微粒明胶固定化青霉素酰化酶性质的研究

青霉素酰化酶(FC.3.5.11)已从大肠杆菌菌株中提取出来。并被固定在微粒明胶上,用于柱式裂解10％高浓度青霉素底物,生产6-氨基青霉烷酸(6-APA)。6-APA产率84％。     

青霉素酰化酶的生产及其在制造—6APA上的应用

引言由Sakaguchi等发现的“penicin”,后鉴定为6-氨基青霉烷酸(6-APA),从而揭开了β-内酰胺类抗生素新纪元。对6-APA的兴趣是在有机化学家致力于酰化此种分子取得成功,并获得象氨苄青霉素、羟氨苄青霉素等具有更宽抗菌谱,且于口服时具有足够稳定性的各种半合成青霉素之后出现的。生产这些半合成青霉素所需关键中间体——6-APA是通过裂解青霉素C(PenG)或青霉素V(PenV)侧链后获得的。最初曾试图     

用于青霉素类及头孢菌素类生产的酶转化法

一、前言 Batchelor等(1959)分离和鉴定了青霉素母核6-氨基青霉烷酸(6-APA),通过向6-APA结构上联接不同的侧链,促使半合成青霉素类的发展,导致以天然产物青霉素G或V脱酰基作用生产6-APA方法的研究。最早用来制造6-APA的直接发酵法(主要是在青霉素G或V发酵时不加侧链前体)很不成     

青霉素V酰化酶在生产6—APA中的潜力

目前发酵生产的青霉素G(Pen G)和青霉素V(Pen V)多半是用作生产β-内酰胺中间体6-氨基青霉烷酸(6-APA)和7-氨基脱乙酰氧头孢烷酸(7-ADCA)的原料.有效、稳定的固定化青霉素酰化酶的开发,为合成具有不同抗菌性能的6-APA和7-ADCA衍生物创造了有利条件.现6-APA年产量约7500t,为此需消耗10~30t固定化青霉素酰化酶.     

电位滴定法测定青霉素G酰胺酶的酶活力

<正> 青霉素G酰胺酶是一种重要的酶催化剂,可用于由青霉素G到6-氨基青霉烷酸(6-APA)和由青霉素G到7-氨基去乙酰氧基头孢霉烷酸(7-ADCA)的反应中。6-APA和7-ADCA在医药上是半合成抗菌素的两种重要中间体,利用它们可合成一系列新的青霉素和头孢菌素。青霉素G酰胺酶的酶活力直接影响着6-APA和7-ADCA的质量和成本,因此,准确测定酶活力具有重要的意义。采用分光光     

青霉素酰化酶基因的克隆与表达

青霉素酰化酶可永解青霉素为6-APA和相应的侧链,6-APA是半合成青霉素的关键中间物,目前工业生产中已用酶法取代化学法制备6-APA,用青霉素G酰化酶或青霉素V酰化酶水解相应的青霉素.青霉素酰化酶可由各种细菌和霉菌产生,其生理功能还不清楚.这些酸的底物专一性都取决于青霉素分子的侧链.青霉素G酰化酶除了作用于青霉素G之外,还可水解各种苯乙酰衍生物.用7-ACA代替6-APA作为底物,对青霉素G酰化酶活力无明显影响.大肠杆菌和雷氏变形杆菌的青霉素G酰化酶都由α、β两个亚基组成,亚基重组试验表明α亚基决定酶的底物专一性,而活性中     

Temocillin—从发现到生产

40年前,β-内酰胺类抗生素在治疗感染症中的位置已被确定,现在它们所占费用是抗生素费用160亿美元的一半以上。目前使用的约60个β-内酰胺抗生素是由6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基头孢烷酸(7-ACA),经氨基酸化制备得到。由于6-APA和7-ACA的可用性,酰化工艺的简单性,以及抗菌性能可变性导致半合成青霉素和头孢菌素的广泛使用。 6-取代青霉素 Beecham对青霉素的兴趣是众所周知的,其中广泛使用的羟氨苄青霉素和替卡西林是该公司的实验室在1957年6-APA分离后首次制成的。1970年该公司决定了从x替     

青霉素 V 酰化酶产生菌液化隐球菌生理特性的研究

青霉素-V-酰化酶(PA)是将苯氧甲基青霉素水解为6-氨基青霉烷酸(6-APA)的酶,已在不同类别的微生物,其中也包括在酵母中发现。Batchelor 等报道了隐球菌、酵母、毛孢子菌菌株产生 PA,Murao 报道了球拟酵母、串酵母,Vandamme 和 Voets 报道了红酵母菌菌株。现在对酵母培养物产生 PA 的兴趣绝非偶然,因酵母生长迅速,生成大     

青霉素酰化酶和β-内酰胺酶

青霉素酰化酶一、引言微生物酶已常用于改造抗生素。抗生素的微生物生物转化能由广泛的降解反应至很局限的特异性反应。某些反应可形成有用的化合物,以此应用于半合成抗生素或新抗生素的工业生产。青霉素生物转化至6-氨基青霉烷酸(6-APA)和侧链酸,是最重要反应之一。水解青霉素产生6-APA 的微生物酶,称为青霉素酰化酶(Penicillin acylase,以下简称 PAase),又称青霉素酰胺酶(Penici-llin amidase)、青霉素酰胺水解酶(Penici-llin amidohydrolase),广泛存在于细菌、放线菌、酵母菌和真菌中。     

国外用固定化酶制备6-氨基青霉烷酸概况

6-氨基青霉烷酸(6-APA)是半合成抗菌素的母核。在6-APA的氨基上用化学方法加上合适的侧链,可获得高效、广谱、服用方便的半合成抗菌素,例如氨苄青霉素、甲氧苯青霉素、邻氯苯甲异噁唑青霉素、苯甲异噁唑青霉素和羧苄青霉素等。由于这些新青霉素在临床上广泛应用,使6-APA需要量日益增长。     

汞溶液滴定6-氨基青霉烷酸

6-APA 是半合成青霉素的重要工业原料,因此必须要有一种正确分析纯6-APA 的方法。碘量法是常用的方法,此法与供测定青霉素的那些碘量法相类似,其效价根据(第一次所测未处理溶液及第二次所测碱水解溶液)二次滴定的差值而得,如果除6-APA 外,尚有青霉素,则可用提取法把青霉素除去。lvashkiv 测定6-APA,是把6-APA 转变成α-苯氧青     

固定化活细胞生产抗生素

一、引言目前商品化抗生素大约有150个,尽管人们已经知道许多重要抗生素的化学合成途径,但是并未采用化学合成方法来制备(结构简单的氯霉素和杀细胞素除外)。这是因为生物合成的那些化合物结构复杂,需多步化学合成反应,太不经济。关于半合成新青霉素迅猛发展也并非起始于青霉素母核6-氨基青霉烷酸(6-APA)化学合成途径的发现,而是不久发现产黄青霉菌在特定发酵条件下分泌6-APA,由6-APA再转化成各种新青霉素。大规模地化学合成抗生素类事实上是     

用离子交换树脂为载体固定化青霉素酰化酶制备6-氨基青霉烷酸的研究

6-氨基青霉烷酸(6-APA)是半合成抗生素的母核。在 6-APA的氨基上引入不同侧链,可获得高效、广谱、服用方便的各种半合成抗生素。目前6APA的制备方法有化学法和固定化酶法。固定化酶法是将青霉素酰化酶固定在水不溶性载体上,直接用于裂解青霉素G生成6-APA。1973年英、美、西欧等国已应用固定化酶生产6-APA。本研究以大孔离子交换树脂为载体使青霉素酰化酶固定化。大孔离子交换树脂具有大孔径、高比表面积、高交换率、耐磨性好等优点。本文报导初步研究结果。 材料与方法     

产生酰化酶菌种的选育

青霉素酰化酶(penicillin acylase)是半合成抗菌素工业上的一种重要酶类,它可用于青霉素或重排酸(7-苯乙酰氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸)的裂解,以生产6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA);也可用于缩合制取氨苄青霉素、羟氨苄青霉素及其他半合成青霉素或头孢菌素。但目前国内广泛使用的产生酰化酶的菌种,酶产量较低,因此我们开展菌种选育工作。以大肠杆菌B-EC-1及B-EC-2二株为出发菌株,经紫外线(UV)诱变二次累积处理,选育到1.236菌株,使酰化酶产量由原来的24.84单位/     

用柑桔黄单孢菌(Xanthomonas citri)的α-氨基酸酯水解酶合成羟氨苄青霉素

本文报道,利用不含青霉素酶的柑桔黄杆菌(X Citri,K24)突变株,将D-α-对-羟基苯甘氨酸甲酯(HPGME)和6-APA,在实验条件下,可把90％以上所投入的6-APA,转化为羟氨苄青霉素。各种最适条件的实验结果如下: 一、通过减少离子强度提高羟氨苄青霉素的产率含有HPGME盐酸盐(20mg/ml)、6-APA(10mg/ml)、磷酸钠缓冲液(100mM)和柑桔黄杆菌(X.Citri.K24)的洗涤细胞(35mg/ml)的反应混和物,于20℃搅拌,保温培养。反应约6小时后,反应液浓度达到高峰,这时转换6-APA为羟氨苄青霉素的     

酶法半合成青霉素与头孢菌素

自从1950年 Sakaguchi 和 Murao发现青霉素酰化酶以来,随着对其研究的不断深入,利用青霉素酰化酶制备6-氨基青霉烷酸(6-APA)已经工业化。1960年Rolinson 等及 Claridge 等发现大肠杆菌(E.coli)或产碱杆菌(Alcalig-enes faecelis)的青霉素酰化酶能从6-APA 和苯乙酸合成青霉素 G;Kaufmann     

6—APA羧化生成8—HPA的动力学研究

在工业化生产青霉素50年之后,包括青霉素在内的β-内酰胺类抗生素仍然是最重要的一类抗生素,它大约占据65%的抗生素市场,而其中的60%以上来源于青霉素G或V.青霉素是由丝状真菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)用补料分批发酵方法生产的,这一过程同时产生相当数量的几个生物合成途径副产物.在这些副产物中,6-氨基青霉烷酸(6-APA)和8-羟基青霉咪唑酸(8-HPA)是普遍存在的两种,即使培养基中存在侧链前体也照样生成.6-APA是在异青霉素N酰胺基水解酶和乙酸辅酶A:异青霉素N酰基转移酶所具有的青霉素酰胺酶活性的作用下生成的.生成的6-APA一部分被分泌到细胞外,并转化为8-HPA,这一反应涉及氨基的羧化以及随后将β-内酰胺环扩大成咪唑烷酮环或它的咪唑啉互变异构体,由此失去抗生素活性(图1).8-HPA不能再进入青霉素生物合成途径,因而是一个不希望生成的副产物.     

头孢菌素和青霉素生产菌的基因工程

抗生素中销售额高的多数品种是头孢菌素类和青霉素类抗生素,它们有良好的抑制细菌细胞壁合成作用。头孢菌素类是把7-ACA或7-ADCA作为起始原料,青霉素类是以6-APA为起始原料合成的。7-ACA和7-ADCA是从产黄顶头孢霉(Acremoniumchrysogenum,原名为Cephalosporiumacremonium)产生的头孢菌素C(CC)和去乙酰头孢菌素C(DAC)通过化学法或化学/酶法制造的,而6-APA是由产黄青霉产生的青霉素G(PG)采用酶法制造的。     

固定化酰化酶在青霉素裂解反应中的影响因素分析

在酶促脱酰法裂解青霉素工业钾盐生产药用中间体6-氨基青霉烷酸(即6-APA)的反应杌理中,在不同反应物浓度、pH及温度下将直接影响酰化酶的活性及其使用寿命。本文通过多组实验进行比较分析摸索出酰化酶的最适宜的工艺条件以达到延长酰化酶的使用寿命,降低6-APA的生产成本的目的。     

测定青霉素发酵液中6-APA含量的简速方法

青霉素发酵液中除含有苄青霉素外,还含有青霉素母核6-氨基青霉烷酸(6—APA)以及青霉素的降解物,其中6-APA能参与青霉素分析方法如碘量法及羟胺法的反应,从而使青霉素测定结果偏高,因此有必要测定发酵液中6-APA的含量以获得准确的青霉素效价。我们利用Technicon AAⅡ型青霉素效价自动测定仪进行测定,从而可使用与青霉素效价测定同一套仪器和试剂,不仅可得到稳定的结果,而且具有操作简速、管理方便的优点。