神经干细胞的来源

神经干细胞是近年来神经科学领域研究的一个热点。神经干细胞可来源于胚胎干细胞和成年干细胞，前者包括早期胚胎细胞和胎儿神经组织细胞，由于从胚胎获取干细胞面l临伦理学的束缚，从成年来源的神经干细胞将是未来临床应用更具可行性的途径。成年来源的神经干细胞包括存在于成年神经组织中的干细胞和从其他组织中分化得到的干细胞，其中骨髓基质细胞具有多分化潜能，在适当的条件下可以诱导分化出神经干细胞，目前备受关注。     

骨髓中一类新细胞群——神经组织定向干细胞的确立☆

背景：骨髓间充质干细胞和造血干细胞具有分化为神经类细胞的潜能已得到共识。另有研究者认为骨髓中除骨髓间充质干细胞和造血干细胞以外，还寄居着CXCR4阳性的组织定向干细胞，包括骨骼肌、心、肝及神经组织定向干细胞。 目的：实验拟进一步证实神经组织定向干细胞寄居于骨髓，并寻求确立神经组织定向干细胞分离、培养的新方法。 设计：开放性实验。 单位：解放军第二军医大学解剖学教研室。 材料：所用成年清洁级SD大鼠由解放军第二军医大学动物中心提供。DMEM/F12，B27，N2均购自Invitrogen公司；bFGF源于CytoLab Ltd；EGF源于Invitrogen公司；Nestin、CXCR4，β-Tublin Ⅲ，神经胶质纤维酸性蛋白等一抗为Santa Cruz公司兔抗鼠多克隆抗体；MAP2ab（Clone11-5B），CNPase（Clone AP20）为NeoMarkers公司小鼠抗大鼠单克隆抗体；荧光（FITC，Cy3）标记试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；免疫组化试剂盒购自Vector Laboratories公司。NycoPrepTM分离液（1.077A）购自Axis-Shield 公司。 方法：实验于2004-01/2006-12在解放军第二军医大学组织工程研究所完成。取SD大鼠双侧股骨及胫骨，冲洗骨髓腔，经NycoPrepTM分离液分离单核细胞层，DMEM/F12（1∶1） 无血清神经干细胞培养液（内含2%B27，1%N2，20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子， 20 μg/L 表皮生长因子,1×105 U/L青霉素, 100 mg/L链霉素），通过先贴壁、后悬浮的方法从骨髓中分离、培养单克隆生长的神经组织定向干细胞。 主要观察指标：通过免疫细胞化学法检测神经组织定向干细胞细胞球CXCR4和nestin蛋白，以及细胞球自然分化后神经元以及神经胶质细胞的标志蛋白。 结果：①神经组织定向干细胞细胞球表达神经干细胞标志蛋白nestin和组织定向干细胞标志蛋白 CXCR4。②神经组织定向干细胞细胞球在含15%胎牛血清的DMEM培养液中可自然分化，分化细胞呈梭形或多角形，有2~5个细胞突起，免疫荧光检测显示神经元标志蛋白β-tublinIII及MAP2ab，以及神经胶质标志蛋白CNPase和神经胶质纤维酸性蛋白阳性。 结论：骨髓中存在神经组织定向干细胞，可自然分化为神经元样细胞及神经胶质样细胞。     

神经干细胞与基因治疗

作为神经组织发育和自我修复的细胞学基础，神经干细胞已成为中枢神经系统损伤和疾病研究的焦点。神经干细胞领域的进展如生物学特性研究以及神经干细胞建系成功等为神经干细胞的临床应用奠定了理论基础。近年来，随着分子生物学、分子遗传学的发展，人们对多种神经系统疾病的相关基因基础有了新的认识，加上基因工程技术的突破，极大地推动了神经系统疾病的基因治疗进展。神经干细胞的临床应用与基因治疗的有机结合为多种神经系统遗传性和获得性疾病的治疗带来了新的希望。     

神经干细胞在神经系统疾病中的应用

背景：神经干细胞的临床应用与基因治疗的有机结合可用于治疗多种神经系统遗传性和获得性疾病,但神经系统疾病多种多样,不同疾病神经组织内环境也不同,它们均影响神经干细胞的治疗效果。神经干细胞基因治疗中,如能同时转入多种外源性基因,让其相互作用及调节,就能更有效地促进神经组织不断再生。 目的：文章就神经干细胞在神经系统疾病方面的应用进行综述。 方法：应用计算机检索Medline数据库(2000-01/2009-08),以“Neural stem cells,Gene,Nervous system diseases”为检索词;应用计算机检索清华同方数据库(2000-01/2009-08),以“神经干细胞、基因、神经系统疾病”为检索词。 结果与结论：计算机初检得到88篇英文文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关的20篇,内容重复性的研究28篇,共保留40篇文献进行综述。神经干细胞作为一种新型的治疗手段,已用作供体细胞或转基因载体,对脑血管病、脑损伤性疾病、脊髓损伤、神经变性病、脑肿瘤、遗传代谢性疾病等治疗均取得了一定效果,但神经干细胞增殖、分化、迁移调控机制的基础性研究还有许多关键问题没有解决,不同疾病神经组织内的微环境亦影响着神经干细胞的治疗。     

神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究进展

神经干细胞(neuralstemsells,NSCs)具有多向分化潜能和自我更新能力及低免疫源性,从人和动物的胚胎和成体神经组织均可获得神经干细胞,体外培养或定向诱导分化后可做为移植治疗神经系统疾病的理想细胞来源。通过各种手段使内源性神经干细胞与移植的神经干细胞分化为适当的神经细胞来重建受损的神经结构,从而促进丧失的神经功能恢复。神经干细胞向病变部位的趋向迁徙性使其成为理想的药物与基因载体用于治疗恶性肿瘤和一些遗传性疾病。神经干细胞移植治疗神经系统疾病具有广阔的应用前景。     

神经干细胞的研究进展

干细胞（stem cell，SC）是上世纪生物医学领域的重大发现，干细胞的概念是Evans在20世纪80年代提出，是指有多种分化潜能和自我更新能力的细胞。按分化潜能的大小，干细胞可分为三种类型：全能干细胞（胚胎干细胞）、单能干细胞、多能干细胞。神经干细胞即为多能干细胞，指可生成神经组织或起源于神经系统，具有自我更新能力并具有演化为不同成熟细胞潜能的细胞，90年代Roybholds等怛。从成年鼠脑纹状体中首次分离出神经干细胞（neural stem cell，NSC）。随着对神经干细胞的深入研究，突破了以往一直认为成年哺乳动物神经元不能再生的观念，而且通过基因修饰还可用于神经系统的基因治疗，表达外源性的神经递质、神经营养因子及代谢性酶，为许多难治性神经系统疾病开辟了一条全新的治疗途径。     

神经干细胞工程化的研究进展

神经干细胞具有自我更新能力和多分化潜能，随着神经干细胞分离培养技术日渐成熟和深入，许多研究者对神经干细胞进行人工改造，产生了工程化的神经干细胞，如可示踪的神经干细胞、有治疗基因的神经干细胞、把神经干细胞改造成永生化的神经干细胞。文章对神经干细胞的基本特性及近年来神经干细胞工程化的研究进展做一综述     

神经干细胞体外长期培养和外源基因表达

目的：探讨胚胎大鼠神经干细胞的体外培养条件及外源基因的表达效率。方法：从胚胎大鼠脑皮质中机械分离细胞，应用N2培养基进行培养和扩增，采用免疫组织化学方法进行鉴定，应用Ad5βgal重组腺病毒载体检测神经干细胞表达外源基因的能力。结果：从胚胎大鼠的大脑皮质中成功分离培养出神经干细胞，在悬浮状态下培养形成典型的神经球并表达波形蛋白和巢蛋白。近100％的细胞可被Ad5βgal基因感染并表达lacZ基因。细胞可用机械方法传代，常规冻融和复苏，体外长期培养可达3个月。结论：神经干细胞可在体外长期稳定培养和传代，能表达βgal外源基因，是细胞治疗和基因治疗的良好载体。     

骨髓间质干细胞及其移植用于治疗颅脑损伤的研究进展

中枢神经系统损伤后造成的神经功能缺损如何恢复一直是神经科医师的难题。一直以来，神经组织被认为是终末分化的组织，一旦损伤则无法再生。近来，随着神经干细胞的发现及其生物学特性和功能的深入研究表明，神经组织也具有再生和自我修复的能力。神经干细胞作为神经修复的细胞学基     

成体神经干细胞诱导方案研究进展

近年来,研究人员致力于构建遗传和表型稳定的神经干细胞系,旨在恢复神经组织不可逆转的功能丧失从而满足临床需求。其中,成人体内维持其多能状态的干细胞也成为研究的焦点之一。随着诱导多能干细胞和体细胞直接转分化为所需细胞类型等技术的发展,基于使用来自胚胎或胎儿神经组织的同种异体神经干细胞的研究方法逐渐成为过去。本文围绕诱导干细胞和重编程体细胞的多能状态维持及诱导神经干细胞的实验方案做一综述。     

神经干细胞条件培养液对脊髓神经组织细胞生长的作用

目的 探讨不同浓度神经干细胞条件培养液对体外培养脊髓组织中不同细胞成分生长的影响.方法 从胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞;从胚胎脊髓中分离脊髓神经组织成分.采用免疫组织化学方法对分离培养的神经干细胞及培养的脊髓神经细胞进行染色鉴定.将脊髓神经组织细胞悬液置于不同浓度的神经干细胞条件培养液中培养.分析不同浓度的干细胞条件培养液对不同细胞成分生长的影响.结果 与对照组比较,30%及50%浓度的神经干细胞条件培养液明显促进人脊髓神经元的生长,而其它浓度条件液对胶质细胞生长作用较强.结论 人胚胎神经干细胞条件培养液对体外培养的脊髓神经元或胶质细胞促生长作用的差异与其浓度有关.     

脑组织移植和神经干细胞研究进展

综述了近年来广泛开展的神经组织和细胞移植的各种主要方法及其进展。着重对神经干细胞这一神经科学的前沿课题进行了详细的复习。并对神经干细胞的研究方法,神经营养因子和神经干细胞的关系,神经干细胞的分化诱导及共临床方面的应用前景作了阐述。     

重组大鼠质粒pEGFP-GDNF的构建及大鼠胚胎神经干细胞转染的研究

目的 探讨携带GDNF基因的神经干细胞表达载体的构建方法。方法 采用RT-PCR方法从大鼠胎脑组织总RNA中扩增出该基因的全序列cDNA，并克隆到增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中，经酶切鉴定及测序分析对重组质粒pEGFP-GDNF作进一步鉴定。采用阳离子脂质体将重组质粒pEGFP-GDNF转染至鼠胚胎神经干细胞。结果 大鼠GD-NF cDNA已正确地克隆到真核表达载体pEGFP-C1中，而构建成重组大鼠质粒pEGFP-GDNF，GDNF基因在细胞中可稳定表达。结论 神经干细胞可直接作为基因靶细胞，能被GDNF真核细胞表达载体pEGFP-GDNF有效的感染。     

携带神经干细胞肌基膜管组织工程支架中神经干细胞的存活分化

摘要 背景：多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,肌基膜管具有良好的细胞、组织相容性和降解性,那么能否将二者结合起来构建一个新的神经组织工程支架？ 目的：以神经干细胞为种子细胞,以肌基膜管为支架,观察携带神经干细胞的肌基膜管组织工程支架中神经干细胞的存活与分化情况。 方法：体外分离培养大鼠神经干细胞,并进行鉴定。用化学萃取方法制作去细胞骨骼肌基膜管支架,将神经干细胞移植入肌基膜管支架培养7 d后,用免疫组织化学方法检测神经干细胞的存活及分化情况,扫描电镜观察其超微结构。 结果与结论：神经干细胞分离培养第5天,Nestin免疫荧光染色可见大量神经球。加血清诱导神经干细胞分化至7 d,进行抗NF、抗GFAP免疫荧光染色,镜下可见NF、GFAP阳性细胞,证明培养的神经干细胞具有多项分化潜能。苏木精-伊红染色法显示肌基膜管中肌细胞成分已消失,肌基膜管支架内主要是大致平行的管道。携带神经干细胞的肌基膜管组织工程支架免疫荧光染色证明,神经干细胞在支架内仍具有干细胞特性,并可分化为神经元和神经胶质细胞。扫描电镜显示神经干细胞可以稳固地贴附在肌基膜管内,提示制备的神经组织工程支架具有良好的生物相容性,可以进行体内移植治疗脊髓损伤等神经系统疾病。 关键词：肌基膜管;组织工程支架;神经干细胞;移植;脊髓损伤 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.47.003     

神经干细胞超顺磁性氧化铁纳米粒子标记和体内MRI示踪

神经干细胞（neural stem cell，NSC）是当今医学的前沿课题，困扰其临床应用的一个难题是如何对移植进入体内的神经干细胞进行监测，观察其存活和迁徙的情况。在中枢神经系统的不同病理、生理条件下，移植的神经干细胞有着不同的迁徙和分化能力，对干细胞这一特性的研究目前多为在移植后的一定时间内处死实验动物，对神经组织进行切片。而这些侵袭性的方法，不能对神经干细胞在同一动物体内的迁徙、增殖情况进行动态的观察，故需要非侵袭的手段来对移植入体内的神经干细胞进行监测。     

神经干细胞及其在中枢神经系统疾病中的应用

神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)的发现和分离成功 ,脑组织具有自我修复的潜能 ,这对“神经组织损伤不能再生”的传统观念提出了挑战。NSC就是神经系统自我修复的细胞学基础 ,NSC的生物学特性 ,分离和增殖、分化及其调控 ,已成为神经组织移植治疗中枢神经系统疾病和神经损伤修复的研究焦点 ,动物实验研究为神经干细胞移植的临床应用提供了基础。一、神经干细胞、祖细胞和神经前体细胞的概念1 992年Reynolds等[1] 从胚胎鼠脑的纹状体区 ,首次分离出能在体外持续增殖且具有向神经元及星形胶质细胞分化潜能的细胞群 ,这些细胞群具有干细胞…     

腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP构建及其在神经干细胞中的表达

摘要 目的 研究腺病毒载体Ad-BDNF -EGFP的构建及在神经干细胞（NSCs）中的表达。方法 通过RT-PCR从在大鼠的海马中获得BDNF基因,通过基因克隆以及HEK293包装,获得了含增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF两种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在。转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆。结果 荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF, 72h的含量达到最高值,为12.78ng/ml;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂。结论 腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病莫定了基础。     

神经干细胞移植在脑梗死治疗中的应用研究进展

神经细胞一经损伤或死亡即不可再生,这使神经系统损伤后的修复相当困难,现行治疗方案远不能满足临床需要。神经干细胞的发现为神经系统疾病的治疗带来了新的希望。神经干细胞是指一类可以自我更新,同时具有分化为神经系统各类细胞之潜能的细胞,自胚胎期和成年哺乳动物的神经组织中皆可分离出。自20世纪90年代以来,对神经干细胞的研究逐渐活跃,并取得多项成就。当前,对神经干细胞的分离、培养、鉴别及分化调控正成为细胞生物学以及整个生命科学的研究热点。在脑卒中患者中,约75%为脑梗死。临床治疗药物,包括改善脑循环、促进脑代谢、抗凝及脱…     

神经组织工程研究进展

组织工程近年来不仅在软骨、骨、皮肤、肌腱、血管组织等方面取得了蓬勃发展,而且随着可降解材料的研制和开发、神经干细胞研究的深入,神经组织工程研究也取得了一定的进展。本文就神经组织工程中种子细胞、支架材料和细胞因子等方面的研究作一综述。种子细胞种子细胞的培养是组织工程的基本要素,细胞主要来源于自体、同种异体、异种组织细胞等。神经组织工程的种子细胞主要为雪旺细胞和神经干细胞。1.雪旺细胞雪旺细胞(Schwann cells,SCs)是周围神经的主要结构和功能细胞,是周围神经组织工程研究的重要种子细胞。SCs在周围神经修复中起着…     

神经干细胞及其在神经科学领域应用展望

目前已经从啮齿类动物及人的脑和脊髓内分离出神经干细胞。生长因子FGF - 2和EGF是神经干细胞增殖的主要分裂源 ,而干细胞分化则受其起源、培养条件、各种细胞因子等调控 ,实验发现可以用后天信号操纵神经干细胞的分化以期获得目的神经生化表型。近来在成年人脑中发现干细胞并且成功建立了永生化细胞系 ,极大地鼓舞了人们设想内源性细胞移植及发展新的有前途的基因治疗载体 ,为神经组织的结构和功能重建提供了新的手段 ,具有广阔的应用前景。