十二碳二元酸产生菌热带假丝酵母的诱变

以热带假丝酵母菌(Candidatropicalis)为出发菌株,经紫外线和氯化锂复合诱变或亚硝酸诱变获得突变株.通过摇瓶分批发酵,对菌株诱变前后发酵产长链二元酸量进行了测定.筛选出能够发酵产酸的突变株12株,其中8株表现出正突变,菌株最高产酸量提高了9.16%.     

常压室温等离子体快速诱变选育丙酮酸高产菌株

本研究以产丙酮酸的光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)Tp19为出发菌株,采用常压室温等离子诱变系统(ARTP)进行诱变,根据CaCO3筛选平板透明圈与菌落直径比以及100孔板产酸量快速筛选丙酮酸高产突变株。最后通过摇瓶发酵复筛,选育出一株遗传稳定的突变株A214,丙酮酸产量达到37.43g/L,比出发菌株提高了13.69%。     

复合诱变选育低产尿素黄酒酵母

通过He-Ne激光和亚硝基胍复合诱变黄酒酵母HJ1615,从中筛选分离得到4株产尿素量远低于亲株的新菌株.对这4株突变株进行发酵栓实验,并测定其发酵综合性能,其中菌株HJ1615-d4在发酵力、总酸、酒精度以及风味物质等综合指标方面保持了亲株的优良性状,同时产尿素的量为15.41 mg/L,低于出发菌株产尿素量50%以上.通过5代以上发酵实验,其遗传性状稳定.     

5’—肌苷酸生产菌的选育及其发酵的初步研究

本文对5'-肌苷酸产生菌的选育及发酵条件对产酸的影响作了研究。 以谷氨酸棒杆菌265为出发菌,利用紫外线硫酸二乙酯以及亚硝基胍等常规诱变手段进行了反复诱变。在此基础上,又采用原生质体诱变的新技术,最后获得一株突变株519,在最佳发酵条件下积累肌苷酸量达7g/L,比原菌株提高了2倍。 本文还对影响发酵产酸的各种因素进行了研究,主要包括种子培养基和发酵培养基、pH值、种龄、接种量、通风量、温度以及添加某些成分等对发酵产酸的影响,并就其中某些因素的影响从理论上进行了探讨。     

紫外线与N~+注入复合诱变选育曲酸高产菌株

为得到一株曲酸的高产菌株,从5种实验菌株中筛选得到1株米曲霉CICC-2336菌株,以其作为出发菌株,经过紫外诱变和氮离子注入诱变两种复合诱变,得到1株曲酸高产菌株,将其命名为Aspergillus oryzaeN11。该菌株经过传代6次后,性状稳定,产酸量基本不变。在接种量15%、30℃恒温、摇床180r/min条件下发酵培养7d后,其产酸量达到24.12g/L,比出发菌株提高101%。     

曲酸菌的选育及发酵工艺条件研究

本研究采用紫外线（UV）诱变育种技术,对产曲酸的米曲霉菌株进行诱变,得到NKS-14583菌株产酸能力稳定且产酸量高。以此为出发菌株,通过各项实验确定出发酵的工艺条件。     

曲酸高产菌的复合诱变选育

以米曲霉（Aspergillus oryzae）3.042为出发菌株,其孢子在无菌水中孵育4 h后,首先经两次紫外照射诱变,筛选获得产曲酸能力提高的突变株UV15。随后将UV15继续进行超声波和微波照射的复合诱变筛选,获得高产菌株M22,将其传代10次后,最终确定M22是一株生长性能和产酸能力均稳定的曲酸高产菌株。该菌株在接种量为104个/mL、30℃、摇床250 r/min、发酵时间6.5 d的条件下,产酸量由原来的11.55 g/L提高到34.28 g/L,比出发菌株提高了197%。     

D-核糖高产菌株的选育及其生产性试验

BacillussubtilisJSIM 10 18菌株是 1株产D 核糖的莽草酸营养缺陷型突变株 ,以此菌株为出发菌株 ,通过甲基磺酸乙酯和紫外线连续、间断诱变处理 ,获得了 1株次黄嘌呤、莽草酸双重缺陷型突变株No .2 71菌株。该突变株摇瓶发酵的D 核糖平均产量为 10 8 1g/L ,比亲株提高了 15 8g/L。在 30 0 0 0L发酵罐中 ,连续 5罐批 ,平均产D 核糖 96 4 g/L ,最高为 98g/L ,比亲株提高了 16 2 5 g/L。     

L-谷氨酸生产菌的选育及其发酵条件的研究

采用黄色短杆菌（Brevibacterium flavum)T1为始发菌株，根据代谢控制发酵原理，利用紫外线、硫酸二乙酯进行诱变，定向选育出具有寡霉素抗性、谷氨酸氧肟酸盐抗性的温度敏感突变株TM106。然后，以温度敏感突变株TM106和产酸率高（10．5％以上）的天津短杆TG961为亲株。通过原生质体融合技术，成功地选育出了产酸率高的融合子CM021，并且该菌株系温度敏感型菌株，可用于谷氨酸强制发酵。在摇瓶条件下，产酸达13.6g/dI；在6m^3发酵罐上进行中试，产酸达14．6g/dI，转化率达62％。     

L-苏氨酸高产菌株的选育及发酵条件优化研究

采用L-苏氨酸生产菌HXS101(AHVR,Ile-)为出发菌株,经NTG诱变处理,选育出一株L-苏氨酸高产菌株HXS315为目的突变株,在10L发酵罐产酸率最高达到94.4 g/L (36 h),然后对其进行发酵条件优化,使菌株HXS315的L-苏氨酸10L发酵罐产酸率提高到105.1g/L (36h).     

Cloning and heterologous expression of the NADPH cytochrome P450 oxidoreductase genes from an industrial dicarboxylic acid-producing Candida tropicalis

NADPH cytochrome P450 oxidoreductase (CPR) catalyses the transfer of electrons during P450-mediated oxidation, which plays an important role in the omega-oxidation pathway of Candida tropicalis. Two putative allelic genes, CPR-a and CPR-b, were cloned from the long chain dicarboxylic acid-producing Candida tropicalis 1230, using cassette PCR methods. Both the identified open reading frames predict the gene products of 679 amino acid residues. The deduced amino acid sequences of CPR-a and CPR-b are highly homologous to CPR genes from C. tropicalis ATCC 750 and Candida maltosa. Both genes were individually expressed in a cpr mutant of Saccharomyces cerevisiae with high CPR activities, in which only a small distinction was observed between recombinant CPR-a and CPR-b. Both CPR-a and CPR-b contain one CTG codon, which codes for serine (amino acid 50) in C. tropicalis rather than universal leucine. A mutated cDNA of CPR-a with a TCG codon instead of CTG codon was constructed and expressed, resulting in little increase in CPR activity. This indicates that the alteration of Ser-50 has little effect on functional expression of CPR. Furthermore, high ketoconazole sensitivity for the cpr mutant was complemented by heterologous expression of the cloned CPR-a or CPR-b.     

高硬度环保聚酯蜡的研制

实验采用直接熔融缩聚法,以十二烷二元酸和乙二醇为主要原料合成高硬度环保聚酯蜡,并用IR进行了结构表征,考察了反应物料比、反应温度、反应时间、催化剂种类对产物的影响。适宜的反应条件:n(乙二醇)∶n(十二烷二元酸)=1.5∶1,反应温度为160℃、反应时间为6 h,以对甲苯磺酸为催化剂。此条件下产物的滴点98℃,针入度1.6(0.1mm),酸值6.25 mg KOH/g,黏度133.14 mm^2/s。     

奶牛源鼠李糖乳杆菌的12C6+重离子束诱变选育

本研究利用中科院重离子加速器释放的12C6+重离子束作为辐射诱变源,以酸斑值（HC）和抑菌圈值为指标,对鼠李糖乳杆菌JF12-1进行功能性诱变。通过致死率和正负突变率确定诱变的最佳辐照剂量;对最佳辐照剂量下的突变菌株利用酸斑法进行初筛,抑菌圈法复筛,而后通过连续传代之后检测乳酸含量变化来测定遗传稳定性,并对遗传稳定菌株进行16S rDNA测序,定位其突变位点。结果显示辐照剂量为300 Gy时,致死率为79.86%,正突变率为30.33%,负突变率为5.38%,确定为最佳诱变剂量;酸斑法初筛最佳诱变剂量下的突变菌株,得到20株HC值较原始野生菌株提高25%以上的突变株;抑菌法复筛得到8株体外抑菌性较原始野生菌株提高15%以上的菌株;遗传稳定性测定发现这8株突变乳酸菌株产乳酸稳定性良好;16S rDNA测序发现原始野生型菌株JF12-1的可能突变位点不在16S rRNA基因上,促使其产酸和抑菌性能增强的突变位点可能发生在其他基因区段。利用12C6+重离子束成功诱变选育出了高产乳酸及体外抑菌性优良的功能性鼠李糖乳杆菌稳定株,为下一步深入开发该菌株提供了较好的理论基础和应用依据。     

热带假丝酵母ctfat1p基因在吸收脂肪族化合物中的功能研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)1798中的ctfat1p基因为研究对象,利用重叠PCR将ctfat1p基因内约500 bp片段与G418抗性基因(kanr)相连接,经末端单酶切后电转化至C. tropicalis 1798感受态细胞中,通过一次同源单交换,将抗性基因kanr插入至ctfat1p基因内部,实现目的基因的敲除,并通过发酵实验分析Ctfat1p在热带假丝酵母脂肪酸跨膜转运过程中的功能。结果表明,经过G418抗性筛选和基因组PCR鉴定,成功获得ctfat1p基因缺失菌株C. tropicalis 1798 Δctfat1p;分析发现ctfat1p基因敲除对C. tropicalis 1798以油脂为底物培养12 h后重组菌OD600 nm值仅为野生型菌株的47.9%,表明ctfat1p基因敲除后影响C. tropicalis 1798对油脂吸收利用。通过基因敲除手段构建ctfat1p基因缺失菌株,可以减弱细胞对长链脂肪酸的摄取,验证了ctfat1p基因为热带假丝酵母油脂吸收和利用的关键基因。     

微生物发酵生产十三碳二元酸的研究

以一株热带假丝酵母(Candida tropicalis)TSW_1为出发菌株,选用不同种类、不同能量、不同剂量的离子进行离子束注入处理,得到从十三碳烷烃生产十三碳二元酸的突变菌株TSW-N-35。研究了N~+和CH_3~+离子注入剂量与Candidda tropicalis存活率之间的关系。菌株的存活率均随着注入剂量的变化表现为相似的“马鞍型”,以十三碳烷烃为底物,在摇瓶条件下,十三碳二元酸(DCA13)产量达71.5g/L。研究发现,蔗糖浓度显著地影响菌体生长,其最适浓度为0.3％;尿素和丙烯酸的浓度显著地影响DCA13的产量,尿素的最适浓度为0.14％;添加0.10％丙烯酸,DCA13的产量能提高20％左右;提高培养温度可缩短发酵时间     

诺丽自然发酵汁中醋酸菌的分离鉴定及发酵特性

为分析诺丽自然发酵汁中醋酸菌的多样性,丰富诺丽中醋酸菌种属信息,采用传统分离培养和16S rRNA基因序列分析相结合的方法,对诺丽自然发酵汁中的醋酸菌进行分离鉴定和发酵特性研究。结果表明,从不同发酵阶段诺丽自然发酵汁的67 个分离菌株中鉴定出了24 株醋酸菌,分别为Acetobacter fabarum（9 株）、Acetobacter syzygii（7 株）、Acetobacter pasteurianus（2 株）、Acetobacter tropicalis（1 株）、Acetobacter lambici（1 株）和Gluconobacter japonicus（4 株）,其中A. syzygii和A. fabarum为诺丽自然发酵过程中的优势菌种。在发酵性能方面,A. tropicalis N21性能最优,产酸量可达28.92 g/L,在40 ℃高温中仍能良好生长且产酸量为14.85 g/L,乙醇体积分数为7%时,产酸量略有下降,但依然可达23.60 g/L,其耐高温和耐乙醇能力均高于其他菌株。     

热带醋酸杆菌B104发酵条件的优化研究

从自然发酵的苹果醋醪中筛选鉴定得到1株热带醋酸杆菌（Acetobacter tropicalis）B104,为进一步提高这株热带醋酸杆菌的产酸能力,对其培养条件和培养基成分进行了优化。结果表明,最佳培养条件和培养基组成为接种量4.0%,培养温度30 ℃,摇床转速120 r/min,培养基初始pH值为5.5,10.0 g/L葡萄糖和体积分数为5.0%的无水乙醇为碳源,20.0 g/L酵母膏为氮源。在此条件下培养12 d,该菌株产酸量达到55.4 g/L,是优化前的1.5倍。     

低能N+离子注入阿维菌素B1a生产菌的诱变选育

以阿维菌素生产菌阿维链霉菌为研究对象,通过低能N+离子注入法对阿维链霉菌进行诱变选育。根据其存活率和突变率,确定最佳的诱变条件为：诱变能量为16 keV,诱变剂量为160×1014 ions/cm2。经过诱变后筛选获得高产突变菌株AVE-10-N102-26。该菌株发酵产阿维菌素B1a含量为3 012 μg/mL,较出发菌株AVE-10提高了25.7%;经多次传代试验结果证明其遗传稳定性较好。     

高产红曲色素的紫红红曲霉诱变育种技术研究

以紫红红曲霉为出发菌株,通过物理(紫外线、超声波、微波)诱变和化学(氯化锂)诱变的方法来选育红曲色素高产菌株,实验过程中分别采用单一的诱变方法和复合诱变方法(2～4种诱变方法相结合)来处理出发菌株,选育出红曲色素高产菌株。试验结果表明,各种诱变方法对紫红红曲霉产红曲色素的能力都有不同程度的提高,其中以2种诱变方法相结合的方式对红曲霉产红曲色素能力提高最为明显,如紫外和超声波复合诱变的方法产红曲色素的色价为922U/mL,比出发菌株产红曲色素的能力提高了约3倍。但随着各结合方法的增多,诱变菌株产色素能力逐渐下降。     

Molecular cloning of the RPS0 gene from Candida tropicalis.

The Saccharomyces cerevisiae RPS0 A and B genes encode proteins essential for maturation of the 40S ribosomal subunit precursors. We have isolated a homologue of the RPS0 gene from Candida tropicalis, which we named CtRPS0. The C. tropicalis RPS0 encodes a protein of 261 amino acid residues with a predicted molecular weight of 28.65 kDa and an isoelectric point of 4.79. CtRps0p displays significant amino acid sequence homology with Rps0p from C. albicans, S. cerevisiae, Neurospora crassa, Schizosaccharomyces pombe, Pneumocystis carinii and higher organisms, such as human, mouse and rat. CtRPS0 on a high copy number vector can complement the lethal phenotype linked to the disruption of both RPS0 genes in S. cerevisiae. Southern blot analysis suggests that CtRPS0 is present at a single locus within the C. tropicalis genome.