miR-629对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-629在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 选取手术切除的胰腺癌组织及其癌旁组织各72例,采用RT-PCR检测miR-629的mRNA表达水平。构建NC-shRNA和miR-629-shRNA慢病毒稳定细胞系,采用CCK-8法检测miR-629对细胞增殖的影响;采用Transwell检测miR-629对细胞迁移的影响;采用双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-629与SIRT3的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织（0.40±0.04）比较,胰腺癌组织中miR-629的mRNA相对表达水平（1.71±0.15）显著增加（t=3.901,P<0.001）;与NC-shRNA细胞比较,miR-629-shRNA细胞的增殖能力均显著下降（F=2.719,P<0.001）;与NC-shRNA细胞（140.22±19.37）比较,miR-629-shRNA细胞的迁移能力（63.91±7.44）显著下降（t=4.612,P<0.001）;荧光素酶报告基因显示,转染SIRT3-WT后,miR-629-shRNA细胞的相对荧光素酶活性（0.33±0.05）较NC-shRNA细胞（1.25±0.12）显著增加（t=4.109,P<0.001）;western blot结果表明miR-629-shRNA细胞中SIRT3的蛋白表达水平（0.44±0.03）较NC-shRNA细胞（1.31±0.11）明显增加（t=3.692,P<0.001）。［结论］ miR-629在胰腺癌组织中高表达,可能通过靶向下调SIRT3的表达促进胰腺癌细胞的增殖和迁移,有望为胰腺癌的临床诊疗提供新的思路。     

miR-124在胃癌中的表达及临床意义

背景与目的：miR-124在多种肿瘤中发挥抑癌基因样功能,如肺癌、前列腺癌、膀胱癌和乳腺癌,但是其在胃癌中的表达及临床意义尚不清楚。该研究旨在研究miR-124在正常胃黏膜上皮细胞与不同胃癌细胞及胃癌组织及正常胃黏膜组织中的表达,分析其表达与胃癌患者性别、年龄、组织学分级、T分期、TNM分期、淋巴结转移及预后之间的相关性。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain-reaction,RTFQ-PCR)检测miR-124在人胃黏膜上皮细胞及胃癌细胞中的表达,采用原位杂交法检测miR-124在胃癌及癌旁正常组织中的表达。结果：RTFQ-PCR结果显示,miR-124在胃癌MKN-74、MKN-28、MKN-45、MGC-803、SGC-7901及AGS细胞中的表达均低于GES-1细胞;原位杂交实验结果显示,miR-124在正常胃黏膜中呈强阳性表达,在胃腺癌组织中表达下降、局灶阳性或缺失;统计分析显示,miR-124与胃腺癌患者组织学分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关,与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关;Kaplan-Meier生存曲线统计分析显示,miR-124低表达患者的总生存时间和无病生存时间显明低于miR-124高表达患者;多因素分析结果提示,miR-124表达下调是影响患者生存的独立预后因素。结论：miR-124在胃癌细胞及组织中表达下调,并且与患者的组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关。     

miR-124调控SOS1表达及对U87胶质瘤细胞增殖的影响

目的:探讨miR-124对胶质瘤细胞增殖的抑制作用及作用靶点.方法:应用生物信息整合分析,SOS1是miR-124负向调节胶质瘤细胞的靶点.应用细胞转染和荧光素酶检测分析证实miR-124对SOS1的作用关系.结果:SOS1是miR-124作用靶点,miR-124直接作用于SOS1 mRNA 3'端非编码区(UTR),但不作用于突变型的3(UTR).miR-124通过作用于靶点SOS1抑制了体外胶质瘤细胞的增殖.结论:SOS1在恶性胶质瘤细胞中呈正向调控,miR-124的含量上升可导致SOS1含量下降,miR-124通过调节SOS1/Raf/ERK信号通路在抑制细胞生长中起重要作用.     

miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中miR-224进行过表达或沉默,采用qRT-PCR法检测miR-224的转染效果,转染成功后采用CCK-8法、FCM检验、Transwell试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移情况。结果:与正常293T细胞相比,宫颈癌细胞SiHa、HeLa中miR-224表达量均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;转染成功后CCK-8法检测SiHa和HeLa细胞增殖情况,与阴性对照组和空白组比较,miR-224 mimic组细胞增殖能力增强,miR-224 inhibitor组细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义（P<0.01）;流式细胞仪检测SiHa和HeLa细胞凋亡情况,miR-224 mimic组细胞凋亡百分比明显低于阴性对照组（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞凋亡百分比明显高于阴性对照组（P<0.01）;划痕试验检测SiHa和HeLa细胞迁移能力,48 h时miR-224 mimic组细胞愈合速率明显较阴性对照组和空白组快,差异有统计学意义（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞愈合速率明显较阴性对照组慢,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:宫颈癌细胞中miR-224过表达可促进细胞增殖和迁移并抑制凋亡,沉默miR-224可抑制细胞增殖和迁移并促进凋亡。     

miR-124对非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 探讨miR-124对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖的影响及其机制.方法 采用CCK8法和克隆形成实验评估miR-124对细胞增殖能力的影响.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测miR-124转染后细胞内PIM3的表达水平.通过双荧光素酶报告系统检测miR-124对PIM3荧光素酶活性的影响,证实miR-124可靶向作用于PIM3的3'UTR区.采用qRT-PCR和Western blot检测si-PIM3转染后细胞内PIM3的表达情况,采用CCK8法和克隆形成实验检测沉默PIM3后对细胞增殖能力的影响.结果 ①miR-124模拟物组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;miR-124模拟物组的克隆形成数明显少于其对照组.②miR-124模拟物组的miR-124过表达后,其PIM3表达低于其对照组,差异有统计学意义.③含野生型结合位点(PIM3 3'UTR区完整片段)的miR-124模拟物组的荧光素酶活性低于其对照组,差异有统计学意义;含突变型结合位点(PIM3 3'UTR区突变片段)的两组无明显差异.④si-PIM3组的PIM3被沉默后,其表达水平明显低于其对照组,差异有统计学意义;si-PIM3组的细胞活性(OD值)低于其对照组,差异有统计学意义,且呈时间依赖性;si-PIM3组的克隆形成数明显少于其对照组.结论 miR-124可通过靶向作用于PIM3的3'UTR区下调后者的表达而抑制NSCLC细胞的增殖.     

miR-155在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的:探讨miR-155在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其对NSCLC细胞增殖、迁移、侵袭的影响机制。方法:通过生物信息学网站预测miR-155的可能靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用qRT-PCR测定NSCLC组织及细胞中miR-155和ZIC3的表达;通过LipofectamineTM2000试剂盒向A549细胞中分别转染miR-155 mimic和mimic NC,共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3;Western blot检测转染miR-155 mimic对ZIC3蛋白表达的影响;MTT法、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测miR-155对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:生物信息学网站预测显示ZIC3-3' UTR与miR-155存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证ZIC3是miR-155的靶基因,ZIC3表达受miR-155的负向调控。NSCLC组织及细胞中miR-155显著低表达,ZIC3显著高表达（P＜0.05）;过表达miR-155抑制了ZIC3蛋白的表达水平（P＜0.05）。转染miR-155 mimic显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P＜0.01）;共转染miR-155 mimic+pMIR-ZIC3逆转了miR-155 mimic对NSCLC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用（P＜0.05）。结论:NSCLC中miR-155显著低表达,其过表达可抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭;miR-155可能通过靶向负调控ZIC3影响NSCLC细胞的生物学行为。     

肠癌组织中miR-141的表达及其对HCT116细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-141在肠癌组织中的表达情况以及其对HCT116细胞生物学功能的影响及其作用机制。方法:选取2016年05月至2018年05月在中国医科大学附属第一人民医院手术切除的30对肠癌组织以及癌旁组织进行miRNA芯片筛查。逆转录定量聚合酶链反应分析其中异常表达miRNA情况,评估miR-141的表达与肿瘤相关信息的相关性。通过TargetScan软件分析miR-141可能靶向的蛋白,在HCT116细胞中通过荧光素酶报告基因实验检测miR-141对DEK蛋白的靶向作用。HCT116细胞中分别过度表达和沉默表达miR-141后,通过MTT实验检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移情况。结果:芯片分析和逆转录定量聚合酶链反应指出miR-141在肠癌组织中表达低于癌旁组织,miR-141与肿瘤的进程具有相关性,TargetScan软件指出miR-141可以靶向作用于DEK,荧光素酶报告基因实验印证了miR-141对DEK的靶向作用。MTT实验指出miR-141过度表达显著抑制细胞增殖,miR-141沉默表达显著促进细胞增殖,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell实验显示,miR-141过度表达可以抑制HCT116细胞的迁移,miR-141沉默表达后HCT116细胞的迁移得到促进。结论:miR-141通过靶向DEK蛋白能够抑制HCT116细胞的增殖和迁移。     

miR-218-5p靶向下调LPAR3抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-218-5p通过调控LPAR3表达对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:qRT-PCR和Western blot检测人正常宫颈细胞H8和4种宫颈癌细胞（SiHa、HeLa、MS751和HT-3）中miR-218-5p和LPAR3的表达。以HeLa细胞为后续研究对象,分别构建过表达miR-218-5p和敲减LPAR3的HeLa细胞株,CCK-8法检测细胞存活情况,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白CyclinD1、迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-218-5p和LPAR3的靶向调控关系。结果:与人正常宫颈细胞H8相比,4种宫颈癌细胞miR-218-5p的表达显著下调,LPAR3的表达显著上调。过表达miR-218-5p或敲减LPAR3均可抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达。LPAR3是miR-218-5p的靶基因,miR-218-5p可负性调控LPAR3的表达。过表达LPAR3可逆转miR-218-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:miR-218-5p通过靶向下调LPAR3表达抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-218-5p/LPAR3分子轴有望成为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

LncRNA MALAT1 通过调控miR-124-3p/IGF2BP1 分子轴促进宫颈癌细胞增殖和转移

[摘要] 目的：探讨lncRNA MALAT1 通过调控miR-124-3p/IGF2BP1 分子轴介导宫颈癌细胞增殖和转移的影响。方法：选取2014 年4 月至2017 年12 月在贵阳市妇幼保健院妇产科收治的、经手术切除的45 例宫颈癌患者癌组织及相应癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系SiHa、Caski、HeLa 和C33a,采用qPCR法检测癌组织和癌细胞系中MALAT1 的表达水平。构建MALAT1 敲降载体、miR-124-3p inhibitor 及IGF2BP1 过表达载体转染宫颈癌细胞,采用CCK-8、Transwell、Wb及免疫荧光实验探讨MALAT1 或其敲降后通过miR-124-3p/IGF2BP1 分子轴对宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响。采用双荧光素酶报告基因检测lncRNA MALAT1、miR-124-3p 及IGF2BP1 的靶向调控关系。结果：MALAT1 在宫颈癌组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。同时,敲降MALAT1 显著抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实MALAT1 靶向作用miR-124-3p 并下调其表达水平,miR-124-3p 可负调控IGF2BP1 的表达。实验进一步证实敲降MALAT1 通过靶向上调miR-124-3p 对IGF2BP1 的抑制作用,进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（P<0.05 或P<0.01）。结论：lncRNA MALAT1 通过下调miR-124-3p/IGF2BP1 分子轴促进宫颈癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,为临床宫颈癌早期诊断/治疗提供了潜在的分子靶点。     

miR-543在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

目的:研究微小RNA-543（microRNA-543,miR-543）在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响。方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响。结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制。结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭。     

miR-124-3p靶向FOXQ1抑制宫颈鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的:探讨miR-124-3p在宫颈鳞状细胞癌（cervical squamous cell carcinoma,CSCC）中的表达水平及对细胞增殖、侵袭能力的影响,初步阐明miR-124-3p对癌基因叉头框蛋白Q1(forkhead box Q1,FOXQ1)的靶向调控机制。方法:收集2015年1月至2017年12月手术切除的CSCC组织标本61份,分别应用RT-qPCR和IHC检测癌组织和癌旁组织中miR-124-3p和FOXQ1蛋白的表达水平,分析miR-124-3p和FOXQ1 mRNA表达的相关性;RT-qPCR检测miR-124-3p和FOXQ1 mRNA在人CSCC细胞株（SiHa和CaSki）及人宫颈永生化鳞状细胞株（Ect1/E6E7）中的表达水平;应用miR-124-3p模拟物转染CaSki细胞,分别采用CCK-8法和Transwell小室检测miR-124-3p对细胞增殖和侵袭能力的影响;采用Western blot检测miR-124-3p对FOXQ1、E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平的影响;最后,应用双荧光素酶报告基因验证miR-124-3p对FOXQ1的靶向调控作用。结果:miR-124-3p在CSCC组织的表达水平低于癌旁组织（P＜0.05）,在人CSCC细胞株（SiHa和CaSki）中的表达水平也均低于人宫颈永生化鳞状细胞株（Ect1/E6E7）（P＜0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miR-124-3p模拟物的CaSki细胞的增殖和侵袭能力明显受到抑制（P＜0.05）。FOXQ1 mRNA和蛋白在CSCC组织中的表达水平均显著高于癌旁组织(P＜0.05),相关性分析显示,FOXQ1 mRNA的表达水平与miR-124-3p呈负相关(r=-0.882,P＜0.05)。在转染miR-124-3p模拟物后,CSCC细胞株CaSki中FOXQ1和Vimentin蛋白表达水平均降低,而E-cadherin蛋白表达增高。双荧光素酶报告基因试验确认miR-124-3p可通过与FOXQ1 mRNA的3' UTR直接结合,靶向调控FOXQ1的表达。结论:miR-124-3p在CSCC中表达下调,其通过靶向调控FOXQ1的表达影响细胞的上皮间质转化状态,从而影响CSCC细胞的增殖和侵袭。     

PGRMC1在宫颈癌组织中的表达及对细胞增殖的影响

目的:检测孕激素受体膜成分1（PGRMC1）在宫颈鳞状细胞癌、腺癌、高级别上皮内病变（high-grade squamous intra-epithelial lesions,HSIL）以及对应正常宫颈组织中的表达情况,并分析其对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:利用免疫组化法检测PGRMC1在151例宫颈鳞状细胞癌、18例宫颈腺癌、26例HSIL以及对应正常宫颈组织中的表达情况;利用CCK-8法分析PGRMC1对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响。结果:PGRMC1在宫颈鳞状细胞癌中的表达高于癌旁正常鳞状上皮中的表达（P＜0.000 1）,在宫颈腺癌中的表达高于癌旁宫颈腺上皮中的表达（P=0.015 7）,在HSIL中的表达也高于瘤旁宫颈鳞状上皮中的表达（P=0.003 2）。PGRMC1的表达与宫颈鳞状细胞癌患者的年龄、脉管侵犯、肿瘤分化、肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移以及FIGO分期均无关（P均>0.05）。CCK-8分析显示干扰PGRMC1可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖。结论:PGRMC1在宫颈鳞状细胞癌、宫颈腺癌以及HSIL中的表达均高于正常宫颈组织中的表达。干扰PGRMC1可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖。     

miR-203a-3p在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIAN...     

SHCBP1基因在结肠癌组织中表达及对结肠癌细胞增殖迁移的影响

目的:探讨SHCBP1基因在结肠癌组织中的表达情况及结肠癌进展过程中的作用。方法:荧光定量PCR、免疫组织化学法检测SHCBP1基因在57例临床结肠癌样本的癌及癌旁组织中表达情况、SHCBP1蛋白表达与定位;构建SHCBP1过表达质粒及合成特异性靶向SHCBP1的siRNA、shRNA并转染结肠癌细胞株,Real-time PCR、Western blot检测细胞株SHCBP1 mRNA和蛋白的表达量,CCK8法、克隆形成检测SHCBP1对结肠癌细胞株增殖能力的影响;划痕实验、Transwell实验检测过表达、干扰后SHCBP1对细胞迁移能力的影响。结果:在57对样本中,结肠癌组织中SHCBP1的表达高于癌旁组织（P<0.001）;SHCBP1主要表达于结肠癌细胞的胞质中。过表达SHCBP1后可显著促进结肠癌细胞株增殖迁移,干扰SHCBP1可抑制结肠癌细胞株增殖迁移。结论:SHCBP1在结肠癌组织中起到促进细胞增殖迁移的作用,在结肠癌的发生发展起到促进作用。     

miR-424靶向NRP2对宫颈癌细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响

目的:探讨微小RNA（miR）-424靶向神经纤毛蛋白2（NRP2）对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及顺铂敏感性的影响。方法:实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测宫颈癌组织和癌旁组织以及宫颈癌细胞SiHa和人宫颈上皮细胞HCerEpiC中miR-424和NRP2蛋白表达情况。将体外培养的SiHa细胞分为对照组、miR-ctrl组（转染miR-ctrl）、miR-424组（转染miR-424模拟物）、miR-424+pcDNA3.1组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1空载体质粒）和miR-424+NRP2组（共转染miR-424模拟物和pcDNA3.1-NRP2过表达载体质粒）,采用实时荧光定量PCR法验证转染效率,免疫印迹法检测SiHa细胞中NRP2蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424和NRP2靶向关系,MTT法检测细胞增殖和顺铂敏感性,Transwell小室检测细胞迁移。结果:双荧光素酶报告基因实验证实miR-424可与NRP2靶向结合;相较于癌旁组织,宫颈癌组织中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;相较于HCerEpiC细胞,SiHa细胞中miR-424表达明显降低,NRP2蛋白表达明显升高（P＜0.05）;与miR-ctrl组比较,miR-424组SiHa细胞中miR-424表达水平明显升高,而NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的半数抑制浓度（IC50）值均明显降低（P＜0.05）;与miR-424+pcDNA3.1组比较,miR-424+NRP2组细胞中NRP2蛋白表达水平、细胞增殖活力、迁移能力和顺铂对细胞的IC50值均明显升高（P＜0.05）;miR-ctrl组和对照组之间以及miR-424+pcDNA3.1组和miR-424组之间上述各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-424可通过靶向调控NRP2表达抑制SiHa细胞增殖、迁移并增强顺铂敏感性。