p42/44 MAPK 激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2 细胞凋亡

目的: 探讨二烯丙基二硫化物(DADS) 诱导CNE2 细胞凋亡及p42/44 MAPK 信号转导通路对此过程的作用。方法: DADS 处理CNE2 细胞24 h 后, 荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数, 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定细胞活性, 流式细胞仪检测凋亡细胞, 蛋白质印迹法检测磷酸化p42/44MAPK 表达。结果: DADS(50 ～ 150 μmol·L^-1) 作用24 h 后, 诱导CNE2 细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化(核浓染核碎裂), 流式细胞仪结果显示, 随着DADS 给药浓度增加, 细胞凋亡率呈浓度依赖性逐渐升高, 细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律, DADS(50 ～ 150 μmol·L^-1 ) 浓度依赖性刺激磷酸化p42/44 MAPK 的表达, p42/44 MAPK 抑制剂U0126 显著增强DADS 致凋亡作用。结论: DADS 诱导CNE2 细胞凋亡时激活磷酸化p42/44 MAPK 表达, 磷酸化p42/44 MAPK 抑制剂能增强DADS 诱导CNE2 细胞凋亡效应。     

9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐对PC12细胞缺氧缺血损伤的保护作用

目的 研究9-(4-乙氧羰基苯氧基)-6, 7-二甲氧基-1, 2, 3, 4-四氢吖啶盐酸盐(EDT) 对神经细胞缺血缺氧损伤的影响。方法 离体培养的PC12 细胞, 用连二亚硫酸钠造成缺氧/复氧损伤模型, 用NaCN 加缺糖造成拟缺血损伤模型, 通过MT T 微量比色、培养介质LDH 活力测定研究EDT 对两模型的保护作用。结果 在10^-8～10^-6 mol·L^-1范围内, EDT 浓度依赖地降低两种损伤所致培养介质内LDH 的释放, 增加MTT 比色值, 同时10^-6 mol·L^-1 EDT 对两模型的保护作用具有时间依赖性, 48 h 达效应平台。结论 EDT 对PC12 细胞缺血缺氧损伤具有保护作用。     

MPP+和6-羟基多巴胺对C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸的影响1

目的 研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP⁺)6-羟基多巴胺(6-OHDA)对C6 胶质瘤细胞摄取谷氨酸(Glu)的影响。方法 应用放射免疫法测定C6胶质瘤细胞对培养液中[³H] -D,L-谷氨酸的摄取;应用四氮唑(MTT)比色法检测胶质瘤细胞的活性。结果 6-OHDA 和MPP⁺均不同程度地抑制C6 胶质瘤细胞摄取Glu;6-OHDA 显著抑制C6 胶质瘤细胞活性,而MPP⁺却不影响细胞活性;蛋白激酶C(PKC)激动剂TPA 显著增强C6 细胞对Glu 的摄取,并拮抗MPP⁺对C6 细胞摄取Glu 的抑制。结论 6-OHDA 抑制C6 胶质瘤细胞对Glu 的摄取,可能与其抑制细胞活性有关,而MPP⁺的抑制作用可能与直接影响转运体的摄取功能有关,并可能由PKC 途径介导。     

盐酸埃他卡林对缺氧诱导神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨盐酸埃他卡林(Ipt) 对缺氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法: 用电镜和流式细胞分析技术, 检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡;应用免疫组化法, 观察凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax 表达的改变。结果: Ipt 10 μmol·L^-1可减轻缺氧诱导的细胞染色质浓缩现象, 逆转缺氧诱导的Bcl-2表达的下调, 对Bax 表达无显著影响;Ipt (0.1~10 μmol·L^-1) 能剂量依赖性地降低凋亡细胞百分率, 以10 μmol·L^-1 浓度组效果最好, 其作用可被ATP 敏感性钾通道特异性阻断剂格列本脲(Gli) 所拮抗。结论: Ipt 对缺氧诱导的神经细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与ATP 敏感性钾通道、Bcl-2 表达相关。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10^-6、10^-7、10^-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达。结果: 在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成; 西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达。结论: 西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

二甲双胍对糖基化终末产物诱导的成骨细胞氧化应激和凋亡的影响

目的: 观察二甲双胍对糖基化终末产物(AGEs)诱导的大鼠颅骨成骨细胞内氧化应激产物活性氧簇(ROS)、细胞早期凋亡的影响。方法: 分离培养大鼠颅骨成骨细胞,2′7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)作为荧光探针,流式细胞检测技术检测细胞内ROS水平,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/ PI)双染色分析细胞早期凋亡率。结果: 与未经葡萄糖处理的牛血清白蛋白(BSA)组对比,500 μg/mL AGEs显著促进成骨细胞内ROS形成和细胞凋亡(均P＜0.01);给予二甲双胍 (100~500 μmol/L)呈浓度依赖性抑制BSA组及AGEs组成骨细胞内ROS形成和细胞凋亡,浓度分别为500、400 μmol/L 时,对细胞内ROS形成和细胞凋亡的抑制作用达到最强。结论: AGEs显著诱导原代成骨细胞内ROS的形成和细胞凋亡,而二甲双胍能够呈浓度依赖性抑制AGEs诱导的成骨细胞内ROS的形成和细胞凋亡,减轻AGEs对成骨细胞的损害。     

As2O3 诱导K562细胞凋亡过程中细胞表面电荷变化的研究

目的:研究三氧化二砷(As₂O₃) 诱导K₅₆₂ 细胞凋亡时细胞表面电荷的变化, 阐明As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡的可能机制, 为As₂O₃ 在临床上的应用提供理论依据。方法:应用细胞电泳仪检测As₂O₃ 诱导K₅₆₂细胞凋亡中细胞电泳率的变化。通过细胞增殖、活力检测, 形态学观察, 亚G1 期细胞含量和DNA 凝胶电泳等鉴定细胞凋亡。结果:1.0 ～ 20 μmol·L^-1As₂O₃ 作用于K₅₆₂细胞, 在细胞形态、DNA 凝胶电泳、FCM 显示出典型的细胞凋亡特征之前, 试验组细胞表面电荷已在1.6 h 左右开始下降, 6 h 内降低最明显, 6 h 后虽有下降, 但幅度明显减弱。与对照组比较, 低于1.0 μmol·L^-1 的As₂O₃ 对细胞表面电荷影响不大。结论:细胞表面电荷的下降是K₅₆₂ 细胞凋亡的早期事件。细胞表面电荷的下降有一定的时间范围, 超过此范围, 细胞表面电荷下降趋向无限大。     

一氧化氮诱导 PC12 细胞凋亡及芍药苷的保护作用

目的: 探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法: MTT和乳酸脱氢酶活性测定细胞存活率,DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率、检测线粒体跨膜电位。结果: 500μmol·L^-1硝普钠(SNP)可诱导PC12细胞凋亡,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1、1和10μmol·L^-1等浓度芍药苷处理后,SNP诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱一氧化氮对线粒体跨膜电位的影响。结论: 芍药苷可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

奥曲肽对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

目的: 探讨奥曲肽抑制肝癌细胞生长的作用。方法: 人肝癌细胞SMMC-7721 培养于含10 %胎牛血清、100 U·ml^-1青霉素、链霉素的RPMI1640 培养液中。以4 个稀释度10^-5、10^-4、10^-3、10^-2g·L^-1将奥曲肽加入培养液,于加药后第48 h 行MTT 比色实验检测生长抑制率。奥曲肽浓度为10^-3g·L^-1时于0、6、12、24、36 h 行DNA 染色分析细胞周期。结果: MTT 比色法测定显示奥曲肽抑制肝癌细胞的生长,在浓度为10^-5、10^-4、10^-3、10^-2g·L^-1作用48 h 生长抑制率分别为9.33 %、12.70 %、19.70 %、20.93 %。药物作用12、24 h,G0-G1 期细胞比例增加,G₂-M 期细胞比例减少。结论: 奥曲肽抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖,机制可能是将肝癌细胞阻滞于G₀-G₁ 期,阻止细胞进入G₂-M 期。     

萘哌地尔衍生物BWYJ 扩张血管效应及其机理研究

目的: 观察萘哌地尔衍生物BWYJ 对家兔血管活动的影响, 并探讨其血管活性机理, 为该药的开发研究提供基础资料。方法: 采用家兔主动脉收缩的方法, 观察BWYJ 对去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT) 和高钾量效曲线的影响;应用无Ca²⁺-复Ca²⁺的实验法, 以NA 和咖啡因为血管收缩剂, 间接观察BWYJ 对细胞内游离钙浓度([Ca²⁺]_i) 的影响,并分析其可能作用机理。结果: BWYJ 10^-7、3×10^-7、10^-6mol·L^-1使NA 量效曲线明显平行右移, 而最大反应不变, pA2 值为7.61 。本品10^-6、10^-5 mol·L^-1对5-HT 量效曲线也有同样的效应, pA2值为6.56 。而当剂量为3×10^-6、10^-5 mol·L^-1时,对氯化钾(KCl) 量效曲线没有明显影响。在无钙Krebs 液中, BWYJ 10^-7、3× 10^-7、10^-6 和10^-5 mol·L^-1呈浓度依赖性抑制NA 所致血管条的短暂收缩, 对复Ca²⁺后NA 所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用, 但其剂量达10^-5 mol·L^-1时尚不能抑制咖啡因在无Ca²⁺液中所致收缩。结论: BWYJ 可能是一种α受体阻断剂, 兼有拮抗5-HT 受体的作用。其扩血管的机理可能是通过阻断细胞膜上的α受体或5-HT 受体, 从而抑制这些受体中介的Ca²⁺内流和Ca²⁺释放所致。     

羟丁酸钠和氯胺酮对心肌细胞毒性作用的对比研究

目的 对比研究羟丁酸钠和氯胺酮对原代培养大鼠心肌细胞的毒性作用。方法 将经原代培养成活4d 后的大鼠心肌细胞分为5 组, 每组6 孔。包括对照组, 小剂量(HL, 3×10^-3mol·L^-1)与大剂量(HH, 3×10^-2 mol·L^-1)羟丁酸钠组和小剂量(KL, 1×10^-5 mol·L^-1)与大剂量(KH, 1×10^-4 mo l·L^-1)氯胺酮组。各组均于实验开始后8 h 终止反应, 评定心肌细胞搏动功能、观察细胞形态学改变、测定心肌细胞酶及电解质变化。结果 与对照组相比, KL 组心肌细胞搏动频率明显加快(P<0.05), 而KH 组减慢(P<0.05)。细胞形态学亦有相应变化。KH 组LDH 和AST 释放量增加(P<0.05), ALP 活性下降(P<0.05)。而HL、HH 组的上述指标均无明显变化。各组间电解质变化未见显著差异。结论 高浓度的氯胺酮具有直接的心肌抑制作用, 而低浓度的氯胺酮却有正性变时性和变力性作用。无论低浓度或高浓度的羟丁酸钠, 均未见心肌细胞毒性作用。     

木犀草素减轻氧化应激引起的血管内皮损伤

目的: 探讨木犀草素对叔丁基过氧化氢致血管内皮损伤的保护作用及相关机制。方法: 首先通过制备大鼠胸主动脉环, 观察木犀草素对叔丁基过氧化氢所致血管张力变化的影响;再采用叔丁基过氧化氢诱导血管内皮细胞氧化损伤模型, 观察木犀草素对其细胞形态学变化及细胞活力的影响, 并用 RT-PCR 检测 eNOS 和COX-1 mR-NA 的含量变化。结果: 木犀草素能够浓度依赖性地对抗叔丁基过氧化氢导致的血管舒张功能损伤及细胞损伤作用, 且浓度依赖性地减弱叔丁基过氧化氢对内皮细胞eNOS mRNA 表达抑制的影响。结论: 木犀草素是一种有效的舒血管物质, 它可以起到抗氧化的作用, 减轻氧化应激反应, 并可能通过维持eNOS 活性等血管内皮途径舒张血管。     

替米沙坦片血药浓度的HPLC测定方法及其在健康人体的药动学研究

目的: 建立高效液相色谱法测定人血浆中替米沙坦的药物浓度,并研究其在健康人体内的药动学3方法: 采用高效液相色谱-焚光检测法,色谱柱为 Hypersil C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液（45:55,pH 5.8);流速为1.0 ml·min^-1;激发波长和发射波长分别为305 nm和365 nm;进样量20 μl;内标物为α-萘酚。结果: 替米沙坦在2~1 024 μg·L^-1范围内线性良好（r=0.9999),回收率,日间、日内差均符合生物样品分析要求。10名健康受试者口服替米沙坦片80 mg后的药动学结果表明,其体内过程符合二房室开放模型,主要药动学参数如下:C_max为0.98±0.44 mg·L^-1;T_max为 0.83±0.45 h; t_1/2为 1.67±1.26 h; t_1/2β为26.00±14.43 h;t_1/2kd为 0.53±0.86h;AUC_0-l为 3.66±2.10 mg·h ^-1; AUC_0-∞为 3.98±2.40 mg·h ^-1·L ^-1。 结论: 此方法便捷,准确,灵敏,适于替米沙坦血药浓度测定和药动学研究,本试验所得药动学参数可为临床合理用药提供理论依据。     

三种阿尔茨海默症治疗药物促体外培养小鼠皮层神经元活性的比较

目的:观察并比较3 种阿尔茨海默症治疗药物盐酸美金刚胺、美曲磷酯及白藜芦醇对体外培养小鼠皮层神经元活性的影响, 为寻找作用机理更优的先导化合物提供理论依据。方法:采用体外培养皮层神经元细胞的方法, 解剖分离15 d 胚胎小鼠皮层神经细胞, 接种于96 孔板, 48 h 后加药并培养72 h, 相差显微镜及免疫组织细胞化学方法进行形态学观察, 并以MTT 法观察3 种药物对小鼠皮层神经元活性的影响。结果:盐酸美金刚胺显著促进小鼠皮层神经元活性, 并呈现出一定的量效关系;美曲磷酯10 pmol·L^-1, 0.1, 1, 10 nmol·L^-1 剂量组对皮层神经元细胞活性没有影响, 而美曲磷酯0.1,1 μmol·L^-1剂量组显著抑制皮层神经元细胞活性;0.1 nmol·L^-1白藜芦醇显著促进皮层神经元细胞活性, 而白藜芦醇0.1, 1, 10 μmol·L^-1剂量组显著抑制皮层神经元细胞活性。结论:盐酸美金刚胺促小鼠皮层神经元活性较高, 故以其为先导化合物设计药效更高的阿尔茨海默症治疗药物的方案是可行的。     

抗病毒新药17997 抗病毒效应的细胞微量量热的研究

目的 研究抗病毒新药17997 对细胞代谢的影响和抑制病毒复制时细胞热效应的变化。方法 利用微量量热的方法。结果 热代谢曲线表明, 在有效抑制病毒复制浓度下, 17997不影响宿主细胞的正常代谢, 且能明显地降低病毒复制时的细胞热代谢。结论 17997 能够抑制病毒复制, 对宿主细胞的热代谢没有影响。     

氯苄四氢小檗碱对抗H2O2引起无血清培养的血管内皮细胞凋亡及坏死

目的: 研究氯苄四氢小檗碱对过氧化氢(H₂O₂)引起无血清培养的小牛主动脉血管内皮细胞的凋亡、增殖、坏死的影响。方法: 通过体外细胞培养, 以噻唑兰(MTT) 法测定细胞存活率;用流式细胞术检测细胞DNA 含量及凋亡细胞百分率、增殖率;DNA 琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA 断裂程度。结果: H₂O₂ 诱导无血清培养的内皮细胞凋亡, 氯苄四氢小檗碱可显著降低内皮肌细胞中凋亡细胞百分率, 并抑制其增殖, 也减少凋亡细胞DNA 断裂, 同时也减少其引起的平滑肌细胞坏死。结论: 氯苄四氢小檗碱可对抗H₂O₂ 引起的无血清培养的血管平滑肌细胞凋亡、增殖及坏死。