Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用.本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响.方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD 载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡.结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达.与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P＜0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比.转染pcNICD的EC9706细胞转染后24 h、48 h和72 h时细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706 细胞的凋亡.提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点.     

重组质粒pEgr-P16在EC9706细胞中的辐射诱导凋亡作用

背景与目的:研究pEgr-P16重组质粒在食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导凋亡作用.材料与方法:pEgr-P16重组质粒通过脂质体介导转染人食管癌EC9706细胞,定量RT-PCR检测2 Gyγ射线照射后被转染细胞中P16的表达和细胞凋亡率的变化.结果:对照组无P16蛋白表达,转染质粒组细胞接受2Gyγ射线照射后2～24 h P16表达量与时间呈曲线关系,在22 h时P16的mRNA水平最高;P16基因联合放射可诱导食管癌细胞凋亡,凋亡率高于单纯照射组和单纯基因诱导组.结论:γ射线可诱导pEgr-P16重组质粒在人EC9706细胞中表达并显著提高EC9706细胞的凋亡率.本研究结果为食管癌基因-放射治疗的进一步研究奠定了实验基础.     

Rab25基因siRNA诱导人卵巢癌细胞A2780……

 目的 观察Rab25基因的小分子干扰RNA（siRNA）对肿瘤细胞的诱导凋亡作用。方法 成功构建Rab25基因的siRNA，稳定转染靶细胞，MTT法检测细胞增生率；流式细胞仪（FCM）检测细胞生长周期和细胞凋亡率；DNA琼脂糖凝胶电泳法（DNA ladder）确定凋亡。结果 细胞生长明显受到抑制，增生能力下降；阻断细胞生长于G1期（转染pSUPER／Rab25 siRNA组细胞G1期达到88.6 %）；细胞凋亡增加，转染pSUPER／Rab25 siRNA组细胞凋亡率为12.3 %，与A2780组细胞及转染空载体组细胞相比，差异有统计学意义（P＜0.01）；DNA凝胶电泳可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带。结论 Rab25基因的siRNA可抑制对肿瘤细胞的生长，诱导其凋亡，可为卵巢癌基因治疗开辟新途径     

小干扰RNA沉默Bcl-2表达增强食管癌细胞放射敏感性研究

目的 探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA (siRNA)对食管癌细胞(EC9706细胞)Bcl-2蛋白表达和凋亡的影响及放射增敏作用。方法 化学合成Bcl-2基因的siRNA,通过脂质体转染法转入EC9706细胞。流式细胞仪检测转染前后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡,成克隆分析siRNA联合X线照射对EC9706细胞的放射敏感性影响。结果 Bcl-2 siRNA1、Bcl-2 siRNA2、Bcl-2 siRNA3转染后Bcl-2蛋白在EC9706细胞中的阳性表达率分别为25.13％、38.87％、30.55％,较对照组的84.28％明显下降(t =4.01、3.04、3.64,P均＜0.05)。Bcl-2 siRNA1转染组凋亡率为33.86％,明显高于空白对照组的5.51％(t=6.55,P＜0.01)和阴性siRNA1转染组的5.59％(t=6.54,P＜0.01);Bcl-2 siRNA1联合X线照射的细胞凋亡率为56.76％,明显高于单纯照射组的24.51％(t=3.59,P＜0.05)。成克隆分析的Bcl-2 siRNA1转染加照射组D0、Dq、SF2值均低于单纯照射组,放射增敏比为1.33(D0值之比)。结论 Bcl-2基因的特异性siRNA可明显增强EC9706细胞的放射敏感性,具有良好临床应用前景。     

Rab25基因siRNA诱导人类卵巢癌细胞A2780凋亡的实验研究

目的 观察Rab25基因的小分子干扰RNA(siRNA)对肿瘤细胞的诱导凋亡作用.方法 成功构建Rab25基因的siRNA,稳定转染靶细胞,MTT法检测细胞增生率;流式细胞仪(FCM)检测细胞生长周期和细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳法(DNAladder)确定凋亡.结果 细胞生长明显受到抑制,增生能力下降;阻断细胞生长于G1期(转染Psuper/Rab25 siRNA组细胞G1期达到88.6%);细胞凋亡增加,转染Psuper/Rab25 siRNA组细胞凋亡率为12.3%,与A2780组细胞及转染空载体组细胞相比,差异有统计学意义(P＜0.01);DNA凝胶电泳可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带.结论 Rab25基因的siRNA可抑制对肿瘤细胞的生长,诱导其凋亡,可为卵巢癌基因治疗开辟新途径.     

真核表达载体PcDNA3.0-AIF△1-480构建及其促凋亡活性的研究

目的:构建AIF截短后只保留羧基端促凋亡结构域的真核表达载体,了解其是否有促凋亡活性作用及其机制。方法:通过PCR方法构建出AIF截短体AIF△1-480的真核表达载体。采用脂质体将该载体瞬时转染人乳腺癌细胞系MCF-7细胞,采用流式细胞技术检测其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用,同时采用JC-1流式细胞技术检测其对线粒体膜电位的影响。选取5～7周龄BALB/c雌性裸鼠35只,构建荷瘤裸鼠模型,并在体内实验中检测该载体的促凋亡活性作用。结果:成功构建真核表达载体PcDNA3.0-AIF△1-480,并经酶切鉴定和DNA测序证明。在体外实验中,与对照组相比该载体能够诱导MCF7细胞发生凋亡,对照组、PcDMA3.0组和PcDNA3.0-AIF△1-480组凋亡率分别为0.01%、16.01%和28.55%。同时MCF7细胞转染该载体后能够使线粒体膜电位发生去极化,导致凋亡的发生,对照组、PcD-MA3.0组和PcDNA3.0-AIF△1-480组凋亡率分别为2.26%、60.37%和95.78%。在荷瘤裸鼠模型中,转染该载体后能够抑制肿瘤的生长,至观察终点中位肿瘤体积分别为1 187.2、1 000.0和609.4mm3。结论:截短后只保留羧基端的AIF仍然有促凋亡活性作用,其机制是通过改变线粒体膜电位来发挥促凋亡作用。     

Puma基因转染对胃癌SGC-7901细胞的促凋亡作用及机制

[目的]探讨puma基因转染对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。[方法]应用脂质体介导重组真核表达载体pEGFP-C1-PUMA瞬时转染至SGC-7901细胞。分别用荧光显微镜和RT—PCR法检测外源基因的表达，MTF比色法测定细胞增殖的抑制，Hoechst33342染色法检测细胞凋亡，流式细胞仪检测细胞周期和线粒体膜电位的变化，Westernblot检测细胞色素C（CytC）和凋亡诱导因子（AIF）的转位。[结果]外源性puma基因在pEGFP—C1-PUMA转染的SGC-7901细胞中实现了表达。PUMA表达使SGC-7901细胞的增殖能力降低并诱导凋亡，转染24、48、72h的生长抑制率分别为19．3％、34．7％、42．2％，凋亡率分别为19．6％、35．4％、46．6％。PUMA表达的SGC-7901细胞DNA合成受到抑制，周期阻滞在GgG1期；线粒体膜电位明显下降，CytC、AIF从线粒体进入胞浆。[结论]puma基因转染可有效抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖，促进其凋亡。促凋亡机制主要是线粒体途径，与线粒体膜电位降低和CytC、AIF从线粒体释放有关。     

组蛋白去乙酰化酶在食管鳞癌中的表达及其表达下调对EC9706细胞生物特性的影响

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase2,HDAC2)在食管鳞癌组织中的表达,并研究其表达下调对食管鳞癌EC9706细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及分析其相关的分子机制。方法:采用免疫组织化学法检测食管鳞癌组织中HDAC2蛋白的表达。将特异性针对HDAC2基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和对照siRNA分别转染食管鳞癌EC9706细胞,实验分3组:未处理组、对照siRNA组和HDAC2siRNA组。蛋白质印迹法检测各组EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达。CCK-8计数法检测转染前后细胞的增殖情况。FCM法检测细胞周期和细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测与细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:HDAC2蛋白在食管鳞癌组织中表达的阳性率为79.71%,显著高于癌旁不典型增生组织的51.11%和正常食管黏膜组织的23.19%,3者之间差异具有统计学意义(χ2=44.121,P=0.000);此外,HDAC2蛋白表达与患者的年龄和性别无关(P均>0.05),但是与组织学分级、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移均显著相关(P均<0.05)。HDAC2siRNA能有效下调食管鳞癌EC9706细胞中HDAC2蛋白的表达,明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖,促使细胞周期静止在G0/G1期,并诱导细胞凋亡。蛋白质印迹法检测结果显示,HDAC2表达下调能明显提高p21和凋亡相关蛋白bax的表达量,同时降低细胞周期蛋白cyclin D1和bcl-2的表达量。结论:HDAC2可能在食管鳞癌的发生、发展中具有重要作用,其表达下调介导的食管鳞癌细胞增殖抑制、细胞周期静止以及细胞凋亡可能与p21、bax的表达升高和cyclin D1、bcl-2表达降低密切相关。     

microRNA-155在食管癌中的表达及其对食管癌细胞增殖凋亡的影响

目的 探讨miRNA-155在食管癌中的表达及其对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用TaqMan探针实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测50例食管癌患者中新鲜食管癌组织和其相应癌旁正常组织中miRNA-155的表达情况;使用脂质体LipofectamineTM2000转染EC9706细胞上调miRNA-155的表达,利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测转染后细胞的增殖变化,流式细胞仪检测其细胞凋亡率的变化.结果 食管癌组织中miRNA-155的表达水平明显低于与其相应的癌旁正常组织(P=0.000);转染miRNA-155后,miRNA-155转染组EC9706细胞中miRNA-155的表达水平高于对照组和NC组(P﹤0.05);细胞的增殖明显受到抑制,且细胞的凋亡率明显升高.结论 miRNA-155在食管癌组织中呈低表达,上调其表达能够明显抑制食管癌EC9706细胞增殖和诱导其凋亡.     

HCPT诱导肝癌细胞凋亡时AIF定位变化与DNA的损伤

目的：探讨羟基喜树碱（HCPT）诱导SMMC-7721细胞凋亡过程中凋亡诱导因子（AIF）不同时相的定位变化和DNA损伤的关系。方法：HCPT作用SMMC-7721细胞后在不同时间点收集细胞，用细胞组分分离试剂盒分离细胞质、线粒体与细胞核成分，用蛋白印迹法与共聚焦显微镜观察AIF的转位，用TUNEL法检测DNA损伤。结果：蛋白印迹结果显示线粒体中AIF在HCPT作用1h无明显变化，6h出现了明显转位，在12h与24h更明显；共聚焦结果也显示在HCPT作用6h后，AIF已从线粒体迁出，12h与24h后，大部分AIF已从线粒体迁至细胞核；TUNEL法检测结果表明伴随AIF的核迁移，DNA出现了明显的损伤。结论：HCPT作用SMMC-7721细胞后AIF的释放是凋亡的早期改变之一；伴随AIF的核转位，同时出现了DNA损伤。     

siRNA抑制食管癌EC9706细胞CXCR4基因表达的实验

目的运用RNAi技术沉默食管癌EC9706细胞CXCR4（chemokine receptor4）基因表达,观察其对肿瘤细胞的生长和转移影响。方法设计CXCR4 基因为靶向的siRNA ,构建siRNA表达载体,通过脂质体将siRNA表达载体转入EC9706细胞。荧光定量PCR法检测细胞CXCR4 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞周期; MTT法检测细胞侵袭和增殖的情况。结果构建出CXCR4 基因为靶向的siRNA表达载体pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1和pRNAT-U6.2/Lenti -siCX2;荧光定量PCR结果显示,转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706细胞和转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX2的EC9706细胞与对照组相比CXCR4 mRNA的表达水平明显降低（P＜0.01）;细胞生长速度较对照组明显减慢（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示：转染pRNAT-U6.2/Lenti-siCX1的EC9706S期细胞比例低于对照组(P＜0.05)。结论沉默CXCR4基因表达对食管癌EC9706细胞的生长和侵袭、转移有明显的抑制作用。     

三氧化二砷对食管癌细胞系EC9706作用的研究

目的探讨不同浓长三氧化二砷（As2O3）对食管癌细胞系EC9706的生长抑制作用及其机理。方法不同浓度三氧化二砷作用于细胞EC9706,采用MTT法检测细胞生长,倒置显微镜观察细胞形态,并通过DNA梯状电泳和流式细胞仪检测凋亡。结果三氧化二砷剂量依赖性抑制细胞生长;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析。细胞株EC9706存在明显的G0／C1期阻滞。结论As2O3具有抑制食管癌细胞株EC9706生长作用,其机理是诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

纳米载体介导的hTERT反义核酸对食管癌细胞生物活性的影响

目的：研究聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒（ polybutylcyanoacrylate nanoparticles, PBCA-NPs, NPs ）介导的端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transeriptase, hTERT）基因反义寡核苷酸 （antisense oligodeoxynucleotide, ASODN）对食管癌细胞EC9706生物活性的影响。方法：采用乳化聚合法制备聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒作为转染寡核苷酸（SODN）的载体，利用激光粒度分析仪和原子力显微镜测定制备NPs的粒径及zeta电位；以NPs介旱8条不同hTERT ASODN（NPs—ASODNⅠ、NPs—ASODNⅡ、NPs—ASODN Ⅲ、NPs—ASODNⅣ、NPs—ASODNⅤ、NPs—ASODNⅥ、NPs—ASODNⅦ和NPs—ASODNⅧ）转染食管癌细胞EC9706，采用MTT法检测转染后对EC9706细胞增殖的影响；采用RT-PCR检测hTERT mRNA表达情况；流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：所制NPs粒径均匀、zeta电位较高，较为理想；以NPs介导hTERT ASODN转染24h时，EC9706细胞增殖被明显抑制，该抑制作用随转染时间的延长和浓度的增高依次增强，与细胞对照组相比有显著差异（P〈0．05）；且不同ASODN转染后对EC9706细胞抑制率不同。单纯NPs组、正义寡核苷酸NPs—SODN组和单纯ASODN组转染后对EC9706细胞增殖无明显抑制作用（P〉0．05）。NPs—ASODN转染EC9706细胞72h时，hTERT mRNA表达水平明显降低，与细胞对照组相比有显著差异（P〈0．05）。NPs—ASODN转染72h时，NPs—ASODNⅠ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ转染组EC9706细胞出现明显凋亡现象（P〈0．05），而NPs—ASODNⅡ、Ⅲ、Ⅳ转染组EC9706细胞未发生明显的凋亡现象（P〉0．05）。结论：聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒可以作为一种良好的基因载体，在其介导下hTERT ASODN能有效抑制食管癌细胞EC9706的增殖和hTERT mRNA的表达，并能诱导细胞凋亡。提示该纳米粒作为一种新型纳米载体为食管癌的基因治疗提供了一条新的途径。这种抑制作用具有时间和浓度依赖性，并具有序列特异性，表明hTERT基因不同位点在端粒酶活性中所起的作用可能不同.     

RNA干扰沉默乏氧诱导因子-1a对紫杉醇诱导食管鳞癌EC9706细胞凋亡的影响

目的:探讨食管癌乏氧耐药机制,观察乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)对紫杉醇诱导的人食管鳞癌EC9706细胞凋亡的影响。方法:用CoCl2化学乏氧法建立乏氧模型;应用Western blot测定RNA干扰前后,乏氧条件下HIF-1α蛋白表达的变化;应用原位末端标记TUNEL法及AnnexinⅤ/PI双标记法检测RNA干扰前后紫杉醇对乏氧培养细胞EC9706细胞凋亡的影响。结果:EC9706细胞经75μmol/L的CoCl2作用4 h后,即可诱导HIF-1α蛋白表达。RNA干扰技术能明显抑制乏氧诱导的HIF-1α蛋白表达。相同的乏氧条件下,转染HIF-1α-siRNA组细胞的凋亡率与未转染组或转染control-siRNA组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乏氧条件下HIF-1α蛋白对紫杉醇诱导的EC9706细胞凋亡具有抑制作用。以HIF-1α为新的靶点可望提高食管癌的治疗水平。     

RNA干扰FGFR3基因表达诱导骨肉瘤细胞凋亡及下调Wnt信号通路的 研究

目的:探讨RNA干扰人成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）基因表达对骨肉瘤细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法:以LipofectamineTM 2000为载体，参照其转染说明将设计合成的2个针对FGFR3的特异性siRNA及阴性对照siRNA转染人骨肉瘤MG63细胞，同时设置空白对照组，转染48 h，Western blotting检测FGFR3、β-catenin、Survivin和Bax蛋白的表达；流式细胞术检测细胞凋亡率；二氯二氢荧光素二乙酸酯（H2DCFHDA）探针检测活性氧（ROS）含量。结果:2个FGFR3 siRNA转染MG63细胞后FGFR3蛋白表达均明显受到抑制，与空白对照组及NC组比较差异具有统计学意义（P<0.05）。MG63细胞转染FGFR3 siRNA后细胞凋亡率明显升高，ROS含量明显升高，β-catenin和Survivin蛋白的表达明显降低，Bax蛋白的表达明显升高，与NC组比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论:RNA干扰FGFR3基因表达可诱导骨肉瘤细胞凋亡，机制可能与细胞内ROS含量升高及Wnt信号通路下调有关。     

siRNA阻断Stat3信号促进食管鳞癌细胞株凋亡

目的：研究RNA干扰技术沉默Stat3基因对食管鳞癌细胞（EC9706）中持续性激活Stat3信号的阻断作用及对细胞凋亡的影响。方法：将化学合成的100nM的Stat3 siRNA转染EC9706细胞,RT-PCR检测转染前后Stat3 mRNA的表达,Western blot检测转染前后细胞中Bcl-2、Stat3及磷酸化Stat3（p-Stat3）蛋白的表达,凝胶电泳迁移率（EMSA）检测转染前后活化Stat3蛋白的DNA结合活性,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡的改变情况。结果：Stat3 siRNA转染细胞48h后细胞形态发生明显的改变,RT-PCR及Western blot结果显示Stat3 siRNA干扰后Stat3mRNA及蛋白表达均受到明显抑制, Stat3信号的激活被阻断,活化Stat3蛋白的核结合活性显著下降。转染后细胞中Bcl-2蛋白的表达明显减少。流式细胞术结果证明Stat3 siRNA可明显促进细胞凋亡。结论：Stat3 siRNA能够特异地阻断食管鳞癌细胞中Stat3 信号的持续性激活并促进肿瘤细胞凋亡。     

HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡

目的：观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染，联合诱导人宫颈癌CaSki细胞凋亡的效应。方法：HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染入宫颈癌CaSki细胞，随后利用RT—PCR技术检测细胞中HPV-16E6癌基因的mRNA水平变化；Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化；流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果：经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPVE6癌基因的mRNA水平均下降，其中联合转染组显著下降（P〈0，05）；抑癌蛋白p53水平均增高，其中联合转染组显著增高，细胞凋亡率均升高，其中联合转染组显著升高（P〈0．05）。结论：HPV-16 E6siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌CaSki细胞后，均能抑制CaSki细胞中HPV-16E6癌基因的表达，使抑癌蛋白p53恢复活性，诱导宫颈癌CaSki细胞凋亡；两者联合别具有协同效应，能显著提高肿瘤细胞凋亡率。     

可溶性FasL联合survivin RNA干扰诱导肺腺癌细胞凋亡

目的：探讨可溶性FasL（sFasL）联合survivin RNA干扰对肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法：构建survivin特异RNA小干扰表达载体，DNA测序，转染A549细胞。G418（geneticin）筛选稳定表达survivin RNA小干扰细胞株，荧光实时定量RT-PCR、免疫印迹（Western blot）和免疫组化法检测survivinm RNA和蛋白表达。sFasL作用于转染后细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测细胞活性和凋亡率。结果：成功构建survivin-siRNA表达载体，筛选出稳定表达单克隆细胞。SurvivinmRNA和蛋白表达分别下降76．4％（P〈0．01）和84．5％，免疫组化也显示survivin下调。sFasL联合survivinRNA干扰细胞，光密度值在各时间点较siRNA组、sFasL组和对照组均明显降低（P〈0．01），抑制率增加；凋亡率较siRNA组、sFasL组和对照组明显增加（P〈0．01）。结论：SurvivinRNA干扰表达载体可降低survivin的表达。sFasL联合survivinRNA干扰较单用sFasL或survivin RNA干扰能更有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖，促进凋亡。     

pEgr-P16重组质粒的构建及其在EC9706细胞中的辐射诱导表达

目的：构建pEgr-P16重组质粒并检测其在人食管癌细胞系EC9706中的辐射诱导表达。方法：人P16cDNA基因连接到Egr-1启动子的下游构建成pEgr-P16重组质粒，利用脂质体介导转染人EC9706细胞，用Western blot方法检测不同剂量γ射线照射后被转染细胞中P16的表达。结果：酶切鉴定证实pEgr-P16重组质粒构建正确。被pEgr-P16重组质粒转染的人食管癌EC9706细胞经不同剂量γ射线照射后，P16基因表达均高于未照射组。结论：γ射线可诱导pEgr-P16重组质粒在人EC9706细胞中表达增强。     

Survivin反义寡核苷酸抑制EC9706细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 观察Sunrivin反义寡核苷酸(ASODN)对人食管癌细胞系EC9706细胞增殖和凋亡的影响.方法 人工合成Survivin基因反义和正义ODN,并进行硫代磷酸化修饰,通过脂质体途径分别转染 EC9706 细胞;应用 RT-PCR 和 Western Blot 检测 SurvivinmRNA和蛋白表达;应用MTT法检测 Survivin ASODN 对 EC9706 细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡比率.结果 体外培养的 EC9706 细胞可表达较强的 Survivin mRNA 和蛋白;Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 Survivin mRNA 和蛋白表达,50μmoL/L ASODN 几乎可以完全抑制.MTT 研究结果表明,Survivin ASODN 可呈浓度依赖性地抑制 EC9706 细胞增殖,50μmol/L ASODN 对细胞生长的抑制率可达78.5%,诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G2/M 期.Survivin SODN 对 Survivin mRNA 和蛋白以及 EC9706 细胞的增殖和细胞周期无明显的抑制作用.结论 脂质体介导转染 Survivin 反义寡核苷酸可抑制细胞增殖、诱导细胞G2/M 期阻滞而促进细胞凋亡.