白介素23受体在支气管哮喘小鼠脾源性CD4+T细胞中的表达及意义

目的 探讨急性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠CD4+T细胞表面白介素23受体(IL-23R)的表达及在哮喘发病中的作用.方法 建立急性哮喘小鼠模型,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4+T细胞,培养24 h后,检测CD4+T细胞表面IL-23R的表达、Th17细胞的阳性率及细胞培养上清液中的IL-17水平.结果 哮喘小鼠脾脏CD4+T细胞表面IL-23R的表达明显高于正常组(P＜0.01);哮喘小鼠脾脏CD4+T细胞中Th17细胞的阳性率明显高于正常组(P＜0.01);哮喘小鼠脾脏CD4+T细胞分泌IL-17浓度明显高于正常组(P＜0.01);小鼠脾脏CD4+T细胞表面IL-23R的表达与Th17细胞的阳性率和IL-17的浓度呈正相关.结论 IL-23R在急性哮喘的发病机制中可能起重要作用.     

广州管圆线虫感染小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和细胞因子的变化

摘 要：目的 观察小鼠感染广州管圆线虫后脾脏T淋巴细胞亚群及其细胞因子分泌水平的变化。方法 用从褐云玛瑙螺体内检获的广州管圆线虫第3期幼虫感染BALB/c小鼠, 感染后第19d及第25d分批处死小鼠, 分离脾细胞,使用细胞内细胞因子荧光染色方法, 用流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中的T细胞亚群的含量,用双抗夹心ELISA法检测脾细胞培养上清细胞因子的浓度。结果 与对照组比较,感染小鼠脾脏CD4+、CD4+IL-4+T淋巴细胞比例显著上升,而CD4+ IL-17 +、CD4+IFN-γ+T淋巴细胞比例显著下降;脾细胞培养上清细胞因子IL-4水平明显升高,而IL-17水平明显下降。同时,感染程度和感染时间等因素也可造成脾脏T淋巴细胞亚群及其细胞因子分泌水平的变化。结论 小鼠感染广州管圆线虫后,表现以脾脏CD4+T淋巴细胞大量增殖和Th2型淋巴细胞极化为特点。     

LFA-1基因缺失对小鼠Nave T细胞体外向Th17细胞分化的影响

背景:淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)参与T细胞的活化和功能调节,与炎症性肠病的发病密切相关。目的:观察LFA-1基因缺失(LFA-1-/-)对小鼠Nave T细胞体外向Th17细胞分化的影响。方法:繁殖LFA-1-/-子代小鼠,提取鼠尾DNA,PCR法鉴定基因型。LFA-1-/-子代小鼠为实验组,野生型(WT)C57BL/6J小鼠为对照组,磁珠分选脾脏单个核细胞中的CD4+CD62L+Nave T细胞并检测其纯度。体外建立不同Th17细胞诱导分化体系[转化生长因子-β(TGF-β)、TGF-β+白细胞介素-6(IL-6)和TGF-β+IL-6+IL-23],以流式细胞术检测两组分选得到的Nave T细胞在不同体系中诱导出的Th17细胞比率,荧光定量PCR法和ELISA法检测Th17细胞特异性转录因子ROR-γt和特异性标记物IL-17A表达。结果:15只子代小鼠均为LFA-1-/-小鼠,磁珠分选得到的CD4+CD62L+Nave T细胞纯度大于95%。低剂量TGF-β+IL-6即能诱导出Th17细胞,在此基础上加入IL-23能促进更多Th17细胞产生。与WT对照组相比,LFA-1-/-组Nave T细胞在TGF-β+IL-6+IL-23体系中诱导产生Th17细胞的效应更为明显(17.2%±1.4%对5.7%±0.2%,P0.001),ROR-γt、IL-17A mRNA表达上调(P0.001),细胞培养上清液中IL-17A浓度升高(P0.01)。结论:LFA-1基因缺失能促进小鼠Nave T细胞体外向Th17细胞分化。     

日本血吸虫感染小鼠CD_4~+ T淋巴细胞协同刺激分子表达谱及其在介导Th1/Th2极化中的作用

目的观察日本血吸虫感染小鼠不同病期体内及体外培养后脾CD4+T淋巴细胞表面的协同刺激分子表达谱,探讨协同刺激分子介导Th1/Th2极化的作用。方法收集血吸虫感染后4w、7w、12w、16w和20w小鼠及正常小鼠脾CD4+T淋巴细胞,以及上述不同病期经SEA诱导72h后脾淋巴细胞培养上清,用流式细胞术检测细胞表面协同刺激分子CD80、CD86、ICOS、CD40、OX40、4-1BB及PD1表达水平,用ELISA法检测培养上清中的Th1细胞因子IFN-γ,Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13。结果血吸虫感染后小鼠脾CD4+T淋巴细胞表面CD86、ICOS、CD40和OX40的表达均随感染时间延长而上调,其中ICOS和CD86表达上调最为显著;经SEA诱导培养72h后CD86、ICOS亦显著上调表达;培养上清检测发现IFN-γ在4w时呈高表达,7w开始随感染时间延长呈下调表达;IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的表达水平则从7w开始明显升高,IL-5的峰值出现在12w,其余均16w达高峰,致20w仍维持在较高水平。结论日本血吸虫感染小鼠CD4+T淋巴细胞协同刺激分子表达水平与Th1/Th2免疫偏移密切相关,其中ICOS、CD86在介导Th2极化中可能具有重要作用。     

结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧基酶诱导小鼠细胞和体液免疫应答

目的检测结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法选清洁级BALB/c小鼠60只,随机分为两组,实验组和对照组。实验组每只小鼠用表达的PEPCK融合蛋白10μg加弗氏不完全佐剂进行腹腔免疫注射,对照组小鼠仅用弗氏不完全佐剂注射。每隔2w免疫1次,共免疫3次。末次免疫2w后,分别取小鼠脾脏、血清,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞,MTT法检测淋巴细胞对刺激的应答水平,ELISA检测血清各种细胞因子及抗PEPCK抗体。结果实验组小鼠的脾脏明显大于对照组小鼠的脾脏,且粘连严重,CD4+T细胞增殖明显(73.5±3.69),CD4+/CD8+比值显著升高(5.1±0.98)(P<0.01);且淋巴细胞的应答能力明显强于对照组小鼠;实验组小鼠血清中IFN-γ、IL-12和TNF-α明显高于对照组,血清抗体滴度随免疫次数逐步增高。结论结核杆菌PEPCK能够有效的刺激机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应,尤以细胞免疫反应为主,是很好的抗结核候选疫苗分子之一。     

白介素23受体在支气管哮喘小鼠脾源性CD4^＋T细胞中的表达及意义

-23R）的表达及在哮喘发病中的作用。方法建立急性哮喘小鼠模型,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4^＋T细胞,培养24h后,检测CD4^＋T细胞表面IL-23R的表达、Th17细胞的阳性率及细胞培养上清液中的IL-17水平。结果哮喘小鼠脾脏CD4^＋T细胞表面IL-23R的表达明显高于正常组（P〈0．01）;哮喘小鼠脾脏CD4^＋T细胞中Th17细胞的阳性率明显高于正常组（P〈0．01）;哮喘小鼠脾脏CD4^＋T细胞分泌IL-17浓度明显高于正常组（P〈O．01）;小鼠脾脏CD4^＋T细胞表面IL-23R的表达与Th17细胞的阳性率和IL-17的浓度呈正相关。结论IL-23R在急性哮喘的发病机制中可能起重要作用。     

日本血吸虫虫卵抗原诱导CD4+CD25+T细胞及其细胞因子表达

目的 探讨日本血吸虫虫卵抗原诱导宿主免疫应答下调的机制.方法 6～8周龄雌性队LB/c小鼠分为2组,实验组小鼠口服血吸虫虫卵10 000个以及尾静脉注射可溶性虫卵抗原(SEA)200μg,每周免疫1次,共4次;对照组注射PBS.流式细胞仪检测SEA免疫小鼠CD4+CD25+T细胞数量;与CD4+CD25-T细胞共同培养,检测CD4+CD25+T细胞抑制功能;流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞表达IL-4、IL-10与IFN-γ水平;酶联免疫吸附试验检测静脉血IL-10和转化生长因子-β表达水平.结果 实验组小鼠CD4+CD25+T细胞数量为14.7%,对照组为7.4%;实验组IL-10为29.2 pg/ml,对照组为11.0 pg/ml.与CD4+CD25-T细胞相比,CD4+CD25+T细胞主要合成IL-10及少量IFN-γ.CD4+CD25+T细胞显著抑制CD4+T细胞增殖. 结论 日本血吸虫虫卵抗原可能通过诱导CD4+CD25+T细胞和IL-10下调机体免疫应答.     

多房棘球蚴感染小鼠辅助Th17细胞,转录因子RORγτ及相关细胞因子的实验研究

目的探讨多房棘球蚴感染小鼠脾脏细胞中辅助性T细胞17比例,转录因子RORγτ和IL-17因子的表达及其意义。方法选用6~8周龄BALB/c小鼠共30只,随机分为多房棘球蚴感染组(Em)、多房棘球蚴感染阿苯达唑治疗组(Em+Albendazole,Em+ABZ)和健康对照组(healthy controls,HC),每组10只。通过腹腔注射法建立泡型包虫病小鼠模型。Em+ABZ治疗组给予灌胃阿苯达唑治疗(100μl/d,35d)通过流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中辅助性T17细胞(CD4+IL-17+Th17细胞/CD4+T细胞)比例,采用实时荧光定量PCR检测脾脏细胞中维甲酸孤独受体(retinoid acid orphan receptor-γτ,RORγτ)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-17水平。结果 CD4+IL-17+Th17细胞/CD4+T细胞比例,Em组为(2.10±1.00)%,与HC组(0.85±0.71)%比较,差异有统计学意义(F=3.07,t=2.66,P<0.01)。Em+ABZ组为(1.54±1.19)%,与HC组和Em组比较,差异无统计学意义(F=3.07,P>0.05);脾脏细胞RORγτmRNA在Em组中的表达(6.1×10-4±5.8×10-4)高于在Em+ABZ组(6.0×10-4±3.5×10-4)和HC组(3.4×10-4±2.4×10-4)中的表达,但差异无统计学意义(F=0.66,P>0.05)。Em+ABZ组与HC组比较,差异亦无统计学意义(F=0.66,P>0.05)。脾脏细胞培养上清液中IL-17A,Em组为(10.71±1.85)ng/ml,明显高于Em+ABZ组[(5.58±3.56)ng/ml]和HC组[(7.31±1.22)ng/ml],差异有统计学意义(F=9.82,t1=3.12,t2=5.57,P<0.01)。Em+ABZ组与HC组比较差异无统计学意义(F=9.82,t=0.84,P>0.05)。结论 Th17细胞参与BALB/c小鼠多房棘球蚴感染免疫和炎性应答过程,阿苯达唑治疗能够减轻免疫损伤和炎症反应。Th17细胞及IL-17A可能是潜在的多房棘球蚴病新的分子免疫干预靶点。     

地塞米松对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及IL-4、IL-10水平的影响

目的 探讨地塞米松对哮喘小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞及IL-4、IL-10水平的影响.方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为三组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组.利用卵清白蛋白腹腔注射和雾化吸入制备哮喘模型;通过流式细胞仪检测各组小鼠脾脏单个核细胞CD4+ CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分比;使用免疫组织化学方法分析各组IL-4在小鼠肺组织中的表达情况;用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清IL-10的水平.结果 哮喘组脾脏单个核细胞CD4+CD25+调节性T细胞百分比及IL-10的表达水平较正常对照组和地塞米松组降低(P＜0.05),哮喘组IL-4水平较正常对照组和地塞米松组增高(P＜0.05).结论 地塞米松的抗炎作用可能通过上调CD4+ CD25+调节性T细胞、调节性T细胞亚群失衡的途径来实现.     

结核分枝杆菌通过诱导宿主产生S100A8/A9促进T细胞死亡的机制研究北大核心CSCD

目的探讨结核分枝杆菌(Mtb)诱导宿主产生的S100钙结合蛋白A8/A9复合物(S100A8/A9)促进T细胞死亡的作用及机制。方法灭活毒性Mtb H37Rv(iMtb H37Rv)与野生型(WT)小鼠全脾细胞体外共同培养不同时间,通过流式细胞术得到S100A8与S100A9的表达差异以及产生S100A8/A9的细胞群。Mtb H37Rv体外诱导WT和S100a9^(-/-)小鼠全脾细胞,通过流式细胞术检测S100A8/A9对CD4^(+)T细胞死亡的影响。采用不同浓度S100A8/A9与人T淋巴细胞系Jurkat细胞共同培养、S100A8/A9与细胞共培养不同时间或是S100A8、S100A9单体以及S100A8/A9复合物与细胞共同培养,通过流式细胞术得到S100A8/A9对Jurkat细胞死亡的影响。通过Western blot检测不同细胞表面TLR4的表达差异。封闭Jurkat细胞表面TLR4受体后与S100A8/A9共同培养,通过流式细胞术得到Jurkat细胞死亡的变化。结果与对照组相比,iMtb H37Rv能诱导脾细胞产生更多的S100A8和S100A9蛋白。S100A8/A9能促进小鼠CD4^(+)T细胞死亡。低剂量的S100A8/A9复合物能诱导Jurkat细胞死亡,且S100A8和S100A A9单体无以上作用。S100A8/A9复合物诱导T细胞死亡为TLR4非依赖通路。结论Mtb通过诱导宿主产生S100A8/A9并促进T细胞死亡。     

Caspase-12 deficiency enhances cytokine responses but does not protect against lethal Plasmodium yoelii 17XL infection

To investigate the effect of caspase-12 deficiency on IFN-γ- independent control of blood-stage malaria, we compared lethal Plasmodium yoelii 17XL infection in wild-type C57BL ? 6J and caspase-12-/-mice. Infected caspase-12-/- mice exhibited higher parasitaemia than WT mice on days 8 and 9 post-inoculation, but all WT and caspase-12-/- mice succumbed by day 10. In addition, infected caspase-12-/-mice had significantly elevated levels of IFN-γ, TNF, IL-18,and IL-10 in sera compared to infected WT mice. At the terminal stage of disease, there were no differences in cytokine levels in the tissues of infected WT and caspase-12-/- mice. However, liver pathology was more severe in infected caspase-12-/- mice compared to infected WT mice. Together, these findings indicate that although caspase-12 deficiency results in enhanced pro-inflammatory and immunoregulatory cytokine levels in sera during P. yoelii 17XL infection, these responses are not essential for protection against lethal malaria infection.     

结核分枝杆菌P19对巨噬细胞TLR-2表达及分布的影响

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。     

BCG初免—单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强免疫策略的免疫效应研究

目的 为了评价BCG初免-单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强的免疫策略诱导小鼠产生的免疫效应.方法 在前期工作的基础上,制备并纯化获得了高滴度的重组腺病毒Ad5-CEAB,然后以小鼠为动物模型,采用BCG初免-Ad5-CEAB加强的异源初免-加强的免疫策略对动物进行免疫,通过测定小鼠淋巴细胞抗原刺激液中IL-12和IFN-γ的含量,测定小鼠血清IgG抗体含量以及小鼠肺盥洗液中sIgA的浓度来评价BCG初免-单次重组腺病毒Ad5-CEAB加强免疫策略的免疫效应.结果 BCG初免-Ad5-CEAB加强免疫后,经抗原刺激后的小鼠淋巴细胞会分泌高水平的IL-12和IFN-y,这两种细胞因子的浓度均显著高于对照组.BCG初免-Ad5-CEAB加强后,还可以有效的刺激小鼠分泌IgG抗体,血清IgG抗体浓度显著高于对照组.另外,小鼠肺盥洗液中sIgA的浓度也显著高于对照组.结论 采用BCG初免-单次Ad5-CEAB加强的异源初免-加强的免疫策略能够有效的刺激小鼠产生较强的免疫应答反应.     

颗粒溶素和白细胞介素12重组耻垢分枝杆菌对小鼠结核病的治疗作用

目的 探讨携带编码人天然颗粒溶素和小鼠白细胞介素12（IL-12）基因质粒（pZM03）的重组耻垢分枝杆菌对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法 结核分枝杆菌H37Rv感染Balb／c小鼠4周后，分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌、pZM03、重组耻垢分枝杆菌治疗6次，于第1次治疗后3个月处死小鼠，检测器官荷菌量、脾淋巴细胞γ干扰素的分泌水平、血清IL-12和IgG2a分泌水平和肺、脾组织中颗粒溶素表达，同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果 重组耻垢分枝治疗组的肺和脾组织对数荷菌量分别为（4.57±0．28）和（3．47±0．25）CFU／g，比生理盐水组的（5．77±0．12）和（4．66±0．18）CFU／g、载体组的（5．62±0．14）和（4．65±0．26）CFU／g及质粒组的（5．04±0．22）和（4．25±0．48）显著降低；重组耻垢分枝杆菌组和pZM03组经结核菌素纯蛋白衍生物刺激后，1干扰素分泌水平显著高于耻垢分枝杆菌组和生理盐水对照组；重组耻垢分枝杆菌组血清IL-12水平和IgG2a水平显著高于耻垢分枝杆菌组和生理盐水对照组。用免疫组织化学方法检测到小鼠肺及脾组织中颗粒溶素的表达。生理盐水和耻垢分枝杆菌组的肺组织病理改变以渗出为主，病变广泛，增生改变不明显；重组耻垢分枝杆菌组的病变范围局限，并有类上皮细胞和泡沫细胞。治疗组和对照组的脾脏病理改变不明显。结论 携带颗粒溶素和IL-12的重组耻垢分枝杆菌对小鼠结核病有一定的免疫治疗作用，与增强宿主Th1型免疫应答和颗粒溶素的抗菌活性有关。     

白细胞介素12调节小鼠Th1/Th2的抗结核分支杆菌感染研究

目的 观察、评价白细胞介素１２（ＩＬ－１２）对结核分支杆菌感染小鼠细胞因子的影响和疗效。方法 将ＢＡＬＢ／ｃ小鼠４２只,制成小鼠结核分支杆菌感染模型,随机分为对照组（ＰＢＳ）和ＩＬ－１２共两组（２１只）。给予ＰＢＳ或ＩＬ－１２治疗,检测血清γ干扰素（ＩＮＦ－γ）、ＩＬ－４、ＩＬ－１０水平（ＥＬＩＳＡ法）和器官菌数计数,观察治疗后生存率。结果 ＩＬ－１２组小鼠无一死亡、肺、肝、脾菌落数分别为（２２７     

结核分枝杆菌P19对巨噬细胞功能及表型影响的研究

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(MtbP19)对单核巨噬细胞功能及表型的影响。方法以10μg/mLMtbP19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育,酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同时间巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌水平;对巨噬细胞表型分子HLA-DR进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19对巨噬细胞表型的影响;流式细胞术及光学显微镜研究MtbP19对巨噬细胞吞噬活性的影响。结果P19能够诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6分泌水平的增加,呈时间依赖关系;经P19刺激的巨噬细胞HLA-DR表达增强,平均荧光强度(MFI)为(54.3±3.4)%,与BSA对照组(34.3±3.6)%比较P<0.05;P19能增强巨噬细胞的吞噬活性。结论MtbP19能诱导巨噬细胞活化,在感染过程中可能具有一定的抗结核保护作用。     

Mycobacterial infection in natural killer T cell knockout mice

To gain a better understanding of the pathological role of natural killer (NK) T cells in murine tuberculosis, NKT knockout (KO) mice (J(alpha)281(-/-)mice) were utilized. Eight-week-old NKT KO mice of BALB/c origin and wild-type (WT) mice were infected with Mycobacterium tuberculosis Kurono strain by the airborne route using an airborne infection apparatus, and their capacity to control mycobacterial growth, granuloma formation, and cytokine production were examined. The NKT KO mice developed granulomatous lesions in the lungs; there was no statistically significant difference in pulmonary granuloma size between NKT KO and WT mice (p<0.01). The average CFU values increased 3 weeks post-infection, but decreased 9 and 11 weeks post-infection, in the lungs of NKT KO mice. When stimulated with Kurono strain in vitro, splenic cells from NKT KO mice produced less IFN-gamma than did those from WT mice. Expression of mRNA for IL-2, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12 p40 was slightly lower in NKT KO mice compared with WT mice. Our data indicate that NKT cells play a detrimental role in late-phase mycobacterial infection, although Th1 cells are essential in early-phase mycobacterial infection.     

结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗的构建、鉴定和表达及其保护力

目的构建和鉴定结核分枝杆菌(MTB)重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-ESAT-6疫苗,研究该疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到ESAT-6抗原编码基因;将该基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-ESAT-6;用电穿孔法将该质粒导入Bb及BL21(DE3),构建结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗。用IPTG诱导重组BL21(DE3)菌表达ES-AT-6/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。65只BALB/c雌性小鼠,随机分为5组:A组(SC)、B组(IM)、C组(IN)、D组(Bb)、E组(PBS)。分别于免疫后8周用5×105CFU MTB H37Ra减毒株悬浮于10μL PBS中进行鼻腔粘膜接种感染。攻击感染后6w剖杀各组小鼠8只,计数肝、肺组织荷菌量,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖。结果PCR成功扩增出288bp的ESAT-6基因;双酶切证实ESAT6基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-ESAT-6疫苗构建成功。免疫印迹分析发现重组质粒pGEX-ESAT-6的表达产物在相对分子量(35kDa)处有明显的蛋白表达条带,表达效率为20%,且能被活动性结核病人血清特异识别。鼻腔内接种组的肝、肺组织荷菌量明显低于其他免疫组。疫苗接种组IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b明显升高,IgG3和IgE无明显变化;疫苗接种组的脾淋巴细胞明显增殖。结论成功构建了结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗,重组Bb-ESAT-6疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有一定免疫保护作用。     

结核分枝杆菌DNA疫苗对小鼠结核病免疫治疗作用的实验研究

目的探讨结核分枝杆菌DNA疫苗pcD85B、pcDMPT64以及小鼠白细胞介素12(IL-12)真核表达质粒psIL12对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将结核分枝杆菌H37Rv感染的C57BL/J6小鼠100只随机分成生理盐水对照组、pcDNA3.1对照组,psIL12治疗组,pcD85B、pcDMPT64、pcD85B+pcDMPT64、pcD85B+psIL12DNA疫苗治疗组。感染4周后分别给予生理盐水、空质粒、psIL-12及DNA疫苗,第1次治疗后2个月处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞特异性γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平,并于第1次治疗后2个月、5个月观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果pcD85B治疗组肺组织荷菌量(lg-1CFU/g)为6.99±0.40,比生理盐水对照组(8.15±0.37)、pCDNA3.1对照组(8.19±0.29)显著降低(P<0.01);脾组织荷菌量(lg-1CFU/g,x±s)为5.17±0.33,比生理盐水对照组(5.76±0.16)及空质粒对照组(5.88±0.21)显著降低(P<0.05)。psIL12治疗组的肺(7.41±0.50)、脾(5.31±0.21)荷菌量比对照组显著降低(P<0.05);pcD85B+psIL12治疗组肺、脾荷菌量与pcD85B组比较差别无统计学意义。pcD85B组脾淋巴细胞IFN-γ、TNFα水平比对照组显著升高(P<0.05),各组间IL4水平差异无统计学意义。生理盐水对照组、pCDNA3.1对照组肺组织     

A matrix metalloproteinase inhibitor promotes granuloma formation during the early phase of Mycobacterium tuberculosis pulmonary infection

OBJECTIVE: The host response to pulmonary Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infection results in granuloma formation in an effort to limit infection, but the host immune cells also provide an environment in which Mtb persists. Granuloma formation requires immune cell infiltration and concurrent extensive remodeling of pulmonary tissue which we hypothesize to be the result of increased matrix metalloproteinases (MMP) activity. DESIGN: C57BL/6 mice infected with virulent Mtb (H37Rv) via intratracheal inoculation were treated with a synthetic inhibitor of MMP activity (BB-94). Mice were assessed for colony forming units, granuloma morphology, leukocyte recruitment and cytokine levels over 90 days of infection. RESULTS: BB-94 treated mice had significantly decreased numbers of pulmonary and blood-borne Mtb early during disease, increased collagen deposition within early granulomas and significantly decreased pulmonary leukocyte recruitment when compared to vehicle-treated, Mtb-infected mice. Cytokine expression did not differ significantly between groups. CONCLUSION: Events of early granuloma formation can be modified by inhibiting MMP activity, by decreasing leukocyte recruitment, a major source of MMPs during infection, enhancing the establishment of granulomas and decreasing blood-borne dissemination of Mtb.