黄芪多糖对小鼠肾小球足细胞Nephrin、Desmin表达的影响

目的:观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对阿霉素(adriacin doxorubicin,ADR)诱导的肾小球足细胞损伤中足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin及骨架蛋白Desmin表达的影响。方法:通过体外培养小鼠肾小球足细胞,以ADR诱导制作足细胞损伤模型,分为对照组、ADR损伤组(0.5 mg·L~(-1) ADR)、APS干预组(0.5 mg·L~(-1) ADR+0.8 g·L~(-1)APS)。MTT比色法检测3组细胞活力;免疫荧光染色观察3组Nephrin、Desmin表达;Western blot检测Nephrin、Desmin蛋白表达;RT-PCR检测Nephrin、Desmin mRNA水平。结果:APS干预组、对照组细胞活力[(87.25±11.14)%、(97.05±12.67)%]高于ADR损伤组[(58.62±7.93)%](P<0.05)。免疫荧光显示:APS干预组足细胞Nephrin表达少于对照组,但明显强于ADR损伤组(P<0.05);而足细胞Desmin少量表达,且明显少于ADR损伤组(P<0.05)。对照组、APS干预组足细胞Nephrin蛋白含量及Nephrin mRNA水平高于ADR损伤组(P<0.05),Desmin蛋白含量及Nephrin mRNA水平低于ADR损伤组,差异有统计学意义(P<0.05);而APS干预组与对照组足细胞Nephrin、Desmin蛋白及Nephrin、Desmin mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:黄芪多糖对ADR诱导的肾小球足细胞损伤具有保护作用,其机制可能与上调Nephrin表达、下调Desmin表达有关。     

黄芪多糖对小鼠肾小球足细胞Nephrin、Desmin表达的影响

目的:观察黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对阿霉素(adriacin doxorubicin,ADR)诱导的肾小球足细胞损伤中足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin及骨架蛋白Desmin表达的影响。方法:通过体外培养小鼠肾小球足细胞,以ADR诱导制作足细胞损伤模型,分为对照组、ADR损伤组(0.5 mg·L~(-1) ADR)、APS干预组(0.5 mg·L~(-1) ADR+0.8 g·L~(-1)APS)。MTT比色法检测3组细胞活力;免疫荧光染色观察3组Nephrin、Desmin表达;Western blot检测Nephrin、Desmin蛋白表达;RT-PCR检测Nephrin、Desmin mRNA水平。结果:APS干预组、对照组细胞活力[(87.25±11.14)%、(97.05±12.67)%]高于ADR损伤组[(58.62±7.93)%](P0.05)。免疫荧光显示:APS干预组足细胞Nephrin表达少于对照组,但明显强于ADR损伤组(P0.05);而足细胞Desmin少量表达,且明显少于ADR损伤组(P0.05)。对照组、APS干预组足细胞Nephrin蛋白含量及Nephrin mRNA水平高于ADR损伤组(P0.05),Desmin蛋白含量及Nephrin mRNA水平低于ADR损伤组,差异有统计学意义(P0.05);而APS干预组与对照组足细胞Nephrin、Desmin蛋白及Nephrin、Desmin mRNA表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:黄芪多糖对ADR诱导的肾小球足细胞损伤具有保护作用,其机制可能与上调Nephrin表达、下调Desmin表达有关。     

肾小球足细胞损伤在脂质肾损害发病中的作用

目的探讨肾小球足细胞损伤在脂质肾损害发病中的可能作用.方法用含4%胆固醇和1%胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型,观察高脂组和正常组大鼠血脂、尿蛋白、肾功能及肾脏病理学改变,运用免疫组化技术检测肾小球足细胞损伤标志蛋白-结蛋白表达,并进行相关分析.结果高脂组大鼠总胆固醇、低密度脂蛋白、血肌酐和尿蛋白均显著升高(P<0.01),肾小球系膜基质增生明显(P<0.01),肾小球内结蛋白表达上调,透射电镜下可观察到肾小球足细胞损伤表现.结蛋白表达与血脂、血肌酐、尿蛋白、肾小球系膜基质增生之间存在显著正相关性.结论肾小球足细胞在促进脂质肾损害发生发展中起重要作用.     

缬沙坦对糖尿病小鼠肾小球组织Notch通路活化及足细胞丢失的影响

目的探讨应用缬沙坦对糖尿病小鼠肾小球组织中Notch通路活化及足细胞丢失的影响。方法建立糖尿病小鼠模型给予缬沙坦治疗,观察小鼠肾小球细胞凋亡及足细胞脱落情况,采用Western blot检测Notch胞内域1(Notch intracellular domain 1,NICD1)、Hesl、Heyl、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白表达情况,Real-time PCR检测Hesl和Heyl mRNA表达情况。结果缬沙坦可降低糖尿病小鼠肾小球细胞凋亡及足细胞脱落,减少糖尿病小鼠肾小球组织中NICDl、Hesl、Heyl、Bax、cleaved caspase-3的表达,增加Bcl-2表达(P<0.05)。结论缬沙坦可通过抑制糖尿病小鼠肾小球组织中Notch通路的活化,减少足细胞凋亡和脱落。     

免疫抑制药物对肾小球足细胞的影响

临床上肾脏损伤最常见的表现即为蛋白尿,而蛋白尿的产生与肾小球滤过屏障功能障碍密切相关,而肾小球滤过屏障中足细胞损伤是引起蛋白尿的关键因素。研究显示,目前一些用于治疗足细胞相关疾病的免疫抑制药物,能够直接保护足细胞,减少蛋白尿的产生,延缓肾功能减退。本文就免疫抑制药物对足细胞的直接作用及其可能作用机制进行综述。     

糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响

目的观察糖肾宁对KK-Ay小鼠肾脏病理及足细胞凋亡的影响。方法利用KK-Ay小鼠建立糖尿病肾病模型,将造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、糖肾宁组及缬沙坦组。另外选取相同数量的C57BL/6J小鼠作为正常对照组。糖肾宁组小鼠予20 g·kg-1·d-1的糖肾宁灌胃,缬沙坦组小鼠予10 mg·kg-1·d-1的缬沙坦灌胃,正常对照组及模型组予等剂量蒸馏水灌胃。灌胃时长为12周。分别在灌胃0、4、8、12周时检测24 h尿蛋白,灌胃12周后心尖取血检测血肌酐及尿素氮水平。HE、Masson、PAS染色观察各组小鼠肾脏病理改变,免疫组化及RT-PCR检测各组小鼠足细胞Caspase-3蛋白表达,TUNEL染色观察各组小鼠足细胞凋亡情况。结果①与正常对照组比较,模型组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P<0.05)。②与正常对照组比较,模型组小鼠肾小球系膜细胞增多,细胞外基质增生;与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠肾小球系膜细胞减少,细胞外基质增生减轻。③与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞Caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P<0.05)。④与正常对照组比较,模型组小鼠足细胞凋亡数目明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖肾宁组及缬沙坦组小鼠足细胞凋亡数目明显降低(P<0.05)。结论糖肾宁能够降低糖尿病肾病蛋白尿,改善肾功能,其机制可能与其改善肾脏病理及减轻足细胞凋亡有关。     

黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Nephrin和Desmin表达的影响

目的 模拟体外高糖病理微环境, 探讨黄芪多糖对实验鼠肾脏肾小球足细胞Nephrin及Desmin表达的影响.方法 试验 (1) :将培养的实验鼠肾脏肾小球足细胞分为5个组, 分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖干预组 (0.0 g/L, 0.1 g/L, 0.2 g/L, 0.4 g/L及0.8 g/L) ;干预时间为72 h, 筛选出黄芪多糖干预的最佳浓度点0.Z g/L.试验 (2) :将培养的实验鼠肾脏肾小球的足细胞分7个组, 分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖的干预 (干预浓度是0.Z g/L) , 干预的时间分别是0 h, 3 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h及72 h;筛选出干预的最佳时间点Y h.试验 (3) :根据上述试验 (1) 、 (2) 结果, 将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组 (黄芪多糖的干预浓度是0.Z g/L, 干预的时间是Y h) , 采用流式细胞术与实时聚合酶链反应 (real-Time Polymerase Chain Reaction, real-Time PCR) 分别检测七组足细胞Nephrin、Desmin蛋白与m RNA的表达.结果 随着黄芪多糖干预梯度浓度的递增, 实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin蛋白表达逐渐上调, Desmin蛋白表达逐渐下调, 呈浓度依赖性 (P<0.05) ;随着黄芪多糖干预时间的延长, 实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin的表达逐渐上调, 但肾小球的足细胞Desmin的表达逐渐下调, 呈时间依赖性.相比正常对照组和甘露醇高渗对照组, 高糖组小鼠肾小球足细胞Nephrin蛋白和m RNA表达均下降, Desmin蛋白和m RNA表达均增加 (P<<0.05) ;而相较高糖组, 黄芪多糖干预组Nephrin蛋白和m RNA表达明显上升, Desmin蛋白和m RNA表达明显降低 (P<0.05) .结论 在高糖刺激下, 黄芪多糖干预可上调肾小球足细胞Nephrin表达, 降低肾小球足细胞Desmin表达, 是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点.     

缬沙坦对小鼠足细胞GPSD核心蛋白在高糖环境下表达的影响

目的通过观察缬沙坦体外干预高糖环境培养的小鼠足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,探讨RAS抑制剂治疗糖尿病肾病蛋白尿的机制。方法用不同浓度的缬沙坦干预高糖(25mmol/L的葡萄糖)培养24h后的小鼠足细胞,以RT-PCR方法检测干预前后足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达水平;以间接免疫荧光法检测2×10-5mol/L缬沙坦干预后nephrin、podocin蛋白的表达。结果①与对照组相比,高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA表达显著减弱(P<0.01);②缬沙坦能显著上调高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);③2×10-5mol/L缬沙坦能显著上调高糖对足细胞nephrin和podocin(P<0.05)蛋白表达的抑制。结论缬沙坦显著上调髙糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,可能是其独立于降压作用以外的降低糖尿病肾病蛋白尿的机制之一。     

体外培养小鼠足细胞表达COX-2的实验研究

目的: 研究环氧合酶-2(COX-2)在小鼠足细胞中的表达情况,为进一步研究嘌呤霉素氨基核苷(PA)诱导足细胞凋亡过程中特异性COX-2的表达,以及特异性COX-2抑制剂对足细胞的保护作用建立实验基础.方法: 将体外培养的条件永恒的足细胞复苏并传代培养,采用Western blot法分析COX-2在足细胞中的表达.结果: 在33℃增殖状态下,足细胞呈鹅卵石状,在37℃分化状态下的足细胞呈分叉状.正常足细胞在37 ℃分化14 d后,用低血清培养液培养后,随着时间延长,COX-2表达逐渐增多,24 h达最高,以后逐渐减少.结论: COX-2在足细胞上的表达呈时间依赖性.     

17β-雌二醇抑制氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞毒效应的研究

目的　通过观察 17β-雌二醇 (E2 )对氧化型低密度脂蛋白 (OX- L DL)的内皮细胞毒效应的影响 ,以及与内皮细胞内游离钙离子变化间的关系 ,探讨 E2 的抗动脉粥样硬化机制。方法　采用 ECV30 4脐静脉内皮细胞株体外培养 ,分为空白对照组、OX- L DL (2 0 0μg/ m l)组、 E2 (4× 10 - 7m ol/ L )组、E2 +OX- L DL组 (E2 预处理 2 4小时后加入 OX- L DL共同作用 )、E2 / OX- L DL组 (E2 预处理 2 4小时后去掉 E2 ,单加入 OX- L DL作用 ) ,运用激光扫描共聚焦显微镜测定 OX- L DL作用 12小时后的细胞内游离钙的浓度 ,及检测不同处理组细胞〔3- 4 ,5 -甲基噻唑 - 2〕2 ,5 -二苯基四氮唑 (MTT)值与乳酸脱氢酶 (L DH )释放的变化。结果　 OX- L DL可引起细胞 MTT值下降 (P <0 .0 1)与L DH值显著升高 (P<0 .0 1) ,伴随有细胞内游离钙浓度升高 (P<0 .0 1) ,而 E2 可显著抑制 OX- L DL引起的细胞内游离钙升高 ,同时减少 L DH的释放 ,抑制 MTT值的下降。结论　 E2 可显著抑制 OX- L DL的细胞毒效应 ,这与 E2 阻止了 OX- L DL激发细胞内游离钙浓度的升高有关 ,这也可能是雌激素预防动脉粥样硬化形成的机制之一。     

五肽胃泌素及丙谷胺对人结肠癌细胞增殖的影响

目的：探讨五肽胃泌素（ｐｅｎｔａｇａｓｔｒｉｎＰＧ）及丙谷胺（ｐｒｏｇｌｕｍｉｄｅＰＧＬ）对体外培养的人结肠癌细胞株ＨＴ２９增殖的影响。方法：用ＭＴＴ法测定细胞生长曲线，用流式细胞仪分析细胞周期变化。结果：ＰＧ能明显刺激ＨＴ２９细胞增殖，２．５×１０－６ｍｏｌ／ＬＰＧ使细胞倍增时间缩短５小时，提高细胞增殖指数（Ｐ＜０．０１）。ＰＧＬ能抑制ＰＧ的促增殖作用，单独使用能抑制ＨＴ２９细胞增殖，４ｍＭＰＧＬ能使ＨＴ２９细胞倍增时间延长１１小时，并降低增殖指数（Ｐ＜０．０１）。结论：胃泌素可能在结肠癌的生长中具有调节作用，胃泌素受体拮抗剂可能在结肠癌的治疗中具有重要作用。     

藤黄菌素对人白血病细胞系HL-60体外增殖的影响

目的:观察藤黄菌素对HL-60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法:分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果:应用台盘蓝拒染法,藤黄菌素能够显著地抑制HL-60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明:藤黄菌素作用2h可使HL-60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论:藤黄菌素能够明显抑制HL-60细胞体外增殖。     

阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白所致的内皮细胞释放NO的影响

目的：分析阿魏酸钠的抗动脉粥样硬化作用机制，为临床治疗提供理论依据。方法：首先在体外进行低密度脂蛋白的氧化，然后分别与加有不同浓度的阿魏酸钠的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）共同孵育，测定培养基上清液中NO的含量，从而观察阿魏酸钠对氧化低密度脂蛋白所致HUVEC释放NO的影响。结果：阿魏酸钠能明显抑制UVEC所致的NO下降作用，这种抑制作用无剂量依赖性。结论：阿魏酸钠的抗动脉粥样硬化作用机制可能通过NO发挥作用。     

肾小球足细胞功能认识的进展

足细胞是肾小球高度分化的细胞类型,是肾小球滤过屏障的重要组成部分。假定足细胞的足突能抵消肾小球基底膜的弹力作用,而血管激素可能调节足突的收缩状态,从而调节肾小球的超滤系数Kf。足细胞损伤可导致蛋白尿的发生,而许多伴有足细胞损伤的肾小球疾病,可能进展为慢性肾衰竭。通过了解调节足细胞的生理特性及其细胞的损伤反应机制可进一步了解蛋白尿及肾小球疾病的发病机制。过去由于足细胞独特的解剖学位置以及足细胞难以通过细胞培养区分,很难发现足细胞的功能。然而,近年来由于生理学、分子生物学及细胞培养技术的进步,使人们更多地了解足细胞在维持肾小球功能中发挥的作用。     

人血树状突细胞对T细胞增殖活性的影响

本文采用MTT法探讨了人外周血树状突细胞对T细胞增殖活性的影响，在50μg/mlPHA刺激下，T细胞增殖活性随树状突细胞浓度的增高而增强，培养上清中IL-1的活性亦随树状突细胞浓度的增高而增强，IL-1参与树状突细胞促T细胞增殖的作用机制。     

明日叶查尔酮对荷瘤小鼠抗氧化能力影响作用的研究

目的研究明日叶查尔酮（AC）对荷H22肝癌小鼠细胞抗氧化能力的影响。方法将50只荷H22肝癌小鼠随机分为肿瘤对照组、环磷酰胺组、明日叶查尔酮高、中、低剂量组共五组,每组10只。AC低、中、高剂量组每日分别灌胃给予8、16、32 mg.kg-1明日叶查尔酮,肿瘤对照组给予生理盐水,环磷酰胺（CTX）组隔日腹腔注射20 mg.kg-1的CTX。第11天处死小鼠,取瘤组织检测各组小鼠血清脂质过氧化物（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶水平（GSH-Px）、总抗氧化能力（T-AOC）等指标,用MTT法检测各组小鼠肿瘤细胞增殖活性。结果 AC各剂量组尤其是中、高剂量组能够显著提高小鼠细胞的抗氧化能力,与肿瘤对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）;肿瘤对照组肝癌细胞增殖活性为（1.135±0.032）U.mL-1,AC高剂量组为（0.716±0.018）U.mL-1,两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论明日叶查尔酮能增强荷H22肝癌小鼠细胞的抗氧化能力,抑制肿瘤细胞增殖活性。     

补肾生血药干预不同时间对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠细胞周期与细胞增殖的影响

目的 观察补肾生血药干预不同时间对环磷酰胺诱发骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期及细胞增殖的影响.方法 52只雄性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、补肾生血药低剂量组、补肾生血药高剂量组.先预防用药3 d,补肾生血药低剂量组、高剂量组灌胃不同剂量补肾生血药,其余组灌胃蒸馏水.第4～6天造模,除空白对照组...     

失神经骨骼肌提取液对雪旺细胞体外增殖的作用

目的：观察去神经支配骨骼肌粗提液在体外培养条件下对雪旺细胞（Schwann cells,SCs)增殖的作用,了解外周神经损伤后SCs大量增殖的机理。方法：将新生大鼠SCs培养标本分为加正常骨骼肌提取液组,加失神经支配骨骼肌提取液组和正常对照组,每组10个标本。通过活细胞计数和S－100免疫细胞化学染色证实,观察两种肌肉提取液对SCs增倍时间的影响。结果：对照组SCs增倍时间为8天,正常骨骼肌提取液组为7天,而去神经支配骨骼肌提取液组为5．5天。结论：周围神经损伤后SCs可能受失神经支配骨骼肌产生的某些物质的刺激而增殖加快。     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法:1,25-二羟维生素D3作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期。结果:1,25-二羟维生素D3作用后胃腺癌细胞生长受抑制,细胞集落形成率明显下降(P<0.05);处理48 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。结论:1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有抑制增殖、诱导分化作用。