磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂LY294002对小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用

目的　探讨磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K）/丝氨酸-苏氨酸激酶（Serine/threonine kinase,AKT）信号转导通路抑制剂LY294002对小鼠氧诱导视网膜病变（oxygen-induced retinopathy,OIR）的视网膜新生血管（retinal neovascularization,RNV）形成的影响。方法　取C57BL/6J小鼠60只,随机分为实验组和对照组,每组各30只,均制备OIR模型。小鼠出氧箱前1 d即鼠龄11 d时实验组玻璃体内注射0.5 μL的LY294002,对照组玻璃体内注射等体积的PBS。病理切片计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数,免疫组织化学和RT-PCR法检测pAKT、VEGF蛋白及mRNA的表达情况。结果　实验组小鼠新生血管内皮细胞核数为（12.53±1.71）个,较对照组（25.31±1.42）个明显减少（P<0.05）;实验组小鼠pAKT、VEGF的蛋白表达呈弱阳性,阳性细胞的吸光度值（9.12±1.35、13.91±1.49）均较对照组（15.11±2.17、19.72±2.61）明显下降（均为P<0.05）;实验组小鼠AKT、VEGF mRNA相对表达量均较对照组明显下降（均为P<0.05）。结论　LY294002通过抑制PI3K/AKT信号转导通路,可有效抑制小鼠OIR的RNV形成,LY294002有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效方法。     

α-黑素细胞刺激素抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的生成

背景 视网膜新生血管形成(RNV)可发生于多种眼病,导致视网膜出血甚至脱离,抑制病理性RNV已逐渐成为眼科疾病治疗中的重点.α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对视网膜发育过程中的生理性血管生成有抑制作用,但其在病理性RNV方面的作用尚未见报道. 目的 以氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠为模型,研究玻璃体腔注射不同质量浓度的α-MSH对病理性RNV的作用. 方法 选取健康清洁级7日龄C57BL/6J幼鼠40只,应用随机数字表法随机分为OIR+0.33μg/μl α-MSH组、OIR+1.67 μ.g/μl α-MSH组、OIR+3.30 μg/μlα-MSH组、OIR组和正常对照组,每组8只.不同剂量α-MSH干预组和OIR组幼鼠在氧体积分数(75±2)％的高氧环境下饲养5d,然后在普通空气环境中饲养5d,正常对照组幼鼠则在普通空气环境中饲养10d.各组取17日龄鼠,球后静脉注射高相对分子质量异硫氰酸葡聚糖(FITC-dextran),制备视网膜铺片,观察视网膜的血管形态,计算无灌注区面积相对于整个视网膜的面积.对小鼠眼球行石蜡切片和苏木精-伊红染色,计数突破内界膜突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数. 结果 视网膜铺片结果显示,正常对照组、OIR组、OIR+O.33 μg/μl α-MSH组、OIR+1.67 μg/μl α-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组视网膜无灌注区相对面积分别为(0.00±0.00)％、(23.01±3.39)％、(18.14±7.20)％、(15.64±7.07)％和(7.62±6.52)％,各组间视网膜无灌注区相对面积总体比较,差异有统计学意义(F=19.635,P＜0.05);其中OIR组无灌注区相对面积显著高于OIR+3.30 μg/μl α-MSH组,差异有统计学意义(t=4.293,P＜0.01).组织病理学检查结果显示,正常对照组、OIR组、OIR+0.33 μg/ μl α-MSH组、OIR+ 1.67 μg/μl α-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数分别为(0.00±0.00)、(11.45±4.26)、(6.35±2.34)、(4.96±1.79)和(1.03±1.25)个.各组突入玻璃体腔的新生血管内皮细胞核数总体比较,差异有统计学意义(F=147.87,P＜0.05);其中OIR组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著高于OIR+0.33μg/μl α-MSH组、OIR+ 1.67 μg/μlα-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组,差异均有统计学意义(均P＜0.001). 结论 α-MSH可减少OIR小鼠模型视网膜中无灌注区的相对面积和视网膜新生血管核数,其对病理性RNV的抑制作用呈剂量依赖性.     

夜间光照对氧诱导的视网膜病变小鼠视网膜新生血管形成的影响

背景 氧诱导的视网膜新生血管形成是多种视网膜血管性疾病的病理学基础,预防视网膜新生血管的形成可缓解视网膜病变对视网膜的损害程度.研究表明夜间睡眠时给予光照可能对早期糖尿病视网膜病变(DR)患者有利,但其对早产儿视网膜病变(ROP)患者视网膜新生血管有无影响报道较少.目的 观察夜间光照对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管形成的影响.方法 将64只SPF级新生C57BL/6J小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组、单纯夜间光照组、OIR模型组、OIR联合夜间光照组,每组16只小鼠.正常对照组和单纯夜间光照组小鼠生长于正常空气(氧体积分数21％);OIR模型组和OIR模型联合夜间光照组小鼠于出生后第7天置于高氧环境(75％±2％)生长,出生第12天调整氧体积分数为正常;OIR联合夜间光照组和单纯夜间光照组于出生后第12～17天给予夜间光照,光照度为100 Ix.各组小鼠均于出生后第17天摘除眼球,采用ADP酶法制备视网膜铺片,了解视网膜血管的改变情况;视网膜组织切片行苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数;免疫组织化学法观察各组小鼠视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测各组视网膜中VEGFmRNA的表达.实验动物的使用和喂养遵循ARVO声明.结果 正常对照组和单纯夜间光照组小鼠视网膜血管形态均无明显差异.OIR模型组视网膜铺片显示视网膜中央部大片无血管区,大量结构异常的新生血管形成.与OIR模型组相比,OIR模型联合夜间光照组视网膜中央无血管区面积以及新生血管分布密度减少.在实验后第17天时,正常对照组和单纯夜间光照组视网膜新生血管内皮细胞核数分别为(0.97±0.83)个和(1.00±0.72)个,OIR模型组为(38.57±5.01)个,而OIR联合夜间光照组小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数为(16.92±3.39)个,总体差异有统计学意义(F=78.767,P=0.000),OIR联合夜间光照组视网膜新生血管内皮细胞核数明显少于OIR模型组,差异有统计学意义(t=20.446,P＜0.01).免疫组织化学法检测显示OIR模型联合夜间光照组中VEGF蛋白表达明显少于OIR模型组.正常对照组、单纯夜间光照组、OIR模型组和OIR联合夜间光照组小鼠视网膜VEGF mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、0.94±0.07、2.08±0.50和1.43±0.21,各组间的总体差异有统计学意义(F=11.268,P=0.003),OIR模型联合夜间光照组表达较OIR模型组下调,差异有统计学意义(t=20.163,P＜0.05).结论 夜间光照可减少OIR小鼠视网膜新生血管的形成.     

阻断促红细胞生成素抑制小鼠视网膜新生血管生成

目的：建立C57 BL/6小鼠氧致血管增生性视网膜病变模型( oxygen induced retinopathy, OIR),探讨阻断促红细胞生成素( Erythropoietin, EPO )对视网膜新生血管的抑制作用。
　　方法：取鼠龄7 d ( P7)的健康C57 BL/6小鼠置于75%±2%氧气浓度的密闭氧舱中5d,鼠龄12d (P12)时返回正常空气环境以建立氧诱导鼠视网膜新生血管模型;新生小鼠于P12~P16隔日给予玻璃体腔内注射0.5μL含有25ng(A组),50ng(B组),250ng(C组)可溶性EPO受体的PBS液以及不含EPO受体的PBS液( D组)。于P17时分批处死各组小鼠,小鼠眼球以4%多聚甲醛固定,制成病理切片,进行视网膜组织形态病理学观察计数突破内界膜新生血管细胞核数,了解视网膜新生血管增生程度。
　　结果：计数病理切片突破内界膜新生血管细胞核数目,各组玻璃体内EPO受体注射组较PBS注射组新生血管细胞核数明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。并且各不同浓度EPO受体组间新生血管细胞核计数差异亦有统计学意义(P<0.01),随着EPO受体浓度增高,突破内界膜新生血管内皮细胞数减少。
　　结论：可溶性EPO受体玻璃体腔内注射能够阻断EPO的促新生血管生成作用,有望成为治疗眼部新生血管性疾病的新方法。     

血管能抑素基因转移抑制视网膜新生血管的实验研究

目的 观察血管能抑素真核表达质粒(pCMV-HA)对小鼠视网膜新生血管RNV形成的抑制作用.方法 将鼠龄为7 d的56只C57BL/6J新生小鼠随机分为正常对照组、氧诱导视网膜病变(OIR)模型组、治疗组和空载体组,每组14只.后3组小鼠置于(75±2)%浓度的氧环境中饲养5 d后,回到正常空气环境中建立氧诱导的RNV动物模型.治疗组小鼠在出生后第12天出氧箱时行玻璃体腔注射血管能抑素pCMV-HA,空载体组注射等量空质粒.出生后第17天行伊凡思蓝(Evans blue)灌注血管造影视网膜铺片观察血管变化.石蜡切片行苏木精-伊红染色,光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数.结果 视网膜铺片结果显示,治疗组较OIR模型组和空载体组视网膜血管分布均匀,新生血管和无灌注区显著减少.治疗组突破内界膜的内皮细胞核数与OIR模型组及空载体组比较,差异有统计学意义(F=39.006,P<0.001).结论 血管能抑素pCMV-HA对氧诱导的RNV有显著的抑制作用.     

特异性抑制富含半胱氨酸蛋白61干扰RNA对小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用观察

目的 观察特异性抑制富含半胱氨酸蛋白61(CCN1)对氧诱导视网膜病变(OIR)模型小鼠视网膜新生血管(RNV)的抑制作用.方法 7日龄C57BL/6J小鼠120只,随机分为对照组和实验组,每组各60只.参照文献方法制备OIR模型.小鼠出氧箱前1d即鼠龄11d时,对照组、实验组小鼠玻璃体腔分别注射空载体质粒、CCN1siRNA表达质粒各1μl.视网膜铺片观察视网膜血管形态,病理切片计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数,免疫组织化学、蛋白免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应检测CCN1、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA的表达情况.结果 与对照组比较,实验组小鼠视网膜血管分布规则、分支良好、新生血管密度减少.两组间突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量比较,差异有统计学意义(t=8.756,P＜0.05);CCN1、VEGF蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(t=3.253、5.365,P＜0.05);CCN1、VEGF蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(t=4.573、5.323,P＜0.05);CCN1、VEGFmRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(t=6.724、9.153,P＜0.05).结论 特异性抑制CCN1能有效抑制OIR模型小鼠RNV形成.     

ILK在氧诱导视网膜病变小鼠模型视网膜组织中的表达

背景 研究表明,整合素连接激酶( ILK)在新生血管形成过程中发挥重要作用,目前ILK在其他组织器官新生血管形成过程中的机制已有报道,但少有其与视网膜新生血管形成关系的研究. 目的 探讨ILK在氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型视网膜新生血管形成和退化过程中的表达及其意义.方法 选用7日龄健康清洁级C57BL/6J小鼠128只,按随机数字表法分为正常对照组和OIR模型组.将小鼠与哺乳母鼠共同置于体积分数(75±2)％氧的玻璃氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立小鼠OIR模型,正常对照组在正常氧环境中饲养21d.取OIR模型组和正常对照组出生后第17天小鼠各5只制备视网膜切片,进行苏木精-伊红染色,检测每张切片中突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目.取出生后第12、14、17、21天OIR模型组和正常对照组小鼠各4只分别制备视网膜切片和视网膜铺片,应用ADP酶组织化学法动态观察视网膜新生血管形成和退化过程;采用免疫组织化学法、实时定量聚合酶链反应( real-time PCR)法和Western blot法检测ILK蛋白及其mRNA在小鼠视网膜中的表达情况. 结果 OIR模型组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核计数为(45.64±12.17)个,正常对照组为(0.35±0.14)个,两组间差异有统计学意义(t=22.85,P＜0.05).视网膜铺片结果显示,OIR模型组小鼠第14天视网膜新生血管开始出现,与同龄正常对照组小鼠视网膜血管比较,出生后17d小鼠新生血管形成和血管走行异常等达到高峰,至21d时新生血管开始退化.免疫组织化学检测显示,ILK主要表达于视网膜神经节细胞层、内核层、内丛状层和光感受器层.Real-time PCR和Western blot结果表明,OIR模型组第12、14、17、21天ILK mRNA在视网膜中的表达水平为(1.00±0.22)、(1.85±0.17)、(1.58±0.43)、(1.53±0.36),呈先升高后下降的趋势;在第12、14、17、21天与正常对照组比较小鼠OIR模型组ILK/3-actin吸光度值均高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=2.97,P＜0.05;t=11.88,P＜0.01;t=16.84,P＜0.01;t=13.00,P＜0.01). 结论 ILK的表达水平与视网膜新生血管的形成存在时空对应关系,ILK的高表达可能与视网膜新生血管形成密切相关.     

Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制

目的　探讨Arresten在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及机制。方法　选取48只出生后7 d健康清洁级C57BL/6J幼鼠,随机分为氧诱导视网膜病变（oxygen induced retinopathy,OIR）组、OIR+ Arresten组和常氧组,每组16只。OIR+Arresten组及OIR组幼鼠在体积分数为（75±2）％的高氧环境下饲养5 d,然后转移至正常氧气环境中饲养5 d,其中OIR+Arresten组幼鼠于高氧饲养刚结束时,给予双眼玻璃体内注射Arresten蛋白。常氧组幼鼠则在常规氧气环境中连续饲养10 d。在鼠龄17 d时,各组取6只幼鼠经股静脉注射异硫氰酸葡聚糖溶液处死并摘出眼球,视网膜铺片后观察视网膜的血管形态、计算无灌注区面积。同时对小鼠眼球视网膜行石蜡切片和HE染色,计算侵入玻璃体内血管内皮细胞核的数量。同时,通过细胞培养实验,利用MTT法检测Arresten蛋白对人血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果　视网膜铺片结果显示,常氧组、OIR组、OIR+Arresten组视网膜无灌注区相对面积分别为（2.35±1.62）％、（57.28±9.36）％和（20.38±8.69）％,三组间总体比较,差异有统计学意义（F=18.732,P<0.05）,且OIR组无灌注区相对面积显著高于OIR+Arresten组,差异有统计学意义（P<0.05）。常氧组小鼠视网膜的内界膜结构仍保持平滑完整,未发现有新生血管侵入玻璃体内。OIR组和OIR+Arresten组每张切片上血管内皮细胞核的数量分别为 （15.18±4.83）个、（7.33±3.88）个,其中OIR+Arresten组侵入玻璃体内新生血管内皮细胞核的数量显著低于OIR组,差异有统计学意义（P<0.05）。Arresten蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制率随着其浓度的升高而增加,但当Arresten蛋白浓度达到1000 μg·L^-1时,人脐静脉内皮细胞的增殖抑制率达到顶峰,为（58.00±0.65）％。结论　Arresten蛋白能够抑制氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成,通过抑制血管内皮细胞增殖来抑制新生血管形成。     

PEDF抑制鼠视网膜新生血管的实验研究(英文)

目的:观察PEDF对氧诱导的血管增生性视网膜病变动物模型视网膜新生血管的抑制作用。方法:40只7日龄的C57BL/6J新生鼠暴露在750mL/L高氧环境中,然后回到正常空气中建立氧诱导的血管增生性视网膜病变的动物模型。随机取1眼为实验眼,在出氧箱时(12d)玻璃体腔注射PEDF,另1眼为对照组,玻璃体腔注射PBS。所有小鼠均于17d处死,视网膜铺片,ADP酶染色观察视网膜血管情况。HE染色,在光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目。结果:与对照组相比,实验组视网膜血管分布规则,未见明显的无灌注区形成;实验组突破内界膜的内皮细胞细胞核数目(10.18±1.74)比对照组(38.89±2.98)明显减少(P<0.01) ;组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。结论:PEDF能够有效抑制视网膜新生血管的生成。     

环氧合酶-2和存活素在视网膜新生血管中的表达

目的:探讨存活素(Survivin)和环氧合酶-2(COX-2)在视网膜新生血管中的表达。方法:以高浓度氧诱导C57BL/6J小鼠建立视网膜新生血管模型。取对照组和给氧组幼鼠眼球作荧光素血管灌注、病理切片及免疫组织化学检测,分别观察视网膜血管的改变、视网膜新生血管内皮细胞数目及Survivin和COX-2蛋白的表达。结果:给氧组视网膜可见大量新生血管形成,新生血管内皮细胞核数为23.38±1.07个,与对照组相比差异有显著统计学意义(P<0.01)。正常对照组:视网膜组织各层中未见Survivin和COX-2蛋白表达(2.56±0.46,2.37±0.80)。给氧组:Survivin蛋白表达在神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管(3.34±0.40),COX-2蛋白表达在内核层、神经节细胞层和突破视网膜内界膜的新生血管(3.89±0.56)。两者表达呈显著正相关(r=0.394,P<0.01)。结论:在视网膜新生血管形成中存在Survivin和COX-2的高表达,且两者表达密切相关。     

Efficacy of intravitreal captopril on oxygen-induced retinopathy in mice

AIM: To study the inhibitory effect of intravitreal captopril on oxygen-induced retinopathy (OIR) in mice. METHODS: Eighty postnatal day (P)7 C57BL/6J mice were randomly divided into treated group and control group with forty mice in each group. The mice were exposed to 75% ± 2% oxygen for 5 days (P7-P11) and then returned to room air for 5 days (P12-P17) to induce retinal neovascularization (RNV). Beginning on P12, the mice in treated group received daily intravitreal injections of captopril (3.0mL/kg), while those in control group received daily intravitreal injections of phosphate-buffered saline (PBS) (3.0mL/kg) through P17. After anesthetized at P17, one eye was chosen randomly as experimental eye and were enucleated. RNV was examined by Adenosine diphosphate-ase (ADPase) stained retina flat-mounts and was quantitated histologically by counting the neovascular endothelial cell nuclei anterior to inner limiting membrane (ILM). The expressions of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were measured by immunohistochemical method. RESULTS: Comparing with control group, more regular distributions, better branch and reduced density of RNV were observed in eyes of treated group. The number of neovascular cell nuclei was less in treated group than that in control group (t=6.135, P<0.01). Stain of MMP-2 and VEGF was weaker in treated group than that in control group. CONCLUSION: The results indicate that captopril can significantly inhibit RNV in OIR mice.     

噻吗洛尔眼液治疗LASIK术后屈光回退54例疗效分析

目的:分析总结2.5g/L马来酸噻吗洛尔眼液(timolol)对准分子激光原位角膜磨镶术(laserin situkeratomileusis,LASIK)后屈光回退的治疗效果。方法:选取我院准分子中心2007-08/2008-08接受LASIK手术病例1400例2650眼,随访0.5a以上,发生屈光回退者有53例66眼,按手术时间随机分为两组,试验组使用2.5g/L马来酸噻吗洛尔眼液进行治疗,对照组使用1g/L玻璃酸钠眼液进行治疗,两组治疗时间均为2wk,治疗结束后将试验组与对照组进行分析比较(视力提高行数)。结果:试验组视力提高-1~4(平均1.45±1.09)行,对照组视力提高-2~2(平均0.61±0.86)行,行成组t检验显示,两组差异有统计学意义(t=3.500,P<0.05)。结论:马来酸噻吗洛尔眼液2.5g/L对LASIK术后屈光回退具有显著疗效。     

结膜印迹细胞学检查在干眼症诊断中的应用

目的:探讨结膜印迹细胞学检查在干眼症诊断中的作用。方法:收集2008-04/2008-09眼科门诊干眼症患者36例72眼,正常人10例20眼,采用结膜印迹细胞学检查联合PAS染色,观察各组结膜上皮细胞和杯状细胞形态及数量变化情况。结果:在形态学方面,97%的正常人表现为Nelson分级中的0级,84%轻度干眼症患者表现为Nelson分级中的1级,79%中度干眼症患者符合Nelson分级中的2级,98%重度干眼症患者符合Nelson分级中的3级;在高倍镜下任意选取五个视野,统计杯状细胞的数量,轻度干眼症组(101.67±15.64),中度干眼症组(40.77±5.39)及重度干眼症组(6.36±3.61)较正常组(196.10±22.53)相比,杯状细胞数量明显减少,P<0.01,重度与轻中度干眼症组比较,前者杯状细胞数量明显少于后两者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:结膜印迹细胞学检查操作简单易行,结果客观精确,联合其他检查方法用于干眼症诊断,有着良好的应用前景。     

Inhibition of LY294002 in retinal neovascularization via down-regulation the PI3K/AKT-VEGF pathway in vivo and in vitro

AIM: To investigate the effects of the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibitor LY294002 on retinal neovascularization (RNV) in the oxygen-induced retinopathy (OIR) mouse model and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). METHODS: C57BL/6J mice were randomly divided into normoxia-control, OIR-control and LY294002 treatment groups. LY294002 or phosphate-buffered solution was intraperitoneally injected daily into mouse pups from P6 to P9 in LY294002 treatment group or OIR-control group. Morphological and pathological changes in RNV, as well as expression levels of PI3K, serine-threonine kinase (AKT) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were observed. HUVECs treating with LY294002 were exposed to hypoxia; the expression of PI3K, AKT and VEGF were examined by Western blot and RT-PCR analyses. RESULTS: Compared with the OIR-control group, LY294002 significantly inhibit RNV. Adenosine diphosphatase (ADPase) staining and hematoxylin and eosin staining indicated that the clock hour scores of neovascularization and the nuclei of pre-retinal neovascular cells in the LY294002 treatment group were clearly less than those in the OIR-control group (1.41±0.52 vs 6.20±1.21; 10.50±1.58 vs 22.25±1.82, both P<0.05). Intravitreal injection of LY294002 (in the LY294002 treatment group) markedly decreased PI3K/AKT-VEGF expression compared with the OIR-control group by immunohistochemistry, Western blotting and RT-PCR (all P<0.05). In HUVECs treated with hypoxia, expression of PI3K, AKT and VEGF were downregulated in the hypoxia-LY294002 group (all P<0.05). CONCLUSION: The PI3K inhibitor LY294002 can inhibit RNV by downregulating PI3K, AKT, and VEGF expression in vivo and in vitro. LY294002 may provide an effective method for preventing retinopathy of prematurity (ROP).     

CREB1在氧诱导视网膜病变小鼠模型中的表达变化

目的研究CREB1在氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型视网膜新生血管形成中的表达变化,探寻视网膜新生血管形成的可能机制。方法实验研究。选用7日龄健康清洁级C57BL/6J小鼠134只,随机分为正常对照组（67只）和OIR模型组（67只）。将小鼠与哺乳母鼠共同置于（75±2）％氧环境内饲养5 d后转移至正常环境中饲养5 d,建立小鼠OIR模型,17日龄的OIR鼠在空气中再继续饲养4 d,正常对照组在正常氧环境中饲养21 d。出生后第17 d时取OIR模型组和正常对照组小鼠制备视网膜切片HE染色法和FITC-dextran心脏灌注视网膜铺片法观察视网膜新生血管情况,以及视网膜组织冰冻切片免疫荧光染色观察P-CREB1表达情况。取2组鼠第7、9、12、14、17、21 d的视网膜采用实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）法和Western Blot法检测CREB1mRNA和蛋白在小鼠视网膜中的表达情况。数据分析采用独立样本t检验和两因素方差分析方法,两两比较采用Bonferronipost-test检验。结果17 d时OIR模型组较正常对照组突破视网膜内界膜的内皮细胞核数明显增加（t=11.31,P<0.05）,且模型组视网膜新生血管区及无灌注区面积分别为（21.40±2.72）%和（30.61±3.12）%。与正常对照组相比,模型组小鼠视网膜中可见大量P-CREB1蛋白荧光,主要表达在内核层和神经节细胞层。Real-time PCR和Western Blot结果表明,正常对照组第7、9、12、14、17天的CREB1mRNA和蛋白在视网膜中的表达水平逐渐升高,21 d时开始出现下降的趋势;在各相应时间点OIR模型组里的CREB1相对表达量除第7天外,其余时间点均高于正常对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论CREB1的表达水平与视网膜新生血管的形成存在时空对应关系,CREB1的高表达可能参与了OIR模型中视网膜新生血管的形成过程。     

胰岛素泵在2型糖尿病眼病围手术期的临床应用研究

目的:比较应用胰岛素泵持续皮下胰岛素输注法(continuoussubcutaneous insulin injection,CSII)与多次皮下胰岛素注射法(multiple subcutaneous insulin injection,MSII)对2型糖尿病(T2DM)眼病围手术期的血糖控制,探讨最佳血糖控制方法。方法:将320例拟行眼科手术的T2DM患者分为CSII组和MSII组,比较两组治疗前后血糖、达标时间、胰岛素用量、低血糖、术后并发症发生率、住院时间及费用。结果:两组均可有效控制血糖(P<0.01),治疗后CSII组餐后2h血糖(2hPBG)优于MSII组(P<0.01),CSII组血糖达标时间、胰岛素用量、低血糖及术后并发症发生率、住院时间均少于MSII组(P<0.01)。CSII组住院费用高于MSII组(P<0.01)。结论:T2DM眼病围手术期应用胰岛素泵安全有效,并可明显缩短住院时间,但住院费用有所增加。     

Inhibitory effect of captopril on retinal neovascularization in mice

AIM: To study the inhibitory effect of captopril on retinal neovascularization (RNV). METHODS: Sixty seven-day-old mice were randomly divided into treated group and control group with thirty mice in each group. These mice were exposed to 750 ± 50mL/L oxygen for 5 days and then to room air. The treated group had been injected captopril (2.7mL/kg), while control group had been injected 9g/L sodium chloride (2.7mL/kg) by intravitreal for 5 days. The mice were sacrificed at the 17th day after birth and the eyes were enucleated. Adenosine diphosphate-ase (ADPase) stained retina flat-mounts was performed to assess the retinal vascular profiles, Hematoxylin Eosin (HE) staining method was applied to count the number of new vascular cell nuclei and the expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and pigment epithelium derived factor (PEDF) was detected by immunohistochemical method. · RESULTS: Comparing with control group, regular distributions, good branch and reduced density of RNV were observed in the treated group. The number of nucleus of new vessels vascular endothelial cells breaking through the internal limiting membrane was less in the treated group than in the control group ( <0.05). Stain of retinal MMP-2 was weaker in the treated group than in the control group and stain of retinal PEDF was stronger in the treated group than in the control group. CONCLUSION: Intravitreal injection of captopril (2.7mL/kg) may block the RNV in the oxygen-induced mouse model and the method may provide an effective method for preventing RNV.     

FLK-1单克隆抗体抑制实验性视网膜血管新生的实验研究

目的:观察血管内皮生长因子受体2(FLK-1)单克隆抗体(anti-FLK1mAb)对视网膜新生血管形成(retinal neovascularization,RNV)的抑制作用,同时分析其对缺血性视网膜病变的影响。方法:将生后第7d的C57BL/6幼鼠置于高氧箱中饲养5d后取回至正常空气环境诱导RNV模型,生后第12,13,15d利用腹腔注射的方法给与实验组小鼠anti-FLK1 mAb500μg(对照组给与等量的大鼠免疫球蛋白),生后第17d处死动物行视网膜铺片和免疫组织化学染色检查,测量视网膜血管无灌注区的面积,计数RNV内皮细胞核数目,定量分析anti-FLK1 mAb对于缺血性视网膜病变以及实验性RNV形成的影响。结果:对照组和实验组均成功建立了RNV模型,实验组RNV的形成明显受到抑制(P<0.01),同时anti-FLK1 mAb也加重了RNV模型的缺血过程(P<0.05)。结论:拮抗FLK-1可以有效抑制RNV的形成,提示拮抗FLK-1可能成为治疗RNV有效的生物学方法之一,其可能加重缺血性视网膜病变的潜在副作用需进一步探讨。     

慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的抑制作用

目的观察慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法5日龄C57BL/6J小鼠112只随机分为正常对照组、单纯OIR模型组、OIR模型+慢病毒空载体处理组(以下简称Vec组)及OIR模型+PSF慢病毒处理组(以下简称PSF组),分别为16、32、32、32只。小鼠7日龄时,正常对照组小鼠常规环境饲养;单纯OIR模型组、Vec组及PSF组小鼠建立OIR模型。小鼠12日龄时,Vec组、PSF组小鼠玻璃体腔分别注射滴度为1×1011 TU/ml的空载体病毒或PSF慢病毒1μl。正常对照组和单纯OIR模型组小鼠不再做任何处理。小鼠17日龄时,采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;作视网膜铺片,测量各组小鼠视网膜无灌注区相对面积;采用实时定量PCR检测各组小鼠视网膜中NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA相对表达量;采用Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相对表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果正常对照组、单纯OIR模型组、Vec组、PSF组小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09个;视网膜无灌注区面积分别为0.00%、(35.71±2.81)%、(36.57±4.53)%、(15.33±4.75)%。4组间小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数及视网膜无灌注区面积比较,差异均有统计学意义(F=24.87、165.70,P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组较正常对照组突破内界膜的血管内皮细胞核数增多,视网膜无灌注区面积增大;PSF组较单纯OIR模型组、Vec组突破内界膜的血管内皮细胞核数减少,视网膜无灌注区面积减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR及Western blot检测结果显示,4组间小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量(F=53.66、83.54)以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量(F=58.38、52.69、24.79)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较正常对照组明显降低,PSF组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较单纯OIR模型组、Vec组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的PSF可通过上调Nrf2及HO-1的表达抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成。