异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用,为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法:实验皮肤标本来源于2002-07/2003-07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者,取冗余全层皮肤组织,患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞,实验分为异搏定组:包括1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9,1×10-10mol/L组,分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液;氢化可的松组:在细胞培养孔中加入2mL浓度为1×10-7mol/L氢化可的松的培养液;对照组:在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0.005的新生牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色;细胞增殖状况测定应用3氚标记的胸腺嘧啶掺入法;观察细胞增殖抑制率[抑制率(I%)=(阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值)/阴性对照每分钟脉冲数值],取各例样本的平均值。结果:①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果:对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖,24h达到高峰,48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应:各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用,其中1×10-6mol/L异搏定与1×10-7mol/L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异(t=0.135,P=0.896>0.05)。③浓度为1×10-6mol/L异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应:氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(60.67±18.94)%比(-19.69±21.26)%,(10.89±11.61)%,(37.03±12.17)%,q=10.867,6.732,3.197;P<0.05];异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(51.42±15.30)%比(-16.83±16.90)%,(1.09±11.62)%,(17.41±13.41)%,q=10.566,7.791,5.265;P<0.05];在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松(t=2.423,P=0.042<0.05)。结论:不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用,异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

持续张力对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：研究单次持续机械应力加载对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法：体外原代培养正常人皮肤成纤维细胞，传至第3代后，接种于弹力培养皿，施力拉伸30％，持续48h后，进行细胞计数和流式细胞仪检测细胞周期。结果：持续拉伸48h后成纤维细胞增殖明显，细胞数量显著高于对照组(t=3．385，P&;lt;0．05)；流式细胞仪检测显示，施力组成纤维细胞的S期细胞比例明显高于对照组(t=4．277，P&;lt;0．05)。结论：皮肤软组织扩张术中，机械张力引起皮肤成纤维细胞增殖可能是皮肤面积增加的主要来源之一。     

持续张力对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:研究单次持续机械应力加载对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法:体外原代培养正常人皮肤成纤维细胞,传至第3代后,接种于弹力培养皿,施力拉伸30%,持续48h后,进行细胞计数和流式细胞仪检测细胞周期。结果:持续拉伸48h后成纤维细胞增殖明显,细胞数量显著高于对照组(t=3.385,P<0.05);流式细胞仪检测显示,施力组成纤维细胞的S期细胞比例明显高于对照组(t=4.277,P<0.05)。结论:皮肤软组织扩张术中,机械张力引起皮肤成纤维细胞增殖可能是皮肤面积增加的主要来源之一。     

新生毛细血管对皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:研究新生毛细血管对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响,探讨新生毛细血管在扩张过程中的作用。方法:体外原代培养正常人皮肤成纤维细胞和人脐静脉内皮细胞,传至第3代用于实验。用50mL/L的胎牛血清培养基培养24h,然后加入不同的培养基,对照组为100mL/L胎牛血清的DMEM培养基,EC组为EC培养基+100mL/L胎牛血清的DMEM培养基,犤3H犦-TDR掺入法反映细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期。结果:经内皮细胞培养基孵育48h后,成纤维细胞增殖明显,3H-TDR掺入量EC组犤(758.31±124.09)计数/min犦高于对照组犤(586.20±60.53)计数/min犦(t=4.318,P<0.01);流式细胞仪检测显示,EC组S期细胞比例犤(21.10±7.27)%犦明显高于对照组犤(11.88±3.97)%犦(t=2.728,P<0.05),提示皮肤成纤维细胞分裂、增殖旺盛。结论:皮肤软组织扩张术中,新生毛细血管的形成是引起皮肤成纤维细胞增殖,皮肤面积增加的机制之一。     

钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响

目的：钙通道阻滞剂可抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的分泌，减少瘢痕的增生。实验拟进一步观察钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响。 方法：实验于2006—03／06在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成。①实验材料：Wistar大鼠10只；盐酸维拉帕米注射液为上海禾丰制药有限公司产品。②实验过程及分组：制作大鼠双侧坐骨神经损伤模型，术后2周取损伤处神经瘢痕，按组织块法培养神经瘢痕成纤维细胞，实验所用细胞为4～8代，分4组，其中3组培养基中维拉帕米药物浓度分别为10，50及100umol／L，l组为空白对照组。③实验评估：分别用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖能力、羟脯氨酸比色法测定细胞上清液中的胶原含量和胞浆中的胶原含量。 结果：①四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖结果：钙通道阻滞剂对神经瘢痕成纤维细胞的生长增殖具有明显抑制作用，且呈现剂量依赖性（P〈0．05）。②羟脯氨酸比色法测定胶原含量：钙通道阻滞剂可使分泌到细胞培养上清中的胶原含量明显减少，以100μmol／L浓度组作用最为显著（P〈0．05）；胞浆中的胶原含量增加，具有明显剂量依赖性，以100μmol／L浓度组作用最为显著（P〈0．05）。 结论：钙通道阻滞剂可以抑制神经瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原分泌。     

新生毛细血管对皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：研究新生毛细血管对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖的影响。探讨新生毛细血管在扩张过程中的作用。方法：体外原代培养正常人皮肤成纤维细胞和人脐静脉内皮细胞，传至第3代用于实验。用50mL／L的胎牛血清培养基培养24h，然后加入不同的培养基，对照组为100mL／L胎牛血清的DMEM培养基，EC组为EC培养基+100mL／L胎牛血清的DMEM培养基，[^3H]-TDR掺入法反映细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期。结果：经内皮细胞培养基孵育48h后，成纤维细胞增殖明显，^3H-TDR掺入量EC组[(758．31&;#177;124.09)计数／min]高于对照组[(586．20&;#177;60．53)计数／min](t=4.318，P&;lt;0.01)；流式细胞仪检测显示．EC组S期细胞比例[(21．10&;#177;7．27)％]明显高于对照组[(11．88&;#177;3．97)％](t=2．728，P&;lt;0．05)，提示皮肤成纤维细胞分裂、增殖旺盛。结论：皮肤软组织扩张术中，新生毛细血管的形成是引起皮肤成纤维细胞增殖，皮肤面积增加的机制之一。     

硒化壳聚糖对体外培养成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：观察硒化壳聚糖在成纤维细胞生长过程中的作用。 方法：实验于2004-01／12在郧阳医学院附属太和医院完成。选取体外培养的第6代成纤维细胞，分为对照组和药物组。药物组浓度为25，50，100，200和400mg／L，分别加入由培养基稀释成的同等体积不同浓度的硒化壳聚糖，对照组加入等体积培养基。5&;#215;10^8L^-1接种于24孔板，培养24h后，加入不同浓度硒化壳聚糖继续培养48h，收集细胞用于电镜观察；5&;#215;10^6L^-1接种于96孔板，培养48h后，加入不同浓度的硒化壳聚糖，继续培养24h，分别加入^3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸或^3H-脯氨酸再作用24h，液闪计数仪测定每分钟计数值来反映细胞增殖及胶原合成的情况。 结果：①对细胞增殖的影响：药物组与对照组比较，细胞核均有不同程度的增大，核浆增大，核仁变大，变多，扩张的内质网增多，细胞表面突起增加，线粒体更为丰富，更易见到聚集成团的糖原。②对DNA影响：400mg／L组^3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸掺入量高于对照组[（18658&;#177;356．42，10564&;#177;356．47）min^-1，P〈0．011；③对细胞胶原合成的影响：100mg／L组^3H-脯氨酸掺入量高于对照组[（2867&;#177;224．09，1762&;#177;186.22）min^-1．P〈0．01]。 结论：创面愈合过程中，硒化壳聚糖可促进皮肤成纤维细胞分裂增殖及胶原合成，促进创面愈合,具有量效关系。     

三维培养的人成纤维细胞增殖特性在皮肤组织工程研究中的意义

目的：探讨三维培养对人皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法：培养人皮肤成纤维细胞，制备鼠尾胶原。对人皮肤成纤维细胞进行三维培养，检测细胞的增殖特性。结果：三维培养的人皮肤成纤维细胞生长曲线显示细胞增殖缓慢，流式细胞仪检测7，14d G0／G1期细胞分别为(79&;#177;3)％，(87&;#177;2)％。未见明显细胞凋亡峰。结论：三维培养对人皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用。     

聚乳酸对皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

目的：观察种植在聚乳酸材料上的皮肤成细胞的生物学特性，为其在人工真皮中的应用打好基础。方法：将体外培养的人皮肤成纤维细胞接种到聚乳酸膜上，观察细胞在膜上的粘附、增殖，形态结构。结果：接种后的皮肤成纤维细胞在聚乳酸膜上有较高的粘附率，并且增殖良好。HE染色明显可见细胞在膜上所形成的复层化结构。结论：聚乳酸可以支持皮肤成纤维细胞的正常生长，在皮肤组织工程中有一定的应用价值。     

硒化壳聚糖对体外培养成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察硒化壳聚糖在成纤维细胞生长过程中的作用。方法:实验于2004-01/12在郧阳医学院附属太和医院完成。选取体外培养的第6代成纤维细胞,分为对照组和药物组。药物组浓度为25,50,100,200和400mg/L,分别加入由培养基稀释成的同等体积不同浓度的硒化壳聚糖,对照组加入等体积培养基。5×108L-1接种于24孔板,培养24h后,加入不同浓度硒化壳聚糖继续培养48h,收集细胞用于电镜观察;5×106L-1接种于96孔板,培养48h后,加入不同浓度的硒化壳聚糖,继续培养24h,分别加入3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸或3H-脯氨酸再作用24h,液闪计数仪测定每分钟计数值来反映细胞增殖及胶原合成的情况。结果:①对细胞增殖的影响:药物组与对照组比较,细胞核均有不同程度的增大,核浆增大,核仁变大,变多,扩张的内质网增多,细胞表面突起增加,线粒体更为丰富,更易见到聚集成团的糖原。②对DNA影响:400mg/L组3H-脱氧胸腺嘧啶核苷酸掺入量高于对照组犤(18658±356.42,10564±356.47)min-1,P<0.01犦;③对细胞胶原合成的影响:100mg/L组3H-脯氨酸掺入量高于对照组犤(2867±224.09,1762±186.22)min-1,P<0.01犦。结论:创面愈合过程中,硒化壳聚糖可促进皮肤成纤维细胞分裂增殖及胶原合成,促进创面愈合。具有量效关系。     

己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

背景:近年来发现己酮可可碱有广泛的抗纤维化作用,但己酮可可碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制作用却少见报道,且其最大抑制剂量尚无定论.目的:观察己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用,并筛选己酮可可碱的最大抑制浓度.方法:以人瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞原代培养,传至第5～8代后将细胞分为实验组和对照组,实验组加入质量浓度为0.1,0 25,0.5,1.0,2.0,3.0 g/L的己酮可可碱,利用MTT比色法检测成纤维细胞的增殖活性.结果与结论:与对照组相比,实验组成纤维细胞增殖抑制率较高(P＜0.05),质量浓度在0.1～2.0 g/L范围内呈明显的量效、时效关系,96 h处于较高水平.实验组最大抑制率为53.37%,最大抑制质量浓度为2.0 g/L.结果表明己酮可可碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,最适抑制质量浓度为2.0 g/L,发挥抑制作用最强的时间为给药后96 h.     

重组人α干扰素对瘢痕成纤维细胞增殖的生物学效应

目的　观察重组人α 干扰素 (rHuIFN α)对培养的人瘢痕成纤维细胞增殖的影响 ,探讨rHuIFN α对瘢痕成纤维细胞生物学作用。方法　将rHuIFN α加入瘢痕成纤维细胞培养基内 ,采用MTT法测定细胞增殖率 ,用3H TdR掺入实验检测细胞DNA合成率 ,应用流式细胞仪分析细胞增殖周期。结果　当rHuIFN α浓度 >40 0 0U/ml时 ,实验组OD值明显低于对照组 (P <0 0 1)。rHuIFN α组3H TdR掺入率明显下降 ,与DMEM组比差异显著 (P <0 0 1)。rHuIFN α组培养 2 4h时瘢痕成纤维细胞进入S期的比例明显降低 (P <0 0 1) ,至 72h时已无显著差别。结论　rHuIFN α可以抑制瘢痕成纤维细胞的DNA合成及增殖 ,其机理为rHuIFN α对瘢痕成纤维细胞进入有丝分裂S期的抑制 ,且其效应呈时间依赖性     

Effects of Aloe vera on gap junctional intercellular communication and proliferation of human diabetic and nondiabetic skin fibroblasts

OBJECTIVE: To evaluate the effects of Aloe vera on gap junctional intercellular communication (GJIC) and proliferation of human skin fibroblasts in the presence or absence of basic fibroblast growth factor (FGF-2). DESIGN: In vitro study using human type II diabetic and nondiabetic skin fibroblast cell lines. SETTING AND SUBJECTS: Diabetic (n = 4) and nondiabetic (n = 4) human skin fibroblast cell lines were purchased from Coriell Institute for Medical Research (Camden, NJ). The cells were cultured with or without Aloe vera extract in increasing concentrations (0%, 0.625%, 1.25%, 2.5%, 5%, 10%, and 20%; v/v) in culture medium and with or without FGF-2 (30 ng/mL). MEASUREMENTS: GJIC was evaluated after 48-hour incubation with treatments by laser cytometry. Cells were counted after 72-hour incubation with treatments by using a Coulter counter. RESULTS: The rate of GJIC was greater (p < 0.01) for diabetic than for nondiabetic fibroblasts (3.5 +/- 0.1 versus 3.0 +/- 0.1% per minute during the first 4 minutes after photobleaching). GJIC was increased ( p < 0.05) for diabetic fibroblasts in the presence of 2.5% and 5% of Aloe vera extract (4.2 +/- 0.1 and 4.0 +/- 0.2 versus 3.5 +/- 0.1% per minute for control, respectively). FGF-2 stimulated (p < 0.01) GJIC for diabetic (4.0 +/- 0.1 versus 3.5 +/- 0.1% per minute for control) and nondiabetic (3.5 +/- 0.1 versus 3.0 +/- 0.1% per minute for control) fibroblasts. Aloe vera extract did not affect GJIC of nondiabetic fibroblast cultured without FGF-2. However, Aloe vera extract decreased (p < 0.05) FGF-2 stimulatory effects on GJIC of diabetic and nondiabetic fibroblasts. Proliferation of diabetic fibroblasts was increased (p < 0.05) by 1.25% and 2.5% Aloe vera extract in medium. Proliferation of nondiabetic fibroblasts was not affected by Aloe vera extract. FGF-2 increased (p < 0.05) proliferation of nondiabetic fibroblasts and FGF-2 did not affect proliferation of diabetic fibroblasts. Aloe vera extract decreased (p < 0.05) FGF-2 stimulatory effects on proliferation of nondiabetic fibroblasts. CONCLUSIONS: These data demonstrate that Aloe vera has the ability to stimulate GJIC and proliferation of human skin fibroblasts in diabetes mellitus. Furthermore, these results indicate that Aloe vera contains a compound(s) that neutralizes, binds with FGF-2 receptor, or otherwise alters signaling pathways for FGF-2. By affecting both GJIC and proliferation of diabetic fibroblasts, Aloe vera may improve wound healing in diabetes mellitus.     

视网膜色素上皮细胞对结膜囊成纤维细胞的影响

目的 :观察人视网膜色素上皮 (RPE)细胞调理液 (RPE -CM )对人结膜囊成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法 :用MTT比色法、3H -脯氨酸掺入法和原位杂交法观察RPE -CM对体外培养的成纤维细胞生长及胶原合成活性的作用。结果 :RPE细胞培养调理液可使成纤维细胞的OD值明显增高 (P<0.01) ,还可使成纤维细胞3H -脯氨酸掺入的CPM值明显高于对照组 (P<0.01)。处理组成纤维细胞中Ⅰ型前胶原mRNA原位杂交信号明显增强。结论 :RPE -CM可刺激成纤维细胞生长及胶原合成 ,此作用与RPE细胞的去分化程度有关     

骨形态发生蛋白2联合地塞米松对人牙龈成纤维细胞增殖及成骨分化的影响

背景：利用人牙龈成纤维细胞和细胞因子相结合是修复牙周组织缺损的一个新的研究热点。目的：观察骨形态发生蛋白2联合地塞米松对体外培养的人牙龈成纤维细胞的细胞增殖及成骨分化的影响。方法：培养至第3代的人牙龈成纤维细胞分5组培养：DMEM组、基础骨诱导组、基础骨诱导＋地塞米松组、骨诱导＋骨形态发生蛋白2组,骨诱导＋地塞米松＋骨形态发生蛋白2组。MTT法检测各组细胞增殖情况,碱性磷酸酶染色、茜素红染色及反转录多聚酶链反应检测各组细胞的成骨分化情况。结果和结论：人牙龈成纤维细胞具有成骨分化的潜能,骨形态发生蛋白2、地塞米松对人牙龈成纤维细胞的细胞增殖无明显影响,单独及联合应用地塞米松、骨形态发生蛋白2能够促进人牙龈成纤维细胞的碱性磷酸酶活性和钙结节的形成,其中两者联合的作用更强,而且后者能明显促进成骨相关基因的表达,提示两者联合更有效地促进人牙龈成纤维细胞成骨分化。