蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况。结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性。蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P<0.01)。结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50μg/mL作用48h之前)主要以诱导凋亡为主。蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关。     

Accutase 消化传代对人胚胎纹状体来源神经干细胞凋亡的影响

目的：观察人类胚胎纹状体来源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经消化酶accutase消化传代后是否 发生了大量细胞凋亡。方法：提取人13~18周自然流产胚胎脑组织纹状体的NSCs,体外形成神经球并培养至3~5 代。经消化酶accutase消化后传代,运用活性caspase-3染色、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)染色等方 法对多聚甲醛固定的NSCs进行凋亡检测,同时采用Annexin V和Hoechst33342/PI等联合染色方法对活细胞进行凋亡 鉴定,以确定NSCs在体外传代后的凋亡情况。结果：在传代后检测的3个时间点(1,24,72 h)中TUNEL染色和活 性caspase-3染色均高度重合。传代后1 h,TUNEL和活性caspase-3染色所检测到的凋亡率为20%~25%,传代后24 h增 高为75%~80%(P<0.01),而传代后72 h,由于存活下来的细胞开始增殖,所以整体凋亡率降为60%~70%,明显低于 24 h(P<0.01)。结论：由人类纹状体来源NSCs形成的神经球,经accutase消化传代后24 h内即发生大量细胞凋亡。对于 体外培养的NSCs,抑制其凋亡可能是促使其自我更新和增殖,最终起到提高细胞扩增能力的有效手段。     

树舌多糖GF抑制小鼠HepA瘤生长机制的初步研究

目的 该研究主要初步探讨树舌多糖(Ganoderm applanatum polysaccharide,GAP)GF抑制小鼠HepA瘤的生长机制.方法 树舌多糖GF注射到HepA小鼠后,通过测定瘤体的质量计算树舌多糖抑瘤率,通过电镜观察HepA细胞的超微结构,通过TUNEL法检测凋亡细胞,通过Western-blot检测Fas、caspase-3、Bcl-2的表达.结果 树舌多糖GF注射到HepA小鼠后,GAPGF的抑瘤率为51.82%;电镜下观察到HepA细胞核固缩、染色质浓缩及凋亡小体形成等典型的细胞凋亡特征;TUNEL分析显示GAPGF能明显诱导HepA细胞凋亡;Western blot分析显示GAPGF可使Fas与cmpase-3表达上调,Bcl-2表达降低.结论 GAPGF通过诱导HepA细胞凋亡抑制小鼠HepA瘤的生长,其分子机制可能与Fas的激活、caspase-3表达的上调以及Bcl-2表达的降低有关.     

黄连温胆汤对糖尿病小鼠海马神经凋亡的影响

目的:研究黄连温胆汤对糖尿病小鼠海马神经凋亡的影响。方法:高糖高脂饲料(HFD)配合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100 mg/kg建立2型糖尿病小鼠模型。小鼠分为空白组、模型组、二甲双胍组、黄连温胆汤低、中、高剂量组6组,每组10只,连续灌胃给药3 w后,原位末端标记法(TUNEL法)检测海马神经元的凋亡,免疫组织化学法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:与模型组相比,二甲双胍组、黄连温胆汤中、高剂量组显著抑制海马神经元的凋亡,caspase-3蛋白的表达显著减少。结论:黄连温胆汤能显著改善糖尿病小鼠的认知功能,其机制可能是通过减少caspase-3蛋白表达,从而抑制海马神经凋亡。     

siRNA沉默Livin基因对顺铂诱导LiBr细胞凋亡及增殖抑制敏感性的影响

目的 为探索沉默Livin基因联合化疗药物提高恶性黑素瘤疗效的可能性和初步机制.方法 在体外以恶性黑素瘤LiBr细胞为研究对象.以低剂量顺铂作用于siRNA沉默Livin后的LiBr细胞.观察沉默Livin基因后LiBr细胞对顺铂诱导的凋亡及增殖抑制敏感性的影响.结果 经TUNEL法和Annexin V-FITC/PI双标法检测凋亡、Western blot检测caspase-3蛋白表达和MTT检测细胞增殖.结果 显示,与单独应用siRNA-3、顺铂相比,siRNA-3联合顺铂可显著诱导细胞凋亡、提高caspase-3活化、抑制细胞增殖.结论 siRNA沉默Livin基因后可明显增加LiBr细胞对顺铂诱导凋亡及增殖抑制的敏感性,恶性黑素瘤的化疗耐药与Livin高表达引起的凋亡抑制密切相关.     

周围神经损伤神经脊细胞caspase-3的表达与病理变化

目的 探讨周围神经损伤神经脊细胞caspase-3的表达与病理变化。方法 将90只SD大鼠随机分为3组:模型组30只制作大鼠周围神经损伤模型,假手术组30只坐骨神经显露后即关闭切口,空白对照组30只不做任何处理。采用免疫组织化学法测定各组制模后6h~5d神经脊细胞caspase-3蛋白的表达变化,HE染色及电镜观察神经脊细胞病理学变化,采用TUNEL法检测各组制模后6h~5d神经脊细胞的凋亡水平。结果 免疫组织化学结果显示空白对照组及假手术组大鼠神经脊细胞caspase-3蛋白阳性表达、细胞凋亡较少,而模型组在周围神经损伤后6h即出现细胞凋亡,24~72h达高峰;caspase-3蛋白阳性表达也在6h明显增多,24h达高峰,72h表达减弱。神经脊细胞caspase-3蛋白的阳性表达与凋亡呈正相关(r=0.821,P<0.01)。结论 周围神经损伤后神经脊细胞存在大量凋亡,其凋亡水平与caspase-3表达相关。     

高压氧对HIBD新生大鼠凋亡的影响

目的利用新生大鼠HIBD动物模型,观察HIBD后不同时间caspase-3（半胱氨酸蛋白酶3）的表达变化,TUNEL检测的凋亡灰度值的变化,探讨HBO与细胞凋亡的关系。方法7日龄大鼠,根据实验设计,观察caspase-3的表达和TUNEL测定凋亡灰度值的变化。结果凋亡灰度值和caspase-3的表达均于HIBD后24h达高峰,72h仍有少量表达。高压氧使凋亡减轻。结论HBO稳压30min和60min均可能通过抑制凋亡发挥神经保护作用。     

氟对小鼠睾丸间质细胞凋亡与caspase-3表达的影响

目的观察氟化钠对体外培养小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,以及对间质细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达的改变。方法将体外培养的小鼠睾丸间质细胞分成4组,加入不同浓度的氟化钠染毒(0,5,10,20 mg/L),染毒48 h后采用流式细胞仪AnnexinⅤ-PI双染法检测细胞凋亡率,并用免疫组织化学法检测氟化钠对小鼠睾丸间质细胞caspase-3的表达。结果所有染氟组均观察到间质细胞凋亡和caspase-3表达的变化。与其他组相比,20 mg/L氟化钠组细胞凋亡值均显著升高,caspase-3表达的平均灰度值则显著降低(P<0.01)。结论氟化钠可促进体外培养小鼠间质细胞凋亡及caspase-3表达,证实了氟化钠对小鼠间质细胞的发育有毒性作用。     

补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤小鼠神经细胞线粒体凋亡途径的影响

目的 研究补阳还五汤联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及可能机制。 方法 改良线栓法建立小鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。90只小鼠随机分5组(每组18只):假手术组、模型组、补阳还五汤(BYHWD)组(按10 ml/kg灌服给药)、依达拉奉(ED)组(按3 mg/kg尾静脉注射给药)、补阳还五汤+依达拉奉(BYHWD+ED)组(BYHWD按10 ml/kg灌服给药+ED按3 mg/kg尾静脉注射给药)。给药1次/d,连续用药7 d。术后1、3、7 d观察各组神经功能缺损评分。术后7 d,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死体积;TUNEL法检测神经细胞的凋亡情况;免疫组化法观察脑皮质bcl-2、bax、caspase-3表达阳性细胞数。各组数据的比较用单因素方差分析,2组间比较用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义。 结果 缺血再灌注后,神经功能评分随时间延长有减少;同一时间点,模型组评分最高,联合用药组评分最低(P＜0.01)。术后7 d各组比较:BYHWD+ED组的脑梗死体积比最小(P＜0.01);各用药组均能降低脑缺血后细胞凋亡数(P＜0.05); bcl-2表达阳性细胞数升高,bax、caspase-3表达阳性细胞数降低,BYHWD+ED组这一变化趋势最明显(P＜0.05)。 结论 两药联用对小鼠脑缺血再灌注损伤有协同神经保护作用,其机制与减少细胞凋亡、调控线粒体凋亡途径蛋白的表达有关。      

白藜芦醇抑制顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的体外研究

目的 通过观察顺铂损伤小鼠肾小管上皮细胞后Bcl-2、Bax及caspase-3的表达以及白藜芦醇干预后其表达的变化,探讨白藜芦醇对顺铂肾小管上皮细胞损伤的保护机制。 方法 体外培养小鼠近曲小管上皮细胞(mProx)并分为4组:对照组(Con)、顺铂25μM组(CIS)、白藜芦醇+顺铂25μM组(RES+CIS),(100μmol白藜芦醇预处理3 h后加入25μM顺铂作用24 h)、白藜芦醇组(RES)。台盼蓝拒染方法测定细胞活力,Tunel法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax及caspase-3的表达变化。 结果 与对照组相比,顺铂组细胞活力下降(P<0.05),细胞凋亡增加(P<0.05),Bax及caspase-3的蛋白表达增强(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与CP组比较,RES+CIS组细胞活力明显增加(P<0.05),细胞凋亡减少(P<0.05),Bax及caspase-3的表达下降(P<0.05),Bcl-2的表达上升(P<0.05)。 结论 白藜芦醇能有效提高小鼠近曲小管上皮细胞存活率,抑制细胞凋亡,其机制可能与其通过下调caspase-3、Bax及上调Bcl-2有关。      

Early activation of caspase-1 after retinal ischemia and reperfusion injury in mice

Background Caspases are important in the signaling pathway of cellular apoptosis. Caspase-3 protein expression has been shown to increase and parallel to neuronal apoptosis in retinal ischemia injury. This study was to determine whether caspase-1 is involved in neuronal cell death or in retinal ischemia and repeffusion injury.Methods In twenty-one adult mice, ischemia was induced by increasing the intraocular pressure.The animals were sacrificed at 1 hour, 3 hours, 6 hours, 1 day, 3 days and 7 days after reperfusion.Frozen sections were used for caspase-1 immunostaining and TUNEL labeling.Results In normal retina, no caspase-1 positive cells were seen. One hour after ischemia,numerous positive cells were noted in the ganglion cell layer (GCL) and inner side of inner nuclear layer (INL). At 3 hours, caspase-1 positive cells continued to increase and peaked at 6 hours, then decreased significantly at 1 day. TUNEL positive cells were detected at 3 hours and peaked at 1 day after ischemia. Double labeling of caspase-1 and TUNEL only showed few cells with co-localization after ischemia.Conclusion Caspase-1 immunoreactivity preceds to the TUNEL labeling in the GCL and INL after retinal ischemia and reperfusion injury and its early activation may play an important role in the initiation of neuronal apoptosis.     

癫痫大鼠海马区增殖的内源性神经前体细胞演变过程的研究

目的 追踪观察匹罗卡品诱导癫痫模型大鼠海马区增殖的内源性神经前体细胞的分化及演变过程，从而探讨痫性发作对增殖的内源性神经前体细胞的影响。方法 氯化锂和匹罗卡品联合诱导大鼠癫痫模型，正常对照组注射生理盐水，干预后14d腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶（BrdU）标记海马DG区增殖的内源性神经前体细胞；用免疫组化方法分别观察标记后5、14、28d海马DG区BrdU／神经元核性蛋白（NeuN）、BrdU／胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达；TUNEL标记方法观察BrdU／TUNEL的表达。结果 与正常对照组相比，癫痫模型组大鼠海马区出现的BrdU阳性细胞明显增多，增殖的细胞大多数分化为神经元（约70％），只有少数分化为星形胶质细胞。随标记时间延长，存活的增殖细胞逐渐减少，部分BrdU阳性细胞表现为TUNEL阳性。结论 癫痫发生后出现了神经前体细胞的增殖，增殖的细胞大多数分化为神经元。但只有少部分细胞存活下来参与海马结构的重组。     

脑挫伤早期神经细胞凋亡和Caspase-3表达变化的观察

目的观察脑挫伤后早期神经细胞凋亡和调节因子Caspase-3表达的时序及空间变化规律。方法采用TUNEL染色和免疫组化染色方法,结合图像分析技术,对不同损伤时间组人脑挫伤组织进行染色观察。结果①TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色的阳性细胞主要分布在挫伤区和挫伤半影区,与远隔部位和对照组脑组织的阴性染色有显著差异,P<0.05;②脑挫伤后48 h内,在挫伤半影区TUNEL染色的阳性率和阳性细胞IOD逐渐增加,各时间组之间有显著差异,P<0.05,两参数与损伤时间均呈线性关系,r分别为0.89和0.93;③Caspase-3阳性表达与神经细胞凋亡变化呈平行关系,两参数与损伤时间也呈线性关系,r分别为0.92和0.90。结论①人脑挫伤后48 h内神经细胞凋亡和Caspase-3阳性表达的阳性率、IOD增加与损伤时间之间呈线性关系,可作为损伤时间推断的新依据;②TUNEL和Caspase-3免疫组化染色阳性细胞主要分布在挫伤半影区和挫伤区都提示可以用于判断脑挫伤部位,尤其是对轻度脑损伤大体和HE染色形态改变不明显的脑挫伤更有意义。     

Neurocyte Apoptosis and Expressions of Caspase-3 and Fas after Spinal Cord Injury and Their Implication in Rats

Spinal cord injury (SCI) is a serious injury com-monly seen in surgical patients, for which there is no established treatment available at present. After spinal injury, neurocytes and tissues undergo necrosis and apoptosis. Apoptosis is a complex pathophysilogical process, mainly involving protease cascade mediated by the members of caspase family, among which caspase-3 plays a key role. Caspase-3 (CPP32) belongs to the cystine-aspartic proteinase family and plays the central role in the exe…     

神经细胞凋亡和Caspase-3表达与脑损伤时间的关系

目的观察脑挫伤后神经细胞凋亡和调节因子Caspase-3表达的时序变化,探索损伤时间推断的新方法。方法采用TUNEL和免疫组化染色方法,结合图像分析技术对不同损伤时间组的脑挫伤组织进行染色观察和分析。结果①TUNEL和Caspase-3免疫组化染色的阳性细胞分布在挫伤灶中央及其周围的半影区,与远隔部位和对照组脑组织呈阴性染色形成明显对比;半影区比中央区更显著,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。②脑挫伤后随着损伤时间的延长,半影区TUNEL染色和Caspase-3表达逐渐增强,呈平行关系;48h内两种染色方法的平均积分光密度（IOD）增加与损伤时间呈线性关系（r分别为0．93和0．69）。结论观察脑挫伤后神经细胞凋亡和Caspase-3的表达随损伤时间逐渐增强的变化规律,可以作为损伤时间推断的新方法。     

双标染色技术在大鼠脑创伤后caspase-3与神经细胞凋亡研究中的应用

目的 探讨末端标记（TUNEL）法与caspase-3免疫组织化学法双标染色技术在研究大鼠神经细胞凋亡机制中应用的优越性.方法 雄性Wistar大鼠12只随机分成两组,用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤.切片先按照试剂盒提供的方法行TUNEL染色显示凋亡,再按caspase-3免疫组化试剂盒检测方法继续染色.结果 双标染色显色满意,大鼠海马区大部分TUNEL阳性细胞同时也表现caspase-3阳性.结论 caspase-3与TUNEL双标染色能更好的反映出大鼠脑创伤后caspase-3与凋亡之间的关系,体现了双标染色技术的优越性.     

一氧化氮对体外培养大鼠软骨细胞Caspase-3及PKC-α表达的影响

目的:研究NO对大鼠软骨细胞Caspase-3及蛋白激酶C(PKC)-α(PKC-α)表达的影响,探讨NO诱导软骨凋亡的机制.方法:软骨细胞用不同浓度的NO处理24 h后,用TUNEL、MTT法和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞活力.Western blot检测Caspase-3及PKC-α的表达.结果:NO处理后软骨细胞TUNEL阳性率明显增高,细胞核片段损害明显,Caspase-3的表达升高,同时抑制PKC-α的表达.结论:NO诱导的软骨细胞凋亡可能通过促进Caspase-3表达,作用机制与抑制PKC-α有关.     

The Effect of Zinc on the Apoptosis of Cultured Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Age relatedmaculardegeneration (ARMD ) ,orsenilemaculardegeneration (SMD) ,hasbecomeamoreimportantsightlessdisease .The precisepathogenicmechanismofARMDiscurrentlyun known .Sotheeffectivetreatmentsand preventivemeasureshavenotbeenavailableuntilnow .Ithasbeenprovedthattheretinalpigmentepithelia (RPE)wasthemaincelltypeaffectedbyARMD .Zincdefi ciencyhasbeensuspectedasapotentialriskfactor.Inthisstudy ,theinfluenceofzincontheapoptosisofRPEwasstudied .1　MATERIALSANDMETHODS1 1　MAT…     

绞股蓝皂苷对体外培养神经前体细胞增殖的影响

目的 探讨不同浓度绞股蓝皂苷(GPs)对体外培养的神经前体细胞(NPCs)增殖能力的影响.方法 从孕14d大鼠胚胎端脑分离NPCs,体外贴壁培养7d传代.传代第1代细胞培养3d,免疫荧光法鉴定NPCs纯度后进行分组实验.加不同浓度GPs(0、25、50、100、200、400μg/mL)作用48h后再次鉴定NPCs纯度,采用MTT法检测细胞活力、细胞计数绘制生长曲线、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖能力、Western blot法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)表迭情况.结果 传代第1代培养3d的NPCs纯度达97%,GPs作用后不影响NPCs纯度,可使细胞活性增强,生长速度加快,BrdU阳性率增高,PCNA表达水平上调.结论 GPs可通过提高PCNA的表达量,促进体外培养的NPCs增殖,100μg/mL为GPs最佳作用浓度.     

缺氧性血管内皮细胞凋亡分子机制的实验研究

目的:研究Caspase-3在缺氧性血管内皮细胞凋亡中的作用.方法:用NaCN合并无糖培养基造成培养的牛主动脉内皮细胞(BAECs)化学性缺氧(CI);应用台盼兰染色、TUNEL、流式细胞仪计数和Hoechst 33342荧光染色的方法观察细胞受损和凋亡情况;应用免疫细胞化学染色的方法观察内皮细胞Caspase-3的表达.结果:Caspase-3的选择性抑制剂可显著减少缺氧性血管内皮细胞凋亡的发生,在Caspase-1和Caspase-6的选择性抑制剂作用下,Caspase-3的表达明显减少.结论:提示Caspase-3参与了缺氧性血管内皮细胞凋亡的发生,在Caspases的蛋白酶级联切割反应中,Caspase-3位于Caspase-1和Caspase-6的下游.