卵巢高反应对围着床期子宫内膜基因表达谱的影响

目的 研究控制性超排卵过程中卵巢高反应者围着床期子宫内膜基因表达谱的变化.方法 超排卵过程中因出现卵巢高反应而取消胚胎移植的妇女(高反应组,n=4)和有正常生育史的育龄妇女(对照组,n=3),分别于围着床期行子宫内膜组织活检术.HE染色观察子宫内膜组织学改变;基因芯片Affymetrix U133A 2.0筛选差异表达基因,Real-time PCR加以验证;应用生物信息学分析工具PANTHER进行差异表达基因的生物学过程分析.结果 对照组子宫内膜均为分泌中期,高反应组子宫内膜部分腺体发育延迟.筛选出差异表达基因364个,其中上调基因233个,下调基因131个;Real-time PCR验证与子宫内膜功能相关基因OPN、PLA2G2、DPPIV、IGFBP5和SSAT,每个基因的Real-time PCR结果与芯片检测的信号值呈显著正相关(r=0.44,P<0.01).PANTHER分析显示,差异表达基因参与细胞因子信号转导和免疫调节等生物学过程.结论 卵巢高反应影响围着床期子宫内膜的基因表达,可能是高甾体激素使子宫内膜接受性降低的机制之一.     

超排卵对围着床期小鼠子宫内膜白血病抑制因子LIF表达的影响

目的通过研究比较超排卵和生理水平时围着床期小鼠子宫内膜白血病抑制因子（leukemia inhibitory faetor，LIF）表达的情况，探讨超排卵是否影响子宫内膜容受性。方法将实验动物随机分为超排卵妊娠组（超排卵组）和自然妊娠组（对照组）2组，每组30只，分别选取动情周期当天、合笼后发现阴道栓第2、4、6、8天共5个时间点取小鼠子宫内膜，用免疫组化和原位杂交法测定小鼠子宫内膜LIF的蛋白表达和LIFmRNA的表达。结果超排卵组和对照组LIF在围着床期子宫内膜上的表达上有相似的规律：即随着妊娠天数的增加，LIF蛋白和LIFmRNA在小鼠围着床期子宫内膜的表达增加，继之呈下降趋势，但其峰值在时间上有所不同，超排卵使LIF在围着床期子宫内膜上表达峰值提前。结论超排卵对围着床期子宫内膜LIF表达有影响，使其表达峰值提前，而白血病抑制因子是参与子宫内膜容受性形成的一个重要的细胞因子，从而可以推测超排卵对子宫内膜容受性有负面影响，导致种植后妊娠率的下降。     

种植窗期人子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4的表达

目的 研究不同卵巢反应性的种植窗期子宫内膜组织中基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)及其受体CXCR4的表达.方法 收集种植窗期子宫内膜组织(n=17),根据卵巢反应性分为卵巢高反应组(n=6)、卵巢中等反应组(n=6)和正常对照组(n=5).应用RT-PCR、Real-time PCR、免疫组织化学染色和Western blotting方法 ,检测并比较各组种植窗期子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4 mRNA和蛋白表达.结果 免疫组织化学染色显示,CXCR4在种植窗期子宫内膜组织中高表达;SDF-1α在内膜腺体和腔上皮细胞中表达,而在问质细胞中不表达.各组子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4 mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 高甾体激素对种植窗期子宫内膜趋化因子SDF-1α及其受体CXCR4的表达无明显影响.提示SDF-1α/CXCR4可能不参与甾体激素对种植窗期CD56bright CDl6-NK细胞募集的调控.     

种植窗期人子宫内膜组织SDF-1α/CXCR4的表达

目的研究不同卵巢反应性的种植窗期子宫内膜组织中基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）及其受体CXCR4的表达。方法收集种植窗期子宫内膜组织（n=17）,根据卵巢反应性分为卵巢高反应组（n=6）、卵巢中等反应组（n=6）和正常对照组（n=5）。应用RT—PCR、Real-timePCR、免疫组织化学染色和Western blotting方法,检测并比较各组种植窗期子宫内膜组织SDF-1α／CXCR4mRNA和蛋白表达。结果免疫组织化学染色显示,CXCR4在种植窗期子宫内膜组织中高表达;SDF-1α在内膜腺体和腔上皮细胞中表达,而在间质细胞中不表达。各组子宫内膜组织SDF-1α／CXCR4mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论高甾体激素对种植窗期子宫内膜趋化因子SDF-1α及其受体CXCR4的表达无明显影响。提示SDF-1α／CXCR4可能不参与甾体激素对种植窗期CD56^bright CD16-NK细胞募集的调控。     

卵巢子宫内膜样癌免疫相关基因的生物信息学分析

目的通过生物信息学方法筛选和分析卵巢子宫内膜样癌差异表达的免疫相关基因,为研究卵巢子宫内膜样癌发病机制、早期诊断和预后判断提供参考。方法从高通量基因表达（GEO）数据库中选取微阵列转录基因数据集GSE57545,通过GEO在线分析工具GEO2R筛选出差异表达基因;使用标注、可视化和集成发现数据库（DAVID）对差异表达基因进行基因本体（GO）分析,京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析;通过STRING数据库构建蛋白互作（PPI）网络,用Cytoscape获取10个具有高度连接性的关键基因;使用路径视图（pathview）进一步研究关键基因在通路中的表达和发挥作用的途径,并用Kaplan-Meier绘图仪分析关键基因表达患者的生存情况。结果通过对正常子宫内膜和卵巢子宫内膜样癌差异表达的免疫相关基因进行筛选获得87个差异表达基因,主要涉及免疫反应、炎症反应等通路。PPI网络和Cytoscape软件筛选出的10个关键基因,包括细胞黏附分子1（ICAM1）、Toll样受体2（TLR2）、C-X-C基序趋化因子配体8（CXCL8）、甘油醛-3-磷酸盐脱氢酶（GAPDH）、C-X-C基序趋化因子配体10（CXCL10）、IL-18、C-X-C基序趋化因子配体1（CXCL1）、C-X-C基序趋化因子配体2（CXCL2）、C-X-C基序趋化因子配体12（CXCL12）、前列腺素-内啡肽合成酶2（PTGS2）。pathview研究发现关键基因在吞噬体、Toll样受体信号通路、抗原处理和呈递通路中表达和发挥作用。生存分析表明TLR2、CXCL10、CXCL12、IL-18高表达和CXCL8、GAPDH、CXCL1低表达与卵巢子宫内膜样癌患者的无病生存和整体生存状况较差相关。结论卵巢子宫内膜样癌差异表达的免疫相关基因可能主要通过调控炎症反应和免疫应答,形成可以逃逸免疫的肿瘤微环境,引起卵巢子宫内膜样癌的发生、发展。     

自噬基因 LC3在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：研究自噬基因LC3在卵巢子宫内膜异位症患者中的表达情况,探讨其与卵巢子宫内膜异位症发生、发展的相关性及意义。方法用Real-time PCR方法,对正常子宫内膜组织以及卵巢子宫内膜异位症患者的在位内膜组织、异位内膜组织进行LC3 mRNA定量分析,探讨其与临床分期的关系。结果 LC3 mRNA在卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜组、异位内膜组和正常子宫内膜组中的表达存在显著差异（ P＜0.05）。异位内膜组表达显著低于正常内膜组,异位内膜组与在位内膜组相比表达明显下调（ P＜0.05） ,在位内膜组和正常内膜组间比较无明显差异（ P＞0.05）。 LC3 mRNA 在卵巢子宫内膜异位症不同临床分期中,异位内膜组Ⅲ～Ⅳ期LC3 mRNA表达显著低于Ⅰ～Ⅱ期（ P＜0.05）。在月经周期不同时相,正常内膜组增殖期的LC3 mRNA表达明显高于分泌期（ P＜0.05） ,卵巢子宫内膜异位症在位内膜组、异位内膜组增殖期与分泌期比较,差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论自噬参与了卵巢子宫内膜异位症的发病,自噬活性的改变可能与子宫内膜异位症的发展及病损程度相关。     

不同方案超排卵下小鼠子宫内膜种植窗期整合素β3的表达

目的 以超排卵下小鼠子宫内膜种植窗期整合素β3的表达为指标,比较不同超排卵方案对小鼠子宫内膜容受性的影响。方法 模拟人类超排卵长周期,对小鼠进行超促排卵。根据超排卵方案的不同,按随机表顺序将40只小鼠分为4组,分别为促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRHant)组、促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)组、孕马血清促性腺激素(PMSG)组及对照组,每组10只小鼠。用免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分别检测小鼠子宫内膜种植窗期整合素β3蛋白和mRNA的表达。结果 免疫组织化学结果显示,与对照组相比GnRHa组小鼠整合素β3蛋白的表达明显下降(P=0．023),GnRHant组和PMSG组小鼠整合素β3蛋白的表达明显降低(P=0．001);与PMSG组小鼠相比,GnRHa组小鼠整合素β3的表达明显增高(P=0．001),而GnRHant组整合素β3的表达差异无显著意义(P=0．768);RT-PCR结果与免疫组化结果相符。结论 与小鼠自然周期相比,3种超排卵方案均使小鼠子宫内膜种植窗期整合素β3的表达明显下降,可能降低了子宫内膜容受性;与单一PMSG超排卵方案相比,GnRHa辅助超排卵方案能明显改善小鼠子宫内膜的容受性;而GnRHant辅助超排卵方案则对小鼠子宫内膜容受性的改善作用不明显。     

抑癌基因PTEN在子宫内膜异位症发生发展中的作用

目的:检测第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)在子宫内膜异位症(EMS)中的表达,探讨其在EMS发病机制中的作用. 方法: 收集EMS患者子宫内膜病灶37(卵巢巧克力囊肿20,子宫肌腺症17)例和正常子宫内膜33例,采用原位杂交技术检测PTEN mRNA在异位内膜组织中的定位和表达强度,并比较PTEN基因表达与EMS临床分型的关系. 结果: PTEN mRNA主要表达于腺体细胞的胞质中;与正常子宫内膜相比,PTEN基因在异位内膜组织中的表达显著降低(48.6% vs 93.9%, P=0.0002);PTEN mRNA的表达呈明显的周期性改变,在增殖期内膜呈低水平表达,分泌期表达增加,但这一差异仅在正常子宫内膜组织中有意义(P=0.0102);PTEN mRNA的表达水平随临床分期的增加而降低(P=0.0026);但在子宫肌腺症和卵巢巧克力囊肿组织中,PTEN基因表达水平无差异(55.0% vs 52.9%, P=0.4018). 结论: PTEN mRNA表达水平的降低可能是EMS的发病机制之一.     

功能失调性子宫出血和细胞凋亡与bcl-2及bax基因表达的关系

目的研究功能失调性子宫出血与细胞凋亡及其相关基因表达产物的关系。方法应用TUNEL技术检测30例正常月经周期的增生期子宫内膜,28例简单增生,2例复杂增生子宫内膜标本的凋亡指数（AI）。应用免疫组化方法检测bcl-2及bax基因在子宫内膜的表达。结果简单增生和复杂增生子宫内膜AI比正常增生期AI高（P〈0.05）;bcl-2基因在正常增生期表达比在简单增生和复杂增生表达略高,差异无显著性（P〉0.05）;bax基因在简单增生和复杂增生表达比在正常增生期表达高（P〈0.05）。结论功能失调性子宫出血的发病与细胞凋亡有关,且与bcl-2,bax表达相关。     

不同用药方案对小鼠种植窗期子宫内膜白血病抑制因子及胞饮突表达的影响

目的:探讨不同用药方案对小鼠种植窗期子宫内膜白血病抑制因子(LIF)和胞饮突表达的影响.方法:将12只去势雌鼠及36只雌性未孕动情期小鼠分为激素替代治疗(HRT)组、超排卵组、控制性超排卵(COH)组和对照组.采用免疫组化SP法检测小鼠种植窗期子宫内膜LIF蛋白的表达;RT-PCR法检测小鼠种植窗期子宫内膜LIF mRNA的表达;扫描电镜观察胞饮突表达的变化.结果:4组小鼠种植窗期子宫内膜LIF mRNA及蛋白的表达差异均有统计学意义(F分别为5.978,4.788,P均<0.05).与对照组相比,HRT组、COH组和超排卵组LIF蛋白及mRNA表达均降低(P<0.01);HRT组高于COH组和超排卵组(P<0.01);COH组高于超排卵组(P<0.01).HRT组小鼠种植窗期子宫内膜胞饮突的发育在形态上与对照组类似,时相上较对照组发育略延后;COH组胞饮突的发育形态上较对照组受到抑制,时相上延迟于对照组;超排卵组胞饮突的发育明显受到抑制,时相上远远滞后于对照组.结论:3种用药方案均可使子宫内膜LIF和胞饮突的表达受到影响,使内膜容受性受到损害;在对小鼠子宫内膜容受性的改善方面,HRT优于COH和超排卵,COH优于超排卵.     

Endometrial Mucin-1 and Pinopode in Peri-implantation Phase in Ovarian High Responders during Controlled Ovarian Hyperstimulation Cycles

Objective To investigate effects of ovarian high response on endometrial mucin-1 (MUC1) and pinopode in peri-implantation phase in controlled ovarian hyperstimulation (COH) cycles. Methods Ovarian high response was defined as serum E2 > 15 000 pmol/L on the day of hCG administration in COH cycle using GnRH agonist and recombinant FSH (n=8). Healthy and fertile women were used as the natural control (n=10). Endometrial biopsies were performed on the day of LH 7/hCG 7. Pinopode formation was observed by scanning electron microscope. Expression of MUC1 was detected with quantitative Real-time PCR and immunohistochemistry. Results In high response group, the lumen surface was covered with variant pinopodes and microvillous. The expression of MUC1 mRNA in high response group was lower than that in the natural control (P<0.05). Immunostaining for MUC1 protein in glandular and luminal epithelium in high response group was lower than that in the natural control (P<0.05). Conclusion Asynchronized pinopode appearance and lower expression of MUC1 during peri-implantation period were the characteristics of endometrium in high response group, which may provide a clue of decreased endometrial receptivity in the supraphysiological hormone milieu.     

错配修复基因1在新疆维吾尔族及汉族卵巢子宫内膜异位症患者中的表达与意义

目的探讨新疆维吾尔族、汉族人群中错配修复基因1(hMLH1)转录水平与卵巢子宫内膜异位症发病的关系。方法收集新疆地区维吾尔族、汉族卵巢子宫内膜异位症患者异位内膜组织(异位内膜组)、在位内膜组织(在位内膜组)以及正常子宫内膜组织(对照组),在位内膜组及对照组的子宫内膜均通过病理检查分为分泌期或增殖期。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(QRT-PCR)定量分析各内膜组织中hMLH1的表达水平。结果维吾尔族及汉族在位内膜组、对照组子宫内膜分泌期与增殖期hMLH1的表达量均无明显差异(P=0.807,P=0.956,P=0.511,P=0.286);维吾尔族和汉族异位内膜组与在位内膜组中hMLH1的表达量比较差异无统计学意义(P=0.058,P=0.854);维吾尔族在位内膜组及对照组的内膜组织中hMLH1的表达量中位数(M)分别为0.109、0.120,四分位数间距(Q)分别为0.180、0.306;汉族在位内膜组及对照组的内膜组织中hMLH1的表达量M分别为0.209、0.270,Q分别为0.286、0.309;hMLH1的表达在在位内膜组及对照组间比较差异有统计学意义(P=0.017),hMLH1的表达在维吾尔族、汉族间比较差异有统计学意义(P=0.037)。结论在位内膜组织中hMLH1的表达水平下降可能与新疆地区维吾尔族及汉族卵巢子宫内膜异位症发病有关。子宫内膜组织中hMLH1的表达水平存在民族差异。     

Association of controlled ovarian hyperstimulation treatment with down-regulation of key regulators involved in embryonic implantation in mice

The debate exists whether or not gonadotropin-releasing hormone(GnRH) analogs used in controlled ovarian hyperstimulation(COH) impair endometrial receptivity.Homeobox A11(Hoxa11),Meis homeobox 1(Meis1),cadherin 1(Cdh1),and catenin beta 1(Ctnnb1) are well known to be involved in successful implantation.In this study,the endometrial expression of Hoxa11,Meis1,Cdh1,and Ctnnb1 during the peri-implantation period was investigated in an in vitro fertilization(IVF) mouse model by real-time RT-PCR and Western blot to evaluate the relationship between Hoxa11,Meis1,Cdh1,and Ctnnb1 expression and the impact of the COH on endometrial receptivity.The mimic COH protocols included GnRH agonist plus human menopausal gonadotropin(HMG)(GnRH agonist group),GnRH antagonist plus HMG(GnRH antagonist group),and HMG alone(HMG group).The expression levels of Hoxa11,Meis1,Cdh1,and Ctnnb1 mRNA and protein were decreased in all of the COH groups.The expression levels of Hoxa11 and Ctnnb1 were the lowest in the GnRH agonist group,and those of Meis1 and Cdh1 were lower in the GnRH analog groups than the HMG group.There were positive correlations between the expression of Hoxa11 and Ctnnb1,as well as the expression of Meis1 and Cdh1 among all the groups.In conclusion,the COH protocols,particularly with GnRH analogs,suppressed Hoxa11,Meis1,Ctnnb1 and Cdh1 expression,in mouse endometrium during the peri-implantation period.Our data reveal a novel molecular mechanism by which the COH protocols might impair endometrial receptivity.     

miR-519d 过表达促使宫颈癌SiHa细胞基因表达谱发生改变

目的分析miR-519d转染前后人宫颈癌SiHa细胞基因表达谱的变化。方法向人宫颈癌SiHa细胞中转染模拟物上调细 胞内miR-519d的表达,采用人全基因组表达谱芯片筛选其对细胞基因表达谱的影响,结合生物信息学软件进行靶基因预测,确 定miR-519d的候选靶基因,采用qRT-PCR进行验证。结果miR-519d表达上调后,共筛选到差异表达基因5172个,其中上调基 因2476个,下调基因2796个。结合生物信息学软件进行靶基因预测,共确定164个miR-519d的候选靶基因。随后,对上述基 因进行KEGG信号通路分析,采用STRING和pSTIING在线数据库构建候选基因编码蛋白的互作网络、预测转录相关和物理 相关关系,发现了一些重要的节点分子。最后,采用qRT-PCR结果对部分关键基因进行了验证,与芯片结果基本一致。结论 miR-519d过表达促使人宫颈癌SiHa细胞的基因表达谱发生了显著地改变,结合生物信息学软件获得了164个候选靶基因,为 系统、全面地阐明miR-519d在宫颈癌中的作用及其分子机制提供了重要的实验依据。     

激活素A在围植入期小鼠子宫内膜的表达

目的 探讨激活素A(activin-A)在围植入期小鼠子宫内膜中表达的分布及生物学意义.方法 应用免疫组化SP法和图像分析方法检测分析孕2～6 d小鼠子宫内膜activin-A的表达情况,并以未孕动情期及假孕2～6 d小鼠子宫内膜作对照.结果 activin-A主要表达于小鼠子宫内膜的腔上皮、腺上皮和基质细胞.acti...     

Effects of a Single and Low Dose of Mifepristone on Integrin Expression in Human Endometrium During the Peri-implantation Period

Objective In order to gain further information about the mechanism of emergency contraception, during the peri-implantation period the effect of single and low dose of Mifepristone on the expression of integrin level in endometrium of healthy women were observed Materials ＆ Methods Eleven healthy women, proven fertility, were randomly divided into two groups: group LH-2 (n = 5) and LH 2 (n = 6). During the control and treatment cycle, placebo or 10 mg Mifepristone were given orally to group LH- 2 on cycle day LH- 2 or to group LH 2 on cycle day LH - 2, respectively. One endometrial tissue specimen was obtained in both the control and the treatment cycle on cycle day LH 7.In this study, the endometrial specimens were assessed by immunohistochemistry analysis to measure the change of integrin α1, α4 and β3 subunits expression on the endometrium after using Mifepristone.Results Mifepristone increased the expression of α1 and α4 subunit in glandular epithelium only in group LH- 2. The expression of β3 integrin subunit remain the same in our experiments.Conclusion Treatment with Mifepristone interferes with integrin distribution during the implantation period, which may imply that the contraceptive effect of Mi fepristone is primarily due to impaired endometrial receptivity.     

超排卵对着床的影响及中药帮得孕的改善作用

目的:观察超排卵对小鼠着床的影响和中药帮得孕的改善作用。方法:仿照临床超排卵方案,运用腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10IU,于48h后注射绒毛膜促性腺激素(HCG)10IU的方法造模。观察妊娠第8天正常组、超排卵组、不同剂量帮得孕组小鼠胚泡着床率和平均胚泡着床点数。伊文思蓝染色观察妊娠第5天子宫内膜血管通透性情况,HE染色观察妊娠第5天子宫内膜蜕膜化情况,免疫组化和Western blot方法观察妊娠第5天子宫内膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:与正常组相比,超排卵组着床率明显下降(P<0.05),与超排卵组相比,帮得孕各剂量组着床率均明显提高(P<0.05);超排卵抑制小鼠子宫内膜血管渗透性,延缓子宫内膜蜕膜化,抑制子宫内膜MMP-9表达,中药帮得孕则有利于促进子宫内膜血管渗透性、促进内膜蜕膜化、促进MMP-9表达。结论:超排卵可致着床障碍,与超排卵药物抑制血管渗透性、抑制子宫内膜蜕膜化和抑制内膜基质降解有关,帮得孕可以一定程度上降低和抵消超排卵这种不良的影响,有利于胚泡成功着床。     

子宫内膜癌患者人附睾蛋白4含量变化及其与肿瘤组织中凋亡分子表达的相关性

目的 探讨子宫内膜癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)含量变化及其与肿瘤组织中凋亡分子表达的相关性.方法 收集2015年9月至2016年9月安徽医科大学第二附属医院收治的子宫内膜癌患者38例,根据病理分期将其分为早期子宫内膜癌组(Ⅰ期)30例、中晚期子宫内膜癌组(Ⅱ~Ⅳ期)8例;另取同期在安徽医科大学第二附属医院门诊接受诊刮治疗的良性疾病患者50例作为对照组.采用电化学发光法测定HE4含量;采用荧光定量PCR法检测肿瘤组织促凋亡基因、抗凋亡基因mRNA表达量.结果 早期子宫内膜癌组和中晚期子宫内膜癌组患者血清HE4含量分别为(125.64±15.82)pmol/L、(243.25±46.83)pmol/L,均高于对照组的(57.38±6.91)pmol/L(P<0.05).早期子宫内膜癌组、中晚期子宫内膜癌组患者肿瘤组织中促凋亡基因XAF1、ITLN-1 mRNA表达量及Caspase-3蛋白表达量低于对照组,中晚期子宫内膜癌组患者以上分子mRNA表达量低于早期子宫内膜癌组(P<0.05);早期子宫内膜癌组、中晚期子宫内膜癌组患者肿瘤组织抗凋亡基因Survivin、c-myb、Bax、RLIP76、PTP1B mRNA表达量高于对照组患者,中晚期子宫内膜癌组患者以上分子的 mRNA表达量高于早期子宫内膜癌组患者(P<0.05).经Pearson检验,子宫内膜癌患者血清HE4含量与肿瘤组织促凋亡基因及Caspase-3蛋白表达量呈负相关,与肿瘤组织抗凋亡基因表达量呈正相关.结论 子宫内膜癌患者血清中存在异常高表达的HE4,且其表达量与肿瘤恶性程度直接相关.