钙调激酶Ⅱ抑制剂对帕金森病运动并发症大鼠谷氨酸受体GluR1亚基特性的影响

目的 探讨钙调激酶Ⅱ抑制剂KN-93对帕金森病运动并发症大鼠行为学及GluR1831位丝氨酸磷酸化的影响.方法 将6-羟基多巴立体定向注射于大鼠前脑内侧束建立帕金森病动物模型.对模型成功的帕金森病大鼠接受每日2次左旋多巴(每公斤体质量50mg左旋多巴加每公斤体质量12.5 mg苄丝肼)腹腔注射,持续22d.在第23天左旋多巴注射前,帕金森病大鼠给予KN-93处理.评估旋转反应时间,采用蛋白印迹法及免疫组织化学检测纹状体区GluR1和GluR1831位丝氨酸磷酸化表达情况.结果 钙调激酶Ⅱ抑制剂KN-93逆转了左旋多巴所诱导的帕金森病大鼠旋转时间的缩短;此外,KN-93能调节与行为学改变密切相关的GluR1的亚细胞分布,且使GluR1831位丝氨酸磷酸化水平明显降低,其表达量分别为(83.4±4.2)%与(47.2±5.2)%.结论 钙调激酶Ⅱ可能通过介导GluRl的831位丝氨酸磷酸化参与了运动并发症的发生,抑制CaMKⅡ信号激酶的药物可能是治疗PD运动并发症的一种新的治疗方式.     

帕金森病运动并发症模型大鼠纹状体NR1特性的研究

目的 探讨长期左旋多巴作用对帕金森病(PD)运动并发症模型大鼠纹状体神经元N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型1(NR1)特性的影响.方法 建立PD运动并发症大鼠模型(n=25),并随机分为三组.左旋多巴长期处理组(n=10):腹腔注射左旋多巴甲酯23 d;MK-801处理组(n=10):第23天左旋多巴甲酯注射前腹腔注射MK-801;溶剂处理组(n=5):腹腔注射0.2%维生素C液.另设假手术组(n=5)为对照组.观察MK-801处理组大鼠行为学变化;采用Western blotting检测另三组大鼠纹状体膜蛋白NR1磷酸化情况.结果 MK-801处理组大鼠在左旋多巴应用第1、8、15、22天,呈现旋转反应时间逐渐缩短及剂峰旋转次数递增的趋势;第23天应用MK-801后,剂峰旋转次数与第22天相比明显减少(P<0.05),旋转反应时间则明显延长(P<0.05).与假手术组相比,溶剂处理组膜蛋白中NR1、磷酸化NR1S890和NR1S896的表达量均下降(P<0.05);而两组磷酸化NR1S897的表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).与溶剂处理组相比,左旋多巴长期处理组NR1及磷酸化NR1S890、NR1S896和NR1S897在膜蛋白中的表达量均升高(P<0.05).结论 左旋多巴引起的PD大鼠运动反应变化可能与NR1的特性改变有关.     

帕金森病运动并发症模型大鼠纹状体NR1特性的研究

目的 探讨长期左旋多巴作用对帕金森病(PD)运动并发症模型大鼠纹状体神经元N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚型1(NR1)特性的影响.方法 建立PD运动并发症大鼠模型(n=25),并随机分为三组.左旋多巴长期处理组(n=10):腹腔注射左旋多巴甲酯23 d;MK-801处理组(n=10):第23天左旋多巴甲酯注射前腹腔注射MK-801;溶剂处理组(n=5):腹腔注射0.2%维生素C液.另设假手术组(n=5)为对照组.观察MK-801处理组大鼠行为学变化;采用Western blotting检测另三组大鼠纹状体膜蛋白NR1磷酸化情况.结果 MK-801处理组大鼠在左旋多巴应用第1、8、15、22天,呈现旋转反应时间逐渐缩短及剂峰旋转次数递增的趋势;第23天应用MK-801后,剂峰旋转次数与第22天相比明显减少(P<0.05),旋转反应时间则明显延长(P<0.05).与假手术组相比,溶剂处理组膜蛋白中NR1、磷酸化NR1S890和NR1S896的表达量均下降(P<0.05);而两组磷酸化NR1S897的表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).与溶剂处理组相比,左旋多巴长期处理组NR1及磷酸化NR1S890、NR1S896和NR1S897在膜蛋白中的表达量均升高(P<0.05).结论 左旋多巴引起的PD大鼠运动反应变化可能与NR1的特性改变有关.     

成年大鼠纹状体区α-羟甲基恶唑丙酸型受体亚单位谷氨酸受体1的研究

目的研究膜α-羟甲基恶唑丙酸型(AMPA)受体亚单位谷氨酸受体1(GluR1)及其磷酸化形式在大鼠纹状体中的表达。方法采用Western印迹法、免疫组织化学法检测纹状体AMPA受体亚单位GluR1表达及磷酸化状态。结果纹状体有GluR1的表达,GluR1有(30．00±4．36)%的磷酸化胞内羧基端831位丝氨酸(GluR1S831)和(31．00±1．56)%的磷酸化胞内羧基端845位丝氨酸(GluR1S845)形式表达;GluR1以及磷酸化GIuR1S831和磷酸化GluR1S845主要在纹状体背外侧区表达,所有小清蛋白阳性的神经元均表达GluR1以及磷酸化GluR1S831和磷酸化GluR1S845,且所有GluR1以及磷酸化GluR1S831和磷酸化GluR1S845阳性的神经元均为小清蛋白阳性的神经元。结论AMPA受体亚单位GluR1独特地在纹状体小清蛋白阳性的神经元表达,且存在明显磷酸化GluR1S831和磷酸化GluR1S845表达,为深入研究病理情况下AMPA受体的特性奠定了基础。     

CaMK Ⅱ在脊髓背角LTP中调节AMPA受体GluR1亚单位的磷酸化

[目的]研究钙/钙调素调依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在大鼠脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强（LTP）中对α-氨基羟甲基异噁唑丙酸（AMPA）受体GluR1亚单位磷酸化的影响,探讨长时程增强的分子机制。 [方法]利用电生理和Western blot方法,检测脊髓背角LTP后30min和3hAMPA受体GluR1亚单位Ser^831和Ser^845位点磷酸化水平,同时在强直刺激前,脊髓局部给予CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93,检测GluR1亚单位Ser^831和Ser^845磷酸化水平变化。 [结果]强直刺激后30min、3h,脊髓背角AMPA受体GluR1亚单位Ser831和Ser845磷酸化水平明显增加。脊髓背角局部给予KN-93,阻断了LTP的诱导并且也阻止了GluR1亚单位Ser^831和Ser^845磷酸化水平的增加。 [结论]强直刺激可导致GluR1亚单位Ser831和Ser845激活且它的激活可能是通过CaMKⅡ来实现的。     

CaMK Ⅱ在脊髓背角LTP中调节AMPA受体GluR1亚单位的磷酸化

 [目的]研究钙/钙调素调依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在大鼠脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强（LTP）中对α-氨基羟甲基异噁唑丙酸（AMPA）受体GluR1亚单位磷酸化的影响,探讨长时程增强的分子机制。 [方法]利用电生理和Western blot方法,检测脊髓背角LTP后30min和3hAMPA受体GluR1亚单位Ser^831和Ser^845位点磷酸化水平,同时在强直刺激前,脊髓局部给予CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93,检测GluR1亚单位Ser^831和Ser^845磷酸化水平变化。 [结果]强直刺激后30min、3h,脊髓背角AMPA受体GluR1亚单位Ser831和Ser845磷酸化水平明显增加。脊髓背角局部给予KN-93,阻断了LTP的诱导并且也阻止了GluR1亚单位Ser^831和Ser^845磷酸化水平的增加。 [结论]强直刺激可导致GluR1亚单位Ser831和Ser845激活且它的激活可能是通过CaMKⅡ来实现的。     

精氨酸加压素对大鼠臂旁外侧核AMPA和NMDA受体亚基mRNA表达的影响

目的 探讨精氨酸加压素(AVP)对大鼠臂旁外侧核(LPB)使君子酸(AMPA)受体和N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体mRNA表达的影响.方法 腹腔连续注射AVP 1周后,采用RT-PCR技术,半定量分析大鼠LPB AMPA受体亚基GluR1、GluR2、GluR3和GluR4以及NMDA受体亚基NR2A和NR2B mRNA表达的变化.结果 与对照组比较,AVP组大鼠LPB GluR1 mRNA表达明显上调(P<0.05),而GluR2、GluR3和GluR4 mRNA表达虽有上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),NR2A和NR2B mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 AVP通过上调LPB AMPA受体,特别是GluR1亚基,而不是NMDA受体,增强LPB谷氨酸能突触传递.     

甲基苯丙胺与HIV-Tat蛋白协同致大鼠纹状体NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达

目的 观察甲基苯丙胺 (MA) 与HIV-Tat蛋白协同作用致大鼠相关脑区N-甲基-D-天冬氨酸 (NMDA) 受体NR2B亚基和诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS) 的表达变化, 探讨MA与HIV-Tat协同作用对神经系统的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠随机分为实验组:MA组 (10 mg/kg MA, 每日2次腹腔注射, 连续4 d) 、HIV-Tat组 (10μg HIV-Tat注入大鼠脑纹状体) 和MA+HIV-Tat组 (按MA组注射MA 4 d后按HIV-Tat组注入HIV-Tat) ;对照组:生理盐水腹腔注射或纹状体内注射.各组大鼠分别于注射结束后48 h和7 d处死, 麻醉后用多聚甲醛灌注, 取出脑组织并固定, 石蜡包埋, 作冠状切面, 用免疫组化和蛋白免疫印迹法对中毒大鼠纹状体中NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达进行观察, 并进行图像分析, 测量其平均光密度值, 与对照组比较并进行统计学分析.结果 各实验组与对照组比较, 纹状体内NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达均有不同程度增高, 差异具有统计学意义 (P<0.05) ;其中MA+HIV-Tat组与MA组、HIV-Tat组比较, NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达显著增高 (P<0.05) .结论 MA与HIV-Tat蛋白的共同作用能够显著增加NMDA受体NR2B亚基和iNOS的表达, 揭示NMDA受体NR2B亚基和iNOS参与了MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制.     

左旋多巴诱发异动症大鼠模型的制作及其行为学研究

目的 探讨左旋多巴(L-dopa)诱发帕金森病(PD)大鼠异动症模型的建立,以及多巴胺受体激动剂与拮抗剂对异动症大鼠不自主运动的影响.方法 6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型并给予L-dopa+苄丝肼治疗21 d,对其异常不自主运动(AIM)进行录像并评分,观察肢体运动功能及旋转行为改变情况.对出现异动症的大鼠给予多巴胺受体激动剂和拮抗剂并观察其行为学改变.结果 PD大鼠在接受L-dopa慢性治疗后出现不自主运动,第3天评分:(31.13±0.32)分,肢体运动功能在接受治疗过程中同时改善.D2受体激动剂可诱发大鼠不自主运动(48.24±1.27)分,D2受体拮抗剂可减轻L-dopa诱发的大鼠不自主运动(41.93±2.27)分,但同时拮抗L-dopa运动功能改善效应.结论 慢性脉冲式L-do-pa治疗PD大鼠可以诱发大鼠AIM,与人类L-dopa诱导的异动症(LID)具有相似的特点,可作为研究异动症的动物模型.     

损毁海马CA3区多巴胺能系统对大鼠条件性恐惧记忆的影响

目的 研究大鼠海马CA3区多巴胺(DA)能系统在条件性恐惧记忆形成与保持中的作用.方法 条件性恐惧训练前2周向双侧海马CA3区注入6-羟基多巴胺(6-OHDA)进行损毁,训练后用Western blotting检测前额叶皮层、CA1、杏仁体GluR1及NR2B的表达变化.结果 (1)与生理盐水组[(66.44±16.58)％,(73.43±23.57)％,(55.27±20.57)％]比较,6-OHDA损毁组恐惧记忆获得的僵住反应[ (65.58±5.33)％]差异无统计学意义(P＞0.05),短时恐惧记忆的僵住反应[(39.24±12.83)％]与长时恐惧记忆的僵住反应[(31.15±6.51)％]明显减少(P＜0.05).(2)与生理盐水组比较,6-OHDA损毁组大鼠前额叶皮层,海马CA1区的GluR1蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),杏仁体BLA区的GluR1蛋白表达升高(P＜0.01).与生理盐水组比较,6-OHDA损毁组大鼠前额叶皮层的NR2B蛋白表达升高(P＜0.01),海马CA1区的NR2B蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),杏仁体BLA区的NR2B蛋白表达降低(P＜0.01).结论 大鼠海马CA3区多巴胺能系统功能下调能损害恐惧记忆的巩固但不影响其获得,还可以调节其他脑区记忆相关蛋白的表达.     

Quantitative autoradiographic study on receptor regulation in the basal ganglia in rat model of levodopa-induced motor complications

In order to study neurotransmitter receptor regulation in the basal ganglia involved in the functional changes underlying levodopa-induced motor complications, quantitative autoradiography was used to observe receptor bindings of dopamine D1 and D2, N-methyl-D-aspartate （NMDA）, amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole propionic acid （AMPA） and amino butyric acid （GABA） in the basal ganglia of rats that had unilateral nigrostriatal lesions and had been chronically treated with levodopa until motor complications developed. The rats were randomly assigned to three groups： normal, denervated and treatment-complicated groups. The results showed that response duration to levodopa became progressively shorter and abnormal involuntary movement （AIM） score was progressively increased during the course of levodopa treatment. Chronic treatment augmented D1 receptors more than denervation, and reduced D2 receptors that were also increased by dopamine denervation. Striatal NMDA receptors were substantially up-regulated in the treatment-complicated group. Levodopa treatment did not change receptors of nigral AMPA, pallidal GABA, and subthalamic GABA, which remained the same as that in denervation group. However, chronic treatment reversed the increase of nigral GABA receptors caused by the lesion. It was concluded that a shortening of response duration and AIM mimicked levodopa-induced motor complications of Parkinson＇s patients. These data suggested that up-regulation of dopamine D1 and NMDA receptors in the striatum leads to an imbalance of stimulation through the striatal output pathways, which is associated with levodopa-induced motor complications.     

NMDA受体与AMPA受体亚单位在培养海马神经元树突上的表达及共定位

目的 :研究含 NR2 B亚单位的 NMDA受体 (以下简称 NR2 B- NMDAR)与含 Glu R2亚单位的 AMPA受体 (以下简称 Glu R2 - AMPAR)在不同发育阶段的培养海马神经元树突上的表面表达及共定位。方法 :以 FL AG- NR2 B、GFP- Glu R2及 CFP- Actin的表达载体共转染原代培养 5 d的大鼠海马神经元 ,分别用抗 FL AG单克隆抗体和山羊抗鼠二抗 - Cy3(红色荧光 )、抗 GFP多克隆抗体和山羊抗兔二抗 - Alex4 88(绿色荧光 )作活细胞双重染色 ,显示并计数表面表达的 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - AMPAR受体簇以及两者共定位的受体簇。结果 :培养 7d和 19d时 NR2 B- NMDAR受体簇密度分别为 39.7± 5 .0和 6 4.7± 6 .1(P<0 .0 1;n=6 ) ;Glu R2 - AMPAR受体簇密度分别为 5 9.1± 3.3和 99.7± 6 .4 (P<0 .0 1;n=6 ) ;两者共定位的受体簇密度分别为 2 9.9± 4 .5和 37.5± 2 .5 (P<0 .0 5 ;n=6 )。培养 7d和 19d时 ,与 Glu R2 - AMPAR共定位的 NR2 B- NMDAR受体簇占总 NR2 B- NMDAR受体簇的比例分别 75 .4 %和 5 7.9% ,而与 NR2 B- NMDAR共定位的 Glu R2 - AMPAR受体簇占总 Glu R2 - AMPAR受体簇的比例分别为 5 0 .6 %和 37.6 %。结论 :随着海马神经元的发育 ,成熟神经元比未成熟神经元树突表面 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - A     

高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

目的：分析高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响。方法研究时间2015年7月—2016年4月,将36只SD大鼠随机分为模型组(皮下注射用生理盐水配成的蛋氨酸溶液)和对照组(相应体积的生理盐水),检测不同时间点大鼠血浆同型半胱氨酸含量及脑内NMDA受体亚单位(NR1、NR2A、NR2B)的蛋白含量。结果模型组中第3小组大鼠的Hcy、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B分别为(21.46±1.37)、(0.99±0.13)、(0.95±0.18)、(1.47±0.25),均高于第2小组和第1小组(P<0.05),第1小组大鼠上述指标含量均为最低,分别为(10.14±1.13)、(0.74±0.11)、(0.70±0.23)、(0.68±0.13)。模型组3个小组大鼠的脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B含量均高于对照组中对应小组大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高同型半胱氨酸血症会导致大鼠脑内NMDA受体亚单位的蛋白表达上升,加重大鼠脑神经损伤。     

NMDA和AMPA型谷氨酸受体亚基在成年大鼠前脑室管膜及室管膜下区的分布

目的:观察前脑室管膜及室管膜下区N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)和使君子酸(AMPA)型谷氨酸受体的分布. 方法:应用成年SD大鼠前脑切片免疫组织化学方法,显示NMDA和AMPA受体六种亚基的细胞定位. 结果:在室管膜及室管膜下区有NMDA受体亚基NR1,NR2C及AMPA受体亚基GluR1,GluR2/3,GluR4免疫反应阳性产物的分布,免疫阳性产物则均匀地分布在细胞质或细胞膜. 半定量分析表明NR1和GluR4阳性细胞的数目和染色密度均高于NR2C,GluR1和GluR2/3阳性细胞. 结论:结合以往研究,NMDA和AMPA受体亚基在大鼠前脑室管膜及室管膜下区定位结果提示NMDA和AMPA受体可能参与该区域神经发生等功能活动的调节.     

中枢NMDA受体NR2B亚单位与神经病理性疼痛的研究现状

中枢神经系统N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体在病理性疼痛的发生和发展中起着重要作用。近年来研究发现中枢神经系统中NMDA受体NR2B亚基与神经病理性疼痛的关系尤为密切。NR2B在疼痛的产生、中枢性痛觉敏感化形成和疼痛治疗中有着深刻的意义。本文就NR2B与神经病理性疼痛的研究现状进行综述。     

老年大鼠空间记忆与海马N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基mRNA的表达

目的 观察老年大鼠在Y迷宫训练建立空间记忆后N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)2B亚基mRNA在海马区的表达变化.方法 用Y迷宫对老年(12月龄)大鼠进行短期强化训练,建立空间记忆后,于即刻,3h,6h,12h,24h,3d每组处死8只老年大鼠,取双侧海马,应用RT-PCR方法 检测大鼠海马NM-DA受体2B亚基(NR2B)mRNA的表达变化.结果 训练组动物(包括即刻,3h,6h,12h,24h组)海马NR2B mRNA的表达量[分别为(683.83±78.13),(806.00±81.43),(848.83±80.84),(915.17±84.25),(568.53±77.14)]明显高于对照组和假训练组[(398.17±74.76),(418.33±70.17),P<0.05],且12h时表达最多.3d组的表达量(430.33±74.41)与对照组和假训练组相比差异无统计学意义.结论 NR2B可能参与了学习记忆信号的转导过程,且在记忆训练后12h时表达最多,3d时恢复到基础水平.     

Humanin抑制NR1亚基表达和NR2B亚基磷酸化的神经保护作用

目的：探讨Humanin （HN）通过抑制N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化在兴奋性神经毒中发挥的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法：利用原代培养的Wistar大鼠皮层神经元建立NMDA诱导的兴奋性神经毒模型,将神经元分为对照组、NMDA组、NMDA+MK-801（MK-801）组和NMDA+HN（HN）
组。流式细胞术荧光定量检测各组神经元膜NMDA受体NR1亚基蛋白的表达,Western blotting法检测各组神经元膜NMDA受体NR2B亚基Tyr1472位点的磷酸化水平。结果： 倒置相差显微镜观察,NMDA组中的神经元胞体肿胀,个别细胞变成圆形,胞体周围光晕模糊,神经元突起大部分消失,表现出明显的神经毒性作用。流式细胞术免疫荧光定量检测,与对照组比较,NMDA组NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显增加（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组的NR1亚基蛋白的平均荧光强度值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,各组神经元的NR2B亚基总蛋白的表达水平无改变;与对照组比较,NMDA组NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平明显升高（P<0.05）;与NMDA组比较,MK-801组和HN组均能降低NR2B亚基蛋白Tyr1472位点的磷酸化水平（P<0.05）。 结论： NMDA受体NR1亚基蛋白表达水平的增加和NR2亚基磷酸化可能参与NMDA诱导的兴奋性神经毒作用;HN可能通过抑制NR1亚基的表达和NR2B亚基的磷酸化而发挥对神经元的保护作用。