白藜芦醇抑制膀胱癌细胞生长增殖及影响miR-34a表达的研究

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对人膀胱癌细胞T24生长增殖的影响,初步探讨miR-34a在Res影响T24细胞中的作用。方法不同浓度Res分别作用T24细胞24 h,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测p53蛋白水平,实时定量PCR(Real-time PCR)检测T24细胞miR-34a的基因表达。结果 Res剂量依赖性地抑制T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,明显增加p53的蛋白表达。此外,Res处理后T24细胞中miR-34a的基因表达亦显著升高。结论 Res能够有效抑制膀胱癌细胞生长增殖,可能与诱导细胞凋亡、上调miR-34a及p53表达有关。     

虎杖有效成分大黄素抗膀胱癌作用的分子机制研究

目的观察虎杖中有效成分大黄素对人膀胱癌T24细胞的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法200μmol／L大黄素干预膀胱癌T24细胞,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Westernblot检测p53的蛋白表达,实时定量PCR（Real-timePCR）检测miR-34a的基因表达,应用化学方法合成成熟miR-34a瞬时转染T24细胞并检测细胞增殖水平。结果大黄素能够有效明显上调p53蛋白以及促进miR-34a的基因表达水平。转染miR-34a后T24细胞生长增殖明显受抑。结论大黄素具有良好的抗膀胱癌活性,其作用机制可能部分与促进膀胱癌细胞中p53表达、上调miR-34a,进而诱导膀胱癌细胞凋亡有关。     

miR-34a调控高糖环境中HK-2细胞增殖作用的初步研究

目的探讨miR-34a对高糖环境中HK-2细胞增殖作用的影响。方法以miR-34a模拟物和miR-34a抑制剂分别转染HK-2细胞,定量PCR检测miR-34a的表达变化,MTT检测细胞增殖活性;Western印迹检测周期相关蛋白CyclinD1和CyclinE的表达变化。生物信息学分析miR-34a的靶基因,对其中的增殖相关转录因子E2F3进行双荧光素酶验证。结果 miR-34a模拟物组miR-34a表达显著上调（P〈0.05）,miR-34a抑制剂组miR-34a显著下调（P〈0.05）。与对照组相比,miR-34a模拟物显著抑制高糖环境中HK-2细胞的增殖作用（P〈0.05）,CyclinD1和CyclinE表达下调（P〈0.05）,miR-34a抑制剂组显著上调高糖环境中HK-2细胞的增殖作用,CyclinD1和CyclinE表达上调（P〈0.05）。TargetScan在线分析软件显示,增殖相关转录因子E2F3可能是miR-34a潜在的靶基因,双荧光素酶分析结果显示E2F3是miR-34a的直接靶基因。结论 miR-34a可以调控高糖环境中HK-2的细胞增殖,其机制可能是通过直接抑制E2F3基因的表达而实现。     

miR-34a调控高糖环境中HK-2细胞增殖作用的初步研究

目的探讨miR-34a对高糖环境中HK-2细胞增殖作用的影响。方法以miR-34a模拟物和miR-34a抑制剂分别转染HK-2细胞,定量PCR检测miR-34a的表达变化,MTT检测细胞增殖活性;Western印迹检测周期相关蛋白CyclinD1和CyclinE的表达变化。生物信息学分析miR-34a的靶基因,对其中的增殖相关转录因子E2F3进行双荧光素酶验证。结果 miR-34a模拟物组miR-34a表达显著上调(P<0.05),miR-34a抑制剂组miR-34a显著下调(P<0.05)。与对照组相比,miR-34a模拟物显著抑制高糖环境中HK-2细胞的增殖作用(P<0.05),CyclinD1和CyclinE表达下调(P<0.05),miR-34a抑制剂组显著上调高糖环境中HK-2细胞的增殖作用,CyclinD1和CyclinE表达上调(P<0.05)。TargetScan在线分析软件显示,增殖相关转录因子E2F3可能是miR-34a潜在的靶基因,双荧光素酶分析结果显示E2F3是miR-34a的直接靶基因。结论 miR-34a可以调控高糖环境中HK-2的细胞增殖,其机制可能是通过直接抑制E2F3基因的表达而实现。     

靶向FHL1的microRNA初步筛选研究

目的 构建含有FHL1基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体,用以检测与其相互作用的microRNA(miRNA).方法 PCR扩增出FHL1基因3'-UTR区片段,插入到经过改造的荧光素酶报告基因载体pcDNA 3.0中;利用Target Scan5.1软件预测可能与FHL1基因3'UTR区相互作用的miRNA,将miRNA与荧光素酶报告重组子共转染至293T细胞中,检测其荧光活性;构建针对荧光活性结果变化明显的miRNA的种子区缺失突变体,检测荧光活性.结果 测序结果表明,含有FHL1基因3'-UTR区的荧光素酶报告基因载体构建正确;荧光素酶活性实验表明,与对照组相比,miR-200c、miR-146a、miR-146b-5p可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低40％左右,并构建上述miRNA缺失突变体,miR-200c使荧光素酶活性回复.结论 成功构建了FHL1基因3'UTR区的荧光素酶报告基因载体,而miR-200c、miR-146a、miR-146b-5p可以抑制其荧光素酶活性,其中miR-200c可能直接作用于FHL1基因3'-UTR区.     

miR-190对胶质瘤细胞生长及迁移抑制机制研究

目的探讨miR-190对胶质瘤细胞生长及迁移的抑制机制。方法通过实时荧光定量PCR法检测miR-190在人胶质细胞HEB和人胶质瘤细胞U87和U251细胞中的表达情况。细胞计数试剂盒(CCK8)实验和转移小室实验检测miR-190过表达和低表达时,U87和U251细胞的增殖和迁移能力。通过MIRDB软件预测miR-190可以靶向的蛋白质,荧光素酶报告基因实验分析miR-190对ZEB2的靶向作用。采用蛋白免疫印迹法检测miR-190过表达和低表达时,U87和U251细胞中ZEB2蛋白的变化情况。结果实时荧光定量PCR实验检测结果指出,miR-190在胶质瘤细胞系U87和U251中显著下调,明显低于正常胶质细胞HEB(P <0. 05)。miR-190表达上调时U87和U251细胞的生长受到抑制(P <0. 05)。转移小室结果显示,miR-190作用后,U87和U251细胞迁移能力下调(P <0. 05); miR-190受到抑制后,迁移细胞数量增加(P <0. 05)。MIRDB软件分析发现,miR-190与ZEB2的3'非翻译区具有结合位点。荧光素酶报告基因实验显示,miR-190能够下调ZEB2野生型的活性(P <0. 05),但是对ZEB2突变型没有作用(P> 0. 05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,miR-190能够显著抑制ZEB2蛋白水平的表达; miR-190表达受到抑制后,ZEB2蛋白水平上调。结论 miR-190可以通过抑制ZEB2的表达,抑制胶质瘤细胞的生长和迁移。     

靶向HER2的CAR T细胞构建与对膀胱癌细胞杀伤活性的探索研究

目的 制备特异性杀伤人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)表达阳性的膀胱癌细胞的嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-Cell,CAR T）,初步探索HER2-CAR T细胞治疗膀胱癌的可行性。方法 首先免疫组化法检测膀胱癌患者石蜡组织切片中肿瘤细胞HER2表达情况,然后以赫赛汀单克隆抗体的单链抗体（single chain antibody fragment,scFv）序列作为CAR T的识别序列,构建包含铰链,共刺激分子（CD28和4-1BB胞内域）和CD3z的三代CAR T慢病毒质粒。使用293T细胞包装慢病毒,感染人源外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）细胞,制备HER2-CAR T细胞,并采用流式细胞术检测CAR的转导效率。将CAR T细胞分别与HER2表达阳性并且稳转构建表达荧光素酶的SK-BR3阳性对照细胞和MDAMB-468阴性对照细胞及T24膀胱癌细胞共培养,采用荧光素酶报告基因检测法检测杀伤...     

miRNA-33a抑制人结肠癌细胞HCT-116增殖的机制研究

目的 探讨miRNA-33a抑制人结肠癌细胞HCT-116增殖的机制.方法 化学法合成miRNA-33a mimics、miRNA-33a inhibitor及阴性对照(NC)序列,然后转染至HCT-116细胞.转染后48h,采用Real-time PCR检测细胞中miRNA-33a含量的变化,Western blotting检测细胞中Twist蛋白含量的变化;转染后24、48、72h,采用CCK-8的检测肿瘤细胞增殖活性的变化.采用信息学软件预测miRNA-33a与Twist的结合位点,并通过荧光素酶报告基因法证实预测的结合位点.结果 miRNA-33a mimics及miRNA-33a inhibitor转染后可明显上调或下调HCT-116细胞内miRNA-33a的相对含量(P＜0.05),而NC转染组细胞miRNA-33a含量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);miRNA-33a mimics及miRNA-33a inhibitor转染后可明显下调或上调HCT-116细胞内Twist蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05),而NC转染组细胞内Twist含量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);miRNA-33a mimics及miRNA-33ainhibitor转染后可明显下调或上调HCT-116细胞对数生长期的增殖活性,转染后48h和72h与对照组比较差异均有统计学意义(p＜0.05),而NC转染组细胞增殖活性与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).荧光素酶实验显示,miRNA-33amimics和miRNA-33a inhibitor转染可以抑制或促进野生型报告基因荧光素酶活性(P＜0.05),而对突变型报告基因荧光素酶活性无明显影响(P＞0.05).结论 miRNA-33a可以通过抑制其靶基因Twist的表达抑制HCT-116细胞的增殖活性.     

上调microRNA-150表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨上调microRNA- 150 (miR- 150)表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 SMMC7721细胞分成miR-150感染组(加入pGIPZ-miR-150慢病毒表达载体)、阴性对照组(加入只含GFP的慢病毒载体)和空白对照组(不转染).采用荧光定量PCR检测miR-150的表达情况,Western blotting检测靶基因c-Myb蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 荧光定量PCR结果显示,转染miR-150pGIPZ后,SMMC7721细胞miR-150表达量(2.48±0.15)较阴性对照组(0.81±0.09)增加了2倍(p＜0.01).CCK-8法检测结果显示,与阴性对照组和空白对照组比较,miR-150组的细胞增殖率显著降低(P＜0.05).Western blotting检测结果表明,miR-150组细胞c-Myb蛋白表达(0.31±0.07)与空白对照组(0.80±0.09)及阴性对照组(0.81±0.08)相比明显减少(P＜0.0l).流式细胞仪检测结果显示,miR-150组细胞凋亡率(19.36％±1.78％)与阴性对照组(5.12％±0.54％)及空白对照组(4.68％±0.35％)相比明显增加(P＜0.01).结论 上调miR-150表达可通过降低靶基因c-Myb的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,miR-150可能成为肝癌靶向治疗新的靶基因.     

MiR-1207-3p靶向XRCC6对结直肠癌细胞HT-29凋亡的影响

目的 探讨miR-1207-3p靶向X-射线修复交叉补充因子6（X-ray repair cross complementing 6,XRCC6）对结直肠癌细胞HT 29凋亡的影响。方法 运用TargetScan在线分析miR-1207-3p与XRCC6的相关性;将XRCC6的3′端非编码区克隆进pmirGLO载体中,利用双荧光素酶报告系统检测miR-1207-3p是否靶向调控XRCC6基因;用LipoFiter3转染试剂转染miR-1207-3p mimics或miR-1207-3p inhibitor进结直肠癌细胞HT-29后,通过Western Blot检测XRCC6蛋白表达量和结直肠癌细胞HT-29凋亡标志蛋白的表达量;采用Annexin V染色法测定细胞凋亡水平。结果 通过TargetScan分析,miR-1207-3p仅在一个区域与XRCC6具有较高匹配度;通过双荧光素酶报告系统检测发现,miR-1207-3p靶向结合XRCC6的3′端非编码区;过表达miR-1207-3p时,XRCC6的表达量下降,细胞凋亡标志蛋白Cleaved-Casp3、Cleaved-Casp9的表达量显著上升,细胞凋亡水平上升(t=34.18,P<0.000 1);敲低miR-1207-3p时,XRCC6的表达量上升,细胞凋亡标志蛋白Cleaved-Casp3、Cleaved-Casp9的表达量显著下降,细胞凋亡水平下降(t=3.375,P=0.027 9)。结论 MiR-1207-3p可通过抑制XRCC6表达量来促进结直肠癌细胞HT-29的凋亡。     

MiR-148a对肺癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨miR-148a对肺癌A549、H460以及H1299细胞放射敏感性的影响。方法根据不同的处理方法,分别按以下方式将肺癌A549、H460和H1299细胞进行分组。（1）将肺癌A549和H460细胞分为3组:空白对照组、4 Gy γ射线照射组和8 Gy γ射线照射组。采用实时定量PCR检测miR-148a的表达水平;（2）将肺癌A549细胞分为2组:空白对照组、miR-148a转染组;同时,将肺癌H460细胞分为2组:空白对照组、anti-miR-148a转染组。分别对转染2组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法来检测细胞增殖;（3）将肺癌A549和H1299细胞分为3组:空白对照组、miR-148a单独处理组、miR-148a和雌激素受体（ER）共转染组。分别对3组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法检测细胞生长情况。采用Student t-test对数据进行统计学分析,P < 0.05表示差异有统计学意义。结果实时定量PCR实验结果显示,γ射线照射能够显著下调肺癌A549和H460细胞中miR-148a的表达水平。克隆形成实验结果显示,与空白对照组相比,miR-148a转染能够显著增强肺癌A549细胞的放射敏感性,差异有统计学意义（t=12.16,P < 0.01）,而anti-miR-148a转染能够显著降低肺癌H460细胞的放射敏感性,差异有统计学意义（t=11.93,P < 0.01）。同时,miR-148a过表达可以明显下调肺癌A549细胞中ER的mRNA及蛋白表达水平;而anti-miR-148a能够显著上调肺癌H460细胞中ER的mRNA及蛋白表达水平。另外,与miR-148a单独处理组相比,miR-148a和ER共转染组中miR-148a对肺癌A549和H1299细胞增殖的影响显著降低,差异有统计学意义（t=11.34、12.68,均P < 0.01）。结论照射可以诱导miR-148a的表达水平降低,人为过表达miR-148a能够抑制ER的蛋白表达水平,进而降低肺癌A549和H1299细胞的增殖能力,同时增强其放射敏感性。     

Down regulation of miR-203 in radiation- induced thymic lymphoma promoted cells proliferation and inhibited apoptosis

Objective To investigate the role of miR-203 in radiation-induced thymic lymphoma (RITL).Methods A ⁶⁰Co irradiator was used for total-body irradiation. MicroRNAs(miRNAs) level was assayed by qRT-PCR. Cell proliferation was assayed by MTT assay. Cell apoptosis was examined by fluorescence activated cell sorter(FACS). Dual luciferase reporter assay system was used to detect the 3'UTR reporter. Results MiR-203 was down-regulated in RITL tissues. Overexpression of miR-203 strongly inhibited the proliferation of both NIH3T3 cells and EL4 cells and vice versa. MiR-203 inhibited cells proliferation and induced apoptosis via TANK-binding kinase (TBK1), SLUG(SNAI2) and Cyclin D1(CCND1). Conclusions Radiation down-regulated the level of miR-203 in thymic, which promoted radiation-induced thymic lymphoma by targeting TBK1, SNAI2 and CCND1.     

18F-FLT体外监测结肠癌细胞早期放射反应

目的 评价18F-脱氧胸腺嘧啶核苷（FLT）监测结肠癌细胞早期放射反应的作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）检测并绘制SW480细胞受X线照射后生长曲线,光学显微镜下观察细胞形态变化.流式细胞仪检测照射后肿瘤细胞增殖周期的重新分布.分别于体外细胞以及肿瘤内检测照射前、后细胞摄取18F-FLT的变化.将18F-FLT（0.05±0.01）MBq加入培养液孵育细胞,分别于30,60,90,120 min测定细胞摄取18F-FLT的放射性.经荷瘤裸鼠尾静脉注射18F-FLT（1.90±0.85）MBq（0.25 ml）,60 min后处死动物,切除肿瘤与肌肉、肺、肝等,测定肿瘤与其他脏器摄取放射性比值变化.应用单因素方差分析进行统计学处理.结果 X线照射后,SW480细胞增殖受到明显的抑制,呈剂量依赖性.细胞形态随照射剂量的不同发生不同的变化.照射后细胞周期发生重新分布.10 Gy组,S期细胞百分比24 h从33.23%降至15.19%,72 h后降至12.44%.20 Gy组,S期细胞百分比24 h后从33.23%降至9.24%,72 h后降至5.43%.体外摄取实验发现,注射后60 min,SW480细胞摄取18F-FLT百分比为（5.21±1.60）%,10 Gy照射24 h后下降至（4.27±0.48）%,72 h降至（3.39±0.59）%.20 Gy组：照射后24 h,SW480摄取的放射性百分比下降至（3.41±0.58）%,72 h后降至（1.63±0.49）%.两照射组在72 h内分别下降了34.94%,69.72%（24 h∶F=8.253,P=0.009;72 h∶F=36.715,P＜0.001）.单位质量肿瘤组织摄取的18F-FLT随照射剂量的增加而逐渐降低（10Gy组：F=12.388,P=0.007;20 Gy组：F=16.744,P=0.004）.结论 18F-FLT在结肠癌细胞内的摄取可以快速反映照射治疗后的细胞变化,18F-FLT可能用于检测结肠癌放射治疗早期反应.     

异紫堇碱对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响

目的 探讨异紫堇碱（ICD）对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。 方法 采用不同浓度（25、50、100、200 μmol/L）ICD处理宫颈癌SiHa细胞（简称ICD处理组）,同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照（NC）组。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）实验检测细胞的增殖抑制率,细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响,Western blot检测磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的相对表达量,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测微小RNA-129-5p（miR-129-5p）的表达。在SiHa细胞中分别转染miR-NC和miR-129-5p,观察转染miR-129-5p对细胞增殖、辐射敏感性、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、γ-H2AX蛋白表达的影响。在SiHa细胞中分别转染anti-miR-NC和anti-miR-129-5p并使用ICD处理,分析其对ICD诱导的细胞增殖、辐射敏感性、PI3K/Akt信号通路的影响。2组间数据的比较采用独立样本t检验。 结果 MTT实验结果显示,与NC组SiHa细胞的增殖抑制率[（0.05±0.01）%]相比,25、50、100、200 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（10.26±1.03）%、（22.16±2.21）%、（44.09±4.41）%、（70.88±7.09）%],且差异均有统计学意义（t=29.736~30.013,均P<0.05）。细胞克隆形成实验、Western blot和qRT-PCR结果显示,与NC组相比,100 μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=19.135~44.478,均P<0.05）,提高γ-H2AX蛋白和miR-129-5p的相对表达量（t=15.041、19.682,均P<0.05）,降低p-PI3K和p-Akt蛋白的相对表达量（t=14.897、15.429,均P<0.05）。与转染miR-NC组相比,转染（高表达）miR-129-5p组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[（75.06±7.51）%对（1.04±0.10）%,t=29.566,P<0.05]、对不同剂量X射线的辐射敏感性（t=13.239~37.015,均P<0.05）和γ-H2AX蛋白的相对表达量（t=17.076,P<0.05）,能够降低cyclinD1蛋白的相对表达量（t=17.393,P<0.05）。与转染anti-miR-NC+ICD处理组相比,转染anti-miR-129-5p（低表达miR-129-5p）+ICD处理组可以反转ICD抑制SiHa细胞增殖、抑制PI3K/Akt信号通路的活性和增强细胞辐射敏感性的作用,且差异均有统计学意义（t=13.370~28.252,均P<0.05）。 结论 ICD能够通过上调miR-129-5p表达及抑制PI3K/Akt信号通路的活性来抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖以及增强其辐射敏感性。     

HBXIP蛋白表达对宫颈癌细胞的增殖能力及放射敏感性的影响

目的探讨用siRNA敲降乙肝病毒X蛋白结合蛋白（HBXIP）的表达对宫颈癌ME-180细胞的增殖能力及放射敏感性的影响。方法根据不同的处理方法,分别按两种分组方式进行分组。（1）把宫颈癌ME-180细胞分为4组:空白对照组、4 Gy γ射线照射组、HBXIP-siRNA转染组以及HBXIP-siRNA+γ射线照射联合组。采用MTT和克隆形成实验法来检测细胞增殖;采用qRTPCR检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bid的表达;Western blot检测蛋白激酶AKT的磷酸化水平。（2）把宫颈癌ME-180细胞分为3组:空白对照组、HBXIP-siRNA单独处理组、HBXIP-siRNA和AKT共转染组。对3组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法检测细胞生长。采用Student t-test对数据进行统计学分析,P < 0.05表示差异有统计学意义。结果 MTT实验和克隆形成实验结果显示,与γ射线照射组相比,HBXIP-siRNA转染+γ射线照射联合组的宫颈癌ME-180细胞增殖率明显降低（t=11.63、12.17,均P < 0.01）,并伴随抑凋亡蛋白Bcl-2表达的降低（t=10.88,P < 0.01）和促凋亡蛋白Bid表达的增高（t=9.31,P < 0.01）。γ射线照射明显上调了HBXIP蛋白的表达水平和AKT蛋白的磷酸化水平,而转染HBXIP-siRNA则抑制了γ射线照射导致的AKT磷酸化水平的升高。另外,与HBXIP-siRNA单独处理组相比,HBXIP-siRNA和AKT共转染组中HBXIP-siRNA对宫颈癌ME-180细胞增殖的影响显著降低（t=8.96,P < 0.01）。结论降低HBXIP蛋白表达可以抑制辐照诱导的AKT磷酸化水平,进而降低宫颈癌ME-180细胞的增殖能力,同时增强其放射敏感性。     

MiR-32-3p在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义

目的 探索miR-32-3p在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中的表达及意义。方法 分析8例健康供者和26例初诊骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞,RT-PCR检测骨髓CD138+细胞中miR-32-3p的表达水平。建立miR-32-3p过表达的MM细胞系（ARP1-miR-32-3pOE）和对照组（ARP1-EV）,检测miR-32-3p对于MM细胞增殖的影响;检测miR-32-3p对细胞增殖相关蛋白（c-Myc,Aurka,Bcl2,Notch1,p53,p-H2AX）的影响。小鼠体内成瘤实验检测miR-32-3p肿瘤细胞增殖的影响。结果 骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞miR-32-3p表达水平低于健康供者（7.33±6.17 vs 40.49±27.97,P<0.001）。ARP1-miR-32-3pOE细胞系增殖速度较ARP1-EV组减低(P<0.001)。硼替佐米（Bortezomib）药物作用下,ARP1-EV细胞系存活率均高于同时点的ARP1-miR-32-3p-OE细胞系（P<0.05),ARP1-miR-32-3pOE细胞系c-Myc,Aurka,Bcl2,Notch1表达较ARP1-EV下调,p-53,p-H2AX的表达上调。成瘤实验中,ARP1-miR-32-3pOE组小鼠肿瘤体积（V3=2.67±1.06）较ARP1-EV组肿瘤体积（V3=4.70±2.15）减小(P<0.05)。结论 MiR-32-3p在MM 患者中低表达,体内体外实验证实miR-32-3p能够抑制MM细胞增殖,增加对抗癌药物硼替佐米的敏感性,显示出潜在的抑癌作用,有望成为治疗MM的新靶点。     

microRNA-7真核表达载体的构建及其对细胞增殖能力的影响

目的构建miR-7真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响。方法以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体。将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测。将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化。结果构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍。CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降（P〈0.05）。结论成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制。     

microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响

目的 探讨microRNA-17-92对人套细胞淋巴瘤细胞放射敏感性的影响.方法 通过细胞转染获得Z138c-TMP2细胞株和稳定高表达miR-17-92的Z138c-TMP2-miR-17-92细胞株.采用锥虫蓝染色活细胞计数和3H-TdR掺入方法,观察两组细胞外照射后生长情况.采用流式细胞仪检测两组细胞照射后周期时相分布和细胞晚期死亡率.结果 随着照射剂量的增加,miR-17-92组较TMP2组有更多存活细胞(t=-3.12和-3.28,P＜0.05);TMP2组细胞出现G2/M期阻滞,miR-17-92组未出现明显周期阻滞(t=2.885,P＜0.05).2和4 Gy照射后培养96 h以上,TMP2组细胞PI单染阳性细胞百分比(24.02%和36.16%)明显高于miR-17-92组(6.49%和11.39%),差异有统计学意义(t=-17.59、-4.972,P＜0.05).结论 miR-17-92高表达可明显降低人套细胞淋巴瘤细胞株Z138c细胞的放射敏感性.改变细胞周期和抵抗照射诱导的凋亡是miR-17-92发挥作用途径之一.