HRP—SPA在兽医临床诊断上的应用

葡萄球菌A蛋白(SPA)具有与人和多种哺乳动物血清中IgG分子Fc段高度亲和的特异性。可用同位素、荧光素、铁蛋白、过氧化物酶标记SPA,而不影响天然蛋白质的生物学特性。国外自1977年开始将辣根过氧化物酶(HRP)标记的SPA(简称HRP—SPA)用于间接免疫酶染色以来,引起了许多医学工作者的极大兴趣。他们把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验在多杀性巴氏杆菌分型上的研究

近年来,国内外对金黄色葡萄球菌A蛋白(简称SPA)及其在免疫学和血清学方面的应用已进行了广泛研究。SPA与IgG的Fc段结合后,有抗体活性的Fab段暴露于SPA的表面,当有特异抗原存在时,则可发生协同凝集反应。根据这一原理,在国外,已广泛应用SPA菌制剂进行细菌的分群(型)和鉴定。如Kronvall(1973)的肺炎球菌快     

葡萄球菌蛋白A(SPA)的性质与应用

葡萄球菌蛋白 A(StaphylococcalProtein A,简称 SPA)是大多数金黄色葡萄球菌细胞壁所特有的一种成分。它具有能与人及多种哺乳动物血清中 IgG 的 Fc 段发生非特异性结合,且不影响抗体与抗原相互反应的特性。由于 SPA 的此种特性,近年来,国内外在细菌、病毒等病原的快速诊断与分型和肿瘤的研究以及免疫学基础理论研究方面,均有广泛应用。一是以 SPA 作载     

葡萄球菌A蛋白及其在免疫学中的应用

葡萄球菌A蛋白(StaphylococcalProtein A,简称SPA)是多数金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分,至今未发现其和致病性有明显的关系,具有与人及多种哺乳动物IgG的Fc段非特异性地结合的特性,这就弓f起了医学及生物科学界的极大重视。现在以SPA为指示系统建立了许多特异、敏感、快速的检测抗原或抗体的方法,应用范围也日益扩大。一、SPA的性质:SPA首先由Ver-wey     

SPA在免疫学上的研究

SPA(葡萄球菌A蛋白)是多数金黄色葡萄球菌细胞壁的主要成分，它能与正常人和多种哺乳动物IgG(免疫球蛋白G)呈非特异性(先天遗传比较初级的识别功能)结合出现沉淀“假免疫反应”。与之结合的IgG仍保持抗体。SPA生物学活性十分广泛，包括与IgG的FC(可结晶片段)结合，固定补体激活B(囊依赖淋巴)细胞，抑制K(荚膜抗原)细胞的ADCC(抗体依赖性细胞介异细胞毒)。     

应用固相免疫电镜技术检查猪轮状病毒

固桐免疫电镜技术是把抗体固定在固相载体上,在悬浮样品中捕捉相应的抗原(病毒粒子),便于在电镜下观察和鉴定。此法优点在于图像背景比较清晰,无非特异性杂质,病毒粒子容易被发现。尤其近年来,将金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)应用在固相免疫电镜技术上,克服了抗血清(抗体)直     

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色，阳性者出现红色斑点，整个试验过程仅需5min即可判断结果；与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应；纯化PRRSV抗原的最低检测量为0．0553mg／mL，即55．3ng／点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测，两种方法的符合率达98％。     

抗赭曲霉毒素A抗体的研制与鉴定

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A.简称OA)与牛血清白蛋白(BSA)结合后,成为半抗原载体复合物,即为一种很好的抗原,用这种人工结合抗原与佐剂混合免疫家兔,便可产生抗OA的抗体,这种抗体对OA具有特异性。用ELISA检测抗体的灵敏度为2.5ng/ml的OA检样。本文主要介绍了抗原的偶合,免疫血清的制备及抗体的效价滴定。     

不同来源标准抗原对H5-4抗体检测结果的影响

为了分析不同来源抗原对各鸡种抗体效价的影响,找出适合特定品种的抗原,提高鸡的免疫活性,试验以35～52日龄健康青脚麻鸡、三黄鸡及53～70日龄健康雪山草鸡、雪山麻鸡、雪山黄鸡、乌骨鸡为研究对象,按照1‰比例从免疫后的健康鸡群中随机采集血样,并采用血凝抑制试验利用A公司和B公司的抗原检测样本血清抗体效价。结果表明:来自A公司的抗原检测出的样本血清抗体效价平均值接近于实际值;两种抗原在35～52日龄青脚麻鸡和三黄鸡的抗体效价检测中差异不显著(P0.05),但B公司的免疫合格率显著高于A公司(P0.05);除53～61日龄雪山草鸡外,来自A公司的抗原检测出的样本血清抗体效价免疫合格率显著高于B公司的抗原(P0.05)。说明B公司的标准抗原适合35～52日龄的青脚麻鸡和三黄鸡,A公司的标准抗原合适其他日龄段各品种的商品鸡。     

应用“协同凝集试验”检验盐湿皮张炭疽病皮的实验报告

我所与遵义医学院微生物教研室合作,采用国内外比较先进的金黄色葡萄球菌A蛋白免疫技术的协同凝集试验法,检验炭疽病皮张。此方法具有特异性商、敏感性强、反应显现快、操作简便、不受器械、场地的限制、快速、易于推广等优点。经我所结合进口皮张和少量其他畜产品(山羊尾、马皮、马身毛)的检疫进行小批量试验,获得了满意的结果。国内开展金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)的研究始于1979年。几年来应用SPA的免疫学特性,根据抗原抗体的特异性,以高度免疫的相应抗血清进行协同凝集试验(CoA),已被广泛应用于细菌、病毒、螺旋体、立克次氏体等病原的鉴定和某些传染病的早期快速诊断,但在兽医方面报道甚少。近来我所闲CoA法检验盐湿皮张和一些畜产品的炭疽病皮,还是初步尝试。     

SPA诊断鸡传染性支气管炎

SPA是金葡萄菌细胞壁抗原的主要成分。目前已知在90%以上的金葡萄菌中均含有这种成份。但不同菌株产生SPA的量相差十分悬殊,且只有金葡萄菌含之,表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌不含SPA。SPA能同人类和多种哺乳类动物的IgG产生沉淀反应。SPA具有天然地和人类及其它一些哺乳动物IgG分子Fe段结合的能力,而不影响该抗体与抗原的反应性。应用这一特性,我们对标准毒株:IBV_(M_(41))、IBV_(M_(21))周、IBV_(H_(52)_、IBV_(H_(120))分别作试验,其结果均为阳性。对照组均为阴性。本试验和IBV在鸡胚内对B(NDV—B)干扰试验,电镜观察,对流免疫电泳实验结果取得一致。一、材料与方法一、标准毒株来源:(一)IBV_(H_(120))、IBV_(H_(52))由上海农科院畜牧兽医研究所引入。     

金黄色葡萄球菌蛋白A的提取、纯化及鉴定

为了获得纯度高、活性好的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),取改良营养肉汤培养基上生长18h的金黄色葡萄球菌培养物,采用溶菌酶裂解细胞壁释放蛋白质,用磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶解后转入透析袋透析,透析物用小鼠IgG-sephrose4FF亲和层析柱纯化,采用二喹啉甲酸(BCA)法测蛋白质浓度。结果表明:SPA浓度为0.933mg/mL;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果在42ku处有明显的电泳条带,蛋白免疫印迹(Western-blot)进一步证实小鼠IgG与SPA在42ku处发生较强的反应;以SPA为抗原,提纯的小鼠IgG为样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测,结果小鼠IgG稀释到1∶25600时仍能与SPA结合,说明提取的SPA活性较高。     

猪圆环病毒抗原表位肽免疫层析试纸条的研制

猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus type 2,PCV2)的感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome,PMWS)的发生密切相关。为快速便捷地检测猪圆环病毒2型抗体,本次试验主要采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,运用金黄色葡萄球菌蛋白A蛋白(Staphylococal Protein A,SPA)作为标记蛋白制备金标垫,分别以猪圆环病毒抗原表位肽和SPA免疫兔血清纯化IgG作为检测带(T带)与质控带(C带),经多次重复试验,分别确定了胶体金的最佳标记浓度、最适pH、重悬液和样品垫处理液的最佳配方以及检测带(优势抗原表位肽)和质控带(多抗IgG)的最适包被浓度,最终装配成抗体检测试纸条,用以检测已知的PCV2阳性血清和阴性血清,验证其检测的敏感性、特异性与稳定性。结果表明,经纳米粒度仪检测可得知胶体金颗粒大小在10 nm～14 nm之间。用SPA标记胶体金的最适pH为6.0,最佳标记量为7μg/mL。检测带和质控带的蛋白包被浓度均为1mg/mL。经验证,该试纸条不同批次间以及同一批次内重复性较好,具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,能够准确检测猪血清样品中的抗体水平,可以进一步评价猪圆环病毒病疫苗的免疫效果。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

协同凝结试验快速检测轮状病毒抗原

某些金色葡萄球菌具有A蛋白(SPA),能与多种动物的IgG的Fc端结合而不影响Fab端与相应抗原结合的特异性。结合有SPA的IgG与相应抗原结合形成肉眼可见的凝结块,这种试验称为协同疑结试验。我们用该法检测动物及人的轮状病毒抗原,并与     

免疫或人工感染鸡副嗜血杆菌发生的血清学应答

免疫或人工感染鸡副嗜血杆菌(Hpg)血清变异型A或C的鸡发生的血清学应答可用特异性的血球凝集(HA)抗原和普通的HA抗原进行检查。免疫或人工感染Hpg血清变异型A的鸡能产生针对Hpg血清变异型的特异性的HA抗原和Hpg普通的HA抗原的血凝抑制(HI)抗体;大部分鸡用血清变异型C免疫后第3周能检出两种HA抗原型的HI抗体,以后滴度逐渐下降;大多数鸡人工感染血清变异型C只产生对普通HA抗原的HI抗体,很少的鸡产生对血清变异型的特异性的HA抗原的HI抗体。     

免疫亲和色谱在动物源性食品兽药残留分析检测中的应用

1概述免疫亲和色谱(immnuoaffinity chromatography,IAC)也叫免疫亲和层析,是色谱技术的一种,是一种利用抗原抗体特异性可逆结合的技术。主要原理是根据抗原抗体的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。具体过程是将抗体与惰性微珠共价结合,然后装柱,将抗原溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,     

口蹄疫疫苗非抗原蛋白对146S抗原免疫效果的影响

为探究非抗原蛋白对口蹄疫病毒A型(FMDV-A) 146S抗原免疫效果的影响,本研究以小鼠和猪为试验动物,分别制备5组小鼠注射用样品:A组(3μg 146S抗原)、B组(3μg 146S抗原+25μg非抗原蛋白)、C组(3μg 146S抗原+50μg非抗原蛋白)、D组(3μg 146S抗原+100μg非抗原蛋白)及E组(空白对照,PBS);同时制备4组猪注射用样品:A组(18μg 146S抗原)、B组(18μg 146S抗原+400μg非抗原蛋白)、C(18μg 146S抗原+4 000μg非抗原蛋白)及D组(空白对照,PBS)。免疫接种试验动物后,通过淋巴细胞增殖试验及实时荧光定量PCR评价比较不同疫苗样品组小鼠产生的细胞免疫应答水平,同时通过液相阻断ELISA方法检测、评价各试验组动物(小鼠和猪)产生的体液免疫应答水平。小鼠试验结果显示,在免疫后3个检测时间点内,4个试验组中C组的平均抗体水平最高,平均抗体效价分别为4.13、5.83和5.50,而D组的抗体水平最低,平均抗体效价分别为3.46、5.16和4.46;C组细胞增殖能力及Th-1型细胞因子IL-6、IFN-β和TNF-αmRNA表达量均高于其他组。猪试验结果显示,A组和B组间平均抗体水平差异不显著(P>0.05),但A组和B组的平均抗体效价均极显著高于C组(P<0.01)。综合上述结果表明,一定范围内少量非抗原蛋白对FMDV-A 146S抗原的免疫效果没有影响,而高浓度的非抗原蛋白则抑制FMDV-A 146S抗原的免疫效果。     

酶标SPA抑制染色法检测貉细小病毒的研究——(Ⅰ)酶标SPA抑制染色法试验程序的确立

应用感染貉细小病毒(RPV)的72h猫肾传代细胞(F_(81))制做细胞抗原片。利用超迷离心结合蔗糖密度梯度离心法提纯RPV病毒作为免疫用抗原,制备了豚鼠抗RPV高免血消。在酶标SPA染色法的基础上测得高免血清最佳工作范围为160~×、320~×、640~×;PPA的最佳工作效价为40~×;被检样品与标准阳性血清作用最佳温度为37℃,时间为60min。确立了酶标SPA抑制染色法的试验程序。并对有关试剂保存有效期进行了试验测定。