的影响。方法选用武汉大学中南医院10对人肝细胞癌及癌旁组织标本,收集时间2019年6月1日—2019年12月1日。实时荧光定量法和蛋白质印迹法用于检测基因Yap1的表达以及表型相关分子的变化。采用MTT细胞增殖检测试剂检测不同浓度丹参酮ⅡA处理后细胞的增殖抑制率。蛋白质印迹实验检测不同干预下细胞凋亡、迁移相关标志物表达变化。流式细胞检测和Transwell实验分别检测细胞凋亡和细胞迁移以及侵袭。计量资料两组间比较采用t检验;计数资料两组间比较采用χ^2检验。结果10对人肝癌组织标本中有8对Yap1的表达明显高于癌旁组织。相对于人正常肝上皮细胞L02,Yap1在肝癌细胞株Huh-7和HCCL-M3中表达增高。si-Yap1-3转染细胞蛋白水平沉默效率达87.004%。MTT结果显示丹参酮ⅡA能够有效抑制Huh-7细胞增殖,其半数抑制浓度为8.683μmol/L。si-Yap1-3与丹参酮ⅡA联合处理Huh-7肝癌细胞,下游增殖迁移标志物E-钙粘蛋白表达增加,波形蛋白表达降低。Transwell实验结果示,相较于si-NC组,丹参酮ⅡA联合si-Yap1-3处理组细胞迁移、侵袭能力明显降低(43.19±2.88 vs 132.20±10.03,t=8.527,P=0.001;53.95±4.20 vs 179.10±11.11,t=4.484,P=0.011)。si-Yap1-3与丹参酮ⅡA联合处理组细胞凋亡相关标志物Bax表达增加,Bcl-2蛋白表达降低,且联合处理组细胞早期凋亡率为25.98%,高于si-NC组的9.21%(χ^2=4.078,P<0.05)。结论沉默促癌基因Yap1联合丹参酮ⅡA能够促进肝癌细胞Huh-7凋亡,并抑制其迁移侵袭,为临床用药提供一定的指导意义。     

支架蛋白RACK1小干扰RNA抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭

目的观察支架蛋白RACK1小干扰RNA(siRNA)对卵巢癌CAOV3细胞增殖、迁移和侵袭的影响和基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达变化。方法体外培养CAOV3细胞,实验分scramble siRNA组和RACK1 siRNA组;Lipofectamine 2000转染CAOV3细胞,Western印迹检测RACK1的干涉效能;MTT法测定CAOV3细胞的增殖率;划痕实验和transwell迁移和侵袭实验研究RACK1对细胞体外增殖、迁移和侵袭运动能力的影响;Western印迹检测CAOV3细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果与scramble siRNA组比较,RACK1 siRNA组RACK1的蛋白表达水平降低,明显抑制CAOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,降低MMP-2和MMP-9蛋白表达。结论下调RACK1表达可抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与改变MMP-2和MMP-9蛋白表达相关。     

AnnexinA2-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及机制

目的观察siRNA靶向干扰膜联蛋白(Annexin)A2对甲状腺乳头状癌(PTC)K1细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨其可能的相关机制。方法首先利用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTC、甲状腺良性肿瘤和正常组织中AnnexinA2 mRNA的表达;采用Western印迹检测细胞中AnnexinA2蛋白的表达水平。实验分为:空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-AnnexinA2组;利用脂质体lipofectamine^TM 2000瞬时转染的方法沉默PTCK1细胞中AnnexinA2的表达,采用qRT-PCR和Western印迹验证K1细胞转染的干扰效果;采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法分别检测K1细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力的变化,进一步采用qRT-PCR和Western印迹分别检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和下游因子c-myc、细胞周期蛋白(cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达变化。结果小干扰RNA转染成功沉默了K1细胞中AnnexinA2基因的表达;转染成功后,与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-AnnexinA2组细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AnnexinA2组中细胞的迁移和侵袭能力显著受到抑制(均P<0.05);沉默AnnexinA2基因后明显抑制了β-catenin、c-myc、cyclinD1、MMP-2、MMP-9的表达水平(均P<0.05)。结论AnnexinA2基因的沉默抑制K1细胞的侵袭、转移能力,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的,从而为PTC分子生物治疗提供新的靶标。     

乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染对胰腺癌AsPC1细胞增殖、转移的影响

目的 观察乏氧环境下PTEN和KAI1基因双转染人胰腺癌AsPC1细胞后对其增殖、迁移的影响.方法 应用我们前期构建的PTEN和KAI1基因过表达载体同时转染乏氧环境培养的人胰腺癌AsPC1细胞,采用蛋白质印迹法检测PTEN和KAI1蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,克隆形成实验观察肿瘤细胞形成集落能力,Transwell小室实验观察细胞的迁移能力.结果 双基因转染后,乏氧培养的AsPC1细胞的PTEN、KAI1蛋白表达量较空载体转染组细胞增加2.05倍及1.51倍;细胞增殖显著减缓(0.5比0.8,P=0.000);克隆形成数显著下降[(41.67±5.03)个比(86.00±7.81)个,P=0.017)];细胞迁移能力明显减弱(0.68±0.05比1.23±0.03,P=0.003).结论 乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染AsPC1细胞后能够抑制其增殖、迁移能力,基因联合治疗胰腺癌可能具有潜在的应用价值.     

PRL-3基因对结直肠癌细胞增殖能力的影响

目的:探讨PRL-3的过表达或敲低对结直肠癌细胞增殖能力的影响.方法:利用MTT法、平板克隆形成实验检测PRL-3对细胞体外增殖的影响;应用流式细胞术检测PRL-3对细胞周期的影响.结果:应用MTT法,检测PRL-3对SW480/EGFP、SW480-EGFP-PRL-3、SW480/EGFP/Mock及SW480-PRL-3-KD1细胞体外增殖能力的影响,经析因方差分析,4组差异具有显著性(F=23.463,P=0.000);不同时间点对细胞体外增殖的影响差异具有显著性(F=71.515,P=0.000);各组细胞与各时间组两因素交互效应显著(F=2.128,P=0.008);除第1天外,其他各时间点细胞组间的细胞增殖差异具有显著性.经LSD法多重比较,结果表明,与SW480/EGFP/Mock和SW480/EGFP细胞相比,SW480-EGFP-PRL-3细胞的增殖速度加快,而SW480-PRL-3-KD1细胞的增殖速度减慢.平板克隆形成实验显示SW480-EGFP-PRL-3细胞克隆形成能力明显增强,而SW480-PRL-3-KD1细胞克隆形成能力显著下降,差异具有显著的统计学意义(F=44.411,P=0.000).结论:PRL-3基因可促进结直肠癌细胞的增殖.     

TPARM对人结直肠癌细胞株SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨四肽重复结构域(TTC)12,也被称为TPARM,其表达对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 将人结肠癌SW480细胞株分为3组：NC组、TPARM-siRNA组和Scr-siRNA组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和Western印迹法检测各组TPARM mRNA和蛋白表达。细胞计数试剂盒(CCK)8法、平板克隆法测定各组TPARM表达对SW480细胞增殖的影响。Western印迹法检测TPARM表达对各组周期相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达。流式细胞术检测各组TPARM表达对SW480细胞凋亡的影响。Transwell小室侵袭实验和划痕实验观察TPARM表达对SW480细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 与NC组、Scr-siRNA组比较,转染TPARM-siRNA后,SW480细胞中TPARM mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。分别与NC组和Scr-siRNA组比较,TPARM-siRNA转染组SW480细胞增殖明显减少(P<0.05),周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4、CDK6的蛋白表达明显下降(P<...     

β-神经生长因子基因转染对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究β-神经生长因子(β-NGF)基因转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对细胞增殖、单克隆形成、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移相关功能的影响。方法将人源β-NGF基因重组的真核表达质粒(p EGFP-N1/β-NGF)转染至HUVEC,同时设置p EGFP-N1空载组、正常组(未转染质粒)、酪氨酸激酶受体A(Trk A)抑制剂组(β-NGF基因转染组加入1∶1000的K252a)。观察转染前后细胞形态学变化,利用real-time PCR和Western blot检测β-NGF基因转染表达效果,MTT法检测β-NGF基因转染对细胞增殖的影响,平板单克隆实验检测β-NGF基因转染对细胞单克隆形成能力的变化,流式细胞术检测β-NGF基因转染对细胞周期和细胞凋亡率的影响,Transwell方法检测转染前后细胞迁移能力的变化,Western blot检测β-NGF基因转染前后Trk A和血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化。结果β-NGF基因成功转染HUVEC 48 h后能够显著提高β-NGF mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),同时促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率(P0.05)。β-NGF基因转染HUVEC后Trk A和VEGF表达水平也随之显著上升(P0.05),但受到Trk A抑制剂的抑制。结论β-NGF基因能够成功转染HUVEC并显著表达,进而促进细胞增殖、单克隆形成、细胞迁移能力,并影响细胞周期抑制细胞凋亡率,而其发挥作用与Trk A结合诱导VEGF表达上调有关。     

lncRNA NBAT1通过MAPK通路影响肝癌细胞增殖和转移的机制

目的 探讨lncRNA神经母细胞瘤相关转录物(NBAT)1对肝癌细胞增殖和转移的影响及分子机制。方法 取43例肝癌组织及癌旁组织，用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA NBAT1表达水平；将肝癌细胞MHCC97H分为pcDNA组(转染NBAT1过表达载体质粒的阴性对照)、pcDNA-NBAT1组(转染NBAT1过表达载体质粒)、SB203580组[10μmol/L丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂SB203580]、Con组(不进行任何处理);四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；克隆形成实验检测细胞克隆形成数；划痕实验检测细胞划痕愈合率；Transwell检测侵袭细胞数；Western印迹检测蛋白表达。结果 肝癌组织中lncRNA NBAT1的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。过表达lncRNA NBAT1后，肝癌细胞MHCC97H活性降低，肝癌细胞克隆形成数减少，划痕愈合率降低，侵袭肝癌细胞数减少，p-细胞外信号调节激酶(ERK)、p-p38和磷酸化c-Jun NH2-末端激酶(p-JNK)蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义(...