自噬因子Beclin 1和LC3表达与胃癌临床病理特征的相关性研究

目的 探讨自噬因子Beclin 1和LC3表达与胃癌临床病理特征的相关性.方法 采用免疫组织化学方法,检测胃癌组织中自噬因子Beclin 1和LC3的表达情况.结果 Beclin 1蛋白在胃癌组织中的表达率为42.5%(51/120),在癌旁组织其表达率为93.3%(112/120),两者比较有显著性差异(χ2=21.3,P<0.05);LC3蛋白在胃癌组织中的表达率为90.0%(108/120),明显高于癌旁组织的表达率(29.3%,34/120),两者有显著性差异(χ2=24.8,P<0.05).Beclin 1和LC3蛋白表达与胃癌肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关,P<0.05.结论 自噬因子Beclin1和LC3表达可能与胃癌的发生发展有关.     

胃癌组织Beclin1表达与幽门螺杆菌感染的相关性

目的:探讨胃癌组织自噬相关蛋白Beclin1的表达和临床意义,及与幽门螺杆菌(HP)感染的相关性.方法:应用免疫组化法检测120例胃癌和配对正常胃组织中自噬相关蛋白Beclin1的表达;分析Beclin1的表达和临床病理学参数的关系;分析Beclin1的表达和无疾病进展生存(disease free survival,DFS)的相关性;应用碳14呼气试验检测胃癌患者幽门螺杆菌的感染,并分析Beclin1的表达和HP感染的相关性.结果:Beclin1在胃癌和正常胃组织的高表达率分别为59.2%(71/120)、36.7%(44/120),胃癌组织Beclin1的高表达率显著高于正常胃组织,差异有统计学意义(P=0.004).Beclin1的高表达与胃癌患者pTNM分期(P<0.001)和区域淋巴结转移(P<0.001)有显著负相关性.与Beclin1高表达的患者比较,Beclin1低表达患者的中位DFS显著缩短(21 vs 25个月,P=0.032).HP阳性胃癌组织的Beclin1高表达率显著高于HP阴性者(71.0%vs 43.1%,P=0.002);Spearmen相关性检验显示HP感染和Beclin1表达有显著相关性(γ=0.280,P=0.002);logistic回归分析显示HP感染对Beclin1表达有显著影响(P=0.009).结论:胃癌组织Beclin1表达水平增高;Beclin1高表达提示较好的预后;HP感染与Beclin1表达有显著相关性.     

微管相关蛋白LC3和自噬基因Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

背景与目的:有研究表明自噬活性的改变与肿瘤的发生、发展有关。诱导自噬性细胞死亡已经成为杀死肿瘤细胞的新策略。本研究检测微管相关蛋白LC3和自噬基因Beclin1在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法:用免疫组化法检测25例良性卵巢肿瘤、25例交界性卵巢肿瘤及75例上皮性卵巢癌组织的LC3和Beclin1表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:良性肿瘤组LC3和Beclin1的阳性率(100%、100%)和交界性卵巢肿瘤组LC3和Beclin1的阳性率(96%、84%)都明显高于上皮性卵巢癌组(57%、57%),且差异具有统计学意义(P均<0.001)。LC3在上皮性卵巢癌中的表达与FIGO分期和肿瘤分化程度相关(P=0.017;0.001)。Beclin1表达与上皮性卵巢癌患者FIGO分期相关(P=0.04)。LC3和Beclin1在卵巢上皮癌中的表达无相关性(P=0.875)。结论:LC3和Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,自噬活性的改变可能与上皮性卵巢癌的发生、发展相关。     

胃腺癌组织Notch1和Jagged1蛋白表达临床意义分析

目的:探讨胃腺癌组织Notch1和Jagged1蛋白的表达及其与临床病理学特征的关系和意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测2009-01-01-2012-12-12泰山医学院附属莱芜医院60例胃腺癌组织和癌旁组织中Notch1和Jagged1蛋白表达水平。结果:Notch1在胃腺癌组织中的阳性表达率为41.7%(25/60),癌旁组织为81.7%(49/60),差异有统计学意义,χ2=20.31,P<0.001;Jagged1在胃腺癌组织中的阳性表达率为71.7%(43/60),癌旁组织为96.7%(58/60),差异有统计学意义,χ2=14.07,P<0.001。Notch1表达与肿瘤分化程度(P=0.006)、淋巴结有无转移(P=0.005)和浸润深度(P=0.009)有关,Jagged1的表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、浸润深度(P=0.009)和淋巴结有无转移(P=0.006)有关。Spearman相关分析结果显示,胃腺癌组织中Notch1和Jagged1蛋白表达呈正相关,r=0.460,P<0.001。结论:胃腺癌组织中Notch1和Jagged1蛋白表达下调,且两者呈正相关,可能与胃腺癌的发生、浸润及转移等多个环节有关;检测Notch1和Jagged1的表达有助于判断胃腺癌的生物学行为。     

MiR-184在人胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响

[目的]探讨miR-184在人胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响。[方法]使用Real-time PCR检测miR-184表达,SGC-7901细胞转染,MTT法检测细胞增殖情况,Hoechst33342染色观察细胞自噬、凋亡情况,Transwell法检测细胞侵袭能力应用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞NF-κB、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达。[结果](1)胃癌组织的miR-184表达水平显著低于正常胃组织(1.74±0.12 vs 2.51±0.41,t=12.745,P<0.001)。(2)转染1d后,miR-184 mimics组的miR-184表达水平(6.02±1.15)显著高于NC组(2.15±0.37)(t=22.652,P<0.001),miR-184 inhibitors组表达水平(0.52±0.09)显著低于NC组(t=30.268,P<0.001)。(3)24~72h内,miR-184 inhibitors组和NC组的细胞增殖能力显著性高于miR-184 mimics组(P<0.05)。(4)Mi R-184 mimics组(45.39%±1.74%)侵袭率显著低于NC组(52.05%±2.03%)(t=17.614,P<0.001),而miR-184 inhibitors组(94.51%±3.08%)侵袭率显著高于NC组(t=22.652,P<0.001)。(5)MiR-184 mimics组(72.32%±22.82%)细胞凋亡率显著高于NC组(44.07%±16.23%)(t=7.133,P<0.001),而miR-184 inhibitors组(35.31%±11.29%)凋亡率显著低于NC组细胞(t=3.133,P=0.001)。(6)MiR-184 mimics组可见大量自噬泡,NC组自噬泡可见部分,miR-184 inhibitors组仅可见极少量自噬泡。(7)MiR-184 mimics组NF-κB、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平显著高于NC组(t=14.055、14.486、28.450,P均<0.001),miR-184inhibitors组NF-κB、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平显著低于NC组(t=15.423、10.354、39.836,P均<0.001)。[结论]MiR-184可在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖能力,其主要作用机制是诱导胃癌细胞的自噬与凋亡。     

AnnexinⅡ和NF-κBp65蛋白在胃腺癌组织中的表达意义

目的 检测胃腺癌组织中Annexin Ⅱ、NF-kBp65蛋白的表达,探讨两者在胃腺癌组织中的表达意义.方法 用免疫组化S-P法检测33例胃腺癌组织、20例萎缩性胃炎组织和33例胃正常组织中Annexin Ⅱ、NF-kBp65蛋白的表达情况,分析其与胃腺癌组织临床病理学特征的关系.结果 1)Annexin Ⅱ、NF-kBp65蛋白在胃腺癌组织中的阳性表达率分别为81.82%、75.76%,均显著高于萎缩性胃炎组织(45.00%、40.00%)(P<0.05)和胃正常组织(24.24%、15.15%)(P<0.05);2)Annexin Ⅱ蛋白在伴有淋巴结转移的胃腺癌组织中的阳性表达率(95.00%)明显高于无淋巴结转移组织(61.54%)(P<0.05).NF-kBp65蛋白在低分化腺癌中的阳性表达率(93.75%)明显高于中高分化腺癌(58.82%)(P<0.05),NF-kBp65蛋白在伴有淋巴结转移的胃腺癌组织中的阳性表达率(90.00%)明显高于无淋巴结转移组织(53.85%)(P<0.05);3)Annexin Ⅱ蛋白和NF-kBp65蛋白在胃腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.467,P<0.05).结论 Annexin Ⅱ、NF-kBp65蛋白的高表达可能在胃腺癌的发生发展和浸润转移中起重要作用.     

PTEN、NF-κBp65和CyclinD1在胃腺癌中的表达及其与肿瘤临床病理间的相关性

背景与目的:探讨PTEN、NF-κBp65和CyclinD1在胃腺癌组织中的表达及其与肿瘤临床病理特征之间的相关性.材料与方法:用免疫组织化学S-P法检测73例胃腺癌及20例正常胃粘膜组织中PTEN、NF-κBp65和CyclinD1的表达情况.结果:①PTEN在胃腺癌组织中蛋白表达阳性率为42.5%(31/73),明显低于它在正常胃粘膜组织中的阳性表达率90%(18/20)(P＜0.01);NF-κBp65和CyclinD1在胃腺癌组织中蛋白表达阳性率分别为58.9%(43/73)和60.3%(44/73),明显高于它们在正常胃粘膜组织中的阳性表达率20%(4/20)和25%(5/20)(P＜0 01);②PTEN与胃腺癌组织分化程度呈正相关(P＜0.01),与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈负相关(P＜0.01或P＜0.05);NF-κBp65与胃腺癌组织分化程度呈负相关(P＜0.05),与胃腺癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈正相关(P＜0.05或P＜0.01);CyclinD1与胃腺癌的浸润深度相关(P＜0.05),与组织分化程度、淋巴结转移及临床分期无相关关系;③胃腺癌中PTEN的阳性表达率与NF-κBp65和CyclinD1均呈负相关(P＜0.05,P＜0.01),NF-κBp65与CyclinD1的阳性表达率呈正相关(P＜0.05).结论:PTEN、NF-κBp65和CyclinD1基因在胃腺癌的发生、发展中起着不同的作用;联合检测PTEN、NF-κBp65和CyclinD1,可能有助于对胃腺癌恶性程度的判定及侵袭转移能力的评估,进而为胃腺癌的预后分析和进一步治疗提供依据.     

SPARC蛋白在胃癌中的表达及与胃癌预后的关系

目的 探讨富含半胱氨酸(Cys)的酸性分泌蛋白(SPARC蛋白)在胃腺癌组织中的表达及与胃腺癌患者预后的关系。方法 免疫组化法检测104例胃腺癌组织和30例癌旁组织中SPARC蛋白的表达差异,并应用统计学的方法分析SPARC蛋白与胃腺癌患者预后的关系。结果 SPARC蛋白在30例癌旁胃黏膜组织中阳性率为20%(6/30),且均为弱表达或无表达,在104例胃腺癌组织中阳性率为76.1%(79/104),二者差异有统计学意义(P＜0.01)。胃腺癌组织中,SPARC蛋白表达高低与淋巴结转移及组织分化程度呈正相关(P＜0.05);SPARC蛋白高表达的胃腺癌患者平均生存时间为27.4个月,明显低于低表达者的40.9个月(P＜0.05)。结论 SPARC蛋白在胃腺癌组织中高表达,且主要表达于胃腺癌细胞周围的间质中;其与淋巴结转移及组织分化程度显著相关;SPARC蛋白高表达的胃腺癌患者生存期短,预后差,但SPARC蛋白不是其独立的预后因素。     

不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响

目的:探讨不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响。方法:选取处于对数生长期的SiHa细胞,将其分为5组,分别应用不同浓度叶酸（0.1 μg/ml、1.0 μg/ml、10 μg/ml、100 μg/ml、1 000 μg/ml）干预72 h,记录干预后各组SiHa细胞自噬小体数量;采用qRT-PCR法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3及p62 mRNA表达情况;采用Western blot法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3和p62蛋白表达情况。结果:不同浓度叶酸干预后自噬小体数量比较,1 000 μg/ml组明显高于其他组（P<0.05）,其中0.1 μg/ml组数量最低,1.0 μg/ml组与10 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。qRT-PCR法测定结果显示,随干预叶酸浓度升高,宫颈癌SiHa细胞中自噬蛋白Beclin1、LC3的mRNA明显升高（P<0.05）;p62 mRNA表达水平随叶酸浓度升高而降低（P<0.05）。Western blot法测定结果显示,自噬蛋白Beclin1、LC3的蛋白表达水平随叶酸浓度增高而增高（P<0.05）,p62蛋白表达水平随叶酸浓度升高而下降（P<0.05）。结论:不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的抑制效果不同,剂量越低抑制效果越强,高剂量叶酸还有刺激宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的作用。     

血管活性肠肽在胃腺癌中的表达及意义

目的:研究胃腺癌中是否存在分泌血管活性肠肽(VIP)的肿瘤细胞,探讨VIP在胃腺癌发生中的作用.方法:通过免疫组化方法.检测30例正常胃窭黏膜,30例不典型增生胃黏膜和74例胃腺癌组织中VIP蛋白的表达,以及中分化胃腺癌细胞系SGC-7901,低分化胃腺癌细胞系BGC-823及未分化胃腺癌细胞系HGC-27中VIP蛋白的表达.结果:36/74例(48.6%)胃腺癌组织中发现VIP阳性细胞.其中高分化7例,中分化15例,低分化14例.阳性细胞形态不规则,多数为细胞浆着色,少数细胞膜着色,核大而不规则.4/30例(13.3%)不典型增生及3/30例(10.0%)正常胃窦黏膜存在VIP阳性细胞.胃腺癌细胞株VIP蛋白呈高水平表达,其中SGC-7901阳性率为71.5%,BGC-823阳性率为82.3%,HGC-27 阳性率为92.8%,VIP免疫反应阳性颗粒主要出现在胞浆.结论:胃腺癌组织的肿瘤细胞有较高VIP蛋白表达;胃腺癌细胞株分泌VIP蛋白,且阳性率有随其分化程度降低而升高的趋势.推测VIP蛋白可能与胃腺癌的发生有密切的关系.     

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点-1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点-1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virusintegration site-1,Bmi-1)蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学法检测正常胃黏膜、慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、异型增生及胃癌组织中Bmi-1、c-myc和Zeste基因增强子同源物2(enhancerof Zeste homolog 2,EZH2)蛋白的表达.结果:Bmi-1蛋白在正常胃黏膜、慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、异型增生和胃癌组织中的阳性表达率分别为5.0％、16.7％、30.7％、58.1％和78.0％,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).胃癌组织中Bmi-1高表达率为45.0％,其表达水平与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P＜0.05).胃癌组织中Bmi-1的表达与c-myc、EZH2表达之间呈正相关rs=0.567,P＜0.001;rs=0.582,P＜0.001).结论:Bmi-1在胃癌组织中表达上调,其高表达与胃癌的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关.     

自噬基因Beclin1与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性研究

背景与目的:有研究表明自噬的抑制与肿瘤的发生有关,沉默自噬基因Beclin1可导致多种恶性肿瘤的发生.本研究探讨Beclin1基因在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析其过表达对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响.方法:用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织的Beclin1表达;构建真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,脂质体法分别将质粒pcDNA3.1/Beclin1、pcDNA3.1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况.结果:正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中Beclin1表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值均较高,两者之间的差异无显著性(P＞0.05);交界性卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达降低,而在上皮性卵巢癌中Beclin1表达的IOD值最低,与正常卵巢组织比较差异有显著性(P＜0.05).ocDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后细胞生长抑制率为(68.75±5.10)%,而pcDNA3.1转染组为(10.91±4.20)%,两者之间差异有显著性(P＜0.05).pcDNA3.1/Beclin1转染后72 h SKOV3细胞的凋亡率为19.07%,高于pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P＜0.05).结论:Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;自噬基因Beclin1的过表达可抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡.     

Beclin 1 expression is an independent prognostic factor for gastric carcinomas

Beclin 1, an important autophagy-related protein in human cells, is involved in autophagy, differentiation, anti-apoptosis, and cancer progression, which is increased during periods of cell stress and extinguished during the cell cycle. In order to clarify the role of Beclin 1 in gastric carcinogenesis and subsequent progression, its expression was examined by immunohistochemistry and in situ hybridization (ISH) on tissue microarrays containing gastric carcinomas, adjacent non-neoplastic mucosa, and metastatic lymph node. Gastric carcinoma tissue and cell lines were studied for Beclin 1 expression by Western blot or RT-PCR, respectively. The results demonstrated that Beclin 1 was distinctively expressed in GES-1, AGS, BGC-823, GT-3 TKB, HGC-27, KATO-III, MGC-803, MKN28, MKN45, SCH, SGC-7901, or STKM-2 at both mRNA and protein levels. However, Beclin 1 mRNA was highly expressed in gastric carcinoma than matched mucosa by real-time PCR and ISH (P?<?0.05). Beclin 1 expression was negatively related to distant metastasis and poor prognosis of gastric carcinoma (P?<?0.05). Beclin 1 was highly expressed in male than female patients with gastric carcinoma (P?<?0.05). The 65-year-elder patients with gastric carcinoma had higher Beclin 1 expression than the younger ones (P?<?0.05). The diffuse-type carcinomas showed less Beclin 1 expression than intestinal- and mixed-type ones (P?<?0.05). In intestinal-type gastric carcinoma, Beclin 1 expression was inversely associated with venous invasion, lymph node metastasis, and tumor–node–metastasis (TNM) staging (P?<?0.05). Kaplan–Meier analysis indicated that Beclin 1 expression was positively linked to favorable prognosis of the patients with overall and intestinal-type carcinoma (P?<?0.05). Cox’s proportional hazard model indicated that venous invasion, lymph node metastasis, distant metastasis, TNM staging, and Beclin 1 expression were independent prognostic factors for gastric carcinomas (P?<?0.05). It was suggested that aberrant Beclin 1 expression is closely linked to pathogenesis, metastasis, and differentiation of gastric carcinoma. Beclin 1 expression might be employed to indicate the favorable prognosis of gastric carcinomas as an independent factor.     

人胃癌组织中RUNX3、DNMT1的表达及其与Hp感染的相关性研究

目的:探讨RUNX3、DNMT1在人胃癌组织中的表达,分析其与胃癌临床病理特征及Hp感染的关系。方法:取70例手术的胃癌及癌旁胃黏膜组织,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测RUNX3及DNMT1基因的mRNA水平,免疫组化分别检测蛋白的表达水平。结果:胃癌组织中RUNX3的表达显著下调,DNMT1表达明显增高,RUNX3表达下调与肿瘤分化程度及淋巴结转移密切相关(P﹤0.05)。RUNX3下调的胃癌组织中DNMT1的表达明显高于RUNX3正常的组织(P<0.05),在Hp阳性的胃癌组织中RUNX3的表达明显低于Hp阴性的胃癌组织(P<0.05)。结论:RUNX3基因和DNMT1基因可能参与胃癌的发生发展,Hp感染在一定程度上参与RUNX3基因失活。     

Prognostic impact of Beclin 1, p62/sequestosome 1 and LC3 protein expression in colon carcinomas from patients receiving 5-fluorouracil as adjuvant chemotherapy

Autophagy is a cellular degradation process that can be activated in tumor cells to confer stress tolerance. During autophagy initiation and autophagosome formation, Beclin 1 binds microtubule-associated protein-1 light chain 3 (LC3I) that is converted to its membrane-bound form (LC3II) and interacts with the ubiquitin-binding protein p62/sequestosome 1 (SQSTM1). We determined the association of Beclin 1, LC3 and p62 protein expression with clinical outcome in resected stage II and III colon carcinomas (n = 178) from participants in 5-fluororuacil (5-FU)-based adjuvant therapy trials. The immunopercentage for each marker was determined and dichotomized for analysis with overall survival (OS) using Cox models. We found that autophagy markers localized to the tumor cell cytoplasm and showed increased expression relative to normal epithelial cells. Overexpression of Beclin 1, LC3 and p62 proteins were detected in 69%, 79% and 85% of tumors, respectively. Expression levels were not significantly associated with clinicopathological variables. In a multivariable analysis adjusting for tumor grade, stage and patient age, Beclin 1 overexpression was independently associated with worse OS [hazard ratio (HR), 1.82; 95% confidence interval (CI), 1.0–3.3; p = 0.042] in patients who received 5-FU-based adjuvant therapy. Neither LC3 nor p62 overexpression was prognostic. In conclusion, Beclin 1 overexpression was associated with reduced survival in colon cancer patients treated with adjuvant 5-FU. These data are consistent with preclinical evidence indicating that autophagy can protect colon cancer cells from 5-FU and support the targeting of autophagy for therapeutic advantage in this malignancy.     

EGFR和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的表达及意义

目的 分析表皮生长因子受体1 (EGFR)和自噬标记蛋白Beclin1在宫颈癌组织中的意义.方法 子宫颈癌患者癌组织标本50例,行全子宫切除术的正常组织标本20例,宫颈上皮内瘤变(CIN)病变组织标本19例,比较3组标本中EGFR和Beclin1的表达阳性情况、宫颈癌临床资料与EGFR和Beclin1表达的关系.结果 EGFR表达阳性率以宫颈癌组最高,其次为CIN组,正常对照组最低(P＜0.05),Beclin1的表达阳性率以宫颈癌组最低,其次为CIN组,正常对照组最高(PP ＜0.05),Beclin1表达阳性率与是否发生淋巴结转移显著相关(P＜0.05).结论 EGFR和Beclin1表达与宫颈癌的发生发展有关,且Beclin1表达与是否发生淋巴结转移密切相关.